诱生型一氧化氮合酶抑制剂对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的 探讨诱生型一氧化氮合酶抑制剂 (iNOSI)氨基胍 (aminoguanidine ,AG)对大鼠脑缺血 再灌注 (ischemia reperfusion ,IR)后期的保护作用。方法 采用Longa改良法 ,建立局灶缺血 再灌注模型。于再灌注即刻给予AG(10 0mg/kg ,每天两次 ) ,测定再灌注后不同时点 (6h ,12h ,2 4h ,48h ,72h ,7d)脑内NOS活性的动态变化及脑梗死体积 ,并对顶叶皮层半暗带区进行光镜下观察。结果 再灌注后 12h～ 72h ,AG治疗组NOS活性明显降低 ,梗死体积减小 ,光镜下病理学观察也表明 ,各时点AG治疗组顶叶皮层神经元变性数目及变性程度均减轻 ,微循环障碍也有不同程度缓解。结论 大鼠大脑中动脉闭塞 3h ,于再灌注即刻给予AG ,可使脑梗死体积缩少 ,使半暗带区神经元变性、微循环障碍程度减轻 ,起到对脑保护的作用。

诱生型一氧化氮合酶抑制剂对TNF—α诱导的人成骨细胞凋亡的保护作用

目的：探讨TNF－α对体外培养人成骨细胞的凋亡影响及iNOS抑制剂对其保护作用。方法：对流产胎儿颅骨分离培养人成骨细胞后分3组：对照组：TNF－α组（不同浓度），TNF－α加L－NMMA组。通过细胞计数绘制生长曲线，流氏细胞仪检测，电镜下观察超微结构的变化，三项指标检测成骨细胞凋亡情况。结果：TNF－α可诱导成骨细胞凋亡，并呈时间剂量依赖性，iNOS抑制剂L－NMMA可有效抑制TNF－α对成骨细胞的损伤作用。结论：iNOS抑制剂对TNF－α诱导的成骨细胞凋亡具有一定的保护作用。

诱生型一氧化氮合酶抑制剂氨基胍对鼠胚发育的影响

目的 :研究诱生型一氧化氮合酶 (ｉｎｄｕｃｉｂｌｅｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅｓｙｎｔｈａｓｅ ,ｉＮＯＳ)选择性抑制剂氨基胍 (ａｍｉｎｏｇｕａｎｉ ｄｉｎｅ,ＡＧ)对鼠胚发育的影响 ,以探讨ｉＮＯＳ对妊娠的作用机制。方法 :雌性昆明小鼠 ,自妊娠第 3、7、1 4天开始皮下注射ＡＧ 1 0或 2 0ｍｇ·ｋｇ- 1 ·ｄ- 1 ,直到妊娠第 1 9天取材 ,测量鼠胎、胎盘重量 ,记录胚胎数、吸收点 ,并观察胎盘、脐带组织学变化 ,用免疫组化、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸黄递酶组化方法测量胎盘脐带内的ＮＯＳ活性。结果 :早期子宫孕珠有吸收的表现。孕早期、中期用药组母鼠重量、胚胎数减少 ,吸收点增多 ,但不影响鼠胎、胎盘的重量。图像分析胎盘内ｉＮＯＳ表达量差异无显著性。结论 :ＡＧ抑制小鼠妊娠早、中期胚胎的着床与发育 。

诱生型一氧化氮合酶选择性抑制剂的研究

:由诱生型一氧化氮合酶 (iNOS)产生的一氧化氮 (NO)起宿主防御作用 ,同时也与许多疾病 ,如败血性休克和炎症等有关。iNOS选择性抑制剂通过降低相关组织中的NO水平而对上述疾病起到防治作用。

一氧化氮合酶抑制剂对大鼠耳蜗诱生型一氧化氮合酶mRNA表达的影响

目的观察一氧化氮合酶(NO synthase,NOS)抑制剂L-NAME(N-nitro-arginine methylester)对大鼠耳蜗新霉素诱导的NOS mRNA表达的影响。方法将50只SD(Sprague-Dawley)大鼠分为3组:A组10只,肌肉注射注射用水2mL,1次/d,共14d;B组20只,肌肉注射新霉素,150mg/kg体质量,1次/d,共14d;C组20只,腹腔注射L-NAME,50mg/kg体质量,30min后肌肉注射新霉素,150mg/kg体质量,1次/d,,共14d。应用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(real time reverse transcription-polymerase chain reaction,real-time RTPCR)技术检测各组耳蜗顶圈、中圈、底圈诱生型NOS mRNA的表达,比较与A组相比,B组和C组诱生型NOS增高比例。结果B组和C组顶圈诱生型NOS的表达增高比例分别为57.10±13.74和40.54±10.99,中圈分别为63.48±12.20和18.45±1.99,底圈分别为71.97±13.15和48.03±11.97,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论NOS抑制剂可以抑制新霉素诱导的耳蜗组织NOS mRNA的高表达,减轻此类抗生素的耳毒性。

抑制诱生型一氧化氮合酶对大鼠心肌梗死后左心室形态及心功能的影响

目的 :探讨抑制诱生型一氧化氮合酶 (iNOS)对大鼠心肌梗死后左心室形态及心功能的影响。方法 :结扎大鼠左冠状动脉建立心肌梗死模型。免疫组化检测心肌iNOS表达水平。分别于心肌梗死发生前、心肌梗死 7d后开始iNOS抑制剂S methylisothiourea (SMT)干预 ,于心肌梗死 6周后测定血浆一氧化氮 (NO)、心肌iNOS表达、左心室形态变化和心功能。结果 :心肌梗死 6周后心肌iNOS表达增加 ,血浆NO水平上升。于心肌梗死发生前、心肌梗死 7d后开始SMT干预均可降低血浆NO水平 ,减轻心室扩张 ,减轻心室重量 ,改善心功能。心肌梗死发生前开始SMT干预尚可提高存活率。结论 :iNOS在心肌梗死后心功能障碍的发生发展过程中起促进作用 ,抑制iNOS可以改善左心室功能 ,其机制与减轻心肌梗死后左心室重构有关。

诱生型一氧化氮合酶特异性抑制肽的制备

目的 :通过噬菌体展示技术筛选 i NOS特异性抑制肽。方法 :将 i NOS FAD结合区及其附近序列的基因片段装入 p ET-2 8a( + ) ,在大肠杆菌 BL2 1 中表达 ,His.Bind TM亲和层析柱纯化目的蛋白 ,使用纯化蛋白筛选Ph.D.-1 2 TM噬菌体库 ,筛选 i NOS活性抑制作用较高的噬菌体克隆 ,测序并合成其中具有一致序列的短肽。结果 :得到具有较高表达量的目的蛋白 ,经 His.Bind TM柱亲和层析纯化后纯度大于 95 % ,以纯化蛋白筛选 Ph.D.-1 2 TM噬菌体库 ,经 4轮筛选获得 1 0株 i NOS活性抑制作用较高的噬菌体克隆 ,测序发现其中 5株序列完全相同 ,合成该 1 2肽 ,初步研究表明其对 i NOS表现为高浓度抑制 ,低浓度兴奋的作用 ,而对 n NOS及 e NOS则没有影响。结论 :以 i NOSFAD片段蛋白为靶蛋白筛选得到的克隆对 i NOS活性具有特异性影响 ,可根据这些特征设计合成小分子前导药物 。

急性脑梗死患者血清(浆)脂联素、诱生型一氧化氮合酶、内皮素的关系及临床意义

目的观察急性脑梗死(ACI)患者血清(浆)脂联素(ADP)、诱生型一氧化氮合酶(iNOS)和内皮素(ET)水平的动态变化,探讨三者在ACI中的作用、相互关系及临床意义。方法选择ACI患者29例为脑梗死(CI)组,健康体检者27例为对照组。采用酶联免疫吸附法(ELISA法)检测血清ADP水平,化学比色法检测血清iNOS水平,放射免疫法检测血浆ET水平,观察发病48 h内及入院后10 d前述指标的变化。第一次结果记为"1",第二次结果记为"2"。计算责任梗死灶体积。结果 CI组ADP1水平显著低于对照组(P<0.05),iNOS1、ET2水平显著高于对照组(P<0.01,P<0.05),ADP2较ADP1水平显著升高(P<0.05),iNOS2较iNOS1水平显著降低(P<0.01)。iNOS1水平与梗死体积呈显著正相关(r=0.371,P<0.05)。ADP1与iNOS1水平呈显著正相关(r=0.418,P<0.05)。结论 ACI患者血清(浆)ADP水平显著降低,iNOS及ET水平显著升高,前两者动态变化明显且显著正相关。血清iNOS水平可以反映CI的严重程度。

低氧诱导肺血管平滑肌细胞诱生型一氧化氮合酶基因表达

本研究采用原位杂交、免疫组织化学、酶组织化学染色方法从三个层次分别证明低氧诱导大鼠肺血管中膜平滑肌细胞一氧化氮合酶（ＮｉｔｒｉｃＯｘｉｄｅＳｙｎｔｈａｓｅ，ＮＯＳ）的基因和蛋白表达，并使中膜平滑肌细胞具有ＮＯＳ活性；离体培养的肺动脉平滑肌细胞实验也证明低氧使肺动脉平滑肌细胞ＮＯＳ活性增加，ＮＯ生成增多。提示诱生型ＮＯＳ基因可能是一种低氧诱导基因，低氧诱导ＮＯＳ表达可能是细胞感受低氧的一种重要机制。

诱生型一氧化氮合酶与脑缺血后期损伤

脑缺血后期敏感细胞受缺血局部产生的某些细胞因子以及血管切变力、氧化还原状态的改变等因素所诱导，表达活性诱生型一氧化氮合酶（ｉｎｄｕｃｉｂｌｅｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅｓｙｎｔｈａｓｅ，ｉＮＯＳ）并持续催化大量的ＮＯ。后者通过干扰细胞正常代谢、形成自由基等途径产生强大的神经细胞毒性。脑缺血损伤后２４ｈ应用选择性的ｉＮＯＳ抑制剂仍能明显减少实验动物的脑缺血梗死区面积，提示ｉＮＯＳ选择性抑制剂有望成为极有价值的脑缺血损伤治疗药物。

诱生型一氧化氮合酶在正常豚鼠耳蜗内的分布

目的 :观察诱生型一氧化氮合酶 (inducible nitric oxide synthase,i NOS)在正常豚鼠耳蜗内的分布。方法 :以特异性 i NOS抗体 ,应用免疫组化 ABC法结合显微图像定量分析技术 ,在 10只正常豚鼠耳蜗冰冻切片上检测 i NOS。结果 :i NOS的阳性免疫反应产物分布于耳蜗的血管纹、螺旋神经节细胞、Corti器的内、外毛细胞及神经纤维。结论 :正常豚鼠耳蜗有 i NOS表达 ,提示 i

诱生型一氧化氮合成酶在豚鼠噪声损伤耳蜗中的表达

目的 观察诱生型一氧化氮合成酶 (iNOS)在噪声暴露豚鼠耳蜗中的表达。方法 将研究组豚鼠暴露于白噪声造成噪声性聋的模型 ,耳蜗用石蜡包埋、切片 ,用免疫组织化学的方法观察iNOS在耳蜗的表达。结果 iNOS在噪声暴露豚鼠耳蜗中表达阳性 ,以血管纹和螺旋神经节的表达较强。结论 iNOS在噪声暴露豚鼠耳蜗中呈阳性表达 ,提示一氧化氮在噪声性聋的发病机制中起重要作用。

TNF-α和IL-1β对HaCaT细胞诱生型一氧化氮合酶表达的影响

目的 探讨炎症性细胞因子肿瘤坏死因子 α(tumornecrosisfactor α ,TNF α)协同白细胞介素 1β(inter leukin 1β ,IL 1β)对体外培养角质形成细胞 (keratinocye ,KC)株HaCaT细胞诱生型一氧化氮合酶 (induciblenitricoxidesyn thase ,iNOS)mRNA和蛋白表达的调节作用 ,以及地塞米松对TNF α和IL 1β作用的影响。 方法 用RT PCR、Westernblotting和免疫组织化学 (SP)方法检测HaCaT细胞iNOSmRNA和蛋白表达情况。结果 正常培养HaCaT细胞iNOS微弱表达或不表达 ,TNF α协同IL 1β显著上调HaCaT细胞iNOSmRNA和蛋白表达 ,地塞米松可显著抑制TNF α和IL 1β的作用。结论 推测TNF α和IL 1β可能通过上调角质形成细胞表达iNOS合成释放的一氧化氮 (niricoxide ,NO)参与皮肤免疫和炎症反应 ;地塞米松的治疗效应可能部分与其能抑制iNOS表达有关。

诱生型一氧化氮合酶抗体的制备与初步应用

目的制备诱生型一氧化氮合酶 (iNOS)特异性抗体并应用于iNOS检测。方法将iNOSN端片段装入原核表达载体pET 2 8a(+) ,在大肠杆菌BL2 1中表达 ,两步法纯化目的蛋白 ,使用纯化蛋白制备iNOS多克隆抗体。获得的抗血清用于小鼠巨噬细胞及小鼠脑缺血模型中iNOS的检测。结果得到具有较高表达量的融合蛋白 ,经两步纯化获得iNOSN端融合蛋白纯品 ,将此蛋白免疫家兔 ,得到iNOS多克隆抗体 ,Westernblot分析表明该抗体不与nNOS、eNOS交叉反应 ,而能检测组织、细胞中的iNOS。

牛珀至宝微丸对内毒素休克肾组织诱生型一氧化氮合酶表达的影响

目的 探讨牛珀至宝微丸对内毒素休克肾组织iNOS表达的作用。方法 静脉注射内毒素 (LPS) 1 5mg/kg、腹腔注射D 氨基半乳糖糖 (D Ga1N) 10 0mg/kg造成内毒素休克模型 ,用牛珀至宝微丸干预处理 ,免疫组化方法检测诱生型一氧化氮合酶 (iNOS)在肾组织内的表达。结果 牛珀至宝微丸可以使肾内iNOS表达减弱 ,肾损伤减轻。结论 牛珀至宝微丸可以减轻内毒素休克造成的肾损伤 。

诱生型一氧化氮合酶调节体外培养大鼠主动脉平滑肌细胞中MMP的表达

目的 探讨在体外培养大鼠主动脉平滑肌细胞 (SMC)中 ,一氧化氮 (NO)的产生及诱生型一氧化氮合酶 (iNOS)的表达变化对基质金属蛋白酶MMP 2 ,MMP 9的调节。方法 酶消化法培养大鼠主动脉平滑肌细胞 (SMC) ,α actin及电镜鉴定SMC后 ,取 3～ 5代SMC用IL 1β诱导iNOS表达 ,使用不同浓度的选择性iNOS抑制剂氨基胍 ,通过RT PCR观察NO调节MMP 2 ,MMP 9的表达情况。结果 氨基胍抑制IL 1β诱导的SMC表达iNOS后 ,在一定范围内降低MMP 2mRNA表达 ,但对MMP 9的表达无明显影响。结论 用不同浓度的氨基胍抑制IL 1β诱导体外培养的SMC表达iNOS ,MMP 2mRNA的表达在一定范围内呈浓度依赖性增加 ,提示NO对MMP 2表达的抑制作用可能在NO介导的以血管重构为特征的一系列血管疾病如腹主动脉瘤 ,经皮血管腔内成形术后再狭窄的病理生理机制中有重要作用 ,并可能为这些疾病的治疗提供新思路。

诱生型一氧化氮合酶和血管内皮生长因子在皮肤血管瘤中的表达及其与血管增生的关系

目的:研究诱生型一氧化氮合酶(iNOS)及血管内皮生长因子(VEGF)在增生期皮肤血管瘤组织中的表达及相关性,探讨它们与增生期血管瘤血管生成的关系,研究iNOS产生的一氧化氮(NO)和VEGF的相互作用及NO在介导VEGF促血管瘤间质内血管生成中的作用机制。方法:应用免疫组化法检测51例增生期皮肤血管瘤标本中iNOS、VEGF和第Ⅷ因子相关抗原(FⅧRAg),血管内皮细胞特异性染色计数肿瘤微血管密度(MVD)。结果:①42例血管瘤组织表达VEGF,32例表达iNOS,血管畸形表达较弱或不表达iNOS和VEGF;②VEGF与iNOS的表达呈正相关性;③VEGF、iNOS的表达与血管瘤组织MVD呈正相关性,血管瘤MVD明显高于血管畸形。结论:①VEGF表达与iNOS表达具有明显的相关性,提示iNOS对VEGF的表达和调节血管生成过程中可能具有重要作用;②MVD随着VEGF和iNOS表达的增强而增加,说明两者对血管瘤血管生成具有促进作用。

银杏叶提取物对肝纤维化大鼠肝脏诱生型一氧化氮合酶及内皮素表达的影响

目的:观察银杏叶提取物(GbE)对肝纤维大鼠肝组织iNOS、ET表达的影响,探讨GbE抗肝纤维的作用机制。方法:采用40%的CCl4皮下注射,3 mL.kg-1.d-1,2次/周,首剂加倍,连续6周诱导大鼠肝纤维化模型,同时分别以高、中、低剂量(200、100、50 mg.kg-1.d-1)的GbE灌胃干预6周,RT-PCR及免疫组化法分别检测肝组织iNOS和ET基因的mRNA及蛋白表达。结果:模型组大鼠肝组织iNOS和ET基因的mRNA及蛋白表达均较正常组明显增高;应用高、中、低剂量GbE干预后,大鼠肝组织iNOS和ET基因的mRNA及蛋白表达明显下降。结论:GbE下调肝纤维化大鼠肝组织iNOS和ET基因的转录和表达可能是其抗肝纤维化作用的机制之一。

脑缺氧缺血新生大鼠诱生型一氧化氮合酶基因的表达及其与脑细胞凋亡的关系

目的 探讨新生大鼠缺氧缺血后脑内诱生型一氧化氮合酶 (i NOS)基因表达的变化及其与脑缺氧缺血所致细胞凋亡的关系。方法 建立新生大鼠缺氧缺血性脑损伤动物模型 ,应用快速竞争性逆转录 PCR技术及原位末端标记法观察脑缺氧缺血后不同时间点缺氧缺血侧大脑组织中 i NOS m RNA的表达及神经细胞凋亡的情况。结果 新生大鼠缺氧缺血后 ,缺氧缺血侧大脑 i NOS m RNA表达自 6h开始明显增强 ,其相对表达量为(0 .41± 0 .1 3 ) ;2 4h达高峰 ,相对表达量为 (2 .0 2± 0 .2 4) ,7d时回至基线水平。缺氧缺血侧脑组织中凋亡细胞数目亦自缺氧缺血后 6h开始明显增多 ,平均为 (2 1 .3± 3 .5 ) /1 0个高倍视野 (1 0 hpf) ;2 4h达高峰 ,约 (63 .7±3 .2 ) /1 0 hpf,与对照组 [平均为 (7.3± 2 .3 ) /1 0 hpf]比较差异有显著性 (P <0 .0 1 )。i NOS m RNA的表达高峰与缺氧缺血后脑细胞凋亡的高峰时相相吻合。结论 缺氧缺血可使新生大鼠脑 i NOS m RNA的表达增强和凋亡细胞增加 ,i NOS过表达在缺氧缺血后脑细胞凋亡的调控过程中起一定作用。

急性脑梗死患者血清(浆)脂联素、诱生型一氧化氮合酶、内皮素的关系及临床意义

目的观察急性脑梗死(ACI)患者血清(浆)脂联素(ADP)、诱生型一氧化氮合酶(iNOS)和内皮素(ET)水平的动态变化,探讨3者在ACI中的作用、相互关系及临床意义。方法选择ACI患者29例为脑梗死(CI)组,健康体检者27例为对照组。采用酶联免疫吸附法(ELISA法)检测血清ADP水平,化学比色法检测血清iNOS水平,放射免疫法检测血浆ET水平,观察发病48 h内及入院后10 d前述指标的变化。第1次结果记为"1",第2次结果记为"2"。计算责任梗死灶体积。结果 CI组ADP1水平显著低于对照组(P<0.05),iNOS1、ET2水平显著高于对照组(P<0.01,P<0.05),ADP2较ADP1水平显著升高(P<0.05),iNOS2较iNOS1水平显著降低(P<0.01)。iNOS1水平与梗死体积呈显著正相关(r=0.371,P<0.05)。ADP1与iNOS1水平呈显著正相关(r=0.418,P<0.05)。结论 ACI患者血清(浆)ADP水平显著降低,iNOS及ET水平显著升高,前两者动态变化明显且显著正相关。血清iNOS水平可以反映CI的严重程度。