诱生型一氧化氮合成酶在豚鼠噪声损伤耳蜗中的表达

目的 观察诱生型一氧化氮合成酶 (iNOS)在噪声暴露豚鼠耳蜗中的表达。方法 将研究组豚鼠暴露于白噪声造成噪声性聋的模型 ,耳蜗用石蜡包埋、切片 ,用免疫组织化学的方法观察iNOS在耳蜗的表达。结果 iNOS在噪声暴露豚鼠耳蜗中表达阳性 ,以血管纹和螺旋神经节的表达较强。结论 iNOS在噪声暴露豚鼠耳蜗中呈阳性表达 ,提示一氧化氮在噪声性聋的发病机制中起重要作用。

诱生型一氧化氮合成酶在豚鼠内淋巴积水耳蜗的表达

观察诱生型一氧化氮合成酶 (iNOS)在豚鼠内淋巴积水耳蜗的表达。将 2 0只豚鼠随机分为正常对照组和实验组 ,破坏实验组豚鼠内淋巴囊以造成内淋巴积水模型。采用免疫组织化学的方法检测iNOS在内淋巴积水耳蜗的表达。结果显示 ,iNOS在内淋巴积水耳蜗的表达阳性 ,且以血管纹和螺旋神经节细胞的表达较强。

子宫内膜异位症中上皮型及诱生型一氧化氮合成酶的表达和意义

目的 :检测上皮型一氧化氮合成酶 (eNOS)及诱生型一氧化氮合成酶 (iNOS)在异位子宫内膜腺上皮细胞中的表达 ,探讨NO/NOS卵巢子宫内膜异位症和子宫腺肌病中的作用。方法 :应用免疫组织化学SP法检测eNOS和iNOS在 71例异位子宫内膜和 3 2例正常子宫内膜中的表达。结果 :eNOS在正常子宫内膜腺上皮细胞的增生期表达较低 ,分泌期较高。iNOS在正常子宫内膜中的表达未见明显变化 ;异位子宫内膜中的eNOS和iNOS的表达在增生期和分泌期均明显高于正常对照组 ;eNOS在子宫腺肌病组的表达高于卵巢子宫内膜异位症组 ,而i NOS的表达无差异 ;痛经组iNOS的表达明显高于无痛经组 ,而eNOS的表达无差异性。结论 :eNOS和iNOS在异位子宫内膜中呈持续性过强表达 ,提示NO/NOS可能与卵巢子宫内膜异位症和子宫腺肌病的发病及进展有关。

风药对肝郁脾虚型UC大鼠结肠组织一氧化氮含量和诱生型一氧化氮合成酶活性的影响

目的:探讨风药对溃疡性结肠炎大鼠结肠组织一氧化氮(N0)含量和诱生型一氧化氮合成酶(iNOS)活性的影响。方法:采用病证结合复合法复制肝郁脾虚型UC大鼠后,分别给予痛泻要方加风药、痛泻要方、痛泻要方去防风灌胃治疗,模型对照组和正常对照组给予生理盐水,4周后处死大鼠,分离其结肠组织,用生化法检测结肠组织NO含量和iNOS的活性,并评价结肠组织损伤。结果:空白对照组比较,模型组iNOS活性和NO含量上升(P<0.01);与模型组比较,痛泻要方加风药、痛泻要方和痛泻要方去防风组iNOS和NO水平下降,其中痛泻要方加风药和痛泻要方组与模型组比较有显著差异(P<0.01,P<0.05)。结论:风药可通过降低结肠组织NO含量和iNOS活性,来达到对UC大鼠结肠黏膜的保护作用。

诱生型一氧化氮合成酶N端蛋白的诱导表达与纯化

诱生型一氧化氮合成酶（ｉＮＯＳ）Ｎ端蛋白的表达，对阐明其功能和制备ｉＮＯＳ特异性抗体具有重要意义。本文对ｉＮＯＳ１１９６ＡＡ重组蛋白在大肠杆菌中的表达条件进行了优化，结果表明：在优化条件下，经ＩＰＴＧ诱导，重组蛋白表达量可达菌体蛋白的１５％２０％。为获得重组蛋白纯品，建立了Ｈｉｓ．ＢｉｎｄＴＭ柱亲和层析法和凝胶蛋白的两步纯化法。

高糖对系膜细胞诱生型一氧化氮合酶表达及细胞外基质合成的影响

目的:探讨高糖对体外培养的系膜细胞诱生型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA表达的调节作用及NO合成的变化,以及上述变化对细胞外基质(ECM )合成的影响。方法:利用脂多糖(LPS)诱导系膜细胞表达iNOS ,观察5 .6、10、2 5、4 0mmol/L不同糖浓度,在0、4、2 4、4 8h不同时间点培养的系膜细胞iNOSmRNA表达的变化及培养上清中NO、Ⅳ型胶原、纤维连接蛋白含量的变化,以相同渗透压的甘露醇为对照组。细胞增殖测定采用MTT法,iNOS表达采用RT -PCR的方法,NO的检测采用硝酸还原法,Ⅳ型胶原、纤维连接蛋白的测定采用ELISA法。结果:高糖抑制系膜细胞增殖;LPS刺激后系膜细胞可表达iNOS ;高糖浓度时iNOSmRNA表达增加,呈浓度和时间依赖性,相同渗透压的甘露醇无类似作用(P <0 .0 1) ;随着糖浓度的升高和时间延长,实验组上清中NO含量增加,Ⅳ型胶原、纤维连接蛋白含量增加。结论:高糖可上调系膜细胞iNOSmRNA的表达和促进NO、Ⅳ型胶原、纤维连接蛋白的合成。

诱生型氧化氮合成酶和动脉粥样硬化

内皮衍生的具有广泛特性的松弛因子氧化氮(NO)是一个生存短暂的自由基,它是由三种异构酶作用于L-精氨酸合成的。这三种酶分别为:固有表达型(神经原型,或Ⅰ型nNOS;内皮型或Ⅱ型eNOS)、及被细胞因子刺激形成型(诱生型或Ⅱ型iNOS)。

低氧诱导肺血管平滑肌细胞诱生型一氧化氮合酶基因表达

本研究采用原位杂交、免疫组织化学、酶组织化学染色方法从三个层次分别证明低氧诱导大鼠肺血管中膜平滑肌细胞一氧化氮合酶（ＮｉｔｒｉｃＯｘｉｄｅＳｙｎｔｈａｓｅ，ＮＯＳ）的基因和蛋白表达，并使中膜平滑肌细胞具有ＮＯＳ活性；离体培养的肺动脉平滑肌细胞实验也证明低氧使肺动脉平滑肌细胞ＮＯＳ活性增加，ＮＯ生成增多。提示诱生型ＮＯＳ基因可能是一种低氧诱导基因，低氧诱导ＮＯＳ表达可能是细胞感受低氧的一种重要机制。

急性脑梗死患者血清(浆)脂联素、诱生型一氧化氮合酶、内皮素的关系及临床意义

目的观察急性脑梗死(ACI)患者血清(浆)脂联素(ADP)、诱生型一氧化氮合酶(iNOS)和内皮素(ET)水平的动态变化,探讨三者在ACI中的作用、相互关系及临床意义。方法选择ACI患者29例为脑梗死(CI)组,健康体检者27例为对照组。采用酶联免疫吸附法(ELISA法)检测血清ADP水平,化学比色法检测血清iNOS水平,放射免疫法检测血浆ET水平,观察发病48 h内及入院后10 d前述指标的变化。第一次结果记为"1",第二次结果记为"2"。计算责任梗死灶体积。结果 CI组ADP1水平显著低于对照组(P<0.05),iNOS1、ET2水平显著高于对照组(P<0.01,P<0.05),ADP2较ADP1水平显著升高(P<0.05),iNOS2较iNOS1水平显著降低(P<0.01)。iNOS1水平与梗死体积呈显著正相关(r=0.371,P<0.05)。ADP1与iNOS1水平呈显著正相关(r=0.418,P<0.05)。结论 ACI患者血清(浆)ADP水平显著降低,iNOS及ET水平显著升高,前两者动态变化明显且显著正相关。血清iNOS水平可以反映CI的严重程度。

诱生型一氧化氮合酶与脑缺血后期损伤

脑缺血后期敏感细胞受缺血局部产生的某些细胞因子以及血管切变力、氧化还原状态的改变等因素所诱导，表达活性诱生型一氧化氮合酶（ｉｎｄｕｃｉｂｌｅｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅｓｙｎｔｈａｓｅ，ｉＮＯＳ）并持续催化大量的ＮＯ。后者通过干扰细胞正常代谢、形成自由基等途径产生强大的神经细胞毒性。脑缺血损伤后２４ｈ应用选择性的ｉＮＯＳ抑制剂仍能明显减少实验动物的脑缺血梗死区面积，提示ｉＮＯＳ选择性抑制剂有望成为极有价值的脑缺血损伤治疗药物。

诱生型一氧化氮合酶在正常豚鼠耳蜗内的分布

目的 :观察诱生型一氧化氮合酶 (inducible nitric oxide synthase,i NOS)在正常豚鼠耳蜗内的分布。方法 :以特异性 i NOS抗体 ,应用免疫组化 ABC法结合显微图像定量分析技术 ,在 10只正常豚鼠耳蜗冰冻切片上检测 i NOS。结果 :i NOS的阳性免疫反应产物分布于耳蜗的血管纹、螺旋神经节细胞、Corti器的内、外毛细胞及神经纤维。结论 :正常豚鼠耳蜗有 i NOS表达 ,提示 i

白芍总苷对骨关节炎血清及关节液中一氧化氮及诱生型一氧化氮合酶的影响

目的探讨白芍总苷(total glucosides of paeony,TGP)对骨关节炎(OA)血清及关节液中一氧化氮(NO)及诱生型一氧化氮合酶(iNOS)的影响。方法选择30例膝OA患者,予TGP治疗,于治疗前、治疗后1月和3月测定血清及关节液中NO及iNOS含量,比较其差异。结果TGP治疗1月患者血清及关节液中NO及iNOS含量与治疗前相比无差异性(P>0.05),治疗后3月患者血清及关节液中NO及iNOS含量与治疗前及治疗后1月相比均有显著差异性(P<0.001)。结论TGP可以降低OA患者血清及关节液中NO及iNOS的含量,是治疗OA的有效药物。

诱生型一氧化氮合酶抗体的制备与初步应用

目的制备诱生型一氧化氮合酶 (iNOS)特异性抗体并应用于iNOS检测。方法将iNOSN端片段装入原核表达载体pET 2 8a(+) ,在大肠杆菌BL2 1中表达 ,两步法纯化目的蛋白 ,使用纯化蛋白制备iNOS多克隆抗体。获得的抗血清用于小鼠巨噬细胞及小鼠脑缺血模型中iNOS的检测。结果得到具有较高表达量的融合蛋白 ,经两步纯化获得iNOSN端融合蛋白纯品 ,将此蛋白免疫家兔 ,得到iNOS多克隆抗体 ,Westernblot分析表明该抗体不与nNOS、eNOS交叉反应 ,而能检测组织、细胞中的iNOS。

诱生型一氧化氮合酶和血管内皮生长因子在皮肤血管瘤中的表达及其与血管增生的关系

目的:研究诱生型一氧化氮合酶(iNOS)及血管内皮生长因子(VEGF)在增生期皮肤血管瘤组织中的表达及相关性,探讨它们与增生期血管瘤血管生成的关系,研究iNOS产生的一氧化氮(NO)和VEGF的相互作用及NO在介导VEGF促血管瘤间质内血管生成中的作用机制。方法:应用免疫组化法检测51例增生期皮肤血管瘤标本中iNOS、VEGF和第Ⅷ因子相关抗原(FⅧRAg),血管内皮细胞特异性染色计数肿瘤微血管密度(MVD)。结果:①42例血管瘤组织表达VEGF,32例表达iNOS,血管畸形表达较弱或不表达iNOS和VEGF;②VEGF与iNOS的表达呈正相关性;③VEGF、iNOS的表达与血管瘤组织MVD呈正相关性,血管瘤MVD明显高于血管畸形。结论:①VEGF表达与iNOS表达具有明显的相关性,提示iNOS对VEGF的表达和调节血管生成过程中可能具有重要作用;②MVD随着VEGF和iNOS表达的增强而增加,说明两者对血管瘤血管生成具有促进作用。

TNF-α和IL-1β对HaCaT细胞诱生型一氧化氮合酶表达的影响

目的 探讨炎症性细胞因子肿瘤坏死因子 α(tumornecrosisfactor α ,TNF α)协同白细胞介素 1β(inter leukin 1β ,IL 1β)对体外培养角质形成细胞 (keratinocye ,KC)株HaCaT细胞诱生型一氧化氮合酶 (induciblenitricoxidesyn thase ,iNOS)mRNA和蛋白表达的调节作用 ,以及地塞米松对TNF α和IL 1β作用的影响。 方法 用RT PCR、Westernblotting和免疫组织化学 (SP)方法检测HaCaT细胞iNOSmRNA和蛋白表达情况。结果 正常培养HaCaT细胞iNOS微弱表达或不表达 ,TNF α协同IL 1β显著上调HaCaT细胞iNOSmRNA和蛋白表达 ,地塞米松可显著抑制TNF α和IL 1β的作用。结论 推测TNF α和IL 1β可能通过上调角质形成细胞表达iNOS合成释放的一氧化氮 (niricoxide ,NO)参与皮肤免疫和炎症反应 ;地塞米松的治疗效应可能部分与其能抑制iNOS表达有关。

牛珀至宝微丸对内毒素休克肾组织诱生型一氧化氮合酶表达的影响

目的 探讨牛珀至宝微丸对内毒素休克肾组织iNOS表达的作用。方法 静脉注射内毒素 (LPS) 1 5mg/kg、腹腔注射D 氨基半乳糖糖 (D Ga1N) 10 0mg/kg造成内毒素休克模型 ,用牛珀至宝微丸干预处理 ,免疫组化方法检测诱生型一氧化氮合酶 (iNOS)在肾组织内的表达。结果 牛珀至宝微丸可以使肾内iNOS表达减弱 ,肾损伤减轻。结论 牛珀至宝微丸可以减轻内毒素休克造成的肾损伤 。

银杏叶提取物对肝纤维化大鼠肝脏诱生型一氧化氮合酶及内皮素表达的影响

目的:观察银杏叶提取物(GbE)对肝纤维大鼠肝组织iNOS、ET表达的影响,探讨GbE抗肝纤维的作用机制。方法:采用40%的CCl4皮下注射,3 mL.kg-1.d-1,2次/周,首剂加倍,连续6周诱导大鼠肝纤维化模型,同时分别以高、中、低剂量(200、100、50 mg.kg-1.d-1)的GbE灌胃干预6周,RT-PCR及免疫组化法分别检测肝组织iNOS和ET基因的mRNA及蛋白表达。结果:模型组大鼠肝组织iNOS和ET基因的mRNA及蛋白表达均较正常组明显增高;应用高、中、低剂量GbE干预后,大鼠肝组织iNOS和ET基因的mRNA及蛋白表达明显下降。结论:GbE下调肝纤维化大鼠肝组织iNOS和ET基因的转录和表达可能是其抗肝纤维化作用的机制之一。

诱生型一氧化氮合酶调节体外培养大鼠主动脉平滑肌细胞中MMP的表达

目的 探讨在体外培养大鼠主动脉平滑肌细胞 (SMC)中 ,一氧化氮 (NO)的产生及诱生型一氧化氮合酶 (iNOS)的表达变化对基质金属蛋白酶MMP 2 ,MMP 9的调节。方法 酶消化法培养大鼠主动脉平滑肌细胞 (SMC) ,α actin及电镜鉴定SMC后 ,取 3～ 5代SMC用IL 1β诱导iNOS表达 ,使用不同浓度的选择性iNOS抑制剂氨基胍 ,通过RT PCR观察NO调节MMP 2 ,MMP 9的表达情况。结果 氨基胍抑制IL 1β诱导的SMC表达iNOS后 ,在一定范围内降低MMP 2mRNA表达 ,但对MMP 9的表达无明显影响。结论 用不同浓度的氨基胍抑制IL 1β诱导体外培养的SMC表达iNOS ,MMP 2mRNA的表达在一定范围内呈浓度依赖性增加 ,提示NO对MMP 2表达的抑制作用可能在NO介导的以血管重构为特征的一系列血管疾病如腹主动脉瘤 ,经皮血管腔内成形术后再狭窄的病理生理机制中有重要作用 ,并可能为这些疾病的治疗提供新思路。

诱生型一氧化氮合酶在肝癌中表达的意义

为证实诱生型一氧化氮合酶 (i NOS)在肝癌发生、发展中的作用 ,采用免疫组化方法对 5 0例原发性肝细胞癌 (HCC)及癌旁组织 (PCHT)中的 i NOS表达情况进行了检测。结果显示 ,i NOS位于肝细胞细胞浆 /膜中 ,在HCC中的表达强度变化较大 ,在 PCHT中呈强表达 ;正常肝组织中呈弱表达 ;淋巴细胞中无表达。证实 i NOS的异常表达可导致 HCC患者体内 NO生成异常及机体对癌细胞的免疫异常。提示提高体内 NO合成 。

抑制诱生型一氧化氮合酶对大鼠心肌梗死后左心室形态及心功能的影响

目的 :探讨抑制诱生型一氧化氮合酶 (iNOS)对大鼠心肌梗死后左心室形态及心功能的影响。方法 :结扎大鼠左冠状动脉建立心肌梗死模型。免疫组化检测心肌iNOS表达水平。分别于心肌梗死发生前、心肌梗死 7d后开始iNOS抑制剂S methylisothiourea (SMT)干预 ,于心肌梗死 6周后测定血浆一氧化氮 (NO)、心肌iNOS表达、左心室形态变化和心功能。结果 :心肌梗死 6周后心肌iNOS表达增加 ,血浆NO水平上升。于心肌梗死发生前、心肌梗死 7d后开始SMT干预均可降低血浆NO水平 ,减轻心室扩张 ,减轻心室重量 ,改善心功能。心肌梗死发生前开始SMT干预尚可提高存活率。结论 :iNOS在心肌梗死后心功能障碍的发生发展过程中起促进作用 ,抑制iNOS可以改善左心室功能 ,其机制与减轻心肌梗死后左心室重构有关。