诱生型一氧化氮合酶特异性抑制肽的制备

目的 :通过噬菌体展示技术筛选 i NOS特异性抑制肽。方法 :将 i NOS FAD结合区及其附近序列的基因片段装入 p ET-2 8a( + ) ,在大肠杆菌 BL2 1 中表达 ,His.Bind TM亲和层析柱纯化目的蛋白 ,使用纯化蛋白筛选Ph.D.-1 2 TM噬菌体库 ,筛选 i NOS活性抑制作用较高的噬菌体克隆 ,测序并合成其中具有一致序列的短肽。结果 :得到具有较高表达量的目的蛋白 ,经 His.Bind TM柱亲和层析纯化后纯度大于 95 % ,以纯化蛋白筛选 Ph.D.-1 2 TM噬菌体库 ,经 4轮筛选获得 1 0株 i NOS活性抑制作用较高的噬菌体克隆 ,测序发现其中 5株序列完全相同 ,合成该 1 2肽 ,初步研究表明其对 i NOS表现为高浓度抑制 ,低浓度兴奋的作用 ,而对 n NOS及 e NOS则没有影响。结论 :以 i NOSFAD片段蛋白为靶蛋白筛选得到的克隆对 i NOS活性具有特异性影响 ,可根据这些特征设计合成小分子前导药物 。