诱导重组人生长激素工程菌高效表达的研究

目的 筛选诱导重组人生长激素 (rhGH)工程菌高效表达的最佳条件 ,为中试及工业化发酵培养提供依据。方法 质粒PBV GH转化 4种不同宿主菌 ,比较 6种不同培养基在不同pH值、氧含量改变情况下 ,rhGH工程菌的生长和表达差异 ,筛选并确定最适宿主菌、最佳培养基及最佳诱导表达条件。结果 ①E coliDH5α为最适宿主菌 ;②TB培养基为最佳培养基 ;③培养基pH7 5～ 7 8有利于目的蛋白的表达。④在半对数生长期 (培养 4～ 5h)迅速升温 ,且菌密度控制在D6 0 0nm3 0之前诱导可获得较高的重组蛋白表达量 ,rhGH表达量占菌体总蛋白的 40 %。发酵时间为 1 0h。结论 E coliDH5α为rhGH高效表达的最适工程菌 ,E coliDH5α/PBV GH在pH7 5～ 7 8的TB培养基中发酵生长 1 0h,可使菌量最佳扩增 。

灵菌红素缩合酶PigC在大肠杆菌中表达条件优化

灵菌红素及其类似物具有良好的抗菌性能,在新型抗菌药物开发领域具有广阔的应用前景。灵菌红素缩合酶PigC是酶法合成灵菌红素及其类似物的关键酶,为了提高重组大肠杆菌Escherichia coli BL21（DE3）/pET-32a-PigC中pigC基因的表达水平,本研究对其诱导条件进行优化。在单因素实验结果的基础上,依据Box-Behnken中心组合原则设计培养基初始pH、乳糖浓度和诱导温度的3因素3水平响应面实验,以Pig C酶活为响应值优化重组菌的诱导条件。结果表明,在培养基初始pH7.1,乳糖浓度4.2 g/L,诱导温度为16.2℃的最佳条件下,该重组菌所产PigC的最高酶活达62.4 U/mL,是优化前的4.9倍,实际值与响应面预测值拟合良好,说明通过响应面试验设计对该重组菌诱导条件的优化是有效的。本研究为PigC的制备及其酶学特性研究提供了基础资料,为酶法合成灵菌红素及其类似物提供了一定的基础。

Study on the Factors Influencing Prokaryotic Expression of ScMYB Protein

[Objective] This study aimed to find out the factors influencing the prokary- otic expression of ScMYB protein and optimize the expression conditions. [Method] First, the prokaryotic expression plasmid ScMYB：：pEASY-E1 was constructed; and then the effects of various induction conditions on its expression were studied, in- cluding concentration of inductor IPTG, induction time, induction temperature and OD600 of the bacteria solution. [Result] All the induction time, induction temperature, and OD600 except the concentration of IPTG have significant influence on the expres- sion of target protein. [Conclusion] The expression of target protein reaches the high- est level under the conditions of induction temperature 37 ℃, induction time 4 h and OD600 0.6-1.0.