三七总皂苷抗心肌细胞肥大与成纤维细胞生长因子诱导早期反应蛋白14的关系

目的研究三七总皂苷(panax notoginseng saponin,PNS)抗心肌细胞肥大是否与成纤维细胞生长因子诱导早期反应蛋白14(fibroblast growth factor-inducible 14,Fnl4)的表达变化相关。方法分离原代新生大鼠心肌细胞,去甲肾上腺素(Norepinephrine,NE)处理原代细胞建立心肌细胞肥大模型。鬼笔环肽染色观察细胞形态,实时定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,q RT-PCR)检测肥大相关基因和Fn14 m RNA表达水平,Western blot检测Fn14蛋白表达水平。结果与对照组比较,NE处理组细胞表面积增大、细胞肥大相关基因m RNA表达水平明显升高,Fn14 m RNA和蛋白表达升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与单独NE组比较,NE和PNS同时处理组的细胞表面积减小、肥大相关基因m RNA表达水平显著下降,差异有统计学意义(P<0.05)。PNS对Fn14 m RNA表达水平影响不大,但是却明显的促进Fn14蛋白表达(P<0.05)。结论 PNS能够抗NE诱导的心肌细胞肥大,同时能够影响Fn14的表达。PNS抗心肌肥大可能通过Fn14起作用。

连续硬膜外麻醉诱导早期阻滞平面欠佳的处理（附20例报告）

对20例常规硬膜外阻滞操作后诱导早期出现的阻滞平面欠佳，经分析原因认为有四种情况可导致阻滞平面异常，提出通过调整病人体位及注药速度，可使连续硬膜外麻醉诱导早期阻滞平面欠佳现象得到明显改善。

TGF-β诱导早期基因1对MG-63细胞成骨分化能力的调控作用及其机制

目的探讨TGF-β诱导早期基因1(TIEG1)在MG-63细胞成骨分化过程中的作用及可能机制。方法将表达抑制TIEG1基因的shRNA质粒用Lipofectamine2000转染到MG-63细胞中,筛选出稳定表达shRNA细胞株即MG-63/TIEG1 KD细胞。用实时定量PCR法和Western blotting法检测MG-63/TIEG1 KD细胞与正常MG-63(MG-63/WT)细胞TIEG1基因及蛋白表达,以验证TIEG1的敲减效果。用成骨分化培养液诱导MG-63/WT及MG-63/TIEG1 KD细胞分化4周,检测两种细胞碱性磷酸酶(ALP)分泌活性及形成的矿化结节,比较二者分化矿化能力的差异。之后将两种细胞用成骨分化培养液培养7 d后收集细胞,实时定量PCR法、Western blotting法检测成骨分化标志物Runx2及Wnt信号通路下游核心分子β-catenin表达;免疫荧光观察β-catenin蛋白表达情况及细胞定位。结果建立了稳定TIEG1敲减的细胞株MG-63/TIEG1 KD,其TIEG1 mRNA和蛋白表达量低于MG-63/WT细胞(P均<0.05)。诱导分化后,MG-63/TIEG1 KD的ALP分泌活性及矿化结节形成能力均低于MG-63/WT细胞(P均<0.05),其Runx2、β-catenin的mRNA及蛋白表达量均低于MG-63/WT细胞(P均<0.05)。结论TIEG1通过调节Wnt/β-catenin信号通路促进MG-63成骨分化及矿化形成能力。

小桐子早期光诱导蛋白基因ELIP克隆及其与靶向miRNA的互作与低温下共表达分析

【目的】作为一种喜温冷敏植物,低温严重影响小桐子的生长发育、地域分布与产量。前期工作发现12℃低温锻炼可显著提高小桐子的抗冷性,小桐子早期光诱导蛋白(ELIP)基因是低温高响应基因。为探究JcELIP在小桐子低温响应中的作用,全面了解JcELIP的结构、调控机制、进化关系及JcELIP与miRNAs的互作关系,也为后续小桐子抗冷分子育种提供一个重要的候选基因资源。【方法】通过RT-PCR克隆了小桐子JcELIP基因并对其进行系统的生物信息学分析,采用RT-qPCR分析JcELIP基因在根、茎、叶中及12℃低温锻炼过程中的表达变化,鉴定与JcELIP互作的miRNAs,进行了12℃低温锻炼过程中的共表达分析。【结果】该基因完整的开放阅读框(ORF)为585 bp,编码194个氨基酸,蛋白的分子质量为2.04 kD,理论等电点为9.59,属于稳定的疏水碱性蛋白,具有3个疏水跨膜螺旋;三级结构主要由ɑ-螺旋和无规则卷曲组成,具有叶绿素a/b结合位点。顺式作用元件预测显示JcELIP具有脱落酸等激素响应元件。进化分析显示:小桐子JcELIP与木薯MeELIP同源性最高。RTqPCR分析显示:正常生长条件下小桐子JcELIP在根、茎、叶中的表达量无显著差异;12℃冷锻炼条件下JcELIP在叶中表达快速上调,48 h时其表达量达到对照组的64.8倍,表明JcELIP参与了小桐子对冷胁迫的响应与适应。基于小桐子降解组数据,鉴定到miR390-x、miR6476-x和novel-m0090-3p等8个miRNAs对JcELIP的表达具有调控作用;共表达分析结果表明在12℃低温锻炼过程中JcELIP的表达受miR390-x和novel-m0090-3p显著负调控。【结论】JcELIP高响应低温胁迫并与miRNAs互作,表明其在小桐子响应低温胁迫过程中发挥重要作用。

茶树早期光诱导蛋白1基因的克隆和表达分析

报道了茶树早期光诱导蛋白1基因(CsELIP1)的cDNA和DNA序列的克隆.该基因编码蛋白含190个氨基酸残基,其基因组序列含有两个内含子(长度分别为129和855 bp).表达分析显示,CsELIP1的mR-NA水平在常温加较强光照(200μmol.m-2.s-1)和低温(5℃)弱光时上调都较少,但在5℃加200μmol.m-2.s-1时被强烈上调,表明CsELIP1的表达可能有一种在其他植物ELIP基因表达中存在的PSⅡ光合效率介导的调节方式.也暗示CsELIP1基因的生理作用可能涉及到茶叶细胞的光保护作用.

早期诱导排尿训练对肾活检术后患者排尿的影响

目的探讨早期诱导排尿训练对肾活检术后患者排尿的影响。方法选择2010年4月至2012年4月在我院待接受肾活检术的患者125例,随机分为五组,每组各25例,A组患者不做任何诱导,仅进行卧位排尿训练,B组进行卧位听流水声诱导,C组进行卧位覆膜热敷、按摩法诱导,D组进行温水冲洗会阴诱导,E组不做任何训练,作为对照组。在术后比较五组患者排尿时间和排尿成功率。结果经早期诱导排尿训练的B、C、D组患者的排尿时间和排尿成功率明显优于未接受诱导的A组和无任何训练的E组,且其差异具有统计学意义(P<0.05),三种诱导方法中温水冲洗会阴诱导法术后排尿最顺畅。结论早期诱导排尿训练有利于肾活检患者术后的排尿,且温水冲洗会阴诱导法最好。

齿肋赤藓早期光诱导蛋白ELIPs的生物信息学分析

从齿肋赤藓转录组数据库出发,共得到39条注释的早期光诱导蛋白Sc ELIPs unigene,其中2条(Sc ELIP1与Sc ELIP2)具有完整ORF。利用多种生物信息学分析工具,对这2条Sc ELIPs序列的同源性、理化性质、保守域、信号肽、疏水性、亚细胞定位、二级结构、跨膜结构、三维结构、活性位点等方面进行分析。结果表明:2条Sc ELIPs序列的ORF全长分别为711 bp和624 bp,分别编码236和207个氨基酸,二者都具有完整的Chloroa_b-bind功能域,定位于叶绿体类囊体膜,含有3个跨膜α螺旋,第1、3螺旋通过Glu和Arg残基形成双重对称结构,且具有至少4个叶绿素结合活性位点。通过对得到的2条Sc ELIPs进行氨基酸序列比对及基因树分析,得出Sc ELIP1与小立碗藓、山墙藓及盐生杜氏藻聚为一支,而Sc ELIP2与高等植物聚为一支,表现出ELIP从低等到高等植物的进化特征。本研究为Sc ELIPs基因后续的克隆和功能研究奠定了基础。

毛竹早期光诱导蛋白基因克隆及功能分析

【目的】探究早期光诱导蛋白(ELIP)基因在竹子光保护中的作用,为进一步阐述竹子光保护机制提供参考依据。【方法】以毛竹Phyllostachys edulis实生苗为材料,在前期研究的基础上克隆毛竹ELIP基因,利用qRT-PCR技术研究其在不同光照诱导下的表达谱,同时通过在拟南芥Arabidopsis thaliana中异位表达对1个基因的功能进行初步鉴定。【结果】克隆获得了3个毛竹ELIP基因(PeELIP1、PeELIP2和PeELIP3),分别编码165、179和182个氨基酸。蛋白结构分析表明:3个PeELIPs蛋白均具有典型的捕光叶绿素a/b结合蛋白功能域,含3个α-螺旋跨膜结构,属于叶绿素a/b结合蛋白超家族。序列比对及进化分析表明:PeELIPs与水稻Oryza sativa、玉米Zea mays等单子叶植物的ELIPs相似性较高,同源性达72%以上,聚类在同一分支。qRT-PCR分析表明:3个PeELIPs基因在毛竹黄化苗中仅检测到微弱表达,光照处理使3个基因的表达量均显著上调;同时在正常毛竹实生苗叶片中,随着光照强度的增强和强光胁迫处理时间的延长,3个PeELIPs基因的表达量都显著上调。过表达PeELIP3可减缓转基因拟南芥在强光下Fv/Fm的下降幅度,但未影响转基因植株的非光化学猝灭系数。【结论】毛竹中至少存在3个PeELIPs,且其表达均受光照的诱导。过量表达PeELIP3能够减缓转基因拟南芥受光抑制的程度,具有一定的光保护作用。

院前早期诱导亚低温在心脏停搏患者抢救中的临床意义

目的分析院前早期诱导亚低温在心脏停搏患者抢救中的临床意义。方法选取2017年3月至2018年7月山东省临朐县人民医院院外心脏停搏患者64例,根据救治方法分为对照组与观察组各32例,对照组院前常规急救处理,观察组院前急救中实施早期诱导亚低温处理,比较两组抢救效果。结果观察组患者到达医院时的肛门温度明显低于对照组,到达目标温度所用时间与心跳复跳时间明显少于对照组(P<0.05)。治疗后,观察组肌酸激酶同工酶水平及呼气末二氧化碳分压显著低于对照组,血氧饱和度显著高于对照组(P<0.05)。观察组自主循环恢复率、存活率均明显高于对照组(P<0.05)。结论在心脏停搏患者抢救中应用院前早期诱导亚低温处理,能够有效降温,缩短心跳复跳时间,可改善患者血气分析结果,有助于提高抢救效果。

成纤维细胞因子诱导早期反应蛋白14在肝纤维化小鼠肝组织的变化

通过研究成纤维细胞因子诱导早期反应蛋白14(Fn14)在肝纤维化小鼠肝组织中表达,探讨Fn14在肝纤维中的作用。方法 通过CCL4腹腔注射构建出小鼠肝纤维化模型,用玉米油腹腔注射小鼠作为对照组,用HE、Masson组织染色确认肝确认纤维化成模效果;用实时荧光定量PCR (Real-time PCR,RT-PCR)、免疫印迹法检测(Western Blotting,WB)Fn14表达量。结果 经过持续6周的CCL4腹腔注射,与对照组相比,HE、Masson组织染色见肝脏组织中纤维间隔形成,确认肝纤维化造模成功,在肝纤维化小鼠肝脏中用WB、RT-PCR法检测Fn14表达量明显增加。结论 肝纤维化过程中Fn14是一种促纤维因子,可能为肝纤维化的预防和治疗提供新思路。

细胞生物电超早期诱导法治疗婴儿臂丛神经损伤

目的对婴儿臂丛神经损伤进行探索性临床治疗研究,寻找最佳治疗时机和有效的治疗方法。方法 A、B两组分别用两种治疗方案,A方案是在病情稳定后期进行按摩和针炙、理疗。B方案是在新生儿期臂丛神经损伤后、即时超早期开始采用软毛刷进行神经梳理和鼠神经生长因子注射对细胞生物电进行诱导干预治疗。结果通过临床两组对照研究,显示两组有明显差异性。结论超早期应用神经梳理和神经营养因子对细胞生物电进行诱导疗法可以缩短疗程。

早期诱导排尿在剖宫产术后的应用

目的探讨早期诱导排尿对产妇剖宫产术后的影响。方法我院2012年1月至2013年5月剖宫产产妇201例,根据不同护理方式分为常规护理组101例和早期诱导排尿组100例,于术后拔除尿管后2、3、4h根据尿液情况指导产妇适量饮用温开水,并帮助其采取座便式进行排尿,观察是否排尿及尿潴留发生率。结果①常规护理组首次排尿时间为(3.80±0.34)h,早期诱导排尿组首次排尿时间为(1.90±0.28)h,两组首次排尿时间差异具有统计学意义;②常规护理组发生尿潴留25例(24.8%);诱导排尿组经早期诱导排尿,仅5例(5.0%)发生尿潴留,差异具有统计学意义。结论早期诱导排尿与剖宫产后患者恢复排尿功能可能存在一定联系,值得临床进一步研究。

受PVY诱导的烟草NtERD1的基因分离与表达分析

通过抑制差减杂交和cDNA芯片法从受PVY诱导的烟草抑制差减杂交文库中筛选得到一段长为745 bp的基因EST片段,经Blast同源性比对分析,该序列与植物脱水诱导早期应答基因(ERD)在核苷酸和氨基酸水平上高度同源。ORfinder分析表明,该序列包含一个492 bp的开放读码框,编码163个氨基酸。氨基酸Blastp比对显示,该氨基酸序列与其他植物脱水诱导早期应答蛋白具有很高的同源性。所以筛选得到的这个新基因属于烟草脱水诱导早期应答基因,被命名为NtERD1(GenBank登录号为GU144573)。实时荧光定量PCR分析表明,NtERD1在PVY接种早期上调表达,因此NtERD1受PVY侵染诱导,可能对烟草抗病毒具有重要作用。

肿瘤坏死因子样凋亡微弱诱导剂在心脏重塑及其相关疾病中作用的研究进展

心力衰竭的病理生理基础是心脏重塑,它能造成心肌细胞增殖、肥大、坏死、凋亡、自噬、间质纤维化、心室扩张和收缩功能不全等结构和功能的改变。研究表明肿瘤坏死因子样凋亡微弱诱导剂(TWEAK)通过与它的受体成纤维细胞生长因子诱导早期反应蛋白14(Fn14)结合参与了这一过程。

肿瘤坏死因子样弱凋亡诱导因子及其受体对肝星状细胞迁徙的影响

目的探讨肿瘤坏死因子样弱凋亡诱导因子(TWEAK)及其受体成纤维细胞生长因子诱导早期反应蛋白14(Fn14)对肝星状细胞迁徙的影响及其机制。方法人源性肝星状细胞株LX-2分别予细胞因子TWEAK处理、特异性下调Fn14(Fn14 siRNA)后加入TWEAK处理,Transwell小室检测肝星状细胞迁徙;real-time PCR及Western Blot检测基质金属蛋白酶(MMP)9的表达量。计量资料两组间比较采用独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。结果 TWEAK处理组较正常LX-2细胞迁徙能力增强[(105±8)个vs(164±17)个,t=5.287,P<0.01];下调Fn14后加入TWEAK处理的LX-2细胞迁徙数目较阴性对照组减少[(122±9)个vs(58±7)个,t=9.836,P<0.01];TWEAK处理LX-2细胞后,MMP9的mRNA及蛋白水平增加(P值均<0.05),且存在时间依赖性;下调Fn14并加入TWEAK后LX-2细胞MMP9的mRNA及蛋白表达量减少,与单纯TWEAK处理的LX-2细胞组比较,差异有统计学意义(t=5.358,P<0.01)。结论 TWEAK可通过其受体Fn14上调MMP9促进肝星状细胞迁徙,阻断该通路可能成为治疗肝纤维化的一个潜在的新靶点。

TWEAK促进大鼠心肌成纤维细胞增殖和胶原合成

目的探讨肿瘤坏死因子样凋亡微弱诱导剂(TWEAK)对大鼠心肌成纤维细胞(CFs)增殖和胶原合成的影响。方法用胰酶消化法培养新生Wistar大鼠CFs,加入重组人TWEAK(rhTWEAK)干预48 h,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞增殖,qRT-PCR检测Ⅰ型和Ⅲ型胶原mRNA,Western blot检测Ⅰ型胶原蛋白表达。结果 rhTWEAK作用后CFs的细胞数目明显增加,Ⅰ型和Ⅲ型胶原mRNA表达上调,同时Ⅰ型胶原蛋白表达显著增强。结论 TWEAK具有促进大鼠心肌成纤维细胞增殖和胶原合成的作用。

植物早期光诱导蛋白基因研究进展

植物早期光诱导蛋白(ELIP)是核编码的叶绿体蛋白,它属于叶绿素结合蛋白超家族的成员。ELIP基因是一古老的基因,在原核细胞中即已存在。真核生物细胞核中的ELIP基因最初可能来源于其质体基因组。目前,已从30多种不同植物中克隆到该基因,研究发现它们多属于胁迫诱导基因,其功能可能涉及光保护作用。本文介绍了20多年来ELIP基因的克隆、生物发生、表达调控和功能方面的研究进展,以期为今后的进一步研究奠定基础。

复苏植物旋蒴苣苔早期光诱导蛋白的特征分析

随着全球气候变暖,旱胁迫越来越成为粮食生产的严重威胁。探索复苏植物耐受极端旱胁迫的机理,积累抗旱相关基因资源,对于植物适应逆境的基础研究,和农业可持续发展,均有重要的作用。旋蒴苣苔(B. hygrometrica)广泛分布于我国山区,是复苏植物的代表性物种,而且有高质量的全基因组序列可以分析利用。本研究对旋蒴苣苔(B. hygrometrica)基因组中的早期光诱导蛋白(ELIPs)基因家族进行挖掘和分析。旋蒴苣苔(B. hygrometrica)基因组中早期光诱导蛋白(ELIPs)基因的数目远高于其他植物(拟南芥,水稻,辣椒,番茄)。系统发育分析显示,早期光诱导蛋白(ELIPs)基因序列具有很高的植物特异性。这说明,早期光诱导蛋白(ELIPs)基因对不同植物进化和适应各自的生长环境具有重要的作用。对处于不同程度干旱状态的旋蒴苣苔(B. hygrometrica)叶片的基因表达分析,表明一部分早期光诱导蛋白(ELIPs)基因表现出很强的对旱处理的响应。不同的早期光诱导蛋白(ELIPs)基因表现出三种不同的响应模式。这些结果表明,旋蒴苣苔(B. hygrometrica)早期光诱导蛋白(ELIPs)基因参与植株应对旱胁迫,而且有精细的调控机制控制不同早期光诱导蛋白(ELIPs)基因的表达量。

植物早期光诱导蛋白的结构、功能及表达模式研究进展

早期光诱导蛋白(earlylight-induced protein,ELIPs)属于叶绿素结合蛋白(chlorophyll a/b binding proteins,Cabs)超家族,是一类定位于叶绿体类囊体膜上的跨膜蛋白,在蓝藻、苔藓、高等微管植物中都有发现,具有悠久的进化历史。其最早在黄化的豌豆幼苗转绿过程中被发现,因其受诱导的时间比其它光诱导蛋白都早,并在光合器官发育完整后迅速消失,具有瞬时积累的特性而得名。它含有三个跨膜α螺旋,其中第1、3螺旋高度同源并通过谷氨酸和精氨酸之间的离子键交叉相连形成双重对称结构;通过充当色素临时载体或抑制叶绿素的合成等方式行使其光保护和非生物胁迫抗性等功能;它能够受多种非生物胁迫的诱导,如干旱、高盐、低温、高温、强光、UV等;它根据跨膜螺旋数的不同可以分为4个不同的组,且螺旋数变化与环境的变换同步,预示着其功能的不断发展。

鹿茸干预去卵巢骨质疏松症模型大鼠的实验评价

目的依据中医学“肾藏精生髓主骨”理论、骨的生长发育与肾精-脑髓-骨髓密切相关,研究鹿茸对去卵巢骨质疏松大鼠下丘脑-肾-骨的调节机制。方法采用去卵巢造模方法建立骨质疏松症大鼠模型,随机分为正常组、模型组、仙灵骨葆组、补佳乐组、鹿茸组;连续给药12周后;以双能X线骨密度分析仪进行骨密度(BMD)检测,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测大鼠股骨、肾、下丘脑组织转化生长因子β1(TGF-β1)、TGF-β1诱导早期应答基因1(TIEG1)活性。结果连续给药12周后,与正常对照组比较,模型组大鼠骨密度显著降低(P<0.05),与模型组比较,鹿茸可明显提高大鼠骨密度;与正常组比较,模型组大鼠骨、肾、下丘脑TGF-β1、TIEG1活性显著降低(P<0.05),与模型组比较,各给药组骨、肾、下丘脑组织中TGF-β1、TIEG1活性显著升高(P<0.05)。结论骨质疏松症病理机制之一是TGF-β1与TIEG1活性异常,鹿茸对下丘脑-肾-骨反馈机制具有明显的调控作用。