TAT/LMP-3融合蛋白的制备及其诱导成骨活性的初步研究

目的:表达并纯化具有入胞转导能力并保持骨诱导活性的重组融合蛋白TAT/LMP-3,观察融合蛋白TAT/LMP-3对人骨髓间充质干细胞的入胞转导活性和诱导其成骨分化的效能.方法:采用基因工程技术构建原核表达载体pET43.1a-TAT/LMP-3和pET43.1a-LMP-3并转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导融合蛋白表达,Ni-NTA树脂亲和层析柱纯化后进行初步鉴定,同时制备重组蛋白LMP-3的多克隆抗体.将融合蛋白与人骨髓间充质干细胞共孵育,Western Blot技术分析融合蛋白的入胞效应,检测成骨细胞标志性基因表达以分析重组蛋白对人骨髓间充质干细胞成骨分化的影响.结果:成功地构建了pET43.1a-TAT-LMP-3融合基因原核表达载体,获得了TAT/LMP-3的可溶性表达,纯化后融合蛋白TAT/LMP-3纯度大于90%.成功制备了TAT/LMP-3的兔源性多克隆抗体.Western Blot分析证实TAT-LMP-3融合蛋白能以浓度和时间依赖性的方式转导进入人骨髓间充质干细胞,同时,TAT/LMP-3能成功诱导人骨髓间充质干细胞成骨分化.结论:成功进行了TAT/LMP-3融合蛋白的原核表达、纯化和鉴定,构建的TAT/LMP-3融合蛋白具有入胞转导能力同时保持了骨诱导活性,为其在脊柱融合的进一步应用奠定了实验基础.

融合蛋白TOP_3原核表达载体的构建、表达及纯化研究

目的:利用HIV病毒TAT蛋白转导结构域、人缺氧诱导因子1α氧依赖降解结构域以及CASPASE3构建融合蛋白的原核表达载体,并在大肠杆菌中表达及纯化。方法:分别构建原核表达质粒pET-28a(+)-TAT、pET-28a(+)-TAT-ODD、pET-28a(+)-TAT-ODD-CASPASE3(pET-28a(+)-TOP3);在大肠杆菌BL21(DE3)pLysS内,利用镍-亚硝胺乙酸-组氨酸(Ni-NTA-His)亲和层析法对重组蛋白TOP3进行纯化。结果:成功构建了pET-28a(+)-TOP3的原核表达载体,经过优化表达和纯化条件,融合蛋白在IPTG诱导下获得特异性表达,纯化得到了高纯度的目的蛋白。结论:融合蛋白TOP3的成功表达及纯化,为该融合蛋白应用于肿瘤的治疗研究奠定了理论基础。

人IP-10融合蛋白表达载体的构建和表达及活性鉴定

目的构建人His标记的IP-10(interferon-γ-inducibleprotein10)融合蛋白表达载体并在原核细胞中表达、纯化,获得有活性的IP-10蛋白,为进一步研究其在炎症过程中的作用机制及寻找新的抗炎途径提供基础。方法从人肺cDNA文库中PCR扩增无信号肽的IP-10基因编码序列,构建重组载体pET-14b/IP-10;重组质粒经酶切、测序鉴定正确后转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株;经异丙基β-D-硫代半乳糖(IPTG)诱导后,用镍离子亲和层析柱纯化融合蛋白,以THP-1细胞进行微室跨膜迁移(transwell)实验鉴定融合蛋白活性。结果酶切、测序鉴定重组载体pET-14b/IP-10构建正确,并纯化得到高纯度的IP-10融合蛋白。而且该蛋白具有诱导单核细胞THP-1跨膜迁移活性。结论成功构建了人IP-10融合蛋白表达载体,并纯化得到具有活性的IP-10融合蛋白,为进一步研究IP-10的功能提供了重要的实验材料。

蓖麻毒素A链与绿色荧光蛋白基因的融合表达和活性测定

目的:表达蓖麻毒素A链(RTA)与绿色荧光蛋白(GFP)的融合蛋白(GFP-RTA),用于蓖麻毒素A链在细胞内的转运机理研究。方法:采用PCR法从重组质粒pKK233.2-RTA中扩增出蓖麻毒素A链基因,然而将其插入真核表达质粒pEGFPC1,构成GFP-RTA融合基因;GFP-RTA经PCR扩增,与T载体连接,用内切酶从T-GFP-RTA中切下GFP-RTA片段,插入原核表达质粒pET-28a(+);在BL21(DE3)中表达GFP-RTA融合蛋白,通过金属螯合和层析纯化,MTT法检测融合蛋白的细胞毒性。结果:测序发现插入的融合基因全长序列完全正确,SDS-PAGE鉴定表达产物分子量正确;经诱导表达后,菌体产生绿色荧光,MTT法表明该融合蛋白呈现与RTA相似的细胞毒性。结论:从大肠杆菌表达的蓖麻毒素A链与绿色荧光蛋白的融合蛋白,具有蓖麻毒素A链和绿色荧光蛋白的生物学活性,可用于蓖麻毒素A链在细胞内的转运途径研究。

人自剪切TRAIL胞外段融合蛋白表达条件的优化

目的:在已构建肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)胞膜外段融合蛋白的原核表达载体基础上,进行表达条件优化,使其高表达为进一步研究其活性奠定基础。方法:将前期构建的PCS/TRAIL 111-281原核表达载体转入大肠埃希菌BL21中,15%SDS-PAGE比较分析不同诱导剂浓度、诱导温度和诱导时间对融合蛋白表达量的影响。结果:在诱导温度15℃,加入0.2 mmol/L诱导剂(isopropy-β-D-thiogalactoside,IPTG)、诱导过夜时可以获得较高的可溶性融合蛋白表达量。结论:诱导剂浓度、诱导温度、诱导时间对融合蛋白表达量有较大的影响。

含人Fc重组凋亡融合蛋白体内外抗肿瘤活性初步研究

目的初步研究含人抗体Fc片段的肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL-Fc)重组融合蛋白的体内外抗肿瘤活性。方法①体外实验:将人急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞、人结肠癌LOVO细胞、人胃癌MKN45细胞、人表皮癌A431细胞、人肝癌HEPG2细胞、人乳腺癌MCF-7细胞和小鼠肝癌H22细胞均随机分为TRAIL-Fc重组融合蛋白组、对照组和空白对照组,分别加入浓度为1000、250、62.5、15.6、3.9、0.97ng/ml的TRAIL-Fc重组融合蛋白和TRAIL对照品以及完全培养液,采用MTT法检测TRAIL-Fc重组融合蛋白对7种肿瘤细胞株的体外生长抑制率。②体内实验:腹腔和腋下接种H22细胞建立小鼠肝癌模型,据治疗药物的不同将小鼠随机分为空白对照组、5-Fu组和TRAIL-Fc重组融合蛋白组。测量记录腹腔接种小鼠的腹围和体重以及腋下接种小鼠的肿瘤体积,15d后取外周血处死各组小鼠,计算抑瘤率并检测血清中AST、ALT含量。结果体外实验结果显示,TRAIL-Fc重组融合蛋白对7种肿瘤细胞株的生长均有不同程度的抑制作用,且抑制作用呈剂量依赖效应;其中对MCF-7细胞的抑制作用最强,其最大生长抑制率为82.5%,其次依次为LOVO(81.9%)、MKN45(52.3%)、H22(51.2%)、Jurkat(50.9%)、HEPG2(35.4%)和A431细胞(20.3%)。与对照品相比,TRAIL-Fc重组融合蛋白对LOVO(IC50为83.5)、MKN45(IC50为243.2)、MCF-7(IC50为84.6)细胞更敏感。体内实验结果显示,空白对照组小鼠腹部明显膨出,后期体重略有下降,肿瘤体积持续显著增加;TRAIL-Fc重组融合蛋白组小鼠腹部轻微膨胀,体重维持较好,肿瘤体积后期略有增加;5-Fu组小鼠腹部无膨胀,体重急剧下降,肿瘤体积明显缩小。TRAIL-Fc重组融合蛋白的抑瘤率为45.79%,AST和ALT检测结果显示其对小鼠肝功能无明显影响。结论 TRAIL-Fc重组融合蛋白具有较强的抑制肿瘤细胞生长的能力,且在体内半衰期明显延长。

M2e-HBC融合蛋白的真核表达

目的:构建以乙肝病毒核心蛋白(HBC)为载体的甲型流感病毒M2基因胞外区(M2e)通用疫苗杆粒,利用昆虫细胞杆状病毒表达系统,进行真核表达。方法:利用PCR技术将甲型流感病毒M2e基因序列与HBC相连。经酶切、酶联将融合基因插入pFastBacHTA载体,在DH10Bac细胞中进行同源重组,经测序鉴定后构建M2e-HBC杆粒,脂质体转染sf9昆虫细胞,收获并扩增含有M2e-HBC的杆状病毒,经扩增后获得高效价的重组杆状病毒,用SDS-PAGE、免疫荧光法和电镜检测目的蛋白的表达。结果:构建了以HBC为载体的M2e通用疫苗杆粒,通过转染sf9昆虫细胞得到M2e-HBC融合蛋白真核表达。结论:成功构建了HBC与甲型流感病毒M2e融合蛋白的病毒样颗粒,为流感通用疫苗的研制奠定了基础。

TRAIL和EGFR配体寡肽与力达霉素辅基蛋白融合蛋白制备过程的优化

目的对以包涵体形式表达的TRAIL和EGFR配体寡肽与力达霉素辅基蛋白融合蛋白Ec-LDP-TRAIL的制备过程进行优化。方法对大肠杆菌原核表达Ec-LDP-TRAIL目的蛋白的温度、诱导物浓度、起始菌体密度及时间等条件进行优化;在Ni2+亲和层析纯化蛋白过程中对样品预处理以及纯化缓冲液成分进行优化;对纯化后蛋白的分步透析复性过程进行一系列优化,并通过基于ELISA的结合活性实验分析Ec-LDP-TRAIL与肿瘤细胞的结合能力。结果经过工艺优化后,纯化后的融合蛋白Ec-LDP-TRAIL纯度达95%以上,复性后LB培养基活性蛋白收率约为2.2 mg/L,与初始复性条件相比提高近2倍。复性后融合蛋白Ec-LDP-TRAIL显示出能够与人表皮癌A431和人大细胞肺癌H460细胞的结合活性。结论融合蛋白Ec-LDP-TRAIL制备过程的优化为后续研发和生产奠定了实验基础,同时也为其他以包涵体形式表达的基于TRAIL的抗肿瘤蛋白药物的制备提供借鉴。

rhBMP_2在去势大鼠中的异位诱导成骨效应

目的:通过观察rhBMP2在去势大鼠中的异位诱导成骨效应,探讨rhBMP2与绝经后骨质疏松的关系。方法:对双侧卵巢切除和单纯行开腹术大鼠双侧股部肌袋植入1.5mg和3mgrhBMP2,于植入后1周、2周和3周取材,行组织学检查,成骨量分析,碱性磷酸酶和钙含量测定。结果:组织学检查发现rhBMP2剂量越大,成骨多,成骨早。实验组较对照组诱导成骨活性增强,表现为成骨量,碱性磷酸酶和钙含量较对照组明显增多(P<0.05)。结论:在卵巢切除大鼠早期rhBMP2表现较高诱导成骨活性,可能与机体代偿有关。

重组人瘦素融合蛋白在大肠杆菌中的低温自诱导表达、纯化和活性鉴定

目的:建立低温自诱导表达重组人瘦素(leptin)融合蛋白的系统方法,经体外纯化获得大量具有生物活性的瘦素蛋白。方法:从cDNA文库中扩增瘦素编码区,克隆到pGEM-Teasy载体,测序正确后亚克隆到A1.3表达载体,转入BL21(DE3),低温自诱导表达。用SDS-PAGE及Western印迹分析鉴定表达产物。对低温自诱导表达产物rMBP-10His-Leptin进行纯化和酶切,获得可与瘦素单抗发生特异性反应的瘦素蛋白。用Km小鼠减肥实验检验其生物学活性。结果:在22×103处有明显的新增蛋白带,含量超过总蛋白的40%,Western印迹证实为瘦素蛋白。Km小鼠减肥实验证实其具有生物学活性。结论:成功建立了低温诱导表达rMBP-10His-Leptin的系统方法,获得大量瘦素蛋白,经验证表达产物具有免疫活性和生物学活性,可供进一步基础及临床研究应用。

ICOS—Ig融合蛋白联合亚剂量环孢素A诱导小鼠移植心脏长期存活

目的 探讨可诱导共刺激分子-Ig融合蛋白（ICOS-Ig）联合亚剂量环孢素A（CsA）对小鼠移植心脏存活时间的影响及其机制。方法自行构建ICOS-Ig。以Balb／c小鼠为供者，C57BL／6小鼠为受者，套管法制备小鼠颈部心脏移植模型，然后将模型分为5组：（1）未处理组，不做任何处理；（2）对照IgG组，移植当天以及术后第2、4、6天腹腔注射IgG250μg；（3）ICOS-Ig组，移植当天以及术后第2、4、6天腹腔注射ICOSylg250μg；（4）CsA组，移植当天以及术后第1～7天腹腔注射CsA10mg／kg；（5）ICOS-Ig＋CsA组，同时给予ICOS-Ig和CsA，使用时间和剂量同前。术后观察移植心脏存活时间，观察移植后第7天移植心脏的病理变化，并进行供、受者混合淋巴细胞反应（MLR），测定受者血清中供者特异性的同种抗体水平。结果各组小鼠移植心脏存活时间分别为：未处理组（8．5±1．5）d，对照IgG组（8．0±0．8）d，ICOS-Ig组（29．5±7．7）d，CsA处理组（21．0±5．0）d，ICOS-Ig＋CsA组移植心脏存活时间均超过50d，6只（6／9）移植心脏存活时间〉100d，ICOS-Ig＋CsA组与其他4组比较，差异均有统计学意义（P〈0．01）。移植后7d，未处理组及对照IgG组心肌明显变性，纤维断裂，间质水肿，肌束间及血管周嗣有大量炎症细胞浸润，而ICOS-Ig组和CsA组心肌无明显变性，间质略水肿，血管周围有少量淋巴细胞浸润，ICOS-Ig＋CsA组的病理改变明显轻于ICOS-Ig组和CsA组。移植后7d，ICOSylg组和CsA组的脾脏淋巴细胞对同种抗原刺激反应比未处理组和对照IgG组明显降低（P〈0．05），而ICOS-Ig＋CsA组的抑制作用明显强于ICOS-Ig组和CsA组（P＜0．05）。移植后7d，ICOS-Ig组和CsA组受者血清中针对特异性供者的抗体水平明显低于未处理组和对照IgG组（P〈0．05），ICOS-Ig＋CsA组的抗体水平明显低于ICOS-Ig组和CsA组（P〈0．05）。结论ICOSylg可以降低受者对供者的免疫反应性，延长移植心脏的存活时间，联合亚剂量CsA可使异体移植心脏长期存活。

马桑内酯致痫大鼠海马结构内SYN和GFAP的表达及其意义

目的:研究马桑内酯所致癫痫持续状态下海马结构内突触体素(SYN)及胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)表达的变化规律,探讨癫痫的发生机制。方法:成年健康雄性SD大鼠30只,随机分为模型组及对照组,采用马桑内酯(50μg/kg)侧脑室注射法建立急性癫痫动物模型,应用免疫组织化学方法观察癫痫持续状态下SYN和GFAP的表达。结果:①模型组海马结构各区突触体素阳性免疫反应产物的密度较对照组普遍增加,尤以CA3区苔藓纤维层和齿状回分子层内带为甚(P<0.05)。②模型组海马结构内GFAP免疫反应阳性的胶质细胞与对照组相比,其平均光密度、胞体截面积和周长均显著增强或增大(P<0.05),GFAP免疫反应性增强。结论:突触体素表达的增强可能易化了神经递质的装载和释放,与癫痫持续状态的维持和加重相关。活化的星形胶质细胞在癫痫持续状态中可能主要起保护作用。

TRAIL_(114～281)-IL-24融合蛋白的原核表达及其体外抗肿瘤细胞活性

目的原核表达肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor,TNF)相关的凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis inducing ligand,TRAIL)114～281肽和人白细胞介素-24(Interleukin-24,IL-24)融合蛋白,并检测其体外抗肿瘤细胞活性。方法以人外周血单个核细胞总RNA为模板,PCR扩增TRAIL114～281和IL-24基因,经T4DNA连接酶连接成融合基因,克隆至pET-28a载体中,构建重组原核表达质粒pET-28a/TRAIL114～281-IL-24,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达的重组蛋白TI经层析法纯化后,进行Western blot分析,并采用MTT法检测其对肿瘤细胞增殖的影响,caspase3活性检测试剂盒检测其对不同肿瘤细胞caspase3活性的影响。结果重组表达质粒经酶切鉴定及测序证明构建正确;TI融合蛋白以包涵体形式表达,表达量约占菌体总蛋白的30%;纯化的重组蛋白纯度可达95%,且可与鼠抗人IL-24抗体发生特异性反应;经复性的蛋白能明显抑制人宫颈癌上皮细胞HeLa和人乳腺癌细胞MCF-7增殖,并显著提高肿瘤细胞的caspase3活性。结论已在大肠杆菌中表达了TRAIL114～281-IL-24融合蛋白,其具有诱导部分肿瘤细胞凋亡的活性。

葡萄糖转运蛋白1、缺氧诱导因子-1α和Ki-67在肝细胞癌中的表达及其相关性研究

目的探讨葡萄糖转运蛋白1（Glutl）、缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）和Ki-67在肝细胞癌中的表达及其相关性。方法运用组织芯片技术，通过免疫组织化学Envision法检测171例肝细胞癌组织、55例癌旁组织、22例正常肝组织中Glutl、HIF-1α和Ki-67的表达情况，并结合临床病理因素进行分析。结果Glutl、HIF-1α和Ki-67在171例肝细胞癌组织中的阳性表达率分别为15．2％、19．9％和66．1％，明显高于其在癌旁肝组织（1．8％、1．8％和5．5％）和正常肝组织（均阴性）中的表达率（P〈0．05）。Glutl和HIF-1α表达与肝细胞癌分化程度和TNM分期有关（P〈0．01，P〈0．05）；Ki-67表达与肝细胞癌分化程度有关（P〈0．01）。肝细胞癌组织中Glutl与HIF-1α的表达呈正相关（r1=0．553，P〈0．05）；Glutl、HIF-1α与Ki-67均呈正相关（r2=0．560，r3=0．613，P〈0．05）。结论Glutl、HIF-1α和Ki-67在肝细胞癌的发生发展中起着不同程度的作用，联合检测Glutl、HIF-1α和Ki-67可能有助于判断肝细胞癌的恶性程度、转移潜能及预后分析。

人源重组ICOSIg对鼠不成熟树突状细胞的生物学作用

目的分析人源可诱导共刺激分子(ICOS)可溶性融合蛋白(ICOSIg)与鼠源不成熟树突状细胞(DCs)是否发生特异性结合及其一般生物学特性。方法通过流式细胞术结合特异性抗体检测了解ICOSIg与不成熟DCs的结合作用;以AnnexinⅤ/PI双染色、活细胞染料CSFE和CCK-8研究ICOSIg对DCs的细胞毒性作用;以[3 H]掺入法研究ICOSIg对于混合淋巴细胞反应的阻断作用。结果 ICOSIg可结合小鼠DCs表面的ICOSL,ICOSIg不引起DCs早期和晚期凋亡,不影响DCs细胞的增殖,可以抑制不同基因小鼠脾细胞的混合淋巴细胞反应。结论本实验室构建的体外表达的ICOSIg具有较强的生物学活性,对鼠DCs无明显的生物学毒性作用,首次从实验角度证实人源ICOSIg可以特异性结合小鼠不成熟DCs表面配体ICOSL,可以用于进一步探讨ICOSL/ICOS共刺激通路的免疫作用。

Trx-DMLS-AIF融合蛋白的原核表达及其对白血病K562细胞脱细胞系统的影响

目的 :原核表达硫氧化还原蛋白-缺线粒体定位信号的凋亡诱导因子融合蛋白(thioredoxin-apoptosis-inducing factor-defected mitochondria localization sign,Trx-DMLS-AIF),并观察其对白血病K562细胞脱细胞系统的影响。方法 :构建表达融合蛋白Trx-DMLS-AIF的重组载体并将其转化至大肠埃希菌BL21中,应用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(isopropyl-β-D-1-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导融合蛋白Trx-DMLS-AIF的表达,并进行Ni-NAT柱亲和层析法纯化。建立白血病K562细胞的脱细胞系统,应用吖啶橙染色法观察Trx-DMLS-AIF对白血病K562细胞脱细胞系统的影响;免疫荧光染色法观察K562细胞质蛋白对Trx-DMLS-AIF进入细胞核的影响。结果 :IPTG成功诱导融合蛋白Trx-DMLS-AIF的表达,并获得纯化的Trx-DMLS-AIF蛋白。吖啶橙染色后发现,Trx-DMLS-AIF能够诱导脱细胞系统K562细胞核凋亡;免疫荧光染色后发现,K562细胞质蛋白可阻止Trx-DMLS-AIF蛋白进入细胞核。结论 :成功诱导融合蛋白Trx-DMLS-AIF的表达。Trx-DMLS-AIF可引起K562细胞核凋亡,K562细胞质蛋白可阻止Trx-DMLS-AIF进入细胞核。

2型糖尿病不同尿白蛋白排泄率患者血清Sirt1与炎症因子的相关关系

目的 探讨2型糖尿病不同尿白蛋白排泄率患者血清沉默信息调节因子1（Sirt1）与炎症因子水平及其相关关系.方法 436例2型糖尿病患者根据尿白蛋白排泄率（尿白蛋白与尿肌酐的比值,ACR）分为正常蛋白尿组（D1组168例）、微量蛋白尿组（D2组152例）、临床蛋白尿组（D3组116例）.采用酶联免疫分析（ELISA）法检测血清Sirt1、低氧诱导因子-1α（HIF-1α）、生长应答蛋白1（EGR1）、胰岛素样生长因子-Ⅰ （ⅠGF-Ⅰ）、单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）水平.并与正常对照组180例相比较.结果 2型糖尿病患者血清Sirt1水平显著低于对照组,且随着尿白蛋白排泄率增加,D1、D2、D3组Sirt1水平逐渐降低（P＜0.01）.与对照组相比,2型糖尿病患者血清炎症因子（HIF-1α、EGR1、IGF-Ⅰ、MCP-1）水平显著升高,并在D1、D2、D3组逐渐升高（均P＜0.01）.且血清Sirt1与炎症因子水平呈负相关.尿白蛋白/尿肌酐比值对数值[Ln （ACR）]（ACR取自然对数）与年龄、DM病史、FBG、空腹胰岛素（FINS）、HOMA-IR、HbA1c、LDL、TC、TG、血肌酐（Scr）、血尿素氮（BUN）、尿酸（UA）、HIF-1α、EGR1、IGF-Ⅰ、MCP-1呈正相关（P＜0.05）;与Sirt1呈负相关（P＜0.01）.HIF-1α、MCP-1、IGF-Ⅰ、DM病史、BUN、Sirt1、UA、LDL以及EGR1是影响Ln （ACR）的主要因素（P＜0.05）.结论 血清Sirt1或成为糖尿病肾病治疗的新靶点.提高血清Sirt1水平可能具有延缓糖尿病肾病的作用.

氨溴索对吸烟诱导的慢性支气管炎大鼠IκBα和TGF-β1表达的影响

目的探讨核转录因子-κB抑制蛋白-α（IκBα）和转化生长因子-β1（TGF-β1）在吸烟诱导的大鼠慢性支气管炎中的作用及氨溴索预先给药对慢性支气管炎大鼠IκBα和TGF-β1表达的影响。方法按随机数字表法将60只雄性Wistar大鼠分为正常组、模型组、低剂量氨溴索组（低剂量组）、高剂量氨溴索组（高剂量组）各15只。采用单纯吸烟的方法建立慢性支气管炎大鼠模型。低剂量组[30mg／（kg·次）]和高剂量组[75mg／（kg·次）]经腹腔注射氨溴索，每天吸烟前注射一次至实验结束。模型组于每天吸烟前腹腔内注射与低剂量组等体积生理盐水一次。76d后将各组大鼠处死，计算各组大鼠支气管肺泡灌洗液（BAFL）中自细胞计数及细胞分类计数；HE染色观察肺组织病理形态学变化；免疫组化法检测IκBα和TGF-β1在大鼠肺组织中的表达。结果模型组病理形态改变符合慢性支气管炎的特点，高、低剂量组与模型组比较，光镜下慢性支气管炎的改变明显减轻。与正常组比较，模型组BAFL中白细胞总数、中性粒细胞数增高，巨噬细胞数降低，肺组织中IκBα表达明显减弱（t=3．24，3．31，3．29，3．48，P〈0．05），TGF—β1表达明显增强（P〈0．05）。高、低剂量组与模型组比较BAFL中自细胞总数、中性粒细胞数降低，巨噬细胞数增高，肺组织中IκBα表达明显增强（t=2．86，2．97，2．92，3．52，2．42，2．88，2．58，3．48，p〈0．05），TGF-β1表达明显减弱（P〈0．05）。高剂量组较低剂量组IκBα表达强，TGF-β1表达减弱（t=2．82，3．64，P〈0．05）。结论吸烟诱导的慢性支气管炎大鼠气道炎症可能与IκBα表达下降和TGF-β1表达上升有关；氨溴索可能通过上调IκBα和下调TGF-β1在肺内的表达，发挥抗气道炎症的作用，并且呈现剂量依赖效应。

子癎前期-子癎患者胎盘HIF-1α与PLGF蛋白表达水平、外周血vWF浓度及相关性研究

目的 探讨子癎前期-子癎患者胎盘低氧诱导因子（HIF-1α）与胎盘生长因子（PLGF）蛋白表达水平及外周血血管性假血友病性因子（vWF）水平变化及其意义.方法 采用蛋白免疫印迹法及酶联免疫吸附法分别测定正常妊娠产妇（22例）、子癎前期轻度患者（28例）、子癎前期重度患者（32例）和子癎患者（9例）中PLGF,vWF和HIF-1α的表达水平,分析各组PIGF、vWF和HIF-1 α水平表达变化及相关性.结果 子癎前期轻度组、子癎前期重度组及子癎组中vWF和HIF-1α水平均显著高于对照组（t≥10.17,P＜0.01）,重度组显著高于轻度组（t=10.81,3.38,P＜0.01）,子癎组显著高于重度组（t=7.03,5.48,P＜0.01）;PLGF表达水平均显著低于对照组（t=15.79,23.72,11.94,P＜0.01）,重度组显著低于轻度组（t=6.02,P＜0.01）,子癎组显著低于重度组（t=3.77,P＜0.01）.子癎前期-子癎病情程度不同外周血vWF水平与胎盘组织中PLGF水平呈负相关（r=-0.601,P＜0.01）,而与HIF-1α水平呈正相关（r=0.701,P＜0.01）,HIF-1α与PLGF水平呈负相关（r=-0.501,P＜0.01）.结论 vWF、PLGF及HIF-1 α表达与子癎前期-子癎密切相关,其可能参与了子癎前期-子癎的发生发展,此三项标志物可作为预测子癎前期-子癎的指标.

宫颈癌组织中Hpa与DEK基因表达的相关性研究

目的研究DEK与Hpa基因在宫颈癌组织中的表达及二者的相关性。方法采用免疫组织化学方法对宫颈癌石蜡标本45例、宫颈上皮内瘤样病变（CIN）45例、正常宫颈组织10例进行Hpa及DEK基因检测。结果（1）DEK在宫颈癌组织、CIN、正常宫颈组织中阳性表达率分别为88．9％、24．4％、10．0％。宫颈癌组织中DEK阳性表达率高于CIN组织和正常组织（X2=38．05，P〈0．01；）（2=5．77，P〈0．05）；Hpa基因在宫颈癌组织、CIN及正常宫颈组织中的阳性表达率分别为75．6％、24．4％和10．0％，宫颈癌组织中Hpa阳性表达率高于CIN组织和正常组织（x2=31．69，12．94，P〈0．01）。（2）在宫颈癌组织中DEK基因表达与Hpa基因表达呈正相关（r=0．617，P=0．001）。结论宫颈癌组织及CIN组织中DEK、Hpa的表达共同影响CIN的发展及宫颈癌的发生和发展。