X连锁凋亡抑制蛋白反义寡核苷酸诱导膀胱移行细胞癌细胞凋亡的研究

目的观察X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)反义寡核苷酸促进膀胱移行癌细胞凋亡的作用及可能机制。方法将XIAP全硫代反义寡核苷酸,通过脂质体途径转染膀胱移行细胞癌细胞。使用RT-PCR和Western blotting检测XIAP的mRNA和蛋白表达,通过流式细胞仪检测细胞凋亡率,荧光分光法检测Caspase-3活性。结果 XIAP反义寡核苷酸能够使癌细胞内XIAP的mRNA和蛋白表达均明显下调,诱导T24细胞凋亡,实验组与对照组相比较,差异具有统计学意义(P<0.05),反义寡核苷酸同时使癌细胞中Caspase-3的活性明显增高,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论下调XIAP的表达可以诱导膀胱癌细胞的凋亡,其机制与提高Caspase-3的活性有关。

Livin和增殖细胞核抗原蛋白在喉鳞状细胞癌中的表达及其临床意义

目的:研究livin蛋白和增殖细胞核抗原(PCNA)在喉鳞状细胞癌(简称喉鳞癌)组织中的表达,探讨它们之间的关系,并了解其临床意义。方法:应用免疫组织化学SP法检测58例喉鳞癌组织和10例正常喉黏膜livin和PCNA蛋白的表达水平。结果:喉鳞癌组织中有livin蛋白的表达,其阳性表达率为82.76%(48/58);平均PCNA标记指数(labelingindex,LI)为(70.47±15.39)%。Livin蛋白表达阳性的喉鳞癌细胞PCNALI为(74.76±12.27)%,高于livin蛋白表达阴性者的(49.87±12.01)%;有颈淋巴结转移的喉鳞癌中livin蛋白阳性率(97.22%)高于无颈淋巴结转移者(59.09%);生存期5年以上的livin蛋白阳性表达率(70.37%,19/27)比生存期5年内者(93.55%,29/31)低。正常喉黏膜未检出阳性结果。结论:喉鳞癌组织中有livin蛋白的表达,其表达与PCNA正相关;livin蛋白能促进喉鳞癌颈淋巴结转移;Livin蛋白阳性表达者的预后较差。

pTAT-XIAP融合蛋白表达载体的构建及其在大肠杆菌中的表达

目的构建pTAT-XIAP原核表达载体,以获得pTAT-XIAP融合蛋白;为其用于神经系统疾病的治疗奠定基础。方法体外合成大鼠XIAP基因,将其插入pTAT-HA质粒,构建pTAT-XIAP融合蛋白表达载体,转入大肠杆菌表达菌株BL21plysS进行诱导表达。SDS-PAGE及Western blot法鉴定融合蛋白。结果表达产物经SDS-PAGE及Western blot分析后,于64 kD处有一明显表达条带,与理论结果相符。结论成功构建了pTAT-XIAP原核表达载体并成功表达出目的融合蛋白,该载体成功表达pTAT-XIAP融合蛋白,有望用于临床神经系统疾病的治疗。

XIAP基因调节机制研究进展

凋亡抑制蛋白（inhibitor of apoptosis protein．IAP）是一类在结构上具有同源性的细胞内源性凋亡抑制蛋白家族，目前为止在人类已经发现的IAPs至少有8种。它们能够对抗各种凋亡诱导因素，抵抗细胞凋亡。X-连锁调亡抑制蛋白（X—linked inhibitor of apoptosis protein，XIAP）是IAP家族的重要成员，定位于Xq24—25，编码区由7个外显子组成，cDNA全长2540bp，mRNA全长为9kb，但实际编码区仅有1．5kb，XIAP含497个氨基酸，分子量为57kD。

凋亡抑制蛋白Apollon在宫颈癌组织中的表达及意义

目的:探讨凋亡抑制蛋白Apollon在宫颈癌及正常宫颈组织中的表达及其与宫颈癌发生、发展的关系。方法:采用免疫组化方法检测40例宫颈癌组织、20例高级别宫颈上皮内瘤变(H-CIN)、20例低级别宫颈上皮内瘤变(L-CIN)和20例正常宫颈组织中的Apollon的表达情况。结果:Apollon在正常宫颈组织、L-CIN组织、H-CIN组织、宫颈癌组织中表达率分别为0.00%、(48.82±8.83)%、(88.49±7.79)%、(92.16±5.46)%,宫颈癌、H-CIN、L-CIN与正常宫颈组织相比差异均有统计学意义(P<0.05),宫颈癌、H-CIN与L-CIN相比差异有统计学意义(P<0.05),而宫颈癌与H-CIN相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论:Apollon在宫颈癌组织中高表达,提示Apollon与宫颈癌的发生、发展密切相关,对宫颈癌生物学行为具有一定的指导意义。

Survivin与肿瘤

Survivin 是新近发现的结构独特的凋亡抑制蛋白家族成员,具有抑制凋亡和调节细胞分裂的双重功能.他参与细胞的生长和分化,在终末分化成熟的正常成人组织中无表达,又重新表达于多种转化细胞和人类绝大多数常见肿瘤组织中.他与肿瘤的关系密切,此方面的研究是学术界的热点问题,研究包括 Survivin 在各种肿瘤中的表达,Survivin 在肿瘤细胞中的作用机制以及在肿瘤早期诊断和治疗中的应用等.本文介绍 Survivin 的生物学特性以及与肿瘤相关的研究进展,为肿瘤的诊治带来希望.

XIAP、c-Jun在乳腺癌组织中的表达及意义

目的探讨X-连锁调亡抑制蛋白(XIAP)和氨基端激酶(c-Jun)在乳腺癌中的表达及其与乳腺癌的关系。方法应用免疫组织化学法检测50例乳腺癌组织及50例乳腺纤维腺瘤组织中XIAP和c-Jun的表达,并分析其临床意义。结果 XIAP和c-Jun在乳腺癌组织中的阳性表达率分别为76%(38/50)和82%(41/50),在乳腺纤维腺瘤中的阳性表达率分别为30%(15/50)和22%(11/50),在乳腺癌中的阳性表达明显高于乳腺纤维腺瘤(P<0.01)。XIAP和c-Jun的阳性表达均与有无淋巴结转移密切相关(P<0.05),与患者年龄、肿瘤直径、组织学分级及临床分期均无明显相关(P>0.05);XIAP的阳性表达和c-Jun的阳性表达呈正相关。结论 XIAP和c-Jun在乳腺癌的发病中具有协同作用,其高表达可能促进淋巴结转移。

儿童脊髓性肌萎缩症的基因学研究

目的 研究我国儿童型脊髓性肌萎缩症 (SMA)患者的运动神经元生存 (SMN)基因及神经细胞凋亡抑制蛋白 (NAIP)基因外显子的缺失情况 ,以探讨此二种基因与SMA表型之间的关系。方法 应用PCR和PCR -酶切法检测 15例Ⅰ～Ⅲ型SMA患者 (Ⅰ型 4例 ,Ⅱ型 3例 ,Ⅲ型 8例 )、2 0例表型正常的SMA直系亲属及30例正常对照的SMN基因的第 7,8号外显子和NAIP基因的第 5 ,6号外显子缺失情况。结果 7例Ⅰ型和Ⅱ型SMA患者中 6例纯合缺失SMN基因外显子 7和 8,1例纯合缺失外显子 7而保留外显子 8;8例Ⅲ型SMA患者仅1例有外显子 7和 8的缺失 ,余 7例均无SMN基因的缺失 ;15例Ⅰ～Ⅲ型SMA患者均未检测到NAIP基因外显子5和 /或 6的缺失。结论 Ⅰ型、Ⅱ型SMA可通过SMN基因第 7,8号外显子的检测进行确诊 ,方法简便可靠 ,Ⅲ型SMA患者SMN基因缺失率低 ,故通过检测SMN基因 7,8外显子进行基因诊断尚需谨慎 ,NAIP基因在SMA发病中的作用尚不清楚 ,有待进一步研究。

转染反义寡核苷酸对人胆管癌QBC939细胞XIAP基因表达及细胞周期作用的实验研究

目的研究转染反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide,ASODN)对人胆管癌细胞株QBC939细胞凋亡抑制蛋白基因(X-linked inhibitor of apoptosis protein,XIAP)表达的抑制作用及对细胞周期凋亡的影响.方法脂质体介导ASODN瞬时转染QBC939细胞,荧光显微镜观察ASODN转染入细胞的情况,并计算转染率;RT-PCR检测转染前后XIAP mRNA表达的变化;流式细胞仪检测转染后细胞周期的变化和凋亡率.结果转染后24h可达到最佳的转染效果;ASODN组的XIAP基因水平明显低于对照组(P<0.05),流式结果显示转染后QBC939G0/G1期细胞高于阴性对照组,凋亡率高于对照组(P<0.05).结论脂质体介导转染ASODN能特异性地抑制QBC939细胞中的XIAP基因表达,使其发生G0/G1期阻滞,并诱导胆管癌细胞凋亡,有望成为胆管癌基因治疗新的靶点.