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链霉菌发育调控启动子——P_(TH270)对细胞分化的影响 被引量:1
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作者 谭华荣 杨海花 +2 位作者 田宇清 吴畏 ChaterK.F. 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第1期58-61,共4页
在原核生物发育分化的分子生物学研究中,以枯草杆菌为模式系统进行了许多研究,但其生命周期特别是分化过程比较简单,不象链霉菌有基质菌丝、气生菌丝、菌丝分隔形成多细胞,然后断裂形成单孢子的过程。链霉菌的这一性状与真核生物丝状真... 在原核生物发育分化的分子生物学研究中,以枯草杆菌为模式系统进行了许多研究,但其生命周期特别是分化过程比较简单,不象链霉菌有基质菌丝、气生菌丝、菌丝分隔形成多细胞,然后断裂形成单孢子的过程。链霉菌的这一性状与真核生物丝状真菌的分化相似。因此在原核生物中,链霉菌是研究分化基因表达调控的良好模式材料,为在时空上研究发育分化基因的多水平调控提供了有利条件。 链霉菌的发育调控启动子(P_(TH270))是国际上首先克隆的两个启动子之一。一些研究结果表明该启动子依赖于链霉菌分化关键基因——whiG。虽然该启动子的序列已被测定,启动子的-10区和-35区已被精确定位,但该启动子在链霉菌发育分化中是如何调控的,当它以高拷贝数的形式存在时对细胞内含物的组份有何影响,这种影响怎样与分化关联,这些都是有待解决的重要问题。 展开更多
关键词 链霉菌 发育 调控启动子 细胞分化
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链霉菌分化调控启动子——P_(TH4)和P_(TH270)的体内转录研究
2
作者 谭华荣 田宇清 +3 位作者 杨海花 吴畏 董可宁 K.F.Chater 《中国科学(C辑)》 CSCD 1997年第4期295-299,共5页
天蓝色链霉菌分化调控启动子P_(TH4)和P_(TH270)被分别亚克隆到链霉菌启动子探针载体pIJ4083后,构建的重组质粒被命名为pIJ4470和pIJ4471.当pIJ4470和pIJ4471转化天蓝色链霉菌的白色分化阻断突变株(C85,C70,C71,C17和C119)后,通过pIJ408... 天蓝色链霉菌分化调控启动子P_(TH4)和P_(TH270)被分别亚克隆到链霉菌启动子探针载体pIJ4083后,构建的重组质粒被命名为pIJ4470和pIJ4471.当pIJ4470和pIJ4471转化天蓝色链霉菌的白色分化阻断突变株(C85,C70,C71,C17和C119)后,通过pIJ4083上儿茶酚加氧酶报告基因的表达可知启动子的活性.从构建的重组菌株中进行了总RNA的提取.用同位素标记P_(TH4)和P_(TH270)的5’-端制备成了探针,以不同来源的RNA为模板与制备的探针分别进行了DNA-RNA杂交.S1 mapping的结果表明,来自C85/pIJ4470,C85/pIJ4471,C70/pIJ4470,C70/pIJ4471及C17/pIJ4470,C17/pIJ4471菌株的RNA杂交后都给出了较强的阳性杂交信号,而来自C71/pIJ4470,C71/pIJ4471菌株的RNA杂交未出现阳性信号,来自C119/pIJ4470与C119/pIJ4471菌株的RNA杂交后有弱的信号.上述结果表明启动子P_(TH4)和P_(TH270)的转录依赖于链霉菌分化关键基因whiG,部分依赖于分化基因whiH,而不依赖于分化基因whiA,whiB及whiI. 展开更多
关键词 锭霉菌 分化 调控启动子 体内转录
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渗透压调控启动子表达木糖醇脱氢酶基因XYL2对重组酿酒酵母木糖代谢的影响 被引量:1
3
作者 谷鸿宇 诸葛斌 +4 位作者 方慧英 宗红 陆信曜 陈方林 诸葛健 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期1122-1126,共5页
渗透压调控启动子在高底物浓度或盐类物质诱导下可实现目标基因的高表达和可控表达,因此可用于构建新的代谢工程菌株.利用来源于可耐高渗的产甘油假丝酵母(Candida glycerinogenes)的渗透压调控启动子PCgSTL3、PCgZWF和PCgGPD,在酿酒酵... 渗透压调控启动子在高底物浓度或盐类物质诱导下可实现目标基因的高表达和可控表达,因此可用于构建新的代谢工程菌株.利用来源于可耐高渗的产甘油假丝酵母(Candida glycerinogenes)的渗透压调控启动子PCgSTL3、PCgZWF和PCgGPD,在酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)中控制木糖醇脱氢酶基因XYL2的表达水平,并研究其在NaCl诱导下对木糖醇脱氢酶活性及重组酿酒酵母木糖代谢流的影响.结果显示,以组成型强启动子PTPI为对照,添加0.4 mol/L NaCl作为渗透压诱导剂后,渗透压调控启动子控制下的木糖醇脱氢酶活性均得到增强,其中在PCgGPD控制下其活性变化最为明显,酶活提高了2.8倍.同时,以PCgGPD控制XYL2基因表达的重组菌木糖消耗量、乙醇产量和产率均为最高,与无诱导剂相比分别提高了62.3%、30.7%和9.7%,副产物木糖醇产率最低,下降了53.3%.本研究表明,渗透压调控启动子PCgGPD可显著提高木糖醇脱氢酶活性,通过添加NaCl作为渗透压诱导剂可实现对XYL2基因的可控表达,显著降低木糖醇积累,提高乙醇产率. 展开更多
关键词 渗透压调控启动子 木糖醇脱氢酶 渗透压 酿酒酵母 木糖
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利用补丁甲基化技术构建特殊报告载体检测DNA甲基化对FCER1G基因启动子的调控活性 被引量:2
4
作者 梁云生 赵明 +2 位作者 梁功平 尹恒 陆前进 《中南大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期120-124,共5页
目的:构建一种特殊的荧光素报告载体检测DNA甲基化对FCER1G基因启动子调控序列的调控活性。方法:用补丁甲基化技术构建特殊的含完全甲基化和模拟甲基化的FCER1G启动子调控序列的PGL-3荧光素报告载体;通过比较完全甲基化与模拟甲基化荧... 目的:构建一种特殊的荧光素报告载体检测DNA甲基化对FCER1G基因启动子调控序列的调控活性。方法:用补丁甲基化技术构建特殊的含完全甲基化和模拟甲基化的FCER1G启动子调控序列的PGL-3荧光素报告载体;通过比较完全甲基化与模拟甲基化荧光素报告载体活性来检测DNA甲基化对FCERG基因启动子调控序列的调控活性。结果:成功构建特殊的完全甲基化与模拟甲基化FCER1G启动子调控序列荧光素报告载体;并检测出完全甲基化与模拟甲基化荧光素报告载体活性比为(0.36±0.07):1(P<0.001)。结论:FCER1G启动子调控序列是甲基化敏感位点,FCER1G启动子受DNA甲基化调控。 展开更多
关键词 补丁甲基化 FCER1G基因 启动子调控序列 DNA甲基化
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TOPO Ⅱα启动子调控因子组蛋白甲基化修饰在苯中毒致造血毒性中的作用 被引量:3
5
作者 施益芬 郑周懿 +3 位作者 陈晶晶 钱珊瑚 历嘉琪 俞康 《温州医学院学报》 CAS 2015年第6期391-396,共6页
目的:研究拓扑异构酶(TOPO)Ⅱα启动子调控因子(SP1、ATF-2、SP3、NF-YA、NF-M、P53、CMYB、C-JUN、ICBP90)组蛋白甲基化修饰在苯中毒致造血毒性中的作用。方法:25例临床慢性苯中毒患者骨髓单个核细胞为病例组,25例正常人骨髓单个核细... 目的:研究拓扑异构酶(TOPO)Ⅱα启动子调控因子(SP1、ATF-2、SP3、NF-YA、NF-M、P53、CMYB、C-JUN、ICBP90)组蛋白甲基化修饰在苯中毒致造血毒性中的作用。方法:25例临床慢性苯中毒患者骨髓单个核细胞为病例组,25例正常人骨髓单个核细胞为对照组,染色质免疫沉淀分析(Ch IP)技术探讨TOPOⅡα启动子各调控因子组蛋白甲基化水平的变化,RT-PCR法测定TOPO Ⅱα启动子各调控因子m RNA表达水平的改变。结果:1与对照组比较,病例组TOPO Ⅱα启动子调控因子NF-M、C-JUN组蛋白H3K4甲基化水平下降,差异有统计学意义(P<0.05),SP1、ATF-2、SP3、NF-YA、P53、C-MYB、ICBP90组蛋白H3K4甲基化水平无明显改变(P>0.05);SP1、NF-M组蛋白H3K9甲基化水平升高,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01),而ATF-2、SP3、NF-YA、P53、C-MYB、C-JUN、ICBP90组蛋白H3K9甲基化水平无明显改变(P>0.05)。2与对照组比较,病例组TOPO Ⅱα启动子调控因子SP1、NF-YA、C-MYB、NF-M及C-JUN m RNA表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01),ATF-2、ICBP90 m RNA表达水平不变(P>0.05),SP3、P53 m RNA表达水平则升高(P<0.05或P<0.01)。结论:1慢性苯中毒TOPO Ⅱα启动子调控因子组蛋白化学修饰水平的改变伴随着调控因子m RNA水平的变化。2TOPO Ⅱα启动子调控因子组蛋白甲基化修饰在苯中毒所致的造血毒性中发挥一定的作用。 展开更多
关键词 拓扑异构酶Ⅱα启动子调控因子 组蛋白甲基化 染色质免疫沉淀分析法
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通过grp启动子调控的可诱导性自杀基因疗法增强光动力治疗效果
6
作者 陈虹霞 《中国激光医学杂志》 CAS CSCD 2003年第3期204-204,共1页
关键词 grp启动子调控 可诱导性自杀基因疗法 光动力治疗 光敏剂 肿瘤
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人Mcl-1基因启动子区结合蛋白的生物信息学分析 被引量:3
7
作者 杜冠魁 骆凯丽 +6 位作者 庞驰 郭杨 恽枫林 柳红琴 文茂羽 张雪子 肖曼 《吉林医学》 CAS 2016年第12期2865-2867,共3页
目的:对人Mcl-1基因启动子区结合蛋白进行生物信息学分析。方法:从Gene Bank数据库中获取人Mcl-1基因5'调控区,使用在线软件JASPAR对该序列可能存在的转录因子结合位点进行预测。结果:Relative profile score threshold在85%、90%、... 目的:对人Mcl-1基因启动子区结合蛋白进行生物信息学分析。方法:从Gene Bank数据库中获取人Mcl-1基因5'调控区,使用在线软件JASPAR对该序列可能存在的转录因子结合位点进行预测。结果:Relative profile score threshold在85%、90%、95%和100%时,该序列存在1700、1147、368和32个可能的转录因子结合位点,包含Arid3a,Atoh1,ETV6,Gata1,GATA3,KLF5,LMX1A,LMX1B,MZF1,Prrx2,SPI1,TBX4,USF1,YY1,ZEB1等。结论:人Mcl-1基因5'调控区存在多种转录因子的结合位点,这些转录因子大多与肿瘤发生,红细胞生成及神经发育等有关。 展开更多
关键词 人Mcl-1基因 启动子5'调控 转录因子结合位点
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人Sirt6基因启动子区结合蛋白的生物信息学分析
8
作者 颜冬菁 王青松 +1 位作者 蔡望伟 唐敏 《生物技术世界》 2015年第6期5-6,共2页
目的:对人Sirt6基因启动子区结合蛋白进行生物信息学分析。方法:从Gene Bank数据库中获取人Sirt6基因5’调控区,使用在线软件JASPAR对该序列可能存在的转录因子结合位点进行预测。结果:Relative profile score threshold在85%、90%、95%... 目的:对人Sirt6基因启动子区结合蛋白进行生物信息学分析。方法:从Gene Bank数据库中获取人Sirt6基因5’调控区,使用在线软件JASPAR对该序列可能存在的转录因子结合位点进行预测。结果:Relative profile score threshold在85%、90%、95%和100%时,该序列存在939、276、70和9个可能的转录因子结合位点,包含Ahr、SPIB、Pdx1、Prrx2、MZF1、Mafb和KLF5等。结论:人Sirt6基因5’调控区存在多种转录因子的结合位点,这些转录因子大多与免疫系统调节、肿瘤发生和代谢调节等有关。 展开更多
关键词 人Sirt6基因 启动子5’调控 转录因子结合位点
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猪NLRC5基因启动子克隆及生物信息学分析 被引量:1
9
作者 刘翔 尹灵丹 +6 位作者 薛美 李亮 赵立媛 蒋成凡 王文哲 冯力 刘平黄 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第13期1-5,143,共6页
为了构建猪NLR家族含CARD结构域5(NOD-like receptor family caspase recruitment domain family domain-containing 5,NLRC5)基因启动子双荧光素酶报告质粒,确认其活性,进而探索其转录调控机制,试验采用PCR方法从猪睾丸细胞(swine test... 为了构建猪NLR家族含CARD结构域5(NOD-like receptor family caspase recruitment domain family domain-containing 5,NLRC5)基因启动子双荧光素酶报告质粒,确认其活性,进而探索其转录调控机制,试验采用PCR方法从猪睾丸细胞(swine testicular cell,ST细胞)中扩增出猪NLRC5基因启动子,将其与pGL3-Basic载体连接,测序正确后将猪NLRC5基因启动子双荧光素酶报告质粒转染至ST细胞中,通过双荧光素酶报告检测试剂盒检测荧光素酶的表达活性,并使用生物信息学软件预测该基因启动子区域的CpG岛、调控元件及转录因子结合位点。结果表明:试验成功构建猪NLRC5基因启动子双荧光素酶报告质粒,该质粒的相对荧光素酶活性极显著高于pGL3-Basic载体(P<0.01)。NLRC5基因启动子区域中存在2个CpG岛,TATA box、CCAAT box和GC box等多种调控元件,以及IRF1、IRF3、STAT1、STAT3、STAT4和NF-κB转录因子结合位点。说明猪NLRC5基因的表达可能受甲基化的影响,同时也可能受顺式作用元件以及干扰素和NF-κB相关转录因子的调控。 展开更多
关键词 启动子质粒 双荧光素酶 NLR家族含CARD结构域5(NLRC5)基因 启动子调控元件 转录因子结合位点 生物信息学
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与链霉菌发育分化有关的启动子——P_(TH4)的调控研究 被引量:1
10
作者 谭华荣 杨海花 +3 位作者 田宇清 吴畏 董可宁 K.F.Chater 《中国科学(C辑)》 CSCD 1997年第2期126-132,共7页
依赖于天蓝色链霉菌分化关键基因——whiG的发育调控启动子(P_(TH4))所控制的下游基因被克隆了,用双脱氧链终止法进行了双链测序.结果表明在1597bp的DNA片段中含有一个完整的开读框架(ORF).在计算机的蛋白文库比较中未找到与该基因产物... 依赖于天蓝色链霉菌分化关键基因——whiG的发育调控启动子(P_(TH4))所控制的下游基因被克隆了,用双脱氧链终止法进行了双链测序.结果表明在1597bp的DNA片段中含有一个完整的开读框架(ORF).在计算机的蛋白文库比较中未找到与该基因产物同源的已知蛋白,可能是一个新的蛋白产物.用基因破坏的策略初步研究了该基因的生物学功能,发现该基因的破坏影响了放线紫红素的产生,即与天蓝色链霉菌放线紫红素的生物合成有关.这进一步证明启动子——P_(TH4)在链霉菌分化中的多级调控作用. 展开更多
关键词 链霉菌 分化 调控启动子 发育
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PIWIL1基因启动子调控的特异表达Cre重组酶的转基因猪的构建
11
作者 段新平 高飞 +5 位作者 全龙泉 唐成程 武蓉 戴祯 欧阳红生 逄大欣 《畜牧与兽医》 北大核心 2012年第S1期322-322,共1页
Cre-LoxP重组酶系统是条件性基因打靶、诱导性基因打靶、时空特异性基因打靶策略的主要技术。本实验建立睾丸特异性表达Cre重组酶的转基因猪,为制备人类生殖系统疾病模型猪奠定基础。利用PCR法扩增出猪PIWIL1启动子序列2822 bp,替换本... Cre-LoxP重组酶系统是条件性基因打靶、诱导性基因打靶、时空特异性基因打靶策略的主要技术。本实验建立睾丸特异性表达Cre重组酶的转基因猪,为制备人类生殖系统疾病模型猪奠定基础。利用PCR法扩增出猪PIWIL1启动子序列2822 bp,替换本实验室保存的猪源Cre重组酶的表达载体pET28a-MHC-Cre-BGHpo1yA-FRT2neor的MHC启动子。 展开更多
关键词 CRE重组酶 转基因猪 PIWIL1 基因打靶 启动子调控 时空特异性 表达载体 猪源 替换本 生殖系统疾病
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染色质调节元件与不同启动子的相互作用对基因表达调控的影响 被引量:4
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作者 王斌 郭庆 +5 位作者 刘凌云 李美荃 戴利利 陈奇娜 刘雪莉 翟书华 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第9期3310-3322,共13页
为探究DNA序列元件对不同启动子调节转基因稳定表达的影响,利用遍在染色质开放元件(Ubiquitous chromatin opening elements,UCOE)和基质黏附序列(Scaffold/matrix-attachment regions,MAR)分别与含增强子的oct4基因启动子、含CpG岛的s... 为探究DNA序列元件对不同启动子调节转基因稳定表达的影响,利用遍在染色质开放元件(Ubiquitous chromatin opening elements,UCOE)和基质黏附序列(Scaffold/matrix-attachment regions,MAR)分别与含增强子的oct4基因启动子、含CpG岛的sox2基因启动子和不含调控元件的nanog基因启动子以及同时包含增强子和CpG岛的CMV启动子组合构建pOCT4-MAR、pOCT4-UCOE、pSOX2-MAR、pSOX2-UCOE、pNANOG-MAR、pNANOG-UCOE、pCMV-UCOE、pCMV-MAR等质粒,分析这些质粒稳定转染后的表达量和嵌合表达差异。结果发现,UCOE与含增强子元件的oct4启动子组合能较稳定高效表达,而MAR与含CpG岛的sox2启动子组合能较稳定高效表达。利用排除位置效应原因的嵌合表达对染色质高级结构调控基因表达的稳定性分析表明:(1)通常情况下UCOE比MAR调节的表达载体的表达更高效和更稳定;UCOE连接含CpG岛的启动子形成开放染色质调节的高表达更稳定;(2)MAR与启动子上TATA盒或增强子可能通过染色质环产生高表达,但相对不稳定。结论:染色质调节元件UCOE和MAR与启动子调控元件之间能通过染色质开放状态或染色质环调控基因稳定表达。 展开更多
关键词 染色质调节序列 启动子调控元件 开放染色质 染色质环
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水稻种子醇溶蛋白4a基因的表达受串联复合启动子调控 被引量:3
13
作者 赵军 范云六 《中国科学(C辑)》 CSCD 1996年第2期156-163,共8页
从水稻中花8号中克隆了醇溶蛋白4a的基因5'侧翼区并首次报道该基因5'端-680~-18区段具有胚乳特异性表达调控功能.本研究通过 5’缺失方法对该基因5'侧翼区的结构和功能进行了进一步分析,结果表明:(1)醇溶蛋白4a基因启动子Ⅰ能够特... 从水稻中花8号中克隆了醇溶蛋白4a的基因5'侧翼区并首次报道该基因5'端-680~-18区段具有胚乳特异性表达调控功能.本研究通过 5’缺失方法对该基因5'侧翼区的结构和功能进行了进一步分析,结果表明:(1)醇溶蛋白4a基因启动子Ⅰ能够特定地在转基因烟草开花发育 22 d后的种子胚乳中激活下游 GUS融合基因表达,是该基因有功能的启动子;(2)prolamin box Ⅱ对该基因的表达具有增强功能;(3)启动子Ⅰ的转录起始点是位于该基因起始ATG上游63 bp处的C碱基. 展开更多
关键词 水稻 种子 醇溶蛋白4a基因 基因表达 启动子调控
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核素^125I标记hTERT/PSA启动子双调控溶瘤腺病毒对前列腺癌靶向治疗及肿瘤微环境的影响 被引量:1
14
作者 史振铎 魏振宁 +7 位作者 郝林 庞昆 周家合 董秉政 张治国 赵岩 孙玉峰 韩从辉 《中华放射医学与防护杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第8期573-581,共9页
目的探究125I-RSOAds-hTERT/PSA溶瘤腺病毒对前列腺癌靶向治疗作用以及对肿瘤微环境的影响。方法采用PCR扩增技术及双酶切连接技术构建125I-RSOAds-hTERT/PSA溶瘤腺病毒(125I-病毒复合物)。通过缺口末端标记法(TUNEL)染色,流式细胞实验... 目的探究125I-RSOAds-hTERT/PSA溶瘤腺病毒对前列腺癌靶向治疗作用以及对肿瘤微环境的影响。方法采用PCR扩增技术及双酶切连接技术构建125I-RSOAds-hTERT/PSA溶瘤腺病毒(125I-病毒复合物)。通过缺口末端标记法(TUNEL)染色,流式细胞实验以及Caspase-3的免疫印迹实验分别从体内和体外检测125I-病毒复合物对前列腺癌细胞的杀伤作用。通过酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测人前列腺癌细胞株PC3和小鼠前列腺癌细胞株RM-1培养上清液及血清中的白介素2(IL-2)、IL-10、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、γ干扰素(IFN-γ)等的分泌水平,探究125I-病毒复合物对瘤组织细胞因子分泌水平的影响。通过免疫组织化学法以及免疫荧光实验探究125I-病毒复合物对前列腺癌组织及癌细胞中CD24、CD44以及前列腺干细胞抗原(PSCA)表达的调节,同时检测瘤组织中CD32和血管内皮生长因子(VEGF)表达水平,以及CD4+、CD8+和巨噬细胞浸润情况。结果125I-病毒复合物体内、体外均可显著诱导癌细胞凋亡,同时显著高于125I组和病毒复合物组。同时IL-2(t=-183.30、-38.20,P<0.05)、IL-10(t=113.80、92.71,P<0.05)、TNF-α(t=-73.20、-73.91,P<0.05)、IFN-γ(t=-65.37、-139.70,P<0.05)在体内体外含量均升高。125I-病毒复合物可降低癌细胞及癌组织中CD24、CD44以及PSCA表达,减小癌组织重量(t=8.55,P<0.05),抑制癌组织血管生成,同时调节肿瘤组织中免疫反应。结论125I-病毒复合物溶瘤腺病毒对前列腺癌靶向可显著杀伤癌细胞,减少癌组织重量和血管生成,同时改善肿瘤微环境。 展开更多
关键词 125I hTERT/PSA启动子调控 溶瘤腺病毒 前列腺癌 靶向治疗
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组织培养和用于研究植物发育的转基因植物 被引量:3
15
作者 邵宏波 初立业 《生物技术通报》 CAS CSCD 1992年第12期1-4,共4页
一、前言产生转基因植物的关键在于所分离的植物细胞或外植体在培养过程中具有的生长及分裂能力,以及在适当条件下再生成完整植株的能力。一旦细胞吸取了外源DNA,只要该外源DNA稳定地保存于细胞中,那么转基因植物就能够得到再生。在过... 一、前言产生转基因植物的关键在于所分离的植物细胞或外植体在培养过程中具有的生长及分裂能力,以及在适当条件下再生成完整植株的能力。一旦细胞吸取了外源DNA,只要该外源DNA稳定地保存于细胞中,那么转基因植物就能够得到再生。在过去的几年中,植物转化方面的进展已经为研究植物DNA序列的功能提供了多种可能性。由于植物转化方便可行,短的生活周期,泛义遗传学,以及可产生大量转基因植物个体的简单性均证明在努力探讨基因表达调控的分子基础方面,植物将会起到非常重要的作用。 展开更多
关键词 转基因植物 植物发育 组织培养 植物细胞 根癌土壤杆菌 启动子调控 全能性 完整植株 细胞团 生活周期
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Study of Transcription Activity of X-Box Binding Protein 1 Gene in Human Different Cell Lines
16
作者 郭风劲 宋方洲 +2 位作者 张静 李婧 唐勇 《Journal of Genetics and Genomics》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2007年第9期790-799,共10页
Human X-box binding protein 1 (XBP1), an important transcription factor, participates in many signal transduction processes. To further investigate the biological function of XBP1, sequences of XBP1 promoter and its... Human X-box binding protein 1 (XBP1), an important transcription factor, participates in many signal transduction processes. To further investigate the biological function of XBP1, sequences of XBP1 promoter and its two deletion mutants were first determined using bioinformatic analysis. The report vectors containing XBP1 promoter and its deletion mutants were then constructed, namely, p1-XBPlp, p2-XBPlp, and p3-XBPlp. Each reporter vector was separately transfected into HepG2, L02, K562, SMMC-7721, HSF, and Lipocyte lto Cell line using FuGENE 6 transfection reagents. The activity of chloramphenicol acetyltransferase (CAT) in each group of transfected cells was detected by ELISA assay, which in turn reflects the transcription activity of the XBP1 gene promoter. The activity involving p3-XBPlp was the highest in HepG2, which was 12.4-fold of that of pCAT3-Basic. The activities of p3-XBPlp in K562 and SMMC-7721 were the second and the third highest, which were 10.9-fold and 10.0-fold of that of the pCAT3-Basic, respectively. The CAT activity in L02 was lower than that in the above-mentioned abnormal cell, and no reporter activity was detected in HSF and Ito Cell. The XBP1 transcription and expression in K562, HepG2 and SMMC-7721 were found to be higher than that in L02, HSF and Ito cells, based on the results of real-time RT-PCR and Western blot. The XBP1 transcription and expression in L02, HSF was lower, whereas that in Ito cells was totally lacking. The result was similar to that of CAT-ELISA. Therefore, the XBP1 gene promoter can drive its downstream gene expression and its activity is cell line-dependent. The core sequence of XBP1 promoter was found between -227bp and 66bp sequence. This sequence was closely associated with the transcriptional activity of XBP1 promoter. 展开更多
关键词 transcription factor XBP1 promoter CAT ELISA transcription regulation
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猪糖皮质激素受体基因启动子分析
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作者 蒋征 赵茹茜 《畜牧与兽医》 北大核心 2012年第S1期148-148,共1页
人和大鼠的研究表明,不同外显子1变体表达的组织特异性和细胞特异性由各自的启动子调控;本实验室前期的研究发现猪糖皮质激素受体(GR)选择性外显子1的转录存在组织特异性,但猪GR外显子1变体启动子的活性分析尚未见报道。本实验构建了与G... 人和大鼠的研究表明,不同外显子1变体表达的组织特异性和细胞特异性由各自的启动子调控;本实验室前期的研究发现猪糖皮质激素受体(GR)选择性外显子1的转录存在组织特异性,但猪GR外显子1变体启动子的活性分析尚未见报道。本实验构建了与GR基因exon1各变体相对应的7种短型启动子区片段(S1-4、S1-5、S1-6、S1-7、S1-10、S1-11、S1-12) 展开更多
关键词 糖皮质激素受体 启动子调控 组织特异性 细胞特异性 启动子片段 大鼠 报告质粒 活性分析 启动子活性 小鼠心肌细胞
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人凝血因子IX在脆壁克鲁维酵母中的表达与分泌 被引量:1
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作者 姚笑迪 霍克克 +2 位作者 方季 戈万忠 李育阳 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2003年第6期26-29,共4页
通过改造人凝血因子IX基因(h-FIX)使其与乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyceslactis)的分泌信号序列(Kss)融合,并置于脆壁克鲁维酵母(K.fragilis)LAC4基因调控型启动子的控制之下,构建成h-FIX基因表达盒。将此表达盒插入克鲁维酵母的整合质粒... 通过改造人凝血因子IX基因(h-FIX)使其与乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyceslactis)的分泌信号序列(Kss)融合,并置于脆壁克鲁维酵母(K.fragilis)LAC4基因调控型启动子的控制之下,构建成h-FIX基因表达盒。将此表达盒插入克鲁维酵母的整合质粒,得到了一个高稳定的h-FIX基因整合表达载体pHKB202-FP。经摇瓶培养并以半乳糖诱导此表达载体转化的酵母菌株,ELISA检测显示酵母上清液中的人凝血因子IX表达量可达到约200 ng/ml。此结果表明人凝血因子IX蛋白首次成功地在脆壁克鲁维酵母中得到了表达和分泌。这对于促进人凝血因子IX的基因工程产业化具有实际意义。 展开更多
关键词 凝血因子 脆壁克鲁维酵母 血友病 分泌信号序列 乳酸克鲁维酵母 基因调控启动子 基因表达盒 IX蛋白
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Mutual regulation between microRNA-373 and methyl-CpGbinding domain protein 2 in hilar cholangiocarcinoma 被引量:8
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作者 Yong-Jun Chen Jian Luo Guang-Yao Yang Kang Yang Song-Qi Wen Sheng-Quan Zou 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS CSCD 2012年第29期3849-3861,共13页
AIM:To investigate the reciprocal modulation between microRNA(miRNA) and DNA methylation via exploring the correlation between miR-373 and methyl-CpGbinding domain protein(MBD)2.METHODS:MiR-373 expression was examined... AIM:To investigate the reciprocal modulation between microRNA(miRNA) and DNA methylation via exploring the correlation between miR-373 and methyl-CpGbinding domain protein(MBD)2.METHODS:MiR-373 expression was examined using the TaqMan miRNA assay.Methylation of miR-373 was investigated using methylation-specific polymerase chain reaction,and recruitment of methyl binding proteins was studied using the chromatin immunoprecipitation assay.Mutation analysis was conducted using the QuikChange Site-Directed Mutagenesis kit.The activity of miR-373 gene promoter constructs and targeting at MBD2-three prime untranslated region(3'UTR) by miR-373 were evaluated by a dual-luciferase reporter gene assay.RESULTS:In hilar cholangiocarcinoma,miR-373 decreased and was closely associated with poor cell differentiation,advanced clinical stage,and shorter survival.The promoter-associated CpG island of miR-373 gene was hypermethylated and inhibited expression of miR-373.MBD2 was up-regulated and enriched at the promoter-associated CpG island of miR-373.Methylation-mediated suppression of miR-373 required MBD2 enrichment at the promoter-associated CpG island,and miR-373 negatively regulated MBD2 expression through targeting the 3'UTR.CONCLUSION:MiR-373 behaves as a direct transcriptional target and negative regulator of MBD2 activity through a feedback loop of CpG island methylation. 展开更多
关键词 MicroRNA-373 Methyl-CpG binding domain proteins 2 Methylation Hilar cholangiocarcinoma Three prime untranslated region
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哺乳动物抑制型转录因子及启动子对的全新设计与构建
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作者 杨子杰 潘祎杰 +6 位作者 蔡毅鸣 傅彤 冯骜 刘燕 王一恒 熊心旋 蔡亮 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第12期1886-1894,共9页
转录因子及启动子是基因回路的基础。相较于原核启动子,真核启动子作用机制复杂,增加了全新设计与改造的难度。目前有限数量的真核转录因子及启动子成为在哺乳动物细胞中设计并实现复杂基因回路以满足各类临床或工业应用需求的瓶颈。文... 转录因子及启动子是基因回路的基础。相较于原核启动子,真核启动子作用机制复杂,增加了全新设计与改造的难度。目前有限数量的真核转录因子及启动子成为在哺乳动物细胞中设计并实现复杂基因回路以满足各类临床或工业应用需求的瓶颈。文中介绍了基于能够结合特定DNA序列的DNA结合结构域,通过柔性连接肽连接到转录抑制模块KRAB,构建抑制型转录因子以及通过在SV40启动子下游插入结合序列构建对应启动子的方法。而后,在哺乳动物细胞系中通过流式细胞术对其抑制转录的强度、不同转录因子及启动子对之间的正交性进行了测定。文中提供了一套标准化的、可调节的转录因子及启动子的全新设计与构建方案。基于该方案所构建的5对抑制型转录因子及启动子对能够在哺乳动物细胞中起到不同程度的抑制效果且相互正交。文中构建的哺乳动物转录因子及启动子对扩充了哺乳动物生物元件库,为构建复杂真核基因回路打下了基础;运用该设计方法能够根据需求构建更多正交的人工转录因子及启动子对。 展开更多
关键词 真核转录调控 人工转录因子 人工启动子 合成生物学 生物元件
原文传递
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