动物诺如病毒的研究进展

诺如病毒(Norovirus,NoV),为诺瓦克样病毒属,与札幌病毒属、兔病毒属、水疱疹病毒属和纽布病毒属同属杯状病毒科,是引起人及牛、猪、犬、猫、鼠、猴子等多种易感动物罹患急性胃肠炎的重要非细菌性病原之一。该病毒原型株于1972年由美国学者Kapikian用免疫电镜技术从1968年暴发的胃肠炎患者样本中被发现,主要经粪—口途径传播,对人类和动物健康构成一定的威胁。

常见腹泻病毒多重荧光逆转录聚合酶链反应检测方法的建立及临床应用

目的建立能同时检测星状病毒、轮状病毒、肠道腺病毒和诺如病毒的多重荧光逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法。方法根据上述4种病毒基因组保守序列设计引物和探针,建立并分析多重荧光RT-PCR的特异性、敏感性、灵敏度;以所建立方法对256例病毒性腹泻患者粪便标本进行检测,同时以基因测序进行验证。结果所建立的腹泻病毒多重荧光RT-PCR检测方法对具有星状病毒、轮状病毒、肠道腺病毒、诺如病毒特异性,灵敏度可达500 copy/mL。256例粪便标本中,星状病毒、轮状病毒、肠道腺病毒和诺如病毒的检出率分别为3.13%、42.97%、9.38%和10.16%,与基因测序比对结果相符。结论成功构建可用于常见腹泻病毒检测的多重荧光RT-PCR检测方法,该法具有快速、灵敏、特异等优点,可用于临床病原诊断。

济南地区秋冬季腹泻中轮状病毒及诺如病毒的感染分析

目的：分析济南地区腹泻中轮状病毒（RV）及诺如病毒（NV）的流行状况，为腹泻的诊治提供依据。方法采集2013年及2014年9～12月济南市腹泻患者粪便标本579例，实时荧光定量PCR检测A组RV及GⅠ/GⅡ型NV，采用SPSS 13.0统计软件对临床及流行病学资料进行统计分析。结果579例腹泻患者中265例检测阳性，阳性率为45.77%（265/579）；其中A组RV阳性166例，阳性率为28.67%；GⅠ型NV阳性2例，阳性率为0.35%；GⅡ型NV阳性97例，阳性率为16.75%。感染RV和NV的病例中，男女比例分别为2.53∶1（119/47）及1.30∶1（56/43）；RV阳性病例年龄主要集中于2岁以下（80.12%），尤其是1岁以下幼儿所占比例最大（51.20%）；NV感染对象主要为小于2岁的婴幼儿（56.57%）及20岁以上成年人（38.38%）。RV和NV感染患者职业均以儿童及学生为主（90.96%和62.63%）；两者均以腹泻和恶心呕吐为主要临床症状（95.18%和84.85%）。结论 A组RV是2013-2014年济南地区秋冬季腹泻的主要病原体，GⅡ型NV也是引起散发性腹泻的主要病原；2岁以下幼儿是RV和NV感染的高危人群，NV还易引起成年人感染，腹泻和恶心呕吐为主要临床症状。

某院2012～2013年婴幼儿腹泻1607例病原学分析

目的：了解2012年1月至2013年12月婴幼儿腹泻病原构成特点。方法收集2012年1月至2013年12月该院临床诊断为腹泻病的5岁以下患儿粪便标本进行常规细菌培养，筛查病原菌，同时，采用免疫层析双抗体夹心法（胶体金）检测轮状病毒、肠道腺病毒抗原，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测诺如病毒抗原。结果1607例患儿标本中轮状病毒阳性606例（37.71%），诺如病毒阳性220例（13.69%），肠道腺病毒阳性169例（10.52%），致病菌阳性82例（5.10%），同时，检出两种病原标本125例（7.78%）；轮状病毒感染高发于秋冬季节（60.67%，364/606），诺如病毒和肠道腺病毒感染无明显季节特征，细菌感染高峰为6-9月份（62.20%，51/82）。不同性别患儿病毒、细菌感染情况比较，差异均无统计学意义（P〉0.05）。结论1607例婴幼儿腹泻的主要病原为病毒，其中轮状病毒所占比例最高，诺如病毒及肠道腺病毒也占相当比例，细菌感染比例较低，各种病原有不同的流行特征，针对不同病原的流行分布特点开展病原学检测对婴幼儿腹泻的诊治及预防具有积极作用。

珠海市冬春季节儿童病毒性腹泻的流行病学特征

目的探讨珠海市冬春季节儿童诺如病毒（NV）、扎如病毒（sV）和星状病毒（AstV）等3种重要病毒性腹泻的流行病学特征。方法采集2009年11月21日至2010年4月3日在珠海市妇幼保健院就诊的腹泻儿童粪便样本，选取轮状病毒和腺病毒筛查阴性的样本，采用逆转录-聚合酶链反应（RT．PCR）技术检测NV、SV和AstV的特异基因片段，并对诺如病毒检测阳性的样本进行分子分型。结果3种病毒季节总检出率为21．49％，其中2009年12月的检出率最高，为29．05％，而2010年2月检出率最低，为12．20％，87．96％的阳性样本来自0—30月龄患儿。NV、SV及AstV的季节检出率分别为14．70％、2．75％和4．04％，3种病毒中以NV和SV各月份阳性检出率差别较大，而AstV较为一致，12—18月龄患儿NV检出率最高（34．09％），60～120月龄患儿sV检出率最高（12．5％），24～30月龄患儿AstV检出率最高（16．67％）。诺如病毒经分子分型后均为GII型。结论NV是引起2009年冬春季节珠海市儿童病毒性腹泻的主要病原之一，SV与AstV也是重要的病原，应加强对婴幼儿NV、SV和AstV等3种重要病毒性腹泻的监测和防控工作。

急性腹泻婴幼儿胃肠道病毒感染现状与临床特征分析

目的 了解浙江省宁波市北仑区婴幼儿急性腹泻的临床特征及其胃肠道病毒的感染情况。方法 选择2012年7月至2013年7月在北仑区人民医院儿科门诊的900例急性腹泻婴幼儿病例(≤5岁),分析婴幼儿急性腹泻的临床特征并采集粪便样本,用PCR方法检测A/B/C型轮状病毒(Rotavirus,RV)、肠道腺病毒(Enteric adenovirus,AdV)、星状病毒(Astrovirus,AstV)、札如病毒(Sapovirus,SV)及诺如病毒(Norovirus,NV),并采用x2检验对不同性别和年龄段患者病毒检出情况进行比较。结果 900份腹泻患儿粪便样本中369份呈阳性结果,其中单一病毒感染的291份,混合病毒感染78份。在单一病毒感染病例的样本中,NV检出率为19.4％(GⅠ型为4.9％,GⅡ型14.6％),RV-A为8.2％,未检出B型及C型RV,SV为2.9％,AstV为1.0％,AdV为0.8％。在混合感染病例的样本中,以RV-A与NV混合感染最多,为5.8％。2岁以下(含2岁)患儿的病毒总检出率(51.0％)显著高于＞2 ～5岁的患儿(22.1％,x2=70.404,P＜0.01)。369例病毒检测阳性的患儿中,24.1％伴有发热,35.2％伴有呕吐症状。单一病毒感染病例发热、呕吐以及发热合并呕吐的发生率均低于混合感染病例(x2=17.878,21.869和14.155,P＜0.01)。结论 NV和RV-A是浙江省宁波市北仑区婴幼儿急性腹泻的主要胃肠道病毒,2岁以下婴幼儿是这两种病毒的易感人群。

针对肠道病毒71型的新型重组融合蛋白类病毒颗粒疫苗研制及其免疫效果评价

目的 研制针对肠道病毒71型（EV71）的新型重组类病毒颗粒疫苗,并评价其免疫效果.方法 利用诺如病毒（NoV）衣壳蛋白（VP1）P区（NoVP）可呈现外源抗原并形成类病毒颗粒的特点,构建获得只包含NoVP或在其表面环位点串联插入EV71衣壳蛋白的三个特异性抗原位点（VP1的SP55和SP70,VP2的VP2-28）基因片段,克隆至质粒pET-28a（＋）后分别转化大肠杆菌后诱导表达,通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）、免疫印迹和透射电镜鉴定和观察表达的重组融合蛋白（NoVP＋ EV71-SP55-SP70-VP2-28）和NoVP蛋白.同时,采用随机分组法将BALB/C小鼠分成A、B和C三组,每组10只,分别用重组融合蛋白（NoVP＋ EV71-SP55-SP70-VP2-28）、NoVP和透析液免疫获得抗血清,采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测小鼠血清中特异性抗体;将小鼠血清与EV71 H3-TY株混合,加入Vero细胞,通过微量中和实验检测特异性抗体效价.采用方差分析和Bonferroni检验对数据进行分析.结果 重组表达产物在大肠杆菌中以包涵体形式存在,SDS-PAGE显示重组融合蛋白和NoVP相对分子质量约为43×10^3和36×10^3;免疫印迹显示重组融合蛋白在相对分子质量约为43×10^3处有特异性条带,透射电镜观察显示重组融合蛋白呈现类病毒颗粒.ELISA显示与SP70多肽反应的小鼠血清吸光度（A490）值A组明显大于B组和C组（F=13.860,P＜0.05）;微量中和实验显示A组小鼠血清针对EV71 H3-TY株的几何平均中和滴度为1∶38.结论 本研究初步获得了针对EV71的一种新型重组融合蛋白类病毒颗粒疫苗,其具有良好的抗原性和特异性,能诱导小鼠产生较高中和滴度的特异性抗体.