用RT-PCR法检测食品中诺沃克样病毒

使用RTPCR法对贝类样品中的诺沃克样病毒进行了检测。对食品中不同的病毒富集方法进行了研究,评价了CHCl3和Frezon去除RTPCR抑制剂的效果,筛选出最佳的病毒富集方法即2次PEG6000(终浓度12%PEG6000,03mol/LNaCl)沉降病毒,并使用CHCl3除去RTPCR抑制剂。此富集方法的回收率为135%。另外,对不同的RNA提取方法的灵敏度进行了比较,最终确认硅胶膜法为简便、快速、有效的RNA提取方法。并且,使用了Superscript反转录酶进行反转录,提高了检测的灵敏度。选用了289和290混合引物进行食品中NLVs的检测,这一引物组合可同时检测Ⅰ型和Ⅱ型NLVs,扩增出1个319bp的特异性片段。通过以上条件的优化,建立了通过RTPCR检测贝类中NLVs的有效方法。该方法的NLVs最低检出限为10×103RT-PCR50/15g。对32件贝类样品进行了NLVs的检测,其中2份毛蚶中被检出NLVs。

用RT-PCR和ELISA对暴发性急性胃肠炎事件中诺沃克样病毒检测的比较

目的 诺沃克样病毒是世界范围内急性非细菌性流行性胃肠炎的重要病原。采用RT-PCR和ELISA两种方法对广州市多起暴发性急性胃肠炎事件中病人标本进行诺沃克样病毒检测 ,了解广州市诺沃克样病毒流行情况 ,并对RT-PCR和ELISA两种检测方法进行比较。方法 用RT-PCR和ELISA对 76份腹泻病人粪便 ,2 3份肛拭子 ,12份食物进行诺沃克样病毒检测。结果 粪便通过RT-PCR检出阳性 37份 ,ELISA检出阳性 17份 ,肛拭子仅通过RT-PCR检出 1份阳性 ,食物无阳性检出。结论 这是首次我国实验室证实的由诺沃克样病毒引起的急性胃肠炎暴发。RT-PCR的阳性率大于ELISA ,且检品以粪便为好。并且我们的分离株与诺沃克原型株相应序列比较的同源性大于 90 %

实时定量RT-PCR方法检测太平洋牡蛎中的诺沃克样病毒

建立了Taqman实时定量RT-PCR方法检测诺沃克样病毒(Norwalk-like Virus,NLV)的方法,并对中国的牡蛎样品进行了分析。选取GⅡ型NLV的RNA聚合酶区域,利用Primer Express 2.0软件设计引物和探针,建立了定量RT-PCR反应体系。将含有NLV扩增片段的质粒10倍梯度稀释,作为标准品进行反应以确定检测灵敏度并制备标准曲线。结果表明,质粒密度在6×106,6×105,6×104,6×103,6×102,6×101,6个拷贝之间,共7个数量级的范围内,定量RT-PCR反应都有"S"型扩增曲线,检测灵敏度为6个拷贝。制备的标准曲线中,病毒拷贝数(X)与Ct值的关系为Ct=-3.36lgX+37.11,相关系数R2=0.998。对中国37批太平洋牡蛎(Crassostrea gigas Thunberg)样品进行了定量检测,有6批样品为阳性,并根据标准曲线测定了NLV的含量。

2004～2005年深圳市婴幼儿腹泻中轮状病毒及诺沃克病毒的感染分析

目的：了解深圳市婴幼儿腹泻中轮状病毒和诺沃克病毒的感染情况，为腹泻病的防治提供依据。方法：采集2004年10月～2005年2月深圳市腹泻患儿粪便244份，采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法分别检测轮状病毒和诺沃克病毒。结果：轮状病毒感染率为34．84％（85／244），其中男性感染率为37．41％，女性感染率为30．93％；诺沃克病毒感染率为12．70％（31／244），其中男性感染率为15．65％，女性感染率为8．24％；轮状病毒和诺沃克病毒的感染率有显著性差异；4例患儿为轮状病毒和诺沃克病毒混合感染，占1．64％；2岁以内儿童HRV及NLV分别占79．38％和80．04％。结论：轮状病毒是深圳市婴幼儿秋冬季腹泻最主要的病原体，诺沃克病毒也是引起婴幼儿散发性腹泻的主要病原，仅次于轮状病毒排第二位，且存在着轮状病毒和诺沃克病毒混合感染的病例，2岁以内儿童是HRV及NLV感染的高危人群，应加强对腹泻儿童轮状病毒及诺沃克病毒的监测。

RT-PCR方法检测贝类中诺沃克样病毒的研究

目的:本研究从病毒富集和核酸提取两方面进行探索,旨在建立一个反转录(RT)PCR技术检测贝类中诺沃克样病毒(NLVs)的方法。方法:利用脊髓灰质炎病毒作为参照毒株,优化了甘氨酸缓冲液-聚乙二醇(PEG)病毒浓缩方法;同时比较了异硫氰酸胍法、SDS-蛋白酶K法、Trizol-异丙醇法、试剂盒法四种RNA提取方法;对市售贝类样品进行了检测,并利用基因测序对阳性样品进行验证。结果:本研究采用的pH9.5甘氨酸缓冲液-16%聚乙二醇病毒浓缩法,病毒的回收率为16.8%,利用Trizol-异丙醇法提取RNA,检出限为8.1×102RT-PCR50/5g贝肉,实际检测贝类样品25件,其中3件样品为阳性,基因测序结果亦证实为阳性。结论:本研究建立了一个灵敏度较高、较为有效的RT-PCR技术检测贝类中诺沃克样病毒的方法。

广州市一起群体性诺沃克病毒性胃肠炎调查分析

诺沃克病毒的感染是成人和大龄儿童流行性非细菌性肠炎的主要病因 ,但由于检验方法尚不普及 ,临床上确诊的较为少见。 2 0 0 3年 10月广州市越秀区某小学学生出现呕吐、腹痛、腹泻、发热等症状 ,人数达 82人 (其中 1名老师 ) ,经广州市、越秀区疾病预防控制中心反复多次详细的现场调查 ,并在广东省疾病预防控制中心的技术支持下 ,利用RT PCR方法在病人粪便标本中检测到诺沃克类病毒。首次在广州市证实该事件的病因是诺沃克类病毒引起的急性胃肠炎。

一起诺沃克病毒引起的急性胃肠炎爆发的分子流行病学研究

目的查明2005年深圳市一起急性胃肠炎的病原体,为制定控制疾病流行策略及指导临床合理用药提供依据。方法收集该次腹泻患者及相关人员的粪便标本15份,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和实时荧光PCR方法检测诺沃克病毒核糖核酸(RNA)。结果15份标本中,RT-PCR及实时荧光PCR方法均检测出10例诺沃克病毒阳性,阳性率为66.7%;2种方法的符合率为100%。同时对其中的10份RT-PCR阳性标本进行脱氧核糖核酸(DNA)序列测定,并进行同源性分析和进化分析。结论该次群体性胃肠炎是由诺沃克病毒G2型感染引起;10份阳性标本中9株的核苷酸同源性为100%,另外1株与其他9株的同源性为99.8%;本次流行的毒株(05-53-61及05-63)与日本东京的SaitamaU201及SaitamaU18亲缘关系较近,核苷酸同源性分别为96%及95%,而与1997年深圳本地株97-11及97-30亲缘关系则较远,核苷酸同源性分别为76.4%及76.7%。

诺沃克病毒合并金黄色葡萄球菌引发某小学食物中毒的调查

目的 查找某小学 82名师生出现以呕吐、腹痛、腹泻和发热为主要症状的群发性疾病的原因。方法 用流行病学疾病暴发调查方法 ,结合逆转录聚合酶链反应 (RT -PCR)、DNA序列测定和食物中毒常规致病菌检测方法检测可疑食品、病人呕吐物及粪便。结果 82名患者都有在学校食堂食用早餐或午餐的共同进餐史 ;在 1 2名患者的粪便中检出诺沃克病毒阳性 1 1份 ,对其中 5份进行诺沃克病毒核酸序列测定 ,结果 4份呈阳性 ;2份患者的呕吐物和 1份厨工肛拭子检出金黄色葡萄球菌 ,肠毒素试验皆呈强阳性。结论 本次食物中毒可能由诺沃克病毒和金黄色葡萄球菌共同引起。

诺沃克样病毒广州地区分子流行病学分析

目的根据广州市多起由诺沃克样病毒引起的食物中毒患者粪便标本中检测到的Ⅱ型诺沃克样病毒序列,初步了解广州地区诺沃克样病毒的分子流行病学情况。方法用RT-PCR对病人粪便中的诺沃克样病毒核酸进行扩增,将阳性产物测序,并与GenBank中的序列相比较。结果归纳出4个代表性序列,并且相似率都不高。结论我国存在诺沃克样病毒引起的食物中毒,而其RNA复制酶的保守区段变异普遍较大。

诺沃克病毒实时荧光RT-PCR检测方法的建立

本文建立了一种用于诺沃克病毒实时荧光RT-PCR检测的引物和方法。分析已报道的诺沃克病毒基因组序列,分别设计引物和荧光探针。通过实时荧光RT-PCR检测,得到诺沃克的特异性荧光曲线,检测结果准确、可靠。

贝类产品中诺沃克病毒的实时荧光RT-PCR检测方法研究

诺沃克病毒是一种分布很广泛的肠道腹泻病毒 ,主要存在于牡蛎、文蛤等贝类中。本研究建立了从贝类中提取诺沃克病毒RNA的方法以及进行实时荧光RT -PCR检测的方法。

贝类产品中诺沃克病毒RT-PCR检测方法

本文建立了贝类产品中诺沃克病毒检测的普通RT -PCR方法。用 8对引物对诺沃克病毒进行检测研究 ,发现GII-SKF/GII-SKR引物检测GII型病毒特异性强且灵敏度高。用引物GI-SKF/GI-SKR和GII-SKF/GII-SKR分别对系列稀释度的质粒进行检测 ,检测灵敏度均能达到 10 2拷贝。将诺沃克病毒添加于牡蛎肠胃组织中并提取RNA ,并用引物GI-SKF/GI-SKR和GII-SKF/GII-SKR对其进行扩增 ,检出GII型诺沃克病毒。

诺沃克类病毒

诺沃克类病毒是引起急性非细菌性胃肠炎暴发的病原之一 ,常通过污染的食物和水而传播。通过分子生物学技术能够从大便标本中检出该病毒。诺沃克类病毒也称为小圆结构病毒 ,并归类为杯状病毒成员。可分为两个不同的基因组 ,基因 Ⅰ 组 (GⅠ)和基因Ⅱ 组 (GⅡ)。诺沃克类病毒多在餐厅、护理中心、医院、学校、旅游等地爆发流行。

诺沃克样病毒分子生物学研究进展

本文着重对诺沃克样病毒 (NLV )分子生物学的研究进展 ,包括毒粒的形态结构、基因组成和分子流行病学特点及预防等问题给予综述介绍。

用RT-PCR和实时荧光RT-PCR检测诺沃克病毒的比较分析

目的:研究用不同方法检测诺沃克病毒核酸的阳性率关系,为进一步完善诺沃克病毒核酸的实验室检测提供依据。方法:采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及实时荧光逆转录聚合酶链反应(real-tim e RT-PCR)两种方法,对124例腹泻标本进行诺沃克病毒核酸的检测。结果:124份标本中,RT-PCR检出诺沃克病毒阳性31例,阳性率为25%;实时RT-PCR检出阳性37例,阳性率为29.84%;两种方法均阳性的28例,均阴性的84例,符合率为90%;不同性别阳性率无显著性差异;采用实时RT-PCR检测诺沃克病毒,敏感性较RT-PCR高,但两种方法的阳性率无统计学差异。对于强阳性样本(Ct值在20以内或电泳结果特异性条带很亮),两种方法检出率均为100%;对于弱阳性样本,则大部份标本实时RT-PCR检出阳性而RT-PCR未能检出,少部份标本RT-PCR检出阳性而荧光RT-PCR未能检出。结论:对于诺沃克病毒的实验室检测方法,首选实时RT-PCR;在可能的情况下,应该RT-PCR和实时RT-PCR两种方法联用进行检测,以避免发生弱阳性样本漏诊的情况。

暴发性胃肠炎中诺沃克样病毒的检测

目的 确定暴发性胃肠炎中诺沃克样病毒的检测方法。方法 对2 0 0 3年10月和2 0 0 4年3月广东省疾病预防控制中心收集到的2起(广州市、江门市各1起)急性胃肠炎暴发患者的粪便和肛拭子标本,采用针对诺沃克样病毒的特异引物和逆转录 聚合酶链反应(RT PCR)技术进行检测,再经核苷酸序列测定方法证实,并与酶联免疫方法进行比较。结果 用RT PCR进行检测,12份急性期粪便标本(广州标本)中诺沃克样病毒阳性11份,13份肛拭子(江门标本)中阳性4份;用酶联免疫方法进行检测,11份粪便标本中有8份阳性,13份肛拭子标本均为阴性;阳性样本经序列分析证实为诺沃克样病毒GⅡ组,其中从广州标本中所获得的广州株与af39913的核酸相似性为96 7% ,从江门标本中所获得的江门株与saitamaU4毒株的核酸相似性为94 5 %。结论 采用PCR和酶标方法可有效地进行粪便的诺沃克样病毒检测。

从“诺沃克协议”看我国会计准则的国际协调

美国自2002年签署诺沃克协议后,一直致力于与国际财务报告准则的趋同,做出了一定努力,也取得了一定成绩。本文简要叙述了诺沃克协议制定的历史背景,交代了诺沃克协议的要点,分析了美国在执行诺沃克协议过程中所采取的主要举措,力求对我国会计准则的国际趋同有所借鉴。

诺沃克样病毒性胃肠炎259例临床分析

目的:探讨诺沃克样病毒性胃肠炎(GNV)诊断和治疗。方法:2008年2月～2009年7月、2009年12月～2010年2月、2010年6月～2010年8月间,我院对分别接诊100例、51例、108例符合GNV诊断标准的患者259例进行回顾性总结分析。结果:GNV259例患者,其中误诊81例,误诊率为31.1%。误诊病例:腹痛待查43例(53.3%)、阑尾炎11例(13.6%)、肠痉挛8例(9.8%)、胰腺炎6例(7.4%)、肝炎5例(6.2%)、胆囊炎5例(6.2%)、脑供血不足1例、肠梗阻1例和剖腹探查1例。恶心腹痛259例,其中阵发性腹部绞痛58例(22.4%)、腹泻55例(22.2%)、低热35例(13.5%)、呕吐14例(5.4%)和上呼吸道感染症状13例(5.02%)。结论:以流行病学所提供的资料表明,该病从2008～2010年3年之中连续流行3次,推测今后还有发生流行的可能。根据流行病学特点和临床表现,可以对GNV做出正确诊断。GNV误诊病例繁多,几乎遍及腹部每个脏器,结果出现各种各样的临床症状。甲氧氯普胺对解除恶心、腹痛尤其对痉挛性腹痛有特效。