半夏组织培养诱导胚状体的正交试验

采用茎尖组织培养技术获得了半夏〔Pinelliaternata(Thunb.)Breit.〕的完整试管苗,并进行了半夏叶不同部位诱导胚状体和愈伤组织的试验;以生长率和总生物碱含量作为指标,对不同激素配比进行了正交试验,筛选出了最佳的培养基组成。结果表明:诱导胚状体和愈伤组织的最佳外植体是半夏的叶柄基部,诱导率分别为43.6%和100.0%,月生长率达24.43倍;最佳培养基为MS+1.0mg/L6 BA+0.1mg/LIAA。研究结果为半夏人工种子的进一步研究奠定了基础。

华东葡萄广西-2花药胚状体诱导与再生植株的研究

为了提供葡萄转抗病基因功能验证及遗传转化研究的再生技术体系,以中国野生华东葡萄(V.pseudoretic-ulata)感白粉病株系广西-2的花药为试材,进行了体细胞胚诱导与再生体系的建立,并探讨了次生胚的诱导与畸形萌发胚状体正常成苗的方法。结果表明,广西-2花药在B5+6-BA4.0mg·L-1+2,4-D0.7mg·L-1+CH1.0g·L-1+PVP1.0g·L-1+蔗糖30.0g·L-1培养基上继代3个月,可诱导胚性愈伤组织产生;B5+6-BA4.0mg·L-1+CH1.0g·L-1+PVP1.0g·L-1+蔗糖15.0g·L-1培养基有利于胚状体形成;胚状体在1/2B5+CH1.0g·L-1+PVP1.0g·L-1+蔗糖15.0g·L-1的液体培养基比相同成分固体培养基中早萌发14d左右;已萌发胚状体在WPM+IBA0.15mg·L-1+AC0.5g·L-1+蔗糖15.0g·L-1培养基上可以生根成苗;MS+6-BA1.5mg·L-1+IBA0.2mg·L-1+蔗糖30.0g·L-1培养基有利于畸形萌发胚状体正常成苗。发育早期胚状体在B5+6-BA1.0mg·L-1+2,4-D0.5mg·L-1+CH1.0g·L-1+PVP1.0g·L-1+蔗糖30.0g·L-1培养基上可形成次生胚。

尾巨桉胚状体诱导及愈伤组织差异研究

以尾巨桉优良无性系无菌苗茎段为外植体,通过对多种不同浓度生长调节剂组合的优化,进行胚状体诱导研究;并对胚性与非胚性愈伤组织进行形态解剖学观察、相关生理指标检测以及相关基因荧光定量PCR分析,以揭示尾巨桉胚性愈伤组织非胚性化发生的机理,为建立尾巨桉体细胞胚胎再生体系提供参考。结果表明:(1)胚性愈伤组织在MS+0.1mg/L NAA+0.01mg/L TDZ培养基中诱导得到胚状体,外植体经过0.5mol/L蔗糖处理12h有助于胚性愈伤组织产生胚状体,胚状体最高发生率为16.7%。(2)尾巨桉胚性与非胚性愈伤组织石蜡切片观察发现,两者的细胞形态特征存在明显的差异,胚性愈伤组织细胞体积小,排列紧密,表现出典型的胚性细胞特征,而非胚性细胞比较大,排列疏松,细胞呈不规则形状。(3)生理生化指标检测结果表明,非胚性愈伤组织中蛋白质含量、SOD、PPO及CAT活性均显著低于胚性愈伤组织,非胚性愈伤组织中木质素、可溶性糖含量以及PAL和POD活性要高于胚性愈伤组织,二者的反肉桂酸4-单加氧酶基因、淀粉磷酸化酶基因、谷胱甘肽硫转移酶基因、葡萄糖-1-磷酸腺苷酸转移酶基因、葡萄糖六磷酸异构酶基因、分支酸合酶基因以及苯丙氨酸解氨酶基因表达差异也达到显著水平。

甘蓝型油菜(Brassica napus)小孢子胚状体的诱导和培养

以网室生长的油菜为供体材料，对１０个甘蓝型油菜不同品种（系）的游离小孢子进行了离体胚状体诱导和培养条件研究。结果表明，分期播种对胚状体形成无明显不利影响，并能延长供花期；生长在田间的植株花蕾比温室内生长植株的单核期花蕾的外部形态短０．５～１．０ｍｍ。在相同条件下，杂交品种和组培品系来源的小孢子诱导成胚率最好；前期低温冷冻处理能促进小孢子分化和提高品种的成胚率。

结球甘蓝小孢子培养条件优化及高代自交系胚状体诱导研究

以25份不同类型的结球甘蓝为试验材料,研究游离小孢子培养过程中影响胚状体产生的因素并进行了优化;同时对结球甘蓝高代自交系的诱导出胚情况进行了研究。结果表明:基因型是影响结球甘蓝胚状体产生的关键因素,参试材料中有11份(2份一代杂种和9份高代自交系)出胚,其中一代杂种中中甘628出胚率(19.8个·蕾^(-1))最高,高代自交系中01-88出胚率(47.5个·蕾^(-1))最高,极显著高于其他参试材料;花蕾长度3.0~3.5 mm、花药长度∶花瓣长度为3∶2至2∶1时,处于单核靠边期的小孢子比例最高,是适合小孢子培养的最佳取样时期;初花期和盛花期是理想的取蕾时期;添加适量活性炭可以极显著提高胚诱导率。

外源添加物对西葫芦胚状体诱导效果研究

以6个基因型的西葫芦未授粉子房为试材,于MS培养基中分别添加不同质量浓度6-BA(1.0,1.5,2.0mg/L)和TDZ(0.04,0.05,0.06mg/L),筛选最适培养基与出胚材料;获得最适培养基后再分别添加不同质量浓度的NAA,AgNO3或相同质量浓度(20mg/L)秋水仙碱不同时间培养,分析其对西葫芦未授粉子房胚状体诱导的效果。结果表明:1西葫芦未授粉子房在培养基(P5)MS+30g/L Suc.+8g/L Agar+0.05mg/L TDZ上胚状体诱导效果最好,XH13-7为出胚率最高材料;2在P5培养基中添加0.25 mg/L NAA有利于出胚并可适当降低玻璃化率,胚状体诱导率高达10.53%;3添加20mg/L AgNO3显著减少胚状体玻璃化,对出胚影响不明显,玻璃化率仅为11.63%;4添加20mg/L秋水仙碱抑制胚状体发生。

提高青花菜花粉胚状体诱导频率的研究

青花菜花药在keller固体培养基上可以直接诱导形成花粉胚状体。诱导频率与供试材料的基因型、小孢子发育时期、培养基成分和初始高温诱导培养有关。不同基因型胚状体诱导频率在0．1～12％之间；花粉胚状体诱导的最佳时期为单核末期至双核初期；培养基以keller＋2．4—D0．1mg／L＋NAA0．1mg／L＋10％蔗糖效果较好；在接种花药后于32～34℃上进行24－48小时高温处理，能使小孢子从配子体发育转变为孢子体发育形成胚状体，显著提高花粉胚状体诱导频率。胚状体在MS培养基附加适量6－BA和NAA上能形成完整植株，花粉胚状体加培植株移栽到田间，成活率在90％以上。

白菜小孢子超低温保存及复苏后胚状体诱导

随着白菜游离小孢子培养技术的不断优化,通过诱导小孢子胚状体获得大量DH系在白菜育种等科研领域得到了广泛应用。但小孢子供体植株受生长季节、生长期等影响,无法长期持续获取高生活力白菜小孢子,成为目前阻碍白菜细胞工程相关研究顺利推进的重要问题之一。本试验利用超低温技术对10份白菜材料小孢子开展冻存复苏研究,结果表明:利用改良B5液体培养基作为冷冻保护剂,白菜小孢子生活力明显高于传统冷冻保护剂二甲基亚砜处理的白菜小孢子;小孢子-80℃(冰箱)和-196℃(液氮)冻存180 d后生活力仍保持在85%以上,且两个温度处理间差异不显著,实际应用中可选择-80℃冰箱冻存替代传统-196℃液氮冻存;利用0.5 mL冻存管保存的白菜小孢子最适复苏条件为37℃恒温水浴40 s,在-80℃冰箱冻存90 d后复苏的小孢子平均生活力达87.9%。复苏冻存30、60、90 d后易出胚材料的白菜小孢子诱导获得了胚状体及再生植株;复苏冻存180 d的白菜小孢子在高温热激诱导条件下仍可感应胁迫,表现为体积膨大,且具胚胎发生能力的小孢子能够进行细胞分裂。本试验为国内首次开展的白菜小孢子超低温冻存研究,建立了白菜小孢子超低温冻存复苏体系,对白菜小孢子培养以及细胞工程相关研究中试验样品的长期保存提供技术支持,并为芸薹属植物小孢子的长期冻存研究提供参考。

不同诱导培养基对小麦花药培养胚状体诱导率的影响

为明确W14-F诱导培养基对黑龙江省春小麦品种及人工合成小麦材料的花药培养胚状体诱导率,以6份人工合成小麦材料和4个普通小麦品种为材料,采用4种诱导培养基W14-F、MS、N6和C17进行花药培养比较试验。结果表明:不同的诱导培养基对于小麦材料的胚状体诱导率不同,4种诱导培养基的胚状体诱导能力依次为W14-F>C17>N6>MS,W14-F培养基胚状体诱导率明显高于其它3个培养基。人工合成小麦和普通小麦在4种培养基上都得到了相近的胚状体诱导率,说明W14-F培养基同样适合人工合成小麦。利用该技术体系培养人工合成小麦与普通小麦的杂种F1材料,得到了较高的诱导率,这为该技术体系直接应用于利用人工合成小麦改良小麦品种抗病抗逆性研究中提供了可靠的依据。

响应面法分析烟草花药胚状体诱导的最佳条件

为优化烟草花药培养体系,以♂净叶黄×♀HKDN-5的杂交子一代为材料,采用响应面法考察了IAA浓度、6-BA浓度和大量元素浓度3个因素对烟草花药胚状体诱导的影响。结果表明:烟草花药胚状体诱导的最佳条件为0.49 mg/L IAA+0.48 mg/L 6-BA+0.56 MS,胚状体的诱导率为36.80%。为了便于实际操作,可采取0.50 mg/L IAA+0.50 mg/L 6-BA+1/2 MS的条件进行试验。

把握植物胚状体发生的重要特性

文章指出了开展胚状体研究工作应抓住的几个重要方面,对控制胚状体发生的重要条件进行探讨,试图从形态与物质上的变化方面去说明与胚状体发生机制的关系,尤其关于胚状体发生的鉴别将增强研究工作中的可操作性。

萝卜游离小孢子成胚诱导影响因素研究进展

综述了影响萝卜小孢子培养中胚状体发生的主要因素,包括基因型、小孢子发育时期、小孢子的处理方式、培养基类型及其添加物等,同时提出了该技术存在的问题,并展望了这项技术在研究和生产实践中的应用前景。

西葫芦未受精子房离体培养的影响因素

【目的】探究西葫芦未受精子房离体培养的主要影响因素,以提高其胚状体诱导率和生根品质,增加再生植株数量,丰富西葫芦育种材料。【方法】以西葫芦"春玉一号"未受精子房为材料,分析MS、B5、N6和White 4种基本培养基的诱胚效果;在MS培养基中添加不同质量浓度的6-BA(0,0.5,1.0,2.0mg/L)和NAA(0,0.2,0.5,1.0mg/L),筛选2种激素的最佳组合;之后添加不同质量浓度的2,4-D(0,1.0,2.0,3.0,4.0,5.0mg/L),筛选2,4-D的适宜质量浓度;在MS培养基中添加不同质量浓度的NAA(0,0.05,0.1,0.2,0.5,1.0mg/L),分析其对胚状体芽生根效果的影响。【结果】西葫芦未受精子房以MS为基本培养基时胚状体诱导率最高,为16.67%;在MS培养基中添加1.0mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA时的诱导效果最好,诱导率为19.76%;在MS+30g/L蔗糖+8g/L琼脂+1.0mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA培养基中添加1.0mg/L 2,4-D可以加快胚珠膨大的速度,增加胚珠转绿的数量,但对出胚的提高效果不显著。MS+30g/L蔗糖+8g/L琼脂+0.1mg/L NAA有利于提高胚状体芽的生根品质,且根系生长健壮。【结论】MS+30g/L蔗糖+8g/L琼脂+1.0mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA+1.0mg/L 2,4-D是西葫芦未受精子房离体培养中胚状体诱导的最佳培养基,MS+30g/L蔗糖+8g/L琼脂+0.1mg/L NAA是诱导其胚状体芽生根的较适宜培养基。

博落回花药离体培养及植株再生研究

对8份不同产地的博落回花药进行了组织培养，通过对花药来源、4℃冷激时间、35℃热激时间、取蕾时期等因素的研究，建立了有效的博落回花药离体培养胚状体发生和植株再生体系。结果表明：有6个产地的博落回花药试材可以获得胚状体和再生植株；不同产地间出胚率差异显著，其中来自湖南高坊的材料出胚率最高，为11.8％；在4℃下冷激24~96 h有利于诱导出胚状体，冷激48 h的花药最容易产生胚状体；35℃热激处理对提高胚状体诱导率的作用不明显；花药培养的最佳取蕾时期为盛花期。

苦瓜未授粉子房的胚状体诱导

苦瓜常规育种获得纯合株系耗时长、成本高,通过离体雌核培养途径获得单倍体可加速苦瓜育种进程。为建立苦瓜未授粉子房离体培养再生体系,本研究利用苦瓜未授粉子房为外植体,研究基因型、接种方式、激素配比、胚囊发育时期、预培养处理对胚状体诱导效果的影响。结果表明:MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA1.00 mg/L+2,4-D 1.0 mg/L+TDZ 0.04 mg/L培养基胚状体的诱导率最高,为19.60%;在8个苦瓜品种中,2个植株生长势强的品种‘桂农科3号’和‘泰国山’苦瓜胚状体诱导率较高,适合作为离体雌核诱导的实验材料;开花当天的子房去除表皮后横切成2 mm的薄片可有效降低愈伤组织的形成,提高胚状体的诱导率;在黑暗和33℃条件下热激3 d有利于子房的转绿和出胚。本研究对苦瓜未授粉子房的胚状体诱导关键因子进行优化,为创制苦瓜单倍体育种材料提供帮助。

芥蓝小孢子培养研究初报

对40份芥蓝材料进行游离小孢子培养及植株再生研究。结果表明：不同基因型间胚状体诱导率差异显著,其中只有红脚黄花芥蓝×612、孤老种、黄花芥蓝、绿宝、香港中花芥蓝产生胚状体;日照时间为11~12 h的供试植株的胚状体诱导率是日照时间为5~6 h的3~7倍;采用单核靠边期至双核早期的小孢子进行胚状体诱导效果最佳,此时花蕾大小为3.0~4.5 mm;在32.5℃下高温预处理小孢子24 h诱导效果最佳,其他温度时间组合条件下胚状体诱导率降低65%~100%。

加工型辣椒花药培养技术研究

为了满足重庆辣椒高效育种与良种创新的需要,以2个加工型辣椒材料578和186及一个甜椒品种‘海丰28’为试材进行花药培养研究。研究了预处理与预培养的时间与温度,并通过正交试验设计,探讨了基本培养基、植物生长调节物质、活性炭、硝酸银、碳源等主要因子对辣椒花药培养的影响。结果表明,高温预培养35℃7天时辣椒578、186、甜椒‘海丰28’的植株诱导率分别为4.86%、2.50%、0.56%,是对3种材料都适合的预培养条件。通过正交试验分析得到对2个基因型特异的优化培养基配方,并且通过比较得到一个对2个基因型都较适合的培养基配方。对花药培养再生的植株进行倍性鉴定,证明3个基因型均得到了具有12条染色体的单倍体植株。以饱和对二氯苯与0.2%秋水仙素浸泡生长点24h进行加倍,成功获得了双单倍体植株。

人工合成甘蓝型油菜的花药培养

对20个基因型的人工合成甘蓝型油菜进行了花药培养.结果表明,在Keller培养基上可以直接诱导出胚状体,胚状体的诱导率与基因型、培养基的添加物等有关.基因型不同,胚状体的诱导率也不同;在培养基中加入活性炭降低胚状体的诱导率,加入0 1mg·L-1的6 BA和0 1mg·L-1NAA能提高胚状体诱导率.

人参组织和细胞培养研究进展

回顾人参组织和细胞培养研究的历史．介绍人参组织和器官的离体培养、胚状体的诱导、毛状根的培养、花药的培养、原生质体培养、细胞培养、细胞的工业比牛产的最新进展。