渝东北片区聚集性诺如病毒感染毒株的遗传多样性

目的分析2021-2022年渝东北片区聚集性诺如病毒感染毒株遗传多样性,促进重点人群和场所诺如病毒感染防控。方法采集聚集性诺如病毒感染事件中患者肛拭子及环境拭子,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测诺如病毒核酸,逆转录PCR扩增病毒RNA聚合酶/衣壳蛋白片段并测序分析,诺如病毒分型工具网站(http://www.rivm.nl/mpf/norovirus/typingtool)确定基因型,运用MEGA-X软件按最大似然法构建种系发生树。结果共调查渝东北片区4个区县11起聚集性诺如病毒感染事件,qRT-PCR检测55份样品,均为GII基因群诺如病毒,经测序存在6种基因型。GII.17[P17]基因型导致4起疫情,GII.17[P17]和GII.1[P16]基因型混合感染导致1起疫情,GII.6[P7]及GII.8[P8]基因型各引起2起疫情,GII.2[P16]及GII.3[P12]基因型分别导致1起疫情。种系发生分析显示55株GII基因群毒株分布在5个基因簇。不同事件相同基因型的诺如病毒都位于同一个基因簇。不同事件不同基因型的诺如病毒各自聚集成簇,分属于不同的基因簇。结论2021-2022年渝东北片区11起聚集性诺如病毒感染毒株涉及多种基因型,GII.17[17]是引起聚集性感染事件的常见基因型,绝大多数事件由单一传染源引起,不同事件相同基因型的诺如病毒存在遗传相关性。

山东省沿海地区市场销售贝类诺如病毒、甲肝病毒、轮状病毒和星状病毒污染状况调查

目的:为了解山东省沿海地区市场销售贝类肠道病毒污染情况,对贝类病毒污染进行初步风险排查和安全性分析。方法:采集山东省滨州、东营、威海、日照、烟台、潍坊共6个地市市场销售的贝类,包括牡蛎、贻贝、扇贝等7种,进行诺如病毒、甲肝病毒、轮状病毒和星状病毒实时荧光RT-PCR检测,并针对阳性样品的区域分布、种类分布、病毒分型和混合感染情况等进行分析。结果:GI型诺如病毒阳性率为3%,GII型诺如病毒阳性率为20%,其中东营、烟台和潍坊阳性率较高,烟台1份样品为GI/GII型诺如病毒合并感染;甲肝病毒、轮状病毒、星状病毒阳性率分别为4%、3%、3%,其中日照有2份合并感染样品,分别为甲肝/GII型诺如病毒合并感染、轮状/GII型诺如病毒合并感染。结论:山东沿海地市市场销售贝类存在肠道病毒感染的情况,尤以诺如病毒阳性率较高,且存在病毒合并感染。

永兴县某职业学校一起诺如病毒暴发疫情调查分析

目的 分析永兴县某职业学校一起诺如病毒感染暴发疫情流行病学特征及暴发原因,为有效预防控制诺如病毒感染提供科学依据。方法 收集整理暴发疫情调查处理资料,包括病例搜索及个案调查、现场卫生学调查、实验室检测等资料,采用描述性流行病学方法分析流行病学特征及疫情原因。结果 本起疫情持续9天,累计发现病例38例,其中5例实验室诊断病例(诺如病毒GⅠ型),33例临床诊断病例,罹患率为1.59%;分布在11个班,男生22人,女生16人;均为寄宿生,无教师发病;症状以腹泻、腹痛为主;环境标本和水样检测未发现诺如病毒;食堂员工中发现3例隐性感染者,1例GⅠ型和2例GⅡ型。结论 本起暴发疫情由诺如病毒引起,要加强学校卫生管理,积极开展健康教育,发病高峰季节应加强重点人群诺如病毒感染监测。

2022至2023年度黄埔区腹泻儿童诺如病毒感染及基因型的研究

目的:对2022年至2023年广州市黄埔区儿童感染诺如病毒(NoV)开展病原学调查,阐明该人群中NoV的基因型分布。方法:采集急性腹泻儿童1~3 d内的粪便标本,采用实时荧光定量RT-PCR方法检测NoV核酸,选择45份阳性样本扩增病毒部分RdRp区基因、VP1区基因、功能未知碱性蛋白酶(ORF3编码)基因,并进行基因测序分析。结果:45份阳性样本中,35份感染的NoV属于GⅡ.P31(GⅡ.Pe)/GⅡ.4毒株,10份属于GⅠ.P6/GⅠ.6毒株。对于GⅠ.P6/GⅠ.6毒株,很难通过未知功能碱性蛋白酶基因序列进行进一步分类,而GⅡ.P31(GⅡ.Pe)/GⅡ.4毒株则可能通过未知功能碱性蛋白酶基因序列进行进一步分类。结论:2022年至2023年广州市黄埔区2~6岁儿童NoV感染主要以GⅡ组为主,其次是GⅠ组;对于GⅡ.P31(GⅡ.Pe)/GⅡ.4毒株有希望通过未知功能碱性蛋白酶基因序列进行进一步分类。

2020-2022年海南省诺如病毒胃肠炎暴发疫情分子流行特征分析

目的 了解海南省2020—2022年诺如病毒暴疫情分子流行特征及诺如病毒流行株基因组进化情况。方法 收集2020年1月至2022年12月诺如病毒暴发信息及标本,应用实时荧光反转录聚合酶链式反应对样本进行诺如病毒检测,阳性样本通过RT-PCR扩增、测序和序列分析;对其中8株诺如病毒毒株进行基因组扩增和序列分析。结果 2020年1月至2022年12月,共报告胃肠炎暴发39起,通过检测确定诺如病毒引起的暴发共25起,主要发生在托幼机构和学校(20/25,80%)。诺如病毒暴发主要集中在海口周围县(东北部),包括定安(5起)、文昌(4起)、澄迈(4起)和临高(3起);其次集中在中西部,包括白沙(2起)、乐东(2起)和东方(3起);东南部万宁1起。2~17岁诺如病毒阳性构成比男性高于女性,大于55岁年龄组诺如病毒阳性构成比女性高于男性,18~40岁阳性检出性别与职业相关。根据RT-PCR分型及测序,13起诺如病毒暴发获得分型结果,均为GⅡ组诺如病毒,检出4种基因型,GⅡ.2[P16]为主要流行株,占60%(9/13),其他3种基因型为GII.4 Sydney[P31](15.4%,2/13)和GⅡ.4 Sydney[P16](7.7%,1/13)和GII.3[P12](7.7%,1/13)。进一步对8株诺如病毒基因组分析,仍与先前毒株处于同一份分支,且均出现一定数量氨基酸变异。结论 诺如病毒是引起海南地区胃肠炎暴发的主要病原,GⅡ.2[P16]为主要流行株。持续开展及加强该项监测为海南地区诺如病毒暴发疫情的防控提供科学依据。

如何应对儿童诺如病毒感染?

诺如病毒是一种引起儿童胃肠道疾病的病原体,在全球范围内均有流行。该病毒为RNA病毒,易发生变异,感染力强,潜伏期短,传播途径多样,冬季频发,易出现地方性暴发。目前,治疗方案主要是降低病毒复制和提升儿童免疫力,同时注重预防措施的实施,注意食品卫生和饮水卫生是预防本病的关键。诺如病毒引起的感染性腹泻属于自限性疾病,目前没有疫苗和特效药物。因此,早期识别和采取有效治疗措施至关重要。

诺如病毒疫苗研究概况

诺如病毒(norovirus,NoV)是引发急性胃肠炎疾病的主要病原体之一。NoV易发生突变产生多种毒株,对人类健康造成严重威胁。由于缺乏成功的动物模型,抗NoV药物和疫苗的后续评价受到了限制,目前尚没有上市的疫苗用于NoV的预防。对NoV疫苗的研究进展进行了综述,重点阐述了病毒样颗粒(virus like particles,VLP)疫苗、病毒载体疫苗和基于P颗粒疫苗的研究现状和发展前景,以期为NoV疫苗的研发提供新思路。

2018—2022年合肥市学校诺如病毒感染疫情特征分析

目的了解合肥市学校诺如病毒感染疫情的流行特征,为校园诺如病毒感染预防与控制提供科学依据。方法采用描述性流行病学方法,分析2018—2022年合肥市各县(市、区)疾病预防控制中心上报的诺如病毒感染疫情调查报告和合肥市疾病预防控制中心实验室检测结果等资料,比较诺如病毒感染罹患率、报告及时性、疫情持续时间、临床症状及诺如病毒GⅠ、GⅡ分型等相关指标。结果2018—2022年合肥市共发生学校诺如病毒感染疫情217起,发病3002例,波及人口314006人,年均罹患率为0.82%~1.32%。其中幼儿园疫情最多,为116起,占53.46%,罹患率2.87%。时间呈双峰分布,集中在每年3—6月和9—12月。暴发疫情的罹患率、疫情持续时长均高于聚集性疫情(均P<0.001)。疫情接报时长与接报时发病数、疫情持续时长均呈正相关(r值分别为0.182、0.783,均P<0.001)。随着学业阶段提升,腹泻症状呈上升趋势(χ^(2)_(趋势)=743.236,P<0.001),呕吐症状呈下降趋势(χ^(2)_(趋势)=386.888,P<0.001),腹泻和呕吐两者症状皆有呈上升趋势(χ^(2)_(趋势)=327.264,P<0.001),发热呈下降趋势(χ^(2)_(趋势)=15.717,P<0.001)。肛拭子标本阳性检出率(60.10%)高于呕吐物和环境标本(分别为38.71%、14.29%;χ^(2)=135.685,P<0.001)。实验室明确诺如病毒GⅠ、GⅡ分型疫情181起,其中GⅠ型28起,占15.47%,GⅡ型149起,占82.32%。结论学校是诺如病毒感染高发场所,开学季应严格落实各项防控措施,提高呕吐、腹泻等症状监测敏感性,做到早发现、早报告、早处置。

扩增子测序技术在牡蛎GⅡ型诺如病毒基因多样性研究中的评估

牡蛎中诺如病毒基因多样的研究对病毒的流行传播和疫情防控具有十分重要的意义,二代测序技术(next generation sequencing, NGS)的扩增子测序具有高通量、高准确性等优势,被广泛应用于基因组学、转录组学和表观基因组学等领域。为评估扩增子测序技术对牡蛎中诺如病毒多样性研究的可行性,采用经典的巢式反转录PCR(reverse transcription-PCR, RT-PCR)方法对人为污染诺如病毒的牡蛎样品进行检测并将产物进行扩增子测序,对病毒基因型覆盖度和灵敏度进行分析。结果显示,在覆盖度方面,扩增子测序技术能够检测出人为添加到牡蛎中的6种GⅡ型诺如病毒,覆盖率达到100%;在灵敏度方面,对人为污染有不同数量诺如病毒的牡蛎进行检测及测序分析,证实扩增子测序的灵敏性较高,低于50个病毒粒子也能检测出。综上,扩增子测序技术提高了牡蛎中诺如病毒检测的准确性以及基因型的丰富度。

2019-2023年上海市临港地区市售牡蛎中人源诺如病毒污染的调查研究

目的 检测2019-2023年上海市临港地区市售牡蛎中人源诺如病毒(norovirus, NoV)的污染状况,并分析病毒基因型分布特点。方法 本研究自2019年10月至2023年4月从上海市水产市场随机采集545份牡蛎样本,利用巢式逆转录聚合酶链式反应方法对样本中的NoV进行检测分析。结果 牡蛎中NoV污染的总阳性率为4.04%(22/545);共检出5种基因型病毒:GⅠ.3 (n=5), GⅠ.4 (n=3), GⅡ.17 (n=3), GⅡ.3 (n=9), GⅡ.4 (n=4),其中有4只牡蛎样本存在GⅠ和GⅡ型NoV混合污染的现象。基因型丰度上, 2019年检出以GⅠ型病毒为主,主要是GⅠ.3;2020年至2022年检出以GⅡ型病毒为主,主要是GⅡ.3和GⅡ.4;2023年上半年检出GⅠ、GⅡ型病毒, GⅡ型偏多。季节上,每年的秋冬季牡蛎中NoV的检出率最高,与人群中NoV的季节性暴发规律相吻合。结论 自新冠疫情暴发以来,上海市临港地区市售牡蛎中NoV检出率大幅下降,阳性检出率和基因类群变化与国外研究结果 趋势一致。该研究结果 不仅填补了国内在新冠疫情期间对牡蛎中NoV监测的数据空缺,而且为牡蛎的食用安全评估提供科学依据。

配置呕吐袋干预学校诺如病毒疫情的效果研究

目的通过健康教育采取配备呕吐袋的方式,探索学校不停课的情况下,干预诺如病毒疫情。方法采取整群随机对照试验设计,以学校为群组单位,通过整群随机抽样的方法将辖区内发生诺如病毒疫情的学校分为干预组和对照组。疫情结束后,收集2组涉疫率、罹患率、二代病例续发率和疫情持续时间、停课率等相关指标,比较防控效果差异。用SPSS 27.0软件对数据进行统计分析,连续变量采用t检验分析,分类变量采用卡方检验或Fisher精确检验。结果干预组共纳入5所学校,研究对象673名,有诺如病毒感染病例14例;罹患率2.08%,涉疫率18.67%,二代病例续发率1.35%,疫情持续天数(8.40±1.67)d,停课率为0。对照组纳入9所学校,研究对象605名,有136例诺如病毒病例;罹患率22.48%,涉疫率21.21%,二代病例续发率21.18%,疫情持续天数(7.89±1.69)d,停课率92.86%。2组罹患率差异有统计学意义(χ^(2)=127.97,P<0.01);涉疫率差异无统计学意义(χ^(2)=0.143,P>0.05);二代病例续发率差异有统计学意义(χ^(2)=129.62,P<0.01)。2组疫情持续天数之间差异无统计学意义(t=0.544,P>0.05)。结论学校配置使用呕吐袋可不停课又有效地降低诺如病毒感染率和二代续发率,对疫情防控具有重要意义。

GI.5和GII.4诺如病毒P蛋白的克隆表达及与长牡蛎类HBGAs的结合特性

为明确人诺如病毒(human norovirus,HuNoV)与长牡蛎类组织血型抗原(histo-blood group antigens,HBGAs)的结合特性,本实验运用大肠杆菌表达系统,克隆表达了基因簇I.5(genogroup I.5,GI.5)和GII.4 HuNoV P蛋白,采用酶联免疫吸附测定研究HuNoV P蛋白与唾液HBGAs和长牡蛎类HBGAs的结合特性。结果表明,GII.4 HuNoV与唾液A型、B型、AB型和O型HBGAs均有较好的结合,而GI.5 HuNoV与B型HBGAs结合较弱,与O型HBGAs具有明显的结合优势。GI.5和GII.4 HuNoV在长牡蛎鳃、消化腺和外套膜中均可富集,其中在消化腺中富集最多,二者主要与类A型和H1型HBGAs结合,GII.4HuNoV与类Lea型、Leb型、Lex型和Ley型HBGAs有不同程度的结合,而GI.5 HuNoV与类Leb型HBGAs仅微弱结合,与类H1型HBGAs具有明显结合优势。综上,不同型别HuNoV与HBGAs的结合特性不尽相同,GII.4HuNoV具有广谱结合特性,GI.5HuNoV具有选择结合特性。

应用噬菌体展示随机12肽库筛选诺如病毒抗原模拟表位

目的:利用Ph.D.-12噬菌体展示肽库筛选诺如病毒(NoV)的抗原模拟表位。方法:包被与GⅡ.4、GⅡ.6、GⅡ.17型NoV具有高特异性及中和能力较强的单链可变片段抗体(scFv),用Ph.D.-12噬菌体展示肽库进行3轮生物淘选。ELISA鉴定淘选所得噬菌体与scFv的结合活性及其与NoV P蛋白的竞争作用;阳性克隆测序后进行生物信息学分析,合成多肽鉴定其抗原性。结果:发现1段与GⅡ.6 VP1区同源性较高的氨基酸序列“MG-D-W”,综合分析提示其可能为GⅡ.6 NoV的抗原模拟表位,且合成的包含“MG-D-W”的多肽可竞争抑制P蛋白与人类组织血型抗原(HBGAs)受体的结合。结论:“MG-DW”是与NoV单链抗体高亲和力的肽段,可能模拟了GⅡ.6 NoV与scFv结合的抗原表位。

基于蛋白序列比对方法获得灵敏度抗体的诺如病毒免疫层析试剂条的临床应用价值

目的探讨基于蛋白序列比对方法获得灵敏度抗体的诺如病毒免疫层析试剂条的临床应用价值。方法选取150例疑似诺如病毒感染患者作为研究对象,回顾性分析所有患者的临床资料。所有患者均接受常规检查和优化检测试纸的诺如病毒抗原检测。利用患者临床数据对检出结果进行验证,从检出率、重复率、符合率、抗干扰能力和交叉反应等方面对该检测优化方法的检测性能进行评估。结果优化后的抗原检测试剂条的检测准确率高于常规抗原快速检测试剂,差异有统计学意义(P<0.05)。通过评估分析发现,诺如病毒抗原检测中的一些关键因素,如样本采集时间、采集方式、保存方式等对检测结果的影响较大。通过对上述因素进行控制和管理,可以提高诺如病毒抗原检测的准确性和可靠性。结论基于蛋白序列比对方法获得灵敏度抗体的诺如病毒试剂条的临床应用价值较高,可以优化检测方法,提高检测准确性和可靠性,减少漏诊和误诊。

食品中诺如病毒的分离、富集与分子检测技术研究进展

由诺如病毒(Norovirus,NoV)感染引起的食品安全问题已经引起国内外的广泛关注,食源性病毒的检测是我国公共卫生研究领域的重点和挑战。其中,食品样本的前处理一直是食源性病毒检测的瓶颈环节,且因不同食品基质的复杂程度不一,需要针对不同的基质制定不同的洗脱富集方法。本文综述了不同食品基质的洗脱富集方法,对抗体、适配体、多肽以及组织血型抗原四种NoV分子识别元件进行了详细阐述,介绍了目前国内外NoV的分子检测方法及其优缺点,并对NoV洗脱纯化及检测技术做出了展望。

2018-2019年上海市普陀区16起聚集性呕吐腹泻疫情中诺如病毒的流行与分析

目的了解上海市普陀区16起聚集性呕吐腹泻疫情中诺如病毒的基因分型和流行特征,为辖区和全市诺如病毒引起的聚集性呕吐腹泻疫情的处置与防控提供技术支撑和数据参考。方法收集2018-2019年上海市普陀区16起聚集性呕吐腹泻疫情所涉及人群的肛拭标本136份。采用实时荧光聚合酶链反应方法检测诺如病毒核酸,典型病例阳性标本采用实时荧光聚合酶链反应扩增聚合酶-衣壳蛋白连接区并进行测序,通过生物信息工具进行基因分型和构建进化树。结果136份标本中诺如病毒GⅡ组核酸阳性62份(45.59%),GⅠ组核酸阳性0份。42份诺如病毒测序成功,通过序列比对分析获得4种基因型别。16起聚集性呕吐腹泻疫情中9起疫情是GⅡ.P16-GⅡ.2型(56.25%),2起疫情是GⅡ.P7-GⅡ.6型(12.50%),2起疫情是GⅡ.P12-GⅡ.3型(12.50%),3起疫情是GⅡ.Pe-GⅡ.4型(18.75%)。结论诺如病毒是引起2018-2019年上海市普陀区聚集性呕吐腹泻疫情的重要病原体,以GⅡ组为主,有多种基因型别,其中GⅡ.P16-GⅡ.2型为主要流行株。

HLA-G 3′UTR基因多态性及血清可溶性HLA-G水平与儿童诺如病毒感染的相关性研究

目的探讨人类白细胞抗原-G(HLA-G)3′非翻译区(3′UTR)基因多态性(SNP)及血清可溶性HLA-G(sHLA-G)水平与儿童诺如病毒感染的相关性。方法选取2021年1月至2022年12月新乡医学院第一附属医院收治的346例诺如病毒感染患儿作为病例组,另选取同期320例健康体检儿童作为对照组,留取所有研究对象全血标本并提取DNA。采用聚合酶链反应扩增HLA-G 3′UTR基因,产物外送测序。使用SNPstats在线分析软件计算两组间SNP位点基因型和等位基因分布频率。采用酶联免疫吸附试验检测病例组和对照组血清sHLA-G水平。结果病例组和对照组HLA-G 3′UTR 14 bp+/-和+3142 C/G基因型和等位基因分布频率比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。病例组血清sHLA-G水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);诺如病毒不同程度感染组血清sHLA-G水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。病例组和对照组14 bp+/-基因型和+3142 C/G基因型对应的血清sHLA-G水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论HLA-G 3′UTR SNP与诺如病毒感染的易感性无关。血清sHLA-G水平对诺如病毒感染早期诊断有较好的预测价值,可能是一种新的血清生物标志物,与患者病情严重程度及预后的关联尚需进一步验证。

基于生物信息学诺如病毒多表位抗原的构建及鉴定

目的:基于生物信息学技术设计诺如病毒(NoV)的多表位抗原并进行制备及鉴定。方法:采用生物信息学方法构建NoV多表位抗原NoV-ZH并进行分析。通过原核表达系统制备重组蛋白并鉴定,经动物免疫、杂交瘤技术制备单克隆抗体,并在胶体金平台初步应用。结果:设计的多表位抗原二级结构中无规卷曲占比较大,理论分子质量及等电点(PI)为13.1 ku、7.16,性质稳定,亲水性较好。免疫评估显示具有良好的免疫原性,可激活体液免疫应答和细胞免疫应答。抗原序列连接pET-28a(+)、pET-32a载体后制备的蛋白分别以包涵体蛋白、可溶性蛋白的形式表达。经动物免疫、杂交瘤技术获得一对配对抗体,应用于胶体金试纸条灵敏度达0.5 ng/ml,试纸条可特异性结合两种基因型NoV重组衣壳蛋白。结论:成功制备诺如病毒多表位抗原并鉴定,为后续NoV通用型检测靶点探究及诊断原材料开发提供参考。

成都市某中学一起诺如病毒感染性腹泻疫情的报告

目的:通过调查处置一起诺如病毒引起的急性胃肠炎暴发疫情,分析疫情暴发的原因,并提出处置建议,为有效防控此类疫情提供依据。方法:采用描述性流行病学方法,收集学校基本情况和病例相关资料,进行流行病学特征分析,采集病例、食堂工作人员等粪便标本进行实验室检测。结果:此次疫情从2022年11月3日—22日结束,历时20天,共报告疑似病例342例,病例涉及多个年级和班级。实验室检测结果显示病例为诺如病毒GⅡ型核酸阳性。结论:此次疫情为一起诺如病毒GⅡ型感染引起的急性胃肠炎暴发疫情,传播途径是人与人的密切接触,病例在班级、寝室内呕吐可能是导致疫情暴发的主要原因。

广州市越秀区2021年某幼儿园一起诺如病毒暴发疫情调查分析

目的 通过对广州市越秀区2021年某幼儿园一起诺如病毒暴发疫情进行流行病学调查分析,为诺如病毒感染疫情防控提供科学依据。方法 根据病例定义开展病例搜索与个案调查、卫生学调查、样本的采集和检测,对资料进行描述性流行病学分析,包括临床表现、时间分布、班级分布、人群分布、实验室检测结果等。结果 2021年11月16—21日该园累计报告病例26例(25例幼儿、1例保育员),总罹患率6.3%(26/416),均为轻症,无重症及死亡病例。临床症状以呕吐为主,其次为腹泻;发病高峰集中在18—19日;男女比例为1∶1;病例分布在6个班级。采集18名患儿、1名患病保育员和5名厨工的肛拭子样本进行检测,发现14份患儿与保育员的样本为诺如病毒GⅡ型阳性、1份厨工样本可疑阳性(灰区)。食堂食品样本、直饮水样本、环境涂抹样本均未检出致病菌。结论 本次疫情是一起由GⅡ型诺如病毒引起的感染性腹泻暴发疫情,传播途径为密切接触人传人传播。呕吐物处置不规范是疫情扩散的原因。建议加强保健医生与清洁工的培训、规范呕吐物处置、健康宣传等防控措施,以控制疫情蔓延。