水体中诺瓦克病毒RT-PCR检测研究

诺瓦克病毒是公认的食源性或水源性非细菌性胃肠炎的主要致病因子之一。建立诺瓦克病毒的RT-PCR检测方法,验证其特异性及灵敏度,并在实验室人工污染水样,进行模拟水样的检测,验证RT-PCR检测方法的实用性。所用引物为RNA多聚酶区的JV12/JV13,多次反复实验,均可产生327bp预期大小的特异条带,并通过杂交进一步证实了其特异性和正确性;在临床粪样中,可达到的最高检测限为50pg/mL。在共42份模拟样品的检测中,经过播毒、富集和浓缩,38份均可检出诺瓦克病毒。其中4份池塘水未检出。在模拟水样中的检测灵敏度为200pg/mL。实验中所建立的试验条件和体系可用于实际水样中诺瓦克病毒的筛选,对水质控制起到了很好的监控作用。

一起诺瓦克病毒引起感染性腹泻爆发疫情调查分析

2006年10月28日浙江省宁海县疾病预防控制中心（CDC）接到黄坛镇卫生院报告，该镇后溪林村有10余例腹泻、呕吐症状病例。现将调查结果分析如下。

深圳市一起诺瓦克病毒感染性腹泻暴发的流行病学调查分析

目的分析深圳市某区一起诺瓦克病毒感染性腹泻暴发的流行病学特征,为防制诺瓦克病毒感染性腹泻提供科学依据。方法确定病例定义进行病例搜索和流行病学调查。采用RT-PCR检测诺瓦克病毒抗原。结果本次疫情流行历时一周,共发病13例,其中幼儿8例,小学生1例,教职工4例。采集10个病例大便样本,实验室检测诺瓦克病毒抗原全部阳性。结论密切接触是此次诺瓦克病毒感染性腹泻暴发的主要传播途径,养成良好的个人卫生习惯、隔离传染源和切断传播途径是预防和控制此病的有效措施。

梅县学校食堂厨工诺瓦克病毒感染情况调查

目的了解梅县学校食堂厨工诺瓦克病毒感染情况,为诺瓦克病毒胃肠炎预防控制工作提供科学依据。方法应用酶联免疫法(ELISA)进行诺瓦克病毒抗原检测。结果234份粪便标本中检出诺瓦克病毒阳性8份,阳性率为3.42%。结论梅县学校食堂厨工存在诺瓦克病毒健康携带者,学校有爆发诺瓦克病毒胃肠炎的潜在危险。

诺瓦克病毒研究进展

诺瓦克病毒(Noroviruses,NVs)是1972年在美国首次发现的新生病毒,到1995年国内才有报道。该病毒是严重危害人类健康的重要食源性病毒,可导致不同年龄阶段人群的急性病毒性腹泻。因为至今没有发现合适的细胞系和动物模型用于NVs的体外增殖,所以对于该病毒的研究相对滞后。随着分子生物学及其他学科的不断发展,不同类群NVs全基因组测序完成并且病毒核衣壳蛋白分别获得真核和原核系统体外表达,从而对该病毒特性产生了一些新的认识和观点。论文从NVs的基因组结构与功能、蛋白质组成与功能、检测方法应用与发展和流行病学积累四个方面,系统介绍了该病毒国内外的研究现状以及其中存在的问题;其中,其蛋白质研究及其检测方法成为NVs的热点。论文还对NVs分子进化、检测技术和病毒体外增殖模式等提出不同的看法和建议。

一起福利院诺瓦克病毒胃肠炎暴发调查

目的调查分析2006年嘉定区一起由诺瓦克病毒引起的福利院胃肠炎暴发疫情的特征及其原因。方法采用现场流行病学方法进行调查,对标本采用RT-PCR方法检测诺瓦克病毒核酸。结果该起疫情共报告病例53例,52例集中在1号楼,1号楼的罹患率为24.41%,在7份病人标本中3份检出诺瓦克病毒核酸阳性。结论本次胃肠炎暴发疫情是由诺瓦克病毒引起,传播途径为人与人之间密切接触传播。

诺瓦克病毒广州株N蛋白基因的克隆、表达及抗原性鉴定

目的克隆、表达和鉴定诺瓦克病毒广州株NVgz01全长N蛋白。方法在成功构建诺瓦克病毒广州株全基因组克隆并测序的基础上,将全长N蛋白基因克隆到表达载体pET28a(+)上,经IPTG诱导表达后,利用Ni2+亲和层析柱对重组N蛋白进行纯化,并用Western blotting和ELISA方法检测其抗原性。结果重组诺瓦克病毒N蛋白基因在大肠杆菌中可以高效表达,其相对分子质量为62×103,可在Ni2+亲和层析柱上高度纯化;经抗原检测试剂盒检测和免疫学方法分析,均表明重组N蛋白具有良好的抗原性。结论本研究克隆和表达了诺瓦克病毒广州株的全长N蛋白,为诺瓦克病毒诊断试剂和疫苗的开发等进一步的研究奠定了基础。

实时荧光PCR检测诺瓦克病毒的应用研究

目的应用实时荧光PCR方法对诺瓦克病毒性急性胃肠炎进行快速检测,为疾病预防控制提供准确可靠的实验诊断依据。方法采集一起急性胃肠炎暴发流行患者的1份粪便、5份肛拭和1份呕吐物,进行实时荧光PCR检测。结果实时荧光PCR检测有l份病人粪便和1份病人肛拭样本中诺瓦克病毒核酸呈阳性。结论这是一起由诺瓦克病毒感染引起的急性胃肠炎暴发流行。

双重RT-PCR检测轮状病毒和诺瓦克病毒核酸方法建立

目的:建立快速且简便的常见腹泻病毒筛检和诊断方法,为及时明确病因、控制病原体的传播以及采取有效的治疗措施,防止抗生素滥用提供病原学依据。方法:对建立的一步法双重RT-PCR进行灵敏度、特异性、重复性分析。并应用该方法对28份疑似病毒性腹泻监测标本进行轮状病毒和诺瓦克病毒核酸检测,同时用普通RT-PCR方法、乳胶凝集法和基因序列分析进行检测结果验证。结果:检测出轮状病毒核酸6份,诺瓦克病毒核酸2份,验证符合率达100%。结论:一步法双重RT-PCR检测轮状病毒和诺瓦克病毒核酸的方法建立,不仅节省了检测过程中的人力、试剂和时间,更重要的是提高了应急筛检的能力,为病毒性腹泻病及时防控和治疗赢得时间。

深圳市某校一起诺瓦克病毒性胃肠炎疫情调查分析

目的:调查以发热呕吐、腹泻为主要症状的胃肠炎的病因,查找传染源,以采取相应的控制措施。方法:采用流行病学调查方法对病例进行调查,对病人以及食堂员工肛拭、粪便以及环境样品采用实时荧光PCR进行定性检测。结果:经诺瓦克病毒基因检测,学生样本3例阳性;教师食堂员工样本阴性;环境样本1例阳性。6月15、19日对73名学生食堂员工进行诺瓦克病毒基因检测,分别有7例(9.6%)和5例(6.9%)阳性。25日,再次对73名食堂员工进行检测,全为阴性。通过测序分析比对,从食堂员工以及学生中检测出的诺瓦克病毒为同一型诺瓦克病毒。结论:该校学生胃肠炎是由诺瓦克病毒感染引起,学生食堂员工带毒是引起此次诺瓦克病毒发生流行的传染源。

舰船诺瓦克病毒流行现状及预防控制研究进展

船舶在海上航行期间，由于气候变化频繁、舱室空气流通不畅、人员相对集中、机体易于疲劳等因素易使舱室工作和服役人员感染疾病。世界卫生组织（WHO）从1987年起开始监测航行船舶的传染性疾病。最新监测资料显示，近5年，航行船舶上发生的疾病以消化道和呼吸道传染病为主，且消化道疾病呈现快速高发趋势。其中，诺沃克病毒所致肠炎在消化道传染病中所占比例高达42％以上，成为航海人员的职业“健康杀手”。近年，对诺瓦克病毒的研究取得了一定进展，现综述如下。

院内感染诺瓦克病毒肠炎临床调查

目的了解院内感染诺瓦克病毒肠炎的流行病学特点及临床特点,观察其防控效果,为控制此类感染提供依据。方法采用现场流行病学和临床资料调查方法,对世纪坛医院发生的诺瓦克病毒肠炎13例病人进行了调查。结果本医院在2006年11月先后出现感染性腹泻病人聚集现象,经临床确诊13例疑似诺瓦克病毒性肠炎。经对病人粪便等进行细菌学检验,均为阴性结果,确定为病毒性感染。经采用试验性治疗,所有病人均痊愈。经及时进行隔离病人和医院病房环境的消毒隔离措施,再无新的病例出现。结论诺瓦克病毒肠炎是可防可控的肠道感染性疾病。

舰船航行期间暴发诺瓦克病毒性急性胃肠炎的回顾性研究

目的:了解海上航行期间诺瓦克病毒性急性胃肠炎(NoV-AGE)暴发流行状况,探讨控制措施。方法:收集并整理47次暴发流行案例,统计每次案例的船型、航行时间、航行海域、发病率和病死率。结果:NoV-AGE疫情在大型邮轮、旅客班轮、海军舰艇等舰船上均有发生,原因为温度控制不当、污染食物处理不当、生食和生饮、交叉感染及个人卫生条件和设施缺乏等。结论:诺瓦克病毒是引发舰船AGE的主要致病微生物,应采取相应措施应对疫情的发生。

诺瓦克病毒抗原检测在急性胃肠炎病原学诊断中的应用

目的为急性胃肠炎病原学诊断和预防控制提供科学依据。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法在急性胃肠炎患者粪便中查找诺瓦克病毒(NV)抗原,进行急性胃肠炎病原学诊断。结果2005年6月—2007年6月在梅州市6起群体性胃肠炎事件中,证实其中3起是由NV引起。结论采用ELISA法在急性胃肠炎患者粪便中查找NV抗原,方法灵敏度高,诊断快速,且较经济,在急性胃肠炎病原学诊断中具有重要的价值。

诺瓦克病毒和诺瓦克样病毒的流行病学研究进展

诺瓦克病毒和诺瓦克样病毒作为急性无菌性流行性胃肠炎的病原之一,日益引起世界各国的重视。本文对诺瓦克病毒和诺瓦克样病毒的流行病学和分子流行病学方面的研究进展作了综述。

诺瓦克病毒ORF2的原核表达及其产物分析

诺瓦克病毒(Norovirus,NV)是1972年在美国首次发现的新生病毒,直到1995年国内才有报道。该病毒是严重危害人类健康的重要食源性病毒,可导致不同年龄阶段人群的急性病毒性腹泻。实验以提取临床NV阳性腹泻样本的基因组RNA为模板,采用RT-PCR方法扩增得到全长为1623bp编码NV主要衣壳蛋白VP1的ORF2全基因序列。将测序结果进行进化分析,结果表明该病毒属于NVGII。将ORF2亚克隆到原核表达载体pET-28a构建原核表达载体,鉴定后转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞。经IPTG诱导表达,获得大小约62kD的融合蛋白并命名为rVP1。以纯化的rVP1免疫新西兰大白兔后制备高免血清,WesternBlot结果表明,实验所获得的多克隆抗体可以特异性识别临床样本中NVVP1。因此,rVP1具有良好的免疫原性和反应原性。对小于rVP1的蛋白条带进行WesternBlot分析,结果表明所有条带均为rVP1的部分蛋白。双向琼脂扩散试验结果显示实验所获得的高效价多克隆抗体与纯化的原核表达产物仅形成单一沉淀带。