2004～2005年深圳市婴幼儿腹泻中轮状病毒及诺沃克病毒的感染分析

目的：了解深圳市婴幼儿腹泻中轮状病毒和诺沃克病毒的感染情况，为腹泻病的防治提供依据。方法：采集2004年10月～2005年2月深圳市腹泻患儿粪便244份，采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法分别检测轮状病毒和诺沃克病毒。结果：轮状病毒感染率为34．84％（85／244），其中男性感染率为37．41％，女性感染率为30．93％；诺沃克病毒感染率为12．70％（31／244），其中男性感染率为15．65％，女性感染率为8．24％；轮状病毒和诺沃克病毒的感染率有显著性差异；4例患儿为轮状病毒和诺沃克病毒混合感染，占1．64％；2岁以内儿童HRV及NLV分别占79．38％和80．04％。结论：轮状病毒是深圳市婴幼儿秋冬季腹泻最主要的病原体，诺沃克病毒也是引起婴幼儿散发性腹泻的主要病原，仅次于轮状病毒排第二位，且存在着轮状病毒和诺沃克病毒混合感染的病例，2岁以内儿童是HRV及NLV感染的高危人群，应加强对腹泻儿童轮状病毒及诺沃克病毒的监测。

广州市一起群体性诺沃克病毒性胃肠炎调查分析

诺沃克病毒的感染是成人和大龄儿童流行性非细菌性肠炎的主要病因 ,但由于检验方法尚不普及 ,临床上确诊的较为少见。 2 0 0 3年 10月广州市越秀区某小学学生出现呕吐、腹痛、腹泻、发热等症状 ,人数达 82人 (其中 1名老师 ) ,经广州市、越秀区疾病预防控制中心反复多次详细的现场调查 ,并在广东省疾病预防控制中心的技术支持下 ,利用RT PCR方法在病人粪便标本中检测到诺沃克类病毒。首次在广州市证实该事件的病因是诺沃克类病毒引起的急性胃肠炎。

一起诺沃克病毒引起的急性胃肠炎爆发的分子流行病学研究

目的查明2005年深圳市一起急性胃肠炎的病原体,为制定控制疾病流行策略及指导临床合理用药提供依据。方法收集该次腹泻患者及相关人员的粪便标本15份,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和实时荧光PCR方法检测诺沃克病毒核糖核酸(RNA)。结果15份标本中,RT-PCR及实时荧光PCR方法均检测出10例诺沃克病毒阳性,阳性率为66.7%;2种方法的符合率为100%。同时对其中的10份RT-PCR阳性标本进行脱氧核糖核酸(DNA)序列测定,并进行同源性分析和进化分析。结论该次群体性胃肠炎是由诺沃克病毒G2型感染引起;10份阳性标本中9株的核苷酸同源性为100%,另外1株与其他9株的同源性为99.8%;本次流行的毒株(05-53-61及05-63)与日本东京的SaitamaU201及SaitamaU18亲缘关系较近,核苷酸同源性分别为96%及95%,而与1997年深圳本地株97-11及97-30亲缘关系则较远,核苷酸同源性分别为76.4%及76.7%。

诺沃克病毒合并金黄色葡萄球菌引发某小学食物中毒的调查

目的 查找某小学 82名师生出现以呕吐、腹痛、腹泻和发热为主要症状的群发性疾病的原因。方法 用流行病学疾病暴发调查方法 ,结合逆转录聚合酶链反应 (RT -PCR)、DNA序列测定和食物中毒常规致病菌检测方法检测可疑食品、病人呕吐物及粪便。结果 82名患者都有在学校食堂食用早餐或午餐的共同进餐史 ;在 1 2名患者的粪便中检出诺沃克病毒阳性 1 1份 ,对其中 5份进行诺沃克病毒核酸序列测定 ,结果 4份呈阳性 ;2份患者的呕吐物和 1份厨工肛拭子检出金黄色葡萄球菌 ,肠毒素试验皆呈强阳性。结论 本次食物中毒可能由诺沃克病毒和金黄色葡萄球菌共同引起。

诺沃克病毒实时荧光RT-PCR检测方法的建立

本文建立了一种用于诺沃克病毒实时荧光RT-PCR检测的引物和方法。分析已报道的诺沃克病毒基因组序列,分别设计引物和荧光探针。通过实时荧光RT-PCR检测,得到诺沃克的特异性荧光曲线,检测结果准确、可靠。

贝类产品中诺沃克病毒的实时荧光RT-PCR检测方法研究

诺沃克病毒是一种分布很广泛的肠道腹泻病毒 ,主要存在于牡蛎、文蛤等贝类中。本研究建立了从贝类中提取诺沃克病毒RNA的方法以及进行实时荧光RT -PCR检测的方法。

贝类产品中诺沃克病毒RT-PCR检测方法

本文建立了贝类产品中诺沃克病毒检测的普通RT -PCR方法。用 8对引物对诺沃克病毒进行检测研究 ,发现GII-SKF/GII-SKR引物检测GII型病毒特异性强且灵敏度高。用引物GI-SKF/GI-SKR和GII-SKF/GII-SKR分别对系列稀释度的质粒进行检测 ,检测灵敏度均能达到 10 2拷贝。将诺沃克病毒添加于牡蛎肠胃组织中并提取RNA ,并用引物GI-SKF/GI-SKR和GII-SKF/GII-SKR对其进行扩增 ,检出GII型诺沃克病毒。

用RT-PCR和实时荧光RT-PCR检测诺沃克病毒的比较分析

目的:研究用不同方法检测诺沃克病毒核酸的阳性率关系,为进一步完善诺沃克病毒核酸的实验室检测提供依据。方法:采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及实时荧光逆转录聚合酶链反应(real-tim e RT-PCR)两种方法,对124例腹泻标本进行诺沃克病毒核酸的检测。结果:124份标本中,RT-PCR检出诺沃克病毒阳性31例,阳性率为25%;实时RT-PCR检出阳性37例,阳性率为29.84%;两种方法均阳性的28例,均阴性的84例,符合率为90%;不同性别阳性率无显著性差异;采用实时RT-PCR检测诺沃克病毒,敏感性较RT-PCR高,但两种方法的阳性率无统计学差异。对于强阳性样本(Ct值在20以内或电泳结果特异性条带很亮),两种方法检出率均为100%;对于弱阳性样本,则大部份标本实时RT-PCR检出阳性而RT-PCR未能检出,少部份标本RT-PCR检出阳性而荧光RT-PCR未能检出。结论:对于诺沃克病毒的实验室检测方法,首选实时RT-PCR;在可能的情况下,应该RT-PCR和实时RT-PCR两种方法联用进行检测,以避免发生弱阳性样本漏诊的情况。

食品中诺沃克病毒（Norwalk Virus）检测方法通过鉴定

近日，来自中国疾病预防控制中心、军事医学科学院微生物与流行病研究所等7家单位的专家，对北京检验检疫局在国内首次开展的“食品中诺沃克病毒检测方法的研究”课题进行了鉴定。专家一致认为，该方法操作简便，灵敏可靠，为国内首创。据了解，诺沃克病毒(Norwalk Virus)是目前最为常见的食物源性病毒，

国内首建诺沃克病毒检测方法

近日北京检验检疫局承担的课题“食品中诺沃克病毒检测方法的研究”通过鉴定。通过此方法检测诺沃克病毒操作简便，灵敏可靠，为国内首创。诺沃克病毒(Norwalk Virus)是目前常见的食物源性病毒，主要存在于贝类等海产品中。为有效保障我国进出口食品的卫生质量，北京检验检疫局2002年开始进行“食品中诺沃克病毒检测研究”。

食品中诺沃克病毒检测方法通过鉴定

11月11日，来自中国疾病预防控制中心、军事医学科学院微生物与流行病研究所、中国CDC食品安全所等7家单位的专家，对北京检验检疫局在国内首次建立的“食品中诺沃克病毒检测方法的研究”课题进行了鉴定，一致认为，该方法操作简便，灵敏可靠，为国内首创。

揭秘诺沃克病毒

2003年秋冬季节．香港嘉诺撒圣心学校先后有150名学生出现呕吐、腹泻和发烧的症状，学校被迫停课．继而又有其他小学校出现了类似的情况。医院化验结果证实生病的学生是感染了病毒性胃肠炎．显然．这种病毒性胃肠炎具有传染性。消息传出来以后．人们非常担心，许多人甚至推迟了去香港旅行的计划．那么这是怎么一回事呢？

诺沃克病毒疫苗研究的困难和进展

人杯状病毒 ( Hu CV)是全世界急性非细菌性胃肠炎爆发的主要原因。对这些病毒作为食物和水传播性疾病病原体的临床意义的深入了解 ,表明需要有效的疫苗。本文介绍了目前Hu CV疫苗研制的困难以及候选疫苗研制现状。

警惕诺如病毒感染

近期诺如病毒感染引起社会的普遍关注。初春是诺如病毒感染性腹泻流行的高发期。由于诺如病毒在人群中普遍易感,一旦感染会严重影响人们的健康和正常生活。一、诺如病毒诺如病毒又称为诺罗病毒、诺沃克病毒或脓融病毒,是一种急性胃肠炎病毒,感染后引起胃肠道炎症,表现为恶心、呕吐、腹痛、腹泻、腹部痉挛等胃肠炎症状。

轻度胃肠炎伴婴幼儿惊厥患儿粪便及脑脊液轮状病毒及诺沃克病毒的检测及意义

目的探讨轻度胃肠炎伴婴幼儿惊厥常见感染病原及轮状病毒（RV）、诺沃克病毒（NoV）导致惊厥发生的差异。方法用RT—PCR方法对30例轻度胃肠炎伴婴幼儿惊厥患儿的大便及脑脊液中RV、NoV进行检测，分析两种病毒所导致惊厥发作频率的差异。结果30例中，RV粪便阳性17例（56．7％），脑脊液阳性3例（17．7％）；NoV粪便阳性6例（25．0％），脑脊液阳性1例（16．7％）。NoV感染患儿惊厥的发生次数为（4．33±1．75）次，明显高于RV感染患儿[（2．53±1．12）次]，差异有非常显著性（P〈0．01）。脑脊液中病毒阳性患儿的惊厥发生次数为（4．75±1．71）次，明显高于阴性患儿[（2．63±1．21）次]（P〈0．01）。结论RV、NoV是导致轻度胃肠炎伴婴幼儿惊厥的常见病原；NoV感染对中枢神经系统的影响程度可能大于RV感染；脑脊液中病毒存在可能与惊厥的频繁发生有关，其具体机制有待进一步研究。

用RT-PCR和ELISA对暴发性急性胃肠炎事件中诺沃克样病毒检测的比较

目的 诺沃克样病毒是世界范围内急性非细菌性流行性胃肠炎的重要病原。采用RT-PCR和ELISA两种方法对广州市多起暴发性急性胃肠炎事件中病人标本进行诺沃克样病毒检测 ,了解广州市诺沃克样病毒流行情况 ,并对RT-PCR和ELISA两种检测方法进行比较。方法 用RT-PCR和ELISA对 76份腹泻病人粪便 ,2 3份肛拭子 ,12份食物进行诺沃克样病毒检测。结果 粪便通过RT-PCR检出阳性 37份 ,ELISA检出阳性 17份 ,肛拭子仅通过RT-PCR检出 1份阳性 ,食物无阳性检出。结论 这是首次我国实验室证实的由诺沃克样病毒引起的急性胃肠炎暴发。RT-PCR的阳性率大于ELISA ,且检品以粪便为好。并且我们的分离株与诺沃克原型株相应序列比较的同源性大于 90 %

用RT-PCR法检测食品中诺沃克样病毒

使用RTPCR法对贝类样品中的诺沃克样病毒进行了检测。对食品中不同的病毒富集方法进行了研究,评价了CHCl3和Frezon去除RTPCR抑制剂的效果,筛选出最佳的病毒富集方法即2次PEG6000(终浓度12%PEG6000,03mol/LNaCl)沉降病毒,并使用CHCl3除去RTPCR抑制剂。此富集方法的回收率为135%。另外,对不同的RNA提取方法的灵敏度进行了比较,最终确认硅胶膜法为简便、快速、有效的RNA提取方法。并且,使用了Superscript反转录酶进行反转录,提高了检测的灵敏度。选用了289和290混合引物进行食品中NLVs的检测,这一引物组合可同时检测Ⅰ型和Ⅱ型NLVs,扩增出1个319bp的特异性片段。通过以上条件的优化,建立了通过RTPCR检测贝类中NLVs的有效方法。该方法的NLVs最低检出限为10×103RT-PCR50/15g。对32件贝类样品进行了NLVs的检测,其中2份毛蚶中被检出NLVs。

实时定量RT-PCR方法检测太平洋牡蛎中的诺沃克样病毒

建立了Taqman实时定量RT-PCR方法检测诺沃克样病毒(Norwalk-like Virus,NLV)的方法,并对中国的牡蛎样品进行了分析。选取GⅡ型NLV的RNA聚合酶区域,利用Primer Express 2.0软件设计引物和探针,建立了定量RT-PCR反应体系。将含有NLV扩增片段的质粒10倍梯度稀释,作为标准品进行反应以确定检测灵敏度并制备标准曲线。结果表明,质粒密度在6×106,6×105,6×104,6×103,6×102,6×101,6个拷贝之间,共7个数量级的范围内,定量RT-PCR反应都有"S"型扩增曲线,检测灵敏度为6个拷贝。制备的标准曲线中,病毒拷贝数(X)与Ct值的关系为Ct=-3.36lgX+37.11,相关系数R2=0.998。对中国37批太平洋牡蛎(Crassostrea gigas Thunberg)样品进行了定量检测,有6批样品为阳性,并根据标准曲线测定了NLV的含量。

RT-PCR方法检测贝类中诺沃克样病毒的研究

目的:本研究从病毒富集和核酸提取两方面进行探索,旨在建立一个反转录(RT)PCR技术检测贝类中诺沃克样病毒(NLVs)的方法。方法:利用脊髓灰质炎病毒作为参照毒株,优化了甘氨酸缓冲液-聚乙二醇(PEG)病毒浓缩方法;同时比较了异硫氰酸胍法、SDS-蛋白酶K法、Trizol-异丙醇法、试剂盒法四种RNA提取方法;对市售贝类样品进行了检测,并利用基因测序对阳性样品进行验证。结果:本研究采用的pH9.5甘氨酸缓冲液-16%聚乙二醇病毒浓缩法,病毒的回收率为16.8%,利用Trizol-异丙醇法提取RNA,检出限为8.1×102RT-PCR50/5g贝肉,实际检测贝类样品25件,其中3件样品为阳性,基因测序结果亦证实为阳性。结论:本研究建立了一个灵敏度较高、较为有效的RT-PCR技术检测贝类中诺沃克样病毒的方法。