骨质疏松与骨诱导生长因子

随着人类平均寿命的延长,人口老龄化日益严重,由老年人生理老化引起的疾病,给家庭和社会带来了一系列社会经济问题。骨质疏松症(Osteoporosis)以其发病普遍及后果严重而受到广泛关注。

骨折愈合与骨诱导生长因子

骨折愈合是一个复杂的生理过程,在这个过程中通过骨的再生来恢复骨结构的完整性.骨的再生除受全身内分泌激素调节外,骨局部生长因子对骨折愈合发挥了非常重要的作用,这些生长因子包括:骨形态发生蛋白(BMPs)、转化生长因子-β(TGF-β)、胰岛素样生长因子(IGFs)、成纤维细胞生长因子(FGFs),以及血小板源性生长因子(PDGFs)[1].

骨质疏松状态下骨诱导生长因子的改变

骨质疏松(Osteoporosis),特别是绝经后骨质疏松和老年性骨质疏松,是一种十分常见的疾病,易发生髋部和脊柱等部位的骨折,造成严重不良后果.动物实验表明,骨质疏松妨碍骨折愈合[1,2],原因颇多,尚未完全阐明.现代骨折愈合的观念是骨诱导和骨传导,骨诱导在骨折愈合过程中发挥了非常重要的作用.骨诱导离不开骨诱导生长因子的中介,这些因子包括:转化生长因子-β(TGF-β)、骨形态发生蛋白(BMPs)、成纤维细胞生长因子(FGFs)、胰岛素样生长因子(IGFs),以及血小板衍生生长因子(PDGFs)[3].现就骨诱导生长因子的功能以及骨质疏松状态下这些生长因子的化进行综述.

外源性骨诱导生长因子注射用骨瓜提取物治疗老年桡骨远端骨折疗效分析

目的：观察外源性骨诱导生长因子注射用骨瓜提取物治疗老年桡骨远端骨折的临床疗效。方法：收集2013年1月-2015年1月某院骨科收治的老年桡骨远端骨折的患者104例,将其分为2组.治疗组（n=54）给予50 mg注射用骨瓜提取物加入250 mL0.9%氯化钠注射液静脉滴注,对照组（n=50）给予碳酸钙口服,均治疗1-3个疗程,观察2组患者骨折愈合效果和治疗前后骨代谢改变情况。结果：治疗2个月后,治疗组健侧桡骨骨密度（0.53±0.06）g/cm^2显著高于对照组（0.49±0.03）g/cm^2,差异有统计学意义（t=4.301,P〈0.05）;骨钙素水平（5.34±4.87）μg/L显著高于对照组（2.21±0.84）μg/L,差异有统计学意义（t=3.982,P〈0.05）;血清骨碱性磷酸酶（145.72±30.28）显著高于对照组（114.29±37.43）,差异有统计学意义（t=5.327,P〈0.05）;I型前胶原竣基端肽（5.98±1.74）μg/L显著高于对照组（3.97±1.28）μg/L,差异有统计学意义（t=3.694,P〈0.05）。治疗组临床有效率（87.04%）显著高于对照组（44.00%）,差异具有统计学意义（t=4.301,P〈0.05）。结论：外源性骨诱导生长因子注射用骨瓜提取物治疗老年桡骨远端骨折具有较好的临床效果,可以明显改善患者的骨代谢情况。

乳脂球表皮生长因子8通过调控缺氧诱导生长因子-1α/血管内皮细胞生长因子/Notch信号通路减轻移植肺缺血再灌注损伤

目的探讨乳脂球表皮生长因子8(MFG-E8)对移植肺缺血再灌注损伤的保护作用及缺氧诱导生长因子-1α(HIF-1α)/血管内皮细胞生长因子(VEGF)/Notch信号转导通路的影响。方法雄性SD大鼠60只,随机分为移植组、MFG-E8组、MFG-E8+HIF-1α抑制剂组,改良袖套法建立大鼠左肺移植模型,MFG-E8组受体大鼠术前30 min尾静脉注射rhMFG-E820μg/kg,MFG-E8+HIF-1α抑制剂组在MFG-E8组基础上,术前经腹腔注射4 mg/kg HIF-1α抑制剂YC-1。移植组受体大鼠尾静脉注射等量生理盐水。移植肺再灌注2 h后阻断右肺门5 min,行动脉血气分析,并测量移植肺组织测髓过氧化物酶(MPO)活性、肺组织湿/干重量比率(W/D);苏木精-伊红(HE)染色观察移植肺组织病理学变化;原位缺口末端标记法(TUNEL)法检测移植肺组织细胞凋亡指数。蛋白免疫印迹(Western blot)法检测HIF-1α/VEGF/Notch通路蛋白及细胞凋亡蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)和bcl-2相关X蛋白(bax)表达,酶联免疫吸附法(ELISA)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)表达水平。结果移植肺再灌注2 h后,MFG-E8组动脉血氧分压/吸氧浓度(PaO_(2)/FiO_(2))较移植组明显提升[(307.23±29.17)mmHg比(215.48±20.92)mmHg,t=8.08,P<0.05]。与移植组比较,MFG-E8组肺组织MPO活性和W/D均明显降低[(1.76±0.21)U/g tissue比(2.51±0.46)U/g tissue,(6.03±1.07)mg/dl比(8.41±1.36)mg/dl,t=4.69、4.35,P<0.05]。移植组病理检测可见肺泡壁水肿、肺泡结构破坏、肺泡腔内明显炎性细胞浸润,与移植组比较,MFG-E8组肺泡结构保持完整、肺泡腔和间质内浸润的炎性细胞明显减少,炎性反应显著减轻。与移植组比较,MFG-E8组肺组织细胞凋亡指数(AI)、bax、TNF-α、IL-6蛋白表达显著降低[(11.47±1.23)%比(27.09±2.57)%、(1.34±0.12)比(1.92±0.13)、(250.1±11.76)pg/ml比(392.7±28.14)pg/ml、(134.6±11.25)pg/ml比(251.3±14.33)pg/ml,t=17.34、10.37、14.79、20.26,P<0.05],bcl-2、HIF-1α、VEGF、Notch1、HES1蛋白表达明显升高(1.75±0.16比1.36±0.12、0.87±0.14比0.36±0.09、0.79±0.08比0.39±0.03、0.58±0.05比0.24±0.03、0.59±0.05比0.28±0.03,t=6.17、9.69、14.80、18.44、16.81,P<0.05)。与MFG-E8组比较,MFG-E8+HIF-1α抑制剂组PaO_(2)/FiO_(2)、bcl-2、HIF-1α、VEGF、Notch1、HES1蛋白表达显著降低[(237.25±21.34)mmHg比(307.23±29.17)mmHg、1.40±0.13比1.75±0.16、0.41±0.08比0.87±0.14、0.41±0.04比0.79±0.08、0.26±0.03比0.58±0.05、0.27±0.03比0.59±0.05,t=6.12、5.37、9.02、13.43、17.35、17.34,P<0.05],肺组织MPO活性、W/D、细胞凋亡指数、bax、TNF-α、IL-6蛋白表达显著升高[(2.47±0.37)U/g tissue比(1.76±0.21)U/g tissue、(7.85±1.32)mg/dl比(6.03±1.07)mg/dl、(25.76±2.63)%比(11.47±1.23)%、1.87±0.14比1.34±0.12、(385.4±27.93)pg/ml比(250.1±11.76)pg/ml、(247.5±14.21)pg/ml比(134.6±11.25)pg/ml,t=5.28、3.39、15.56、9.09、14.12、19.70,P<0.05]。结论MFG-E8能减轻大鼠移植肺缺血再灌注损伤,其作用机制可能与其激活HIF-1α/VEGF/Notch信号转导通路,抑制细胞凋亡,降低炎性细胞因子表达,减轻脂质过氧化反应有关。

布托啡诺调节缺氧诱导因子-1α/血管内皮生长因子信号通路对宫颈癌细胞增殖、迁移和血管生成的影响

目的探讨布托啡诺(Butorphanol)对宫颈癌细胞增殖、迁移和血管生成的影响及作用机制。方法使用0.5~80.0μg/mL的布托啡诺分别处理HeLa细胞24 h,细胞计数试剂-8(CCK-8)法检测细胞增殖,计算IC50值。将HeLa细胞分为对照组(Control组)、阴性对照组(NC组)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)过表达组(HIF-1α组)、布托啡诺组(Butorphanol组)、Butorphanol+HIF-1α组,平板克隆形成实验、细胞划痕实验、Transwell小室实验、小管形成实验分别检测HeLa细胞增殖、迁移、侵袭与血管生成,Western blot法检测HIF-1α、血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达,裸鼠移植瘤实验检验布托啡诺对宫颈癌移植瘤生长的影响。结果过表达HIF-1α可显著促进HeLa细胞增殖、迁移、侵袭及血管生成拟态形成,并上调HIF-1α、VEGF蛋白表达(P<0.05);布托啡诺可有效抑制HeLa细胞增殖、迁移、侵袭、血管生成拟态形成及宫颈癌移植瘤生长,并下调HIF-1α、VEGF蛋白表达(P<0.05);布托啡诺对宫颈癌细胞的抑制作用可被HIF-1α的过表达减弱。结论布托啡诺通过抑制HIF-1α/VEGF信号通路抑制宫颈癌细胞增殖、迁移、侵袭及血管生成,抑制宫颈癌的生长。

转化生长因子β诱导蛋白在胶质瘤中的表达及生物学功能

目的:探讨转化生长因子β诱导蛋白(TGFBI)在胶质瘤中的表达及其生物学功能。方法:通过从癌症基因组图谱(TCGA)、中国脑胶质瘤图谱(CGGA)和脑肿瘤分子数据库(Rembrandt)下载胶质瘤的转录组数据和相应的临床资料,分析在不同级别胶质瘤中TGFBI mRNA的表达水平,及其表达变化与胶质瘤患者预后的关系。免疫组织化学染色法检测35例胶质母细胞瘤组织和5例正常脑组织中TGFBI蛋白的表达水平。通过用慢病毒转染U87和U373细胞株构建TGFBI表达下调的胶质母细胞瘤细胞系,检测TGFBI对胶质瘤细胞增殖、侵袭、凋亡和细胞周期的影响。通过基因集富集分析(GSEA)预测TGFBI在胶质瘤发生发展中可能参与并调控的相关通路。结果:TCGA、CGGA和Rembrandt数据库的结果分析显示随着胶质瘤级别的增加,TGFBI mRNA的表达水平升高(P<0.05)。此外,TGFBI m RNA的高表达与胶质瘤患者不良预后显著相关(P<0.01)。免疫组化检测结果显示,与正常脑组织相比,胶质母细胞瘤组织中TGFBI蛋白表达水平显著增加(P<0.05)。细胞学实验结果显示,TGFBI表达下调可显著抑制胶质母细胞瘤细胞增殖和侵袭能力,同时能够促进细胞凋亡,促使细胞从G1期转向S期。GSEA分析结果显示高表达TGFBI可能通过TOLL样受体信号通路、NOD样受体信号通路和JAK-STAT信号通路参与调控胶质瘤恶性生物学行为。结论:TGFBI在胶质母细胞瘤组织中表达升高,可促进肿瘤细胞的增殖、侵袭,抑制细胞凋亡并诱导细胞周期重排,推测其可能在胶质瘤发生发展中扮演着癌基因的角色。

百草枯中毒小鼠肺组织转化生长因子β和缺氧诱导因子1α的表达

目的探讨百草枯中毒小鼠肺组织转化生长因子β(TGF-β)和缺氧诱导因子1α(HIF-1α)的表达变化。方法将30只雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照组(n=10)和百草枯组(n=20)。百草枯组腹腔注射百草枯20 mg/kg,对照组腹腔注射等体积生理盐水。在染毒后第7天处死10只百草枯组小鼠,第28天处死其余小鼠。通过苏木精-伊红(HE)染色和Masson染色进行肺组织病理学观察;免疫组织化学法检测肺组织TGF-β和HIF-1α蛋白的表达。采用Pearson相关分析法分析TGF-β蛋白与HIF-1α蛋白表达的相关性。结果 HE染色和Masson染色结果均显示:在染毒后第7天,百草枯组可见肺纤维化表现;染毒后第28天,肺纤维化程度加重。染毒后第7天百草枯组小鼠肺组织TGF-β蛋白的表达明显高于对照组,染毒后第28天TGF-β蛋白的表达高于染毒后第7天,差异均有统计学意义(P<0.05)。染毒后第7天和第28天,百草枯组小鼠肺组织HIF-1α蛋白的表达均明显高于对照组(P<0.05);染毒后第28天的HIF-1α蛋白的表达高于第7天,但差异无统计学意义(P>0.05)。在染毒后第7天和第28天,百草枯组TGF-β蛋白与HIF-1α蛋白的表达均无相关性(r=0.295,P=0.630;r=0.218,P=0.725)。结论百草枯中毒可上调小鼠肺组织的TGF-β和HIF-1α蛋白,TGF-β和HIF-1α可能通过不同途径参与了肺纤维化的形成。

沉默miRNA210可能通过低氧诱导因子-血管内皮生长因子途径减轻心肌炎时心肌细胞的损伤

目的研究miRNA210在脂多糖(LPS)诱导心肌炎时对大鼠原代心肌细胞的作用及其内在机制。方法采用CCK8法检测正常或LPS诱导时miRNA210对大鼠原代心肌细胞活力的影响;ELISA法检测在LPS诱导前提下,miRNA210处理后肿瘤坏死因子(TNF)-α与白细胞介素(IL)-1β的分泌情况;流式细胞凋亡法检测各干预组前后大鼠原代心肌细胞的凋亡情况;Western blot法检测凋亡相关蛋白bcl-2、bax、caspase-3和低氧诱导因子1(HIF1)-血管内皮生长因子(VEGF)的表达情况。结果CCK8检测结果显示,与对照组相比,miRNA210模拟物(t=0.000,P=1.000)和siRNA(t=0.686,P=0.500)干扰对大鼠原代心肌细胞的影响差异无统计学意义,LPS处理后大鼠原代心肌细胞的细胞活力明显降低(t=8.764,P<0.001);与LPS组相比,抑制miRNA210后大鼠原代心肌细胞活力明显升高(t=3.576,P=0.012)。ELISA检测结果显示,与对照组相比,LPS诱导后IL-1β(t=4.166,P=0.014)和TNF-α(t=6.309,P=0.003)表达显著上调;与LPS组相比,应用miRNA210模拟物后IL-1β(t=4.096,P=0.015)和TNF-α(t=4.424,P=0.011)表达显著升高,沉默miRNA210后IL-1β(t=4.287,P=0.012)和TNF-α(t=3.577,P=0.023)表达显著下调。流式细胞凋亡实验结果表明,与对照组相比,LPS诱导后的大鼠原代心肌细胞凋亡明显增加(t=32.780,P<0.001);与LPS组相比,应用miRNA210模拟物明显加重了LPS诱导的细胞凋亡(t=7.412,P=0.002),沉默miRNA210后的大鼠原代心肌细胞凋亡率明显降低(t=11.720,P<0.001)。Western blot检测结果表明,与对照组相比,LPS显著下调了bcl-2表达(t=8.346,P=0.001),上调了bax(t=12.890,P<0.001)和caspase-3的表达(t=4.331,P=0.012)。与LPS组相比,应用miRNA210模拟物后bcl-2(t=6.074,P=0.003)表达明显下降,bax(t=5.376,P=0.022)和caspase-3(t=5.859,P=0.004)表达明显升高;沉默miRNA210后bcl-2表达明显升高(t=3.873,P=0.017),bax(t=5.205,P=0.006)和caspase-3(t=2.800,P=0.040)表达明显下降。与对照组比,LPS组的HIF1(t=10.380,P=0.001)和VEGF(t=4.973,P=0.008)表达显著上调;与LPS组相比,应用miRNA210模拟物后的HIF1(t=8.952,P=0.001)和VEGF表达(t=11.203,P=0.001)显著上调,沉默miRNA210后的HIF1(t=3.893,P=0.017)和VEGF表达(t=3.181,P=0.033)显著降低。与LPS组相比,应用2ME后逆转miRNA210模拟物后的bax(t=4.899,P=0.008)、HIF1(t=2.833,P=0.047)及caspase-3(t=2.877,P=0.045)和VEGF表达(t=2.994,P=0.040)显著降低,bcl-2表达(t=3.392,P=0.017)显著升高。结论沉默miRNA210可通过HIF1-VEGF介导的凋亡通路来减少LPS诱导的心肌细胞损伤。

遗传性Avellino角膜营养不良一家系转化生长因子β诱导基因的突变研究

背景研究发现角膜营养不良与位于染色体5q31区域转化生长因子β诱导基因（TGFBI）的突变有关，目前发现Avellino角膜营养不良的TGFBI基因突变位点为R124H。目的检测中国遗传性Avellino角膜营养不良一家系的致病基因并进行分子遗传学分析，探讨其TGFBI的基因突变类型。方法本家系先证者在北京大学第三医院确诊，共调查连续4代27名成员，收集遗传性Avellino角膜营养不良患者8例和表型正常成员2名的外周血3ml提取DNA，合成TGFBI第4、11、12外显子的特异性引物，采用聚合酶链反应（PCR）进行扩增，对PCR产物直接进行DNA测序分析并与正常GenBank中的TGFBI基因序列比对。结果该家系中Avellino角膜营养不良的遗传模式符合常染色体显性遗传，8例患者的TGFBI基因第4外显子均显示CGC〉CAC（R124H）突变杂合子，家系中的2名表型正常成员无此基因位点突变。8名家系成员存在第11外显子的472密码子CTC〉CTT的杂合性同义单核苷酸多态性（SNP），9名家系成员存在第12外显子的540密码子TTT〉TTC的杂合性同义SNP，且SNP与疾病表现型无关。结论该Avellino角膜营养不良家系存在TGFBI基因突变，为R124H杂合突变类型。

胰腺癌组织中转化生长因子β诱导蛋白表达及临床意义

目的:探讨胰腺癌组织中转化生长因子β诱导蛋白(TGFBIp/βig-h3)mRNA和蛋白表达水平及其意义方法:收集15例胰腺癌术后的患者癌组织、癌旁组织以及4例正常胰腺组织标本,提取胰腺组织标本总RNA,利用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测胰腺组织标本TGFBIp mRNA水平;应用Western blot检测TGFBIp蛋白表达水平。结果:胰腺癌组织TGFBIpmRNA及蛋白表达水平明显高于癌旁胰腺组织及正常胰腺组织(P<0.01)。在不同分化程度的胰腺癌组织中,TGFBIp mRNA及蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05);Ⅲ～Ⅳ期及有淋巴结转移胰腺癌组织中TGFBIp mRNA及蛋白表达水平明显高于Ⅰ～Ⅱ期及无淋巴结转移胰腺癌组织,差异有统计学意义(P<0.05)结论:TGFBIp高表达与胰腺癌的发生发展相关,其可能的调控机制及生物学效应有待进一步研究。

麦冬多糖对转化生长因子-β1诱导心肌细胞凋亡的影响

目的探讨麦冬多糖(MDG-1)对转化生长因子(TGF)-β1诱导的心肌细胞活力、凋亡的影响及机制。方法大鼠H9c2心肌细胞分为对照组(不经特殊处理)、TGF-β1组(20ng/ml TGF-β1处理细胞)和MDG-1组(100mg/LMDG-1及20ng/mlTGF-β1处理细胞),噻唑蓝(MTT)及流式细胞术分别检测细胞活力及凋亡率;2′,7′-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)探针检测活性氧(ROS)水平;Western印迹检测增殖细胞抗原(PCNA)、B淋巴细胞瘤(Bcl)-2、p53、核因子(NF)-κB p65、KB抑制蛋白激酶(IKK)α和β-catenin的蛋白表达。结果与对照组比较,TGF-β1组细胞活力显著降低,PCNA和Bcl-2蛋白表达显著降低,细胞凋亡率显著升高,ROS水平显著升高,p53、NF-κB p65、IKKα和β-catenin蛋白表达显著升高(P<0.05)。与TGF-β1组比较,MDG-1组细胞活力显著升高,PCNA和Bcl-2蛋白表达显著升高,细胞凋亡率显著降低,ROS水平显著降低,p53、NF-κB p65、IKKα和β-catenin蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论MDG-1可增强心肌细胞活力,抑制心肌细胞凋亡,其机制可能与降低细胞内ROS水平及抑制Wnt/β-catenin信号和NF-κB信号有关。

转化生长因子β诱导基因在人角膜组织及细胞中的表达

背景临床研究表明多数角膜营养不良的发病与转化生长因子β诱导（TGFBI）基因突变有关，但其发病的分子机制尚不完全清楚。目的研究TGFBI基因在人角膜组织及体外培养的角膜上皮细胞和基质细胞中的表达，为进一步研究角膜营养不良的发病机制奠定基础。方法对人角膜上皮细胞和基质细胞进行培养和传代，应用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）法检测TGFBImRNA在人角膜组织及细胞中的表达，将供体角膜组织制成石蜡包埋切片，利用免疫组织化学法检测TGFBI蛋白在角膜组织、人角膜上皮细胞和角膜基质细胞中的表达，采用免疫荧光技术检测TGFBI蛋白在细胞爬片的表达。结果RT—PCR检测显示人角膜组织和基质细胞中在1274bp处可见TGFBImRNA的清晰条带，而角膜上皮细胞中亦有TGFBImRNA表达。免疫组织化学检测显示，TGFBI蛋白在人角膜组织中基质细胞的细胞质中呈阳性表达，但人角膜上皮细胞中未见TGFBI蛋白表达。免疫荧光检测技术显示，人角膜基质细胞胞质中TGFBI蛋白呈红色荧光，而角膜上皮细胞未见TGFBI蛋白表达。结论TGFBI主要在人角膜基质层表达，而在上皮层几乎不表达，有助于进一步研究TGFBI在角膜营养不良发病机制中的作用。

人转化生长因子β诱导基因真核表达载体的构建及其对人角膜上皮细胞增生的影响

背景人转化生长因子-β诱导（TGFBI）基因是第一个被确定的角膜营养不良的致病基因，而TGFBI引起角膜营养不良的机制目前尚不清楚，研究TGFBI的功能对于揭示角膜营养不良的发病机制及了解角膜生理及病理功能都具有重要意义。目的构建人TGFBI基因的真核表达载体并将其转染于人角膜上皮细胞，探讨其对角膜上皮细胞增生及相关基因表达的影响。方法从角膜移植后剩余的供体角膜中提取人正常角膜组织总RNA，经逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）合成TGFBI cDNA，将TGFBI胶回收产物与载体pCMV—N-HA分别进行双酶切，取连接产物10μl转化100μl大肠杆菌感受态DH5α克隆入真核表达载体pCMV—N—HA，以菌落PCR和EcoRV、XhoI双酶切法测序鉴定。设置重组质粒pCMV—N—HA—TGFBI转染组、空质粒pCMV—N—HA转染组、阴性对照组及pGFP—C2转染对照组，以测定重组质粒转染率。重组质粒pCMV-N—HA—TGFBI转染人角膜上皮细胞，激光共焦显微镜下观察转染pGFP—C2后增强型绿色荧光蛋白（EGFP）的表达，用细胞计数试剂盒8（CCK-8法）检测转染细胞的增生情况，SYBR荧光实时定量PCR和Western blot法检测TGFBI、基质金属蛋白酶（MMPs）、组织金属蛋白酶抑制剂（TIMP）蛋白及其mRNA在转染后角膜上皮细胞的表达。结果pCMV—N-HA—TGFBI阳性克隆质粒进行经EcoRV和XhoI双酶切鉴定测序结果显示，扩增的TGFBI cDNA以正确序列和方式插入载体，pGFP—C2载体转染人角膜上皮细胞后48h共焦显微镜下可见EGFP的表达，转染效率为70％。重组质粒pCMV—N—HA-TGFBI转染组TGFBI mRNA的表达明显高于空质粒pCMV—N—HA转染组和阴性对照组，TGFBI蛋白仅在pCMV—N-HA．TGFBI转染组表达。CCK-8法显示重组质粒pCMV—N-HA-TGFBI转染组、空质粒pCMV—N—HA转染组和阴性对照组间角膜上皮的吸光度（A450）值的差异无统计学意义（F=3．34，P〉0．05）。荧光实时定量PCR结果显示，重组质粒pCMV-N—HA-TGFBI转染组中MMP，mRNA、MMP，mRNA转录水平比空质粒pCMV—N—HA转染组和阴性对照组均升高（P〈0．05），而TIMP，mRNA则明显下降（P〈0．05）；Western blot结果证实MMP1、MMP3、TIMP1蛋白表达规律相同（P〈0．05）。结论人TGFBI基因真核表达载体可被成功构建并在人角膜上皮细胞中呈过表达。TGFBI可能是通过MMP1、MMP3及TIMP1的表达变化来增加细胞外基质的降解，从而参与角膜的某些生理病理过程。

大鼠心肌梗死后心肌中转化生长因子β诱导基因-22蛋白表达的变化规律及白细胞介素-6对其表达的诱导作用

目的:检测大鼠心肌梗死(心梗)后心肌组织中转化生长因子β诱导基因-22(TSC-22)蛋白水平表达的动态变化,并在细胞水平上研究白细胞介素-6(IL-6)是否对其蛋白表达有诱导作用。方法:雄性Sprague-Dawley大鼠,通过结扎左冠状动脉前降支制备心梗模型。分为心肌梗死模型组(心梗组)和假手术对照组(假手术组),于术后1天、3天、7天、2周、4周进行心脏标本取材,酶联免疫吸附(ELISA)法检测大鼠左心室心肌组织中TSC-22蛋白的表达。胰酶消化法分离培养乳鼠原代心肌细胞,随机分为心肌细胞对照组和心肌细胞实验组,心肌细胞对照组正常培养,心肌细胞实验组分别在2.5、5.0、10.0 ng/ml浓度的IL-6刺激下培养24 h。采用ELISA法、免疫细胞化学法和免疫印迹法(Western blot)等方法检测TSC-22蛋白表达。结果:ELISA法结果表明,大鼠心肌梗死1天、7天心梗组比假手术组左心室心肌组织中TSC-22蛋白含量显著升高,4周时则显著降低,差异均有统计学意义(P均<0.05)。心肌细胞实验的ELISA法结果表明,在10.0 ng/ml的IL-6刺激24 h后,心肌细胞实验组比心肌细胞对照组TSC-22蛋白表达水平显著升高,差异有统计学意义(P<0.05),在2.5、5.0 ng/ml IL-6刺激24 h后,心肌细胞实验组与心肌细胞对照组比较差异无统计学意义;免疫细胞化学法和蛋白免疫印迹法结果显示,10.0 ng/ml的IL-6刺激24 h后,TSC-22在细胞核中的染色明显加深。结论:大鼠心梗后的急性期,如梗死1天、7天后,左心室心肌组织中TSC-22蛋白水平迅速升高。炎症细胞因子IL-6可能是其在心梗后上调的诱导因素之一。

三七总皂苷抗心肌细胞肥大与成纤维细胞生长因子诱导早期反应蛋白14的关系

目的研究三七总皂苷(panax notoginseng saponin,PNS)抗心肌细胞肥大是否与成纤维细胞生长因子诱导早期反应蛋白14(fibroblast growth factor-inducible 14,Fnl4)的表达变化相关。方法分离原代新生大鼠心肌细胞,去甲肾上腺素(Norepinephrine,NE)处理原代细胞建立心肌细胞肥大模型。鬼笔环肽染色观察细胞形态,实时定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,q RT-PCR)检测肥大相关基因和Fn14 m RNA表达水平,Western blot检测Fn14蛋白表达水平。结果与对照组比较,NE处理组细胞表面积增大、细胞肥大相关基因m RNA表达水平明显升高,Fn14 m RNA和蛋白表达升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与单独NE组比较,NE和PNS同时处理组的细胞表面积减小、肥大相关基因m RNA表达水平显著下降,差异有统计学意义(P<0.05)。PNS对Fn14 m RNA表达水平影响不大,但是却明显的促进Fn14蛋白表达(P<0.05)。结论 PNS能够抗NE诱导的心肌细胞肥大,同时能够影响Fn14的表达。PNS抗心肌肥大可能通过Fn14起作用。

细胞生长因子联合诱导ES细胞向肾脏前体细胞分化的实验研究

目的:探讨细胞生长因子联合诱导胚胎干细胞(embryonic stem cell,ES细胞)向肾脏前体细胞定向分化的实验技术,为应用胚胎干细胞进行肾脏再生提供实验基础。方法:小鼠ES细胞悬浮培养2d制备成拟胚体,RA、activin-A、Bmp7三种生长因子诱导培养5d设为A组,不加生长因子培养设为对照(B组),生长因子培养5天后继续以肾脏上皮细胞生长培养液培养7d设为C组,免疫荧光检测Pax2、Bry、WT1蛋白表达情况,流式细胞技术检测Pax2、Bry、CD24阳性细胞比例,realtimePCR检测Pax2、Bry、Osr1、Lim1、WT1、Six2、Sall1、AQP1、CD24、PDGFR基因表达情况。结果:免疫荧光染色结果显示A组细胞Pax2、Bry、WT1的表达明显高于B组;流式细胞技术检测显示A组Pax2、Bry、CD24阳性细胞比例较B组增加,C组表达Pax2、Bry的阳性细胞比例较A组明显升高;realtimePCR检测显示A组Pax2、Bry、Osr1、Lim1、WT1表达较B组明显增加(P<0.05或P<0.01),C组表达CD24基因较A组明显升高(P<0.05)。结论:胚胎干细胞在体外生长因子联合诱导条件下能够分化为早期肾脏前体细胞,并表达部分成熟肾脏细胞的标记物。

转化生长因子β诱导蛋白研究进展

转化生长因子β诱导蛋白（transforming growth factor-β-induced protein,TGFBIp/βig-h3）是1个多功能细胞外基质分子,作为转化生长因子β（TGFβ）诱导基因已在肺腺癌细胞系A549中克隆成功。TGFBIp在细胞黏附、迁移、增殖、分化中起十分重要作用,其表达与细胞黏附、迁徙、角膜营养不良、肿瘤侵犯与转移、血栓、风湿性关节炎、动脉粥样硬化、

神经生长因子诱导基因B-β在大鼠视网膜无长突细胞发育过程中的表达

观察孤儿核受体神经生长因子诱导基因B-β（nerve growth factor-induced gene B-β,NGFIB-β）在大鼠视网膜发育过程中蛋白表达的动态变化及与无长突细胞的相关关系。方法采用孕14d、16d、18d妊娠大鼠（各5只）、生后0d、3d、5d、6d、7d、9d、13d、15d（各5只）的幼鼠及成熟大鼠（5只）,全部处死后立刻取出眼球组织于福尔马林中固定,石蜡包埋、组织切片,免疫组织化学及免疫组织化学双重染色后显微镜下观察。结果NGFIB-β在视网膜发育过程中的表达出现了显著的动态变化。NGFIB-β首先在孕18d胎鼠视网膜组织出现少量表达,阳性表达主要在内核层内缘,随着发育的进行阳性细胞数目明显增多,生后3-7d达到高峰,之后随着细胞的成熟阳性表达又逐渐减少,成熟的视网膜组织内仅见少量阳性细胞,通过NGFIB-β和视网膜无长突细胞特异性标记物突出融合蛋白-1的免疫组织化学双重染色显示NGFIB-β阳性细胞为无长突细胞,两种蛋白共同表达在一个细胞内。结论NGFIB-β在大鼠视网膜无长突神经细胞的分化成熟过程中起重要作用。