微小RNA-133b靶向调控多聚嘧啶通道结合蛋白1对乳腺癌细胞生物学行为的影响

目的探讨微小RNA(miR)-133b靶向调控多聚嘧啶通道结合蛋白1(PTBP1)调控乳腺癌细胞生物学的行为机制。方法选取乳腺癌及癌旁组织标本83例,收集患者临床病理资料,同时选取乳腺癌细胞系(MCF-7)、正常乳腺上皮细胞系(MCF-10A),实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测miR-133b和PTBP1 mRNA表达,分析与临床病理特征的关系,MCF-7细胞分为阴性对照组、miR-133b模拟物(mimic)组、miR-133b inhibitor组、miR-133b mimic+PTBP1沉默组和miR-133b inhibitor+和PTBP1沉默组,噻唑蓝(MTT)实验与流式细胞术分别检测MCF-7细胞增殖及周期的变化,划痕实验和Transwell小室检测细胞迁移及侵袭,蛋白质印迹法(Western blot)检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)、bcl-2相关X蛋白(bax)和PTBP1蛋白表达,双荧光素酶实验验证miR-133b对PTBP1的靶向调控机制。多组间比较采用单因素方差分析,两两比较采用LSD-t检验,计数资料采用χ^(2)检验和Fisher精确检验进行分析。结果miR-133b和PTBP1 mRNA在乳腺癌组织(0.94±0.18、4.28±0.27)及乳腺癌细胞的表达水平(1.09±0.22、3.65±0.19)分别明显低于和高于癌旁组织(2.12±0.09、t=4.343,P<0.05;1.37±0.21、t=6.006,P<0.05)及MCF-10A细胞(1.99±0.11、t=5.223,P<0.05;1.15±0.09、t=5.774,P<0.05)。miR-133b和PTBP1均与TNM分期(1.204±0.057、3.865±0.172,χ^(2)=6.217,P<0.001)和淋巴转移(0.489±0.041、1.632±0.147,χ^(2)=7.031,P<0.001)等明显相关,而与年龄(0.601±0.052、2.008±0.187,χ^(2)=0.261,P>0.05)、分化程度(0.592±0.057、1.994±0.187,χ^(2)=0.274,P>0.05)和病理分级无关(0.587±0.059、1.921±0.172,χ^(2)=0.257,P>0.05)。与阴性对照组比较,miR-133b mimic组增殖率[(35.43±1.74)%、(8.43±0.35)%,F=166.465,P<0.05]、迁移、侵袭细胞数(109±10.562、77±5.751,t=4.663,P<0.05;128±11.624、81±7.251,t=7.453,P<0.05)、bcl-2(2.78±0.32、0.76±0.11,t=4.122,P<0.05)和PTBP1表达(3.45±0.33、0.89±0.26,t=3.154,P<0.05)明显降低,G1期阻滞明显延长(F=276.872,P<0.05),bax表达明显增加(1.22±0.12、3.39±0.46,t=9.123,P<0.05),miR-133b mimic+PTBP1沉默组变化更为明显(1.22±0.12、7.71±0.23,t=6.009,P<0.05),miR-133b inhibitor组明显逆转上述指标变化(1.22±0.12、0.76±0.11,t=3.334,P<0.05),miR-133b inhibitor+PTBP1沉默组逆转更为明显(1.22±0.12、0.33±0.11,t=5.098,P<0.05)。双荧光素酶实验显示miR-133b可靶向调控PTBP1。结论miR-133b靶向调控PTBP1从而抑制乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭并促进细胞凋亡。

多聚嘧啶区结合蛋白1通过调控基因的可变剪接促进胆管癌细胞的生长、迁移及侵袭能力

胆管癌是一种起病隐匿、侵袭性强、致死率高的原发性恶性肿瘤。多聚嘧啶区结合蛋白1(polypyrimidine tract-binding protein 1,PTBP1)已被报道,在多种类型肿瘤组织中异常高表达并参与癌症进展,但其在胆管癌中的作用仍未见报道。该研究旨在探讨PTBP1在胆管癌中的生物学功能,并初步解析其分子机制。本文利用公开的癌症基因组图谱(the cancer genome atlas,TCGA)数据,分析了胆管癌及癌旁组织中的PTBP1 mRNA表达水平。结果显示,PTBP1在胆管癌组织中的表达水平显著高于癌旁组织(P<0.05)。随后,在胆管癌细胞系RBE和HuH28中,通过CCK-8和细胞平板克隆实验,评价了PTBP1对胆管癌细胞生长能力的影响。结果显示,过表达PTBP1可显著促进胆管癌细胞的生长(P<0.01),而敲低PTBP1显著抑制胆管癌细胞的生长(P<0.001)。Transwell和Invasion实验结果显示,过表达PTBP1可显著促进胆管癌细胞的迁移和侵袭(P<0.001),而敲低PTBP1显著抑制胆管癌细胞的迁移和侵袭(P<0.001)。转录物组测序和通路富集分析结果显示,在胆管癌细胞中,敲低PTBP1后上调表达的基因显著富集于p53信号通路;而下调表达的基因显著富集于胆固醇代谢、Rho GTPase和TGF-β等信号通路。基于上述转录物组测序数据,本文还分析发现,敲低PTBP1可导致一系列基因发生异常的mRNA可变剪接事件,例如参与TGF-β调控的TGIF1及与p53活性相关的GNAS基因等。综上所述,PTBP1可能通过调控一系列基因的可变剪接而影响多个癌症相关的信号通路,从而促进胆管癌的进展。

多聚嘧啶区结合蛋白1促进肿瘤发展分子机制的研究进展

多聚嘧啶区结合蛋白1(PTBP1)是一种已知的转录后基因表达调节因子,可以调控mRNA的可变剪接、翻译、稳定性和定位,具有多种与RNA代谢相关的分子功能。PTBP1在多种恶性肿瘤中高表达,并可以通过影响肿瘤细胞的能量代谢、增殖、凋亡和转移等方式促进胶质瘤、结直肠癌、乳腺癌等肿瘤的恶性进展,具有作为临床诊断标志物和治疗靶标的潜力。

RNA结合蛋白PTBP 1与磷酸化-AXL共表达在骨肉瘤中的临床意义

【目的】探索RNA结合蛋白PTBP1与p-AXL在骨肉瘤中的表达情况及其临床病理联系,并进一步探讨PTBP1/p-AXL共表达在骨肉瘤中的预后评估意义。【方法】应用GEO和Target数据库分析PTBP1与AXL在骨肉瘤和正常组织中的表达差异及PTBP1的预后价值。收集2016年3月至2020年10月中山大学第一附属医院76例骨肉瘤和37例非恶性骨组织(骨痂、骨纤维结构不良或骨样骨瘤)及其病例信息,应用免疫组化法检测PTBP1和p-AXL蛋白的表达情况并行统计学分析。【结果】GEO数据库分析结果显示PTBP1和AXL在骨肉瘤组织的表达具有高于正常组织的趋势,但尚未达到统计学意义;Target数据分析结果显示PTBP1高表达组骨肉瘤患者总生存期(OS)与无进展生存期(PFS)均短于低表达组,但差异尚未达统计学意义(P=0.064;P=0.134)。免疫组化结果显示PTBP1和p-AXL蛋白的表达在骨肉瘤组织中显著高于非恶性骨组织;p-AXL阳性表达率与肺转移相关(P=0.025);Kaplan-Meier分析发现肺转移、复发、PTBP1表达及PTBP1/p-AXL共表达等因素与骨肉瘤患者不良总生存期相关;且多变量Cox回归分析显示肺转移(P<0.0001)、PTBP1表达阳性(P=0.041)是骨肉瘤患者总生存期(OS)独立危险因素;PTBP1/p-AXL共表达患者的OS(P=0.017)和PFS(P=0.043)均低于非PTBP1/p-AXL共表达患者。【结论】PTBP1、p-AXL在骨肉瘤中高表达,PTBP1与p-AXL共表达与患者预后差相关,且PTBP1可作为骨肉瘤患者独立预后指标。

结直肠癌组织miR-330-5p、PTBP1的表达与病理参数和预后的关系

目的分析结直肠癌组织微小核糖核酸-330-5p(miR-330-5p)、多聚嘧啶区结合蛋白1(PTBP1)的表达与病理参数及预后的关系。方法选取2018年1月—2020年5月南通市中医院肛肠科收治的结直肠癌患者101例,收集术中部分癌组织及其癌旁组织,采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测miR-330-5p、PTBP1 mRNA表达。通过Targetscan数据库预测miR-330-5p与PTBP1的结合位点,分析miR-330-5p、PTBP1 mRNA在结直肠癌组织不同临床病理参数中的差异;采用K-M法绘制其生存曲线;多因素Cox回归分析患者预后影响因素。结果与癌旁组织比较,结直肠癌组织miR-330-5p表达降低,PTBP1 mRNA表达升高(t/P=24.000/<0.001、19.233/<0.001)。miR-330-5p与PTBP1存在结合位点,二者在结直肠癌组织表达呈负相关(r/P=-0.679/<0.001)。与低分化程度、TNMⅢ期、有淋巴结转移比较,中高分化程度、TNMⅠ~Ⅱ期、无淋巴结转移结直肠癌组织miR-330-5p升高、PTBP1 mRNA表达降低(t/P=2.490/0.014、2.479/0.015,2.837/0.006,2.953/0.004,3.319/0.001、3.307/0.001)。101例结直肠癌患者3年总生存率为83.17%(84/101)。miR-330-5p高表达组、PTBP1 mRNA低表达组3年总生存率分别高于miR-330-5p低表达组、PTBP1 mRNA高表达组(χ^(2)/P=6.466/0.011、11.697/0.001)。结直肠癌患者死亡的独立危险因素为低分化、TNM分期Ⅲ期、淋巴结转移和PTBP1 mRNA≥1.50,独立保护因素为miR-330-5p≥0.57[OR(95%CI)=3.642(1.278~10.381)、3.817(1.375~10.598)、4.013(1.418~11.351)、2.684(1.025~7.029)、0.338(0.129~0.890)]。结论结直肠癌组织miR-330-5p低表达和PTBP1 mRNA高表达,与分化程度、TNM分期、淋巴结转移和预后有关。

剪接因子PTBP1在消化道肿瘤中作用的研究进展

RNA剪接失调是肿瘤重要的分子病理特征之一,与剪接因子异常表达密切相关。多聚嘧啶串结合蛋白1(PTBP1)是剪接因子不均一核糖核蛋白家族成员之一,可通过调控增殖、迁移、侵袭、自噬、凋亡、免疫监视及代谢重编程等环节参与多种肿瘤的发生与发展,是消化道肿瘤的潜在临床应用靶点。PTBP1作为关键的剪接因子调节靶基因前体mRNA的剪接及mRNA稳定性等,其调控可变剪接的新型分子机制在消化道肿瘤中也得到了进一步阐述。该文对剪接因子PTBP1在消化道肿瘤中作用的研究进展作一综述。

lncRNA BCRT1、PTBP3在老年乳腺癌组织中的表达及预后的关系分析

目的 研究长链非编码RNA乳腺癌相关转录物1(lncRNA BCRT1)、多聚嘧啶结合蛋白3(PTBP3)在老年乳腺癌组织中的表达及与预后的关系。方法 选取2018年3月至2020年3月于该院诊治的126例老年乳腺癌患者。采用实时荧光定量PCR检测组织中lncRNA BCRT1、PTBP3 mRNA表达。采用免疫组化检测组织中PTBP3蛋白表达。采用Pearson相关分析癌组织中lncRNA BCRT1与PTBP3 mRNA表达的相关性。随访3年,采用Kaplan-Meier生存曲线分析不同lncRNA BCRT1、PTBP3表达老年乳腺癌患者无进展生存预后的差异。采用Cox回归分析老年乳腺癌无进展生存预后的相关因素。结果 癌组织中lncRNA BCRT1表达为(2.84±0.63),高于癌旁组织(1.13±0.25),差异有统计学意义(t=28.320,P<0.001)。癌组织中PTBP3 mRNA表达为(2.17±0.59),高于癌旁组织(0.75±0.26),差异有统计学意义(t=24.722,P<0.001)。癌组织中lncRNA BCRT1表达与PTBP3 mRNA呈正相关(r=0.712,P<0.001)。lncRNA BCRT1、 PTBP3 mRNA在乳腺癌中的表达与肿瘤分化程度、TNM分期有关,差异均有统计学意义(P<0.05)。lncRNA BCRT1高表达组3年累积无进展生存率低于低表达组,差异有统计学意义(Log-rank χ^(2)=12.577,P<0.001)。PTBP3 mRNA高表达组3年累积无进展生存率低于低表达组,差异有统计学意义(Log-rank χ^(2)=9.617,P=0.002)。lncRNA BCRT1高表达组3年无进展生存期为(30.56±2.23)个月,短于低表达组的(33.65±1.27)个月,差异有统计学意义(t=9.595,P<0.001)。PTBP3 mRNA高表达组3年无进展生存期为(31.66±2.15)个月,短于低表达组的(34.19±1.73)个月,差异有统计学意义(t=7.370,P<0.001)。lncRNA BCRT1高表达、PTBP3 mRNA高表达、TNM分期Ⅲ期、低分化程度是老年乳腺癌患者无进展生存预后的相关因素(P<0.05)。结论 老年乳腺癌中lncRNA BCRT1、PTBP3表达升高,均与TNM分期、肿瘤分化程度有关,是评估老年乳腺癌无进展生存预后的肿瘤标志物。

RNA结合蛋白多聚嘧啶通道结合蛋白1在肿瘤中的研究进展

多聚嘧啶通道结合蛋白1（PTBP1）是调控可变剪接及mRNA代谢过程中的重要蛋白.它的异常表达可造成其下游靶基因的可变剪接及mRNA水平的改变,直接参与肿瘤的发生、发展.PTBP1是具有很大潜力的肿瘤标志蛋白.

RNA结合蛋白PTB在精子发生中的研究进展

RNA结合蛋白通过与新生转录子相互作用来调节细胞的功能,因而在人体发育和内环境中越来越受到关注。多聚嘧啶序列结合蛋白(PTB)家族是RNA结合蛋白的重要组成部分,且在基因表达的转录后调控中起到至关重要的作用。随着对PTB转录后调控以及各个亚型的深入研究发现,在精子发生过程中,Ptbp1(polypyrimidine tract-binding protein 1)在精原细胞有丝分裂中为主要表达亚型,而Ptbp2在精母细胞减数分裂期至精子细胞阶段中大量表达,且能与磷酸甘油酸激酶2(PGK2)mRNA 3'端非编码区结合,从而使Pgk2 mRNA在小鼠生殖细胞中稳定表达。当睾丸组织中Ptbp2表达失活时,生精小管中生精细胞分化停滞在圆形精子细胞阶段并伴有大量的巨型多核细胞(MNCs)产生,精母细胞凋亡增加,生精小管变细,精子成熟障碍,进而影响男性生育能力。本文就PTB的结构及其在精子发生中的调控作用进行综述。

NSCLC患者血清中PTBP1、CDCP1的表达及临床预后意义

目的 探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者血清中多聚嘧啶束结合蛋白1(PTBP1)、含CUB结构域的蛋白质1(CDCP1)的表达及临床预后意义。方法 选取于贵州航天医院就诊的90例NSCLC患者为NSCLC组,以同期诊治的40例肺部良性疾病患者为良性疾病组,40例体检健康者为对照组。采用酶联免疫吸附试验检测各组血清PTBP1、CDCP1水平,并比较各组血清PTBP1、CDCP1水平差异,比较不同临床病理特征患者血清PTBP1、CDCP1水平差异。采用Pearson相关分析NSCLC组血清PTBP1与CDCP1水平的相关性,采用Kaplan-Meier生存曲线分析血清PTBP1、CDCP1水平对NSCLC患者生存预后的影响,采用单因素及多因素Cox回归分析影响NSCLC患者生存预后的因素。结果 NSCLC组血清PTBP1、CDCP1水平明显高于良性疾病组和对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。NSCLC组患者血清PTBP1与CDCP1水平呈正相关(r=0.721,P<0.001)。不同肿瘤分期、淋巴结转移患者血清PTBP1、CDCP1水平差异有统计学意义(P<0.05)。PTBP1高表达组和低表达组NSCLC患者的平均生存时间分别为(27.59±3.32)个月、(31.47±3.68)个月,Kaplan-Meier生存曲线分析结果显示,PTBP1高表达组患者累积生存率低于PTBP1低表达组患者(χ^(2)=5.910,P=0.015)。CDCP1高表达组和低表达组平均生存时间分别为(27.34±3.29)个月、(32.27±3.54)个月,CDCP1高表达组患者累积生存率低于CDCP1低表达组患者(χ^(2)=7.544,P=0.006)。肿瘤分期Ⅲ~Ⅳ期、有淋巴结转移、PTBP1高表达、CDCP1高表达是影响NSCLC患者生存预后的独立危险因素。结论 NSCLC患者血清PTBP1、CDCP1水平升高,二者与肿瘤分期及淋巴结转移有关,是影响NSCLC患者生存预后的独立危险因素,二者是潜在的NSCLC肿瘤标志物。

多聚嘧啶区结合蛋白1对胃癌细胞增殖和转移的作用机制

目的探讨多聚嘧啶区结合蛋白1(PTBP1)在胃癌组织和人胃癌细胞株中的表达,以及PTBP1对胃癌细胞增殖与转移的作用机制。方法收集2019年1至6月于西安交通大学第一附属医院行外科手术切除的胃癌患者的癌组织与对应的癌旁组织。运用Kaplan-Meier Plotter数据库分析胃癌患者的生存情况。选择PTBP1表达水平相对较高的人胃癌细胞株SGC7901和AGS进行小干扰RNA(siRNA)转染下调PTBP1表达,实验分为空白对照组、阴性对照组和PTBP1敲低组。分别运用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测胃癌细胞中PTBP1 mRNA和PTBP1的表达。通过MTT法转染24、48、72、96 h后,观察PTBP1对胃癌细胞增殖的作用;Transwell实验检测下调PTBP1后胃癌细胞侵袭和迁移的变化,蛋白质印迹法检测下调PTBP1后胃癌细胞上皮-间质转化(EMT)标志物E-钙黏蛋白、N-钙黏蛋白和波形蛋白的改变。采用独立样本t检验、方差分析和秩和检验进行统计学分析。结果Kaplan-Meier Plotter预后分析显示,高表达PTBP1胃癌患者总生存期短于低表达PTBP1胃癌患者[9.2个月(6.2个月,17.2个月)比19.0个月(14.5个月,28.4个月)],差异有统计学意义(Z=5.31,P<0.05)。实时荧光定量PCR检测结果显示,人胃癌细胞株SGC7901和AGS中,PTBP1敲低组PTBP1 mRNA表达水平均低于空白对照组和阴性对照组(SGC7901:0.78±0.11比3.10±0.19、2.99±0.23。AGS:0.80±0.09比3.55±0.24、3.50±0.18),差异均有统计学意义(tSGC7901=10.57、8.08,tAGS=10.91、13.42;P均<0.01)。蛋白质印迹结果显示,人胃癌细胞株SGC7901和AGS中,PTBP1敲低组PTBP1表达水平均低于空白对照组和阴性对照组(SGC7901:0.38±0.04比1.42±0.05、1.35±0.09。AGS:0.17±0.02比1.52±0.08、1.38±0.45),差异均有统计学意义(tSGC7901=15.94、10.57,tAGS=16.60、20.80;P均<0.01)。MTT结果显示,转染48、72、96 h后,PTBP1敲低组的吸光度值较阴性对照组分别下降了0.25±0.01、0.38±0.02、0.84±0.04,其中转染96 h后的差值最显著,差异有统计学意义(t=10.21、14.32,P均<0.01)。Transwell实验结果显示,人胃癌细胞株SGC7901和AGS中,PTBP1敲低组发生侵袭和迁移的细胞数均少于空白对照组和阴性对照组(SGC7901:42.00±5.91比116.40±10.23、114.40±10.43;39.60±6.77比125.80±11.51、122.40±5.90。AGS:40.20±7.25比115.60±14.63、117.40±9.12;36.00±5.20比122.40±12.10、125.40±12.74),差异均有统计学意义(tSGC7901=14.07、13.50、14.43、20.62,tAGS=10.27、14.75、14.68、16.76;P均<0.01)。蛋白质印迹结果显示,PTBP1敲低组E-钙黏蛋白表达水平均高于空白对照组和阴性对照组(SGC7901:1.42±0.05比0.53±0.05、0.57±0.03。AGS:1.34±0.04比0.54±0.03、0.61±0.01),而N-钙黏蛋白和波形蛋白的表达水平均低于空白对照组和阴性对照组(SGC7901:0.50±0.03比1.64±0.05、1.46±0.07,0.32±0.07比1.42±0.07、1.33±0.07。AGS:0.37±0.06比1.47±0.04、1.36±0.04,0.41±0.04比1.53±0.06、1.37±0.04),差异均有统计学意义(tSGC7901=11.63、13.19、18.83、11.68、11.43、10.43,tAGS=15.02、16.23、14.67、12.97、14.45、17.18;P均<0.01)。结论胃癌组织和细胞中PTBP1表达水平均升高,并且参与调控胃癌细胞的增殖、转移和EMT。

多聚嘧啶区结合蛋白1通过上皮间质转化途径促进结直肠癌的转移与侵袭

目的分析多聚嘧啶区结合蛋白1(PTBP1)在结直肠癌中的表达水平,并探讨其对结直肠癌细胞侵袭及上皮-间质转化(EMT)的影响。方法(1)下载TCGA数据库中结直肠癌转录组数据集,用Limma包分析结直肠癌组织(n=479)和正常组织(n=42)中PTBP1的表达及其与患者临床预后的相关性。(2)第1转染组和第2转染组为SW480细胞中分别转染对照慢病毒(ShCtrl)5μL和PTBP1敲低慢病毒(ShPTBP1组)5μL;第3转染组和第4转染组为LoVo细胞中分别转染ShCtrl和ShPTBP1各5μL;第5转染组和第6转染组为HCT116细胞中分别转染对照质粒(Vector)5μg和PTBP1过表达质粒(plasmid+PTBP1组)5μg;第7转染组和8转染组为HT29细胞中分别转染Vector和plasmid+PTBP1各5μg。以Transwell小室检测上述不同转染组细胞的侵袭能力,用蛋白质印迹法检测各组细胞中的PTBP1、E-cadherin、Vimentin和Snail蛋白表达水平。结果(1)PTBP1在结直肠癌组织和正常组织中的表达量分别为62.05±30.21和39.38±10.06,2组间比较差异有统计学意义(P<0.05),并与临床不良预后有关。(2)第1至第8转染组的侵袭细胞百分比分别为(100.00±6.28)%,(45.77±1.68)%,(100.00±7.27)%,(41.05±5.68)%,(100.00±6.55)%,(157.65±4.24)%,(100.00±9.80)%和(189.51±4.66)%;这8组的PTBP1蛋白表达水平分别为1.22±0.10,0.80±0.09,0.93±0.04,0.69±0.05,0.96±0.04,1.11±0.01,0.92±0.04和1.17±0.04;这8组的E-cadherin蛋白表达水平分别为0.36±0.05,0.87±0.12,0.64±0.00,1.00±0.06,0.60±0.02,0.49±0.02,0.53±0.02和0.30±0.01;这8组的Vimentin蛋白表达水平分别为0.82±0.02,0.65±0.05,0.72±0.04,0.54±0.04,0.46±0.06,0.74±0.04,0.45±0.06和0.74±0.05;这8组的Snail蛋白表达水平分别为0.96±0.04,0.74±0.05,0.72±0.04,0.57±0.01,0.55±0.01,0.82±0.09,0.58±0.02和0.90±0.09。以上指标:第2转染组与第1转染组比较,或第4转染组与第3转染组比较,或第6转染组与第5转染组比较,或第8转染组与第7转染组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。PTBP1表达与Vimentin和Snail呈正相关,而与E-cadherin呈负相关。结论PTBP1在结直肠癌组织中异常高表达,且与癌细胞的侵袭能力呈正相关,其机制可能与诱导EMT途径有关。

抑制PTBP1对脉络膜黑色素瘤细胞增殖和侵袭力的影响

目的探讨多聚嘧啶区结合蛋白1(PTBP1)对脉络膜黑色素瘤(CM)细胞增殖活性和迁移、侵袭能力的影响。方法选取人CM细胞系OCM-1,根据转染序列的不同分为si-PTBP1组(转染PTBP1特异性干扰序列)、si-Control组(转染阴性对照序列)和空白组(不作任何处理)。分别检测各组细胞PTBP1 mRNA的表达,以及PTBP1、上皮型钙黏蛋白(E-Cad)和波形蛋白的表达。通过细胞实验分析各组细胞的增殖活性和迁移、侵袭能力。结果si-PTBP1组PTBP1 mRNA相对表达量显著低于si-Control组和空白组(P<0.05),si-Control组和空白组之间差异无统计学意义(P>0.05)。培养24、48、72和96h,si-PTBP1组细胞增殖活性均低于si-Control组和空白组(P<0.05)。si-PTBP1组迁移细胞数和侵袭细胞数均少于si-Control组和空白组(P<0.05)。si-PTBP1组PTBP1和波形蛋白相对表达量低于si-Control组和空白组(P<0.05),E-Cad相对表达量高于si-Control组和空白组(P<0.05)。结论抑制OCM-1细胞PTBP1表达可抑制细胞增殖活性,削弱细胞的迁移和侵袭能力,其机制可能与抑制上皮-间质转化有关。

PTBP1结合CDC5L对胃癌细胞增殖活动的影响

目的为探索胃癌细胞增殖的分子机制,研究多聚嘧啶区结合蛋白1(PTBP1)和细胞分裂周期5样(裂殖酵母)(CDC5L)基因结合促进胃癌细胞增殖凋亡的影响。方法GEPIA2数据库预测PTBP1和CDC5L在胃癌细胞中的表达;RT⁃qPCR和Western blot检测PTBP1和CDC5L的表达水平;GEPIA2数据库预测CDC5L和PTBP1之间的相关性,并通过免疫蛋白沉淀实验检测验证。通过转染,干扰PTBP1和CDC5L的表达。随后,克隆实验检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期;TUNEL荧光染色检测细胞凋亡;Western blot检测凋亡蛋白Bax、Bcl⁃2和caspase3的表达。结果GEPIA2数据库预测所示PTBP1和CDC5L在胃癌中表达差异有统计学意义(P<0.05),且高表达。与癌旁组织中蛋白表达相比,PTBP1和CDC5L在胃癌组织中表达提高(P<0.01);比正常细胞中蛋白表达相比,PTBP1和CDC5L在胃癌细胞中表达均上调(P<0.01);GEPIA2数据库显示PTBP1与CDC5L具有正向线性相关性;免疫沉淀实验结果表明PTBP1和CDC5L可相互结合。细胞克隆实验表明PTBP1和(或)CDC5L被抑制后,胃癌细胞增殖水平下降(P<0.05);且敲低PTBP1和/或CDC5L后胃癌细胞周期G0/G1期受阻滞(P<0.001)。细胞凋亡水平检测显示,与对照组相比,干扰PTBP1和/或CDC5L后,胃癌细胞凋亡增多(P<0.01);相关凋亡蛋白差异具有统计学变化(Bcl⁃2,P<0.05;Bac,P<0.01;cleaved⁃caspase3/caspase3,P<0.05)。结论PTBP1和CDC5L具有结合关系,敲低PTBP1和CDC5L的表达具有抑制胃癌细胞增殖,促进细胞凋亡作用。

多聚嘧啶区结合蛋白1基因及其相关疾病的研究进展

多聚嘧啶区结合蛋白1(polyrimidine tract binding protein 1,PTBP1)是一种选择性剪接蛋白,通过对Pre-mRNA的选择性剪接以产生多样化的mRNA,从而参与多基因表达的转录调控过程,在肿瘤细胞存活、增殖、转移等过程中发挥重要作用。在不同肿瘤中,PTBP1的表达水平及生物学功能不同,机制之一可能在于其结合的相互作用蛋白不同。另外,PTBP1与神经系统退行性病变、高血压的发病有关,还参与机体免疫及细胞衰老。本文就PTBP1的结构、功能及其与疾病的相关性等方面作一综述。

miR-133b靶向PTBP1对肾细胞癌增殖和侵袭的影响

目的探讨miR-133b靶向多聚嘧啶区结合蛋白1(polyrimidine tract binding protein 1,PTBP1)对肾细胞癌(renal cell carcinoma,RCC)增殖和侵袭的影响。方法检测miR-133b在RCC癌组织及细胞中的表达水平;验证miR-133b与PTBP1的靶向关系及miR-133b表达对肾癌细胞PTBP1表达及增殖、迁移的影响。结果与癌旁组织比较,miR-133b在RCC组织中表达下降,而PTBP1上升(P<0.05)。PTBP1是miR-133b的靶基因;与miR-NC组比较,miR-133bmimic组的克隆形成率、侵袭细胞数目及PTBP1表达明显下降,而miR-133b inhibitor组上升;与miR-133b mimic+pc-NC组比较,miR-133b mimic+pc-PTBP1组的克隆形成率、侵袭细胞数目及PTBP1表达水平上升(P<0.05)。结论miR-133b在RCC癌组织及细胞中表达下调,且其可能通过调控PTBP1的表达水平来影响细胞的增殖和侵袭能力。

过表达LncRNA DIO3OS通过结合PTBP1调控BDNF表达以缓解氯胺酮诱导的小鼠海马神经元细胞毒性

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)DIO3OS对氯胺酮诱导的小鼠海马神经元细胞毒性的影响及其作用机制。方法:(1)分离并培养原代小鼠海马神经元,应用CCK-8法检测不同浓度(0、25、50、100、200μmol/L)氯胺酮对细胞活力的影响,qPCR法检测DIO3OS mRNA的表达。(2)将海马神经元分为对照组、氯胺酮组(50μmol/L氯胺酮培养24 h)、氯胺酮+pc组(转染pcDNA3.1质粒48 h后加50μmol/L氯胺酮培养24 h)、氯胺酮+DIO3OS组(转染pcDNA3.1-DIO3OS质粒48 h后加50μmol/L氯胺酮培养24 h),应用CCK-8法检测各组细胞活力,乳酸脱氢酶(LDH)细胞毒性检测试剂盒检测LDH释放量,流式细胞术检测细胞凋亡情况,qPCR法检测DIO3OS、脑源性神经营养因子(BDNF)mRNA的表达,Western blotting实验检测多聚嘧啶区结合蛋白1(PTBP1)、BDNF蛋白的表达。(3)提取正常海马神经元的总蛋白,应用RNA沉降实验检测DIO3OS mRNA及BDNF mRNA与PTBP1蛋白的结合能力。(4)将海马神经元分为氯胺酮+DIO3OS+si-NC组(同时转染pcDNA3.1-DIO3OS和si-NC质粒48 h后加50μmol/L氯胺酮培养24 h)、氯胺酮+DIO3OS+si-PTBP1组(同时转染pcDNA3.1-DIO3OS和si-PTBP1质粒48 h后加50μmol/L氯胺酮培养24 h),应用qPCR法检测DIO3OS、BDNF mRNA的表达,Western blotting实验检测PTBP1、BDNF蛋白的表达。(5)将海马神经元分为氯胺酮组(50μmol/L氯胺酮培养24 h)、氯胺酮+si-DIO3OS组(转染si-DIO3OS质粒48 h后加50μmol/L氯胺酮培养24 h)、氯胺酮+si-PTBP1组(转染si-PTBP1质粒48 h后加50μmol/L氯胺酮培养24 h)、氯胺酮+si-DIO3OS+si-PTBP1组(同时转染si-DIO3OS和si-PTBP1质粒48 h后加50μmol/L氯胺酮培养24 h),应用qPCR法检测DIO3OS、BDNF mRNA的表达,Western blotting实验检测BDNF蛋白的表达。(6)将海马神经元分为氯胺酮+DIO3OS+si-NC组(同时转染pcDNA3.1-DIO3OS和si-NC质粒48 h后加50μmol/L氯胺酮培养24 h)、氯胺酮+DIO3OS+si-BDNF组(同时转染pcDNA3.1-DIO3OS和si-BDNF质粒48 h后加50μmol/L氯胺酮培养24 h),应用CCK-8法检测细胞活力,LDH细胞毒性检测试剂盒检测LDH释放量,流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果:(1)25、50、100、200μmol/L氯胺酮组海马神经元细胞活力、DIO3OS mRNA表达均较0μmol/L氯胺酮组明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。(2)与对照组相比,氯胺酮组海马神经元中DIO3OS mRNA表达、细胞活力明显降低,LDH释放量明显增加,凋亡率明显增加,BDNF mRNA和蛋白表达明显降低,PTBP1蛋白表达明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与氯胺酮+pc组相比,氯胺酮+DIO3OS组海马神经元中DIO3OS mRNA表达、细胞活力明显增加,LDH释放量明显降低,凋亡率明显降低,BDNF mRNA和蛋白表达明显增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。(3)RNA沉降实验显示生物素化标记的DIO3OS、BDNF均可吸附PTBP1蛋白,但生物素化标记的DIO3OS、BDNF反义链均不能吸附PTBP1蛋白。(4)与氯胺酮+DIO3OS+si-NC组相比,氯胺酮+DIO3OS+si-PTBP1组海马神经元中BDNF mRNA和蛋白表达均明显降低,PTBP1蛋白表达明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05);2组间DIO3OS mRNA表达的差异无统计学意义(P>0.05)。(5)与氯胺酮组相比,氯胺酮+si-DIO3OS组、氯胺酮+si-DIO3OS+si-PTBP1组海马神经元中DIO3OS mRNA表达均明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与氯胺酮组相比,氯胺酮+si-DIO3OS组、氯胺酮+si-PTBP1组海马神经元中BDNF mRNA和蛋白表达均明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与氯胺酮+si-DIO3OS组、氯胺酮+si-PTBP1组相比,氯胺酮+si-DIO3OS+si-PTBP1组海马神经元中BDNF mRNA和蛋白表达均明显增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。(6)与氯胺酮+DIO3OS+si-NC组相比,氯胺酮+DIO3OS+si-BDNF组海马神经元的细胞活力明显降低,LDH释放量明显增加,凋亡率明显增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:LncRNA DIO3OS在氯胺酮诱导的原代小鼠海马神经元中表达降低,而过表达DIO3OS可通过结合PTBP1调控BDNF的表达来缓解氯胺酮诱导的神经元细胞毒性。

PTBP1对肝癌细胞铁死亡的影响和机制研究

目的:探讨肝癌细胞HepG2中多聚嘧啶区结合蛋白1(PTBP1)对铁死亡的影响及作用机制。方法:使用转染试剂增强PTBP1小干扰转染效率。沉默PTBP1后加入铁死亡诱导剂erastin,Western blot观察HepG2铁死亡通路中关键基因的表达变化,脂质过氧化物试剂盒(MDA)、铁离子检测试剂盒、活性氧检测试剂盒(ROS)检测铁死亡相关的指标,RNA免疫共沉淀(RIP)检测方法验证PTBP1的下游靶分子,Western blot、RT-qPCR验证沉默PTBP1前后多聚胞嘧啶结合蛋白1(PCBP1)的蛋白变化趋势。结果:沉默PTBP1后,erastin诱导下谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、长链酯酰辅酶A合成酶4(ACSL4)、铁蛋白重链1(FTH1)表达增加。“NC+erastin”组细胞内铁离子显著高于其他各组。“NC+erastin”组脂质过氧化物水平积累最为显著。在激光共聚焦显微镜下“si-PTBP1+erastin”组与“NC+erastin”组相比,红色荧光信号强度明显减弱。流式细胞术检测显示,“si-PTBP1+erastin”组ROS水平较“NC+erastin”组下降。RIP检测发现,PCBP1富集倍数显著高于其他铁离子代谢基因;沉默PTBP1后,PCBP1表达显著下调。结论:PTBP1通过上调PCBP1,介导铁离子转运,增强铁死亡的敏感性。

LncRNA FTX对慢性髓细胞性白血病细胞伊马替尼抵抗的影响及机制研究

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)FTX对慢性髓细胞性白血病(CML)伊马替尼(Imatinib)抵抗的影响及可能机制。方法梯度诱导CML细胞K562伊马替尼抵抗的形成(抵抗组),采用等体积生理盐水处理CML细胞K562(敏感组),对处于对数生长期的抵抗组细胞转染LncRNA FTX-siRNA(转染组),对处于对数生长期的抵抗组细胞转染空白对照载体(对照组)。采用逆转录聚合酶链反应(PCR)检测抵抗组和敏感组细胞中LncRNA FTX的相对表达量以及转染组和对照组细胞中多聚嘧啶序列结合蛋白1(PTBP1)mRNA的表达水平,CCK-8法检测伊马替尼对4组细胞的半抑制浓度(IC50),蛋白质印迹法(Western blot)检测4组细胞中PTBP1蛋白的相对表达量。结果抵抗组细胞中LncRNA FTX的相对表达量明显高于敏感组(P﹤0.01);伊马替尼对抵抗组细胞的IC50值明显高于敏感组,对转染组细胞的IC50值明显低于对照组(P﹤0.01);抵抗组细胞中PTBP1蛋白的相对表达量明显高于敏感组,转染组细胞中PTBP1蛋白的相对表达量明显低于对照组(P﹤0.01);转染组和对照组细胞中PTBP1 mRNA的相对表达量比较,差异无统计学意义(P﹥0.05)。结论 LncRNA FTX可通过抑制PTBP1蛋白的表达,介导CML细胞伊马替尼抵抗的形成。

选择性剪接与无义介导的mRNA降解机制研究进展

mRNA的选择性剪接(alternative splicing,AS)是基因转录后的重要调节机制,也是增加蛋白质种类和数量,使有限的基因表达出更多蛋白质的主要机制。无义介导的m RNA降解(nonsense mediated m RNA decay,NMD)机制是一种存在于细胞内的m RNA监控机制,能检测并快速降解突变的m RNA。研究表明AS常与NMD机制相偶联,当某种基因表达异常升高时,通过AS产生可以被NMD降解的m RNA剪接异构体而下调该基因的表达,从而使基因表达维持在正常范围。AS和NMD机制的异常与人类多种遗传病和癌症的发生机制密切相关。故综述选择性剪接与无义介导的m RNA降解机制的机理及研究进展。