花黄色素调节AMPK/SIRT1/NF-κB信号通路对冠心病大鼠心肌损伤的影响

目的:探讨花黄色素(SY)调控腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/沉默信息调节因子1(SIRT1)/核转录因子-κB(NF-κB)对冠心病(CHD)大鼠心肌损伤的影响。方法:将60只SD大鼠随机分为正常对照组(NC组,生理盐水)、模型组(Model组,生理盐水)、SY组(100 mg/kg SY)、EX-527组(47 mg/kg EX-527)、SY+EX-527组(100 mg/kg SY+47 mg/kg EX-527),每组12只,持续4周给予相应药物。试剂盒检测血清三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平和心肌白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平;苏木素-伊红(HE)染色法进行心肌组织病理学观察;末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)法检测心肌细胞凋亡情况;蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测心肌组织AMPK/SIRT1/NF-κB通路相关蛋白表达。结果:与NC组相比,Model组大鼠心肌细胞数量少且排列杂乱,细胞核皱缩,TC、TG、LDL-C、氧化修饰低密度脂蛋白(ox-LDL)、IL-6、TNF-α水平、心肌细胞凋亡率及NF-κB蛋白水平明显上升(P<0.05),SOD、GSH-Px水平及磷酸化-AMPK(p-AMPK)/AMPK、SIRT1蛋白水平明显下降(P<0.05)。与Model组比较,SY组大鼠心肌细胞数量增多且排列整齐有序,TC、TG、LDL-C、ox-LDL、IL-6、TNF-α水平、心肌细胞凋亡率及NF-κB蛋白水平明显下降(P<0.05),SOD、GSH-Px水平及p-AMPK/AMPK、SIRT1蛋白水平明显上升(P<0.05);而EX-527组以上指标呈现相反趋势。与SY组相比,SY+EX-527组大鼠心肌损伤加重,TC、TG、LDL-C、ox-LDL、IL-6、TNF-α水平、心肌细胞凋亡率及NF-κB蛋白水平明显上升(P<0.05),SOD、GSH-Px水平及p-AMPK/AMPK、SIRT1蛋白水平明显下降(P<0.05)。结论:SY可能通过调控AMPK/SIRT1/NF-κB通路降低氧化应激,减轻炎症反应,对冠心病大鼠心肌损伤起到一定改善作用。

补阳还五汤对动脉粥样硬化模型小鼠SIRT1/HMGB1/NF-κB通路及炎症反应的影响

目的:观察补阳还五汤对动脉粥样硬化模型载脂蛋白E基因敲除(ApoE^(-/-))小鼠沉默信息调节因子相关酶1(SIRT1)/高迁移率族蛋白B1(HMGB1)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路及炎症反应的影响。方法:小鼠适应性饲养2周后,ApoE^(-/-)小鼠给予高脂饲料喂养进行动脉粥样硬化模型制备。8周后分离小鼠主动脉根部,制备石蜡切片,油红O染色证实模型复制成功。将40只ApoE^(-/-)小鼠随机分为模型组、补阳还五汤低剂量组、补阳还五汤中剂量组、补阳还五汤高剂量组,每组10只;另将10只C57BL/6J小鼠继续普通饲料喂养设置为空白组,各组小鼠均干预4周。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测小鼠血清炎性因子[γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-12、IL-1β]表达水平;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测小鼠主动脉SIRT1、HMGB1、NF-κB蛋白表达。结果:补阳还五汤可升高小鼠主动脉斑块中SIRT1蛋白表达,降低HMGB1、NF-κB蛋白表达及小鼠血清IFN-γ、TNF-α、IL-12、IL-1β表达。结论:补阳还五汤可能通过调控SIRT1/HMGB1/NF-κB信号通路,减低炎症反应,发挥抗动脉粥样硬化的作用。

番茄红素调节AMPK/SIRT1/NF-κB信号通路对过敏性结膜炎小鼠的治疗作用

目的基于腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/沉默信息调节因子1(SIRT1)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路探讨番茄红素(LYC)减轻过敏性结膜炎小鼠炎症的作用机制。方法利用卵清蛋白(OVA)致敏建立AC小鼠模型。将BALB/c小鼠分为正常组(NC组)、模型组(AC组)、LYC低组(5 mg/kg)、LYC中组(10 mg/kg)、LYC高组(20 mg/kg),LYC高+AMPK抑制剂(CC)组(0.2 mg/kg)。观察小鼠眼周情况,采用苏木精-伊红染色观察结膜组织病理学变化,采用流式细胞仪检测脾脏中Th17、Treg细胞比例,采用酶联免疫吸附试验试剂盒检测血清中炎症因子、免疫球蛋白(Ig)E、胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)水平,采用蛋白质印迹法检测结膜组织AMPK/SIRT1/NF-κB信号通路蛋白水平。结果与NC组比较,AC组小鼠眼部出现结膜充血、红肿、溢泪等现象,结膜组织嗜酸性粒细胞较多,Th17细胞比例、白细胞介素(IL)-17、IL-6、IgE、TSLP、磷酸化AMPK(p-AMPK)、核NF-κB p65水平升高,Treg细胞比例、IL-10、转化生长因子(TGF)-β、SIRT1水平降低(P<0.05)。与AC组比较,LYC中、高组小鼠眼部结膜充血、水肿、溢泪等明显减轻,结膜组织嗜酸性粒细胞较少,脾脏中Th17/Treg细胞比例趋向平衡,IL-17、IL-6、IgE、TSLP、核NF-κB p65水平降低,IL-10、TGF-β、p-AMPK、SIRT1水平升高(P<0.05)。CC可抵消LYC对AC小鼠的上述保护作用。结论LYC可减轻AC小鼠的过敏和炎症反应,维护机体免疫平衡,其机制可能与促进AMPK/SIRT1通路活化,抑制NF-κB通路活化有关。

基于AMPK/sirt1/RANKL/OPG通路研究补阳还五汤促进骨质疏松性骨折大鼠愈合的机制

目的基于AMP活化蛋白激酶(AMPK)/沉默信息调节因子(sirt)1/核转录因子(NF)-κB受体活化蛋白配体(RANKL)/骨保护素(OPG)信号通路,探究补阳还五汤促进骨质疏松性骨折大鼠骨折愈合的机制。方法将大鼠随机分成假手术组、模型组、补阳还五汤低剂量组(6.25 g/kg)、补阳还五汤中剂量组(12.50 g/kg)和补阳还五汤高剂量组(25.00 g/kg)。除假手术组外,其余组均构建骨质疏松性骨折模型,并给予相应剂量药物干预。检测大鼠骨密度(BMD)值、骨折愈合评分及骨痂体积;自动生化分析仪测定血清碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素、钙和磷水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测股骨组织中的丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平;苏木素-伊红(HE)染色观察各组大鼠骨痂组织的病理形态;Western印迹检测股骨组织中AMPK/sirt1/RANKL/OPG通路蛋白表达。结果与假手术组相比,模型组骨痂骨小梁分布稀疏,成骨细胞大量减少且有纤维组织生成,骨痂体积、血清中ALP、骨钙素、钙和磷水平及股骨组织中MDA水平、RANKL蛋白水平显著升高(P<0.05),BMD值、骨折愈合评分、骨组织中SOD和GSH-Px水平和AMPK、sirt1、OPG蛋白水平显著降低(P<0.05)。与模型组相比,补阳还五汤低、中、高剂量组骨痂骨小梁分布较为密集,成骨细胞增加,骨痂体积、血清中ALP、骨钙素、钙和磷水平及股骨组织中MDA水平、RANKL蛋白水平显著降低(P<0.05),BMD值、骨折愈合评分、骨组织中SOD和GSH-Px水平和AMPK、sirt1、OPG蛋白水平显著升高(P<0.05)。结论补阳还五汤可能通过抑制氧化应激反应,调节AMPK/sirt1/RANKL/OPG通路,发挥对骨质疏松骨折大鼠的治疗作用。

松果菊苷调控Sirt1-FOXO1通路减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤

目的:研究松果菊苷通过调控沉默信息转录调节因子1(Sirt1)-叉形头转录因子1(FOXO1)通路减轻大鼠心肌缺血再灌注(MI/R)损伤。方法:结扎大鼠左冠状动脉前降支30 min,再灌注6 h建立MI/R损伤模型。将大鼠随机分为4组:假手术组、MI/R组、松果菊苷+MI/R组、Sirt1特异性抑制剂EX527+松果菊苷+MI/R组,每组10只,腹腔注射给药。心脏切片后用三苯基氯化四氮唑(TCC)染色测定心肌梗死面积;分光光度法测定血清中乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸激酶(CK)含量;TUNEL法检测心肌细胞凋亡率;蛋白质印迹法(Western blot)和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测sirt1和FOXO1蛋白和mRNA表达水平。结果:与MI/R组比较,松果菊苷+MI/R组大鼠心肌梗死面积、LDH和CK含量、心肌细胞凋亡率、FOXO1蛋白和mRNA表达水平显著降低,Sirt1蛋白和mRNA表达水平显著升高(P<0.05)。与松果菊苷+MI/R组比较,EX527+松果菊苷+MI/R组大鼠心肌梗死面积、LDH和CK含量、心肌细胞凋亡率、FOXO1蛋白和mRNA表达水平显著升高,而Sirt1蛋白和mRNA表达水平显著降低(P<0.05)。结论:松果菊苷能够减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤,其机制可能与调控Sirt1-FOXO1通路有关。

蓝萼甲素对急性髓系白血病U937细胞增殖、凋亡、自噬及SIRT1/FoxO1信号通路的影响

目的:探究蓝萼甲素对急性髓系白血病(AML)U937细胞增殖、凋亡、自噬及沉默信息调节因子1(SIRT1)/叉头框转录因子O1(FoxO1)信号通路的影响。方法:体外培养AML U937细胞,取培养至对数生长期的U937细胞分为对照组(常规培养U937细胞)、三氧化二砷组(在含U937细胞的培养基中加入2μmol/L的三氧化二砷)、蓝萼甲素低(在含U937细胞的培养基中加入2μmol/L蓝萼甲素)、高(在含U937细胞的培养基中加入4μmol/L蓝萼甲素)浓度组,继续培养48 h后。四甲基偶氮唑蓝法检测U937细胞增殖率,流式细胞术检测U937细胞凋亡率,单丹磺酰尸胺荧光染色观察U937细胞自噬小体数量,荧光定量PCR法检测U937细胞SIRT1、FoxO1 mRNA表达水平,蛋白印迹法检测U937细胞SIRT1、FoxO1蛋白表达水平。结果:与对照组相比,三氧化二砷组、蓝萼甲素低、高浓度组U937细胞增殖率显著降低(均P<0.05),凋亡率、自噬小体数量、SIRT1、FoxO1 mRNA和蛋白表达水平显著升高(均P<0.05);与三氧化二砷组相比,蓝萼甲素低、高浓度组U937细胞增殖率显著升高(均P<0.05),凋亡率、自噬小体数量、SIRT1、FoxO1 mRNA和蛋白表达水平显著降低(均P<0.05);与蓝萼甲素低浓度组相比,蓝萼甲素高浓度组U937细胞增殖率显著降低(P<0.05),凋亡率、自噬小体数量、SIRT1、FoxO1 mRNA和蛋白表达水平显著升高(均P<0.05)。结论:蓝萼甲素能抑制U937细胞的增殖,促进其凋亡和自噬,其机制可能与激活SIRT1/FoxO1信号通路有关。

乌头汤对骨关节炎软骨细胞中基质金属蛋白酶13和肿瘤坏死因子-α表达的影响机制研究

目的:探讨乌头汤对骨关节炎(OA)软骨细胞中基质金属蛋白酶13(MMP-13)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响,以及其对沉默信息转录调控因子1(Silent Information Regulator 1,SIRT1)/转录因子叉头框蛋白O1(Forkhead Box Transcription Factor O1,FOXO1)信号的调控机制。方法:以脂多糖模拟炎性微环境构建骨关节炎软骨细胞模型;以SIRT1信号特异性抑制剂EX527做功能挽救实验,细胞实验分为正常对照组、脂多糖组、乌头汤低剂量组、乌头汤高剂量组、抑制剂组;钙黄绿素-AM(Calcein-AM)/碘化丙啶(Propidium Iodide,PI)染色检测各组细胞的生长活性;流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率,免疫荧光检测各组细胞中TNF-α和MMP-13的表达;免疫组化检测各组细胞中蛋白聚糖(Aggrecan)和Ⅱ型胶原(CollagenⅡ)的表达;Western Blot法检测细胞和软骨组织中SIRT1、乙酰化叉头转录因子1(Ac-FOXO1)、B淋巴细胞瘤-2(B Cell Lymphoma-2,Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bcl2-associated X Protein,Bax)的表达。结果:在骨关节炎细胞模型中,细胞的生长活性明显降低,凋亡率明显升高,TNF-α和MMP-13以及Ac-FOXO1和Bax的表达明显升高,Aggrecan和CollagenⅡ、SIRT1和Bcl-2的表达明显降低,乌头汤低、高剂量能明显阻滞这些参数的恶化,发挥保护软骨细胞的作用,而EX527可部分逆转乌头汤的保护作用,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:乌头汤能明显下调TNF-α和MMP-13的表达,抑制骨关节炎软骨细胞的凋亡,这可能与激活SIRT1信号、抑制FOXO1的乙酰化有关。

宣白承气汤调控sirt1/FOXO1通路对脂多糖致大鼠急性肺损伤的影响

目的:探讨宣白承气汤对脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤大鼠的影响以及可能机制。方法:清洁级SD雄性大鼠50只,尾静脉注射LPS制备急性肺损伤模型,随机分为模型组、阳性对照组(地塞米松)、低剂量宣白承气汤组(2g生药/kg)、中剂量宣白承气汤组(5g生药/kg)、高剂量宣白承气汤组(8g生药/kg),每组10只,另设正常对照组10只,模型制备成功后连续7d给药,末次给药后通过HE染色法观察肺组织病理变化,通过考马斯亮蓝法检测大鼠肺泡灌洗液蛋白含量,通过酶联免疫吸附法检测血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、一氧化氮(NO)水平,采用免疫印迹法(WB)检测大鼠肺组织sirt1/FOXO1通路相关蛋白表达。结果:模型组大鼠肺泡腔内充满炎性渗出物和出血,低、中、高宣白承气汤组炎症细胞浸润及出血情况有所改善;与正常组相比,模型组大鼠肺泡灌洗液蛋白、肺体指数、血清TNF-α、NO水平、大鼠肺组织FOXO1蛋白水平显著升高(P<0.05),大鼠肺组织sirt1蛋白水平显著下降(P<0.05);与模型组相比,低、中、高剂量宣白承气汤组肺泡灌洗液蛋白、肺体指数、血清TNF-α、NO水平、大鼠肺组织FOXO1蛋白水平均依次降低(P均<0.05),大鼠肺组织sirt1蛋白水平依次升高(P<0.05),且高剂量宣白承气汤组肺泡灌洗液蛋白、肺体指数、血清TNF-α、NO水平、大鼠肺组织FOXO1、sirt1蛋白水平与阳性对照组差异无统计学意义(P>0.05)。结论:宣白承气汤可能通过激活sirt1表达抑制FOXO1转录,进而降低炎症反应,减轻LPS诱导的大鼠急性肺损伤。

电针通过SIRT1-FOXO1通路激活自噬减轻神经病理性疼痛的机制

目的探讨电针通过沉默信息调节因子(SIRT1)1-叉头状转录因子(FOX)O1通路激活自噬减轻神经病理性疼痛(NP)的机制。方法实验分为假手术组、模型组、电针组、电针+抑制剂组,每组12只。除假手术组外,其余各组建立坐骨神经慢性压迫损伤(CCI)所致NP大鼠模型,造模第7天电针组选用“环跳”“阳陵泉”穴电针针刺;电针+抑制剂组在电针组基础上分别在第7天、第10天、第14天脊髓鞘内注射SIRT1抑制剂EX-527;假手术组和模型组鞘内注射等体积二甲基亚砜(DMSO)。造模前、造模后给药前、给药后测定机械缩足反射阈值(MWT)和热刺激缩足反射潜伏期(PWTL);免疫荧光检测脊髓SIRT1蛋白表达情况;透射电镜下观察脊髓超微结构;Western印迹检测脊髓中微管相关蛋白1轻链(LC)3、SIRT1、FOXO1蛋白水平。结果造模前,各组MWT、PWTL差异无统计学意义(P>0.05)。造模后给药前,与假手术组相比,模型组、电针组、电针+抑制剂组MWT、PWTL明显降低(P<0.05)。给药后,模型组出现线粒体肿胀破裂现象,且与溶酶体融合,未发现明显的自噬小体;电针组线粒体结构基本恢复,自噬小体数量多,双膜包裹里可见少量的内质网碎片;电针+抑制剂组自噬小体数量较电针组明显减少,自噬小体部分出现单膜结构。与假手术组相比,模型组MWT、PWTL、脊髓中SIRT1蛋白免疫荧光强度和蛋白水平、FOXO1、LC3Ⅱ蛋白水平、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ明显降低(P<0.05),LC3Ⅰ蛋白水平明显升高(P<0.05);与模型组相比,电针组MWT、PWTL、脊髓中SIRT1蛋白免疫荧光强度和蛋白水平、FOXO1、LC3Ⅱ蛋白水平、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ明显升高(P<0.05),LC3Ⅰ蛋白水平明显降低(P<0.05);与电针组相比,电针+抑制剂组MWT、PWTL、脊髓中SIRT1蛋白免疫荧光强度和蛋白水平、FOXO1、LC3Ⅱ蛋白水平、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ明显降低(P<0.05),LC3Ⅰ蛋白水平明显升高(P<0.05)。结论电针通过激活SIRT1-FOXO1通路激活自噬减轻NP,实现对NP大鼠的保护。

miR-199a在妊娠糖尿病中的表达及参与胰岛素抵抗的作用机制研究

目的探究微小RNA(miR)-199a在妊娠糖尿病(GDM)中的表达及调控沉默信息调节因子1(SIRT1)/叉头盒转录因子O1(FOXO1)通路参与胰岛素抵抗(IR)的机制。方法GDM孕妇56例为GDM组,正常孕妇60例为正常孕妇组,实时荧光定量PCR(qPCR)检测2组胎盘中miR-199a水平;计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);Pearson相关分析miR-199a与HOMA-IR的相关性。体外培养人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo并建立IR模型。miR-199a功能验证:细胞依处理方式不同分为模型组、miRNA inhibitor NC组、miR-199a inhibitor组、miRNA mimic NC组、miR-199a mimic组;qPCR检测各组细胞中miR-199a表达情况,蒽酮法检测细胞内葡萄糖吸收量,试剂盒检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平,Western blot检测SIRT1、FOXO1、乙酰化(Ac)-FOXO1蛋白水平,双荧光素酶报告基因实验鉴定miR-199a与SIRT1的靶向关系。结果与正常孕妇组比较,GDM组胎盘中miR-199a、HOMA-IR水平升高(P<0.05);GDM组miR-199a水平与HOMA-IR呈正相关(P<0.05)。棕榈酸、胰岛素共同作用细胞24 h成功建立IR模型。与模型组和miRNA inhibitor NC组比较,miR-199a inhibitor组miR-199a、MDA水平降低,葡萄糖吸收量、SOD水平、SIRT1蛋白水平升高(P<0.05)。与模型组和miRNA mimic NC组比较,miR-199a mimic组miR-199a和Ac-FOXO1蛋白表达升高、MDA水平升高,葡萄糖吸收量、SIRT1蛋白水平降低(P<0.05)。Tarbase数据库分析显示,miR-199a与SIRT1存在互补的结合位点,并经双荧光素酶实验证实。结论GDM患者胎盘中miR-199a高表达,升高的miR-199a可通过靶向下调SIRT1而促进FOXO1乙酰化,导致IR。

太白楤木总皂苷介导SIRT1/FOXO1/PGC-1α通路对创伤性脑损伤小鼠认知功能障碍的影响

目的探讨太白楤木总皂苷(SAT)介导沉默信息调节因子1(silence infor-mation regulator 1,SIRT 1)/叉头转录因子1(forkhead transcription factor 1,FoxO1)/过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α(PGC-1α)通路对创伤性脑损伤(traumatic brain injury,TBI)小鼠认知功能障碍的影响。方法将C57BL/6小鼠分为Con组、Model组、SAT组(135 mg·kg^(-1))、EX-527组(10 mg·kg^(-1) SIRT1抑制剂EX-527)、SAT+EX-527组,每组12只。Con组小鼠接受除皮层冲击外的所有手术操作,其余各组小鼠均利用可控皮层冲击法构建TBI模型,建模成功后,进行相应给药处理,每天1次,持续7 d。Morris水迷宫实验检测小鼠学习与空间记忆能力;HE染色检测损伤皮质病理学变化;ELISA法检测损伤皮质中白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;TUNEL染色检测神经元凋亡;Western blot检测损伤皮质中半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、SIRT1、Ace-FoxO1、Ace-PGC-1α蛋白表达。结果与Con组比较,Model组小鼠脑皮层组织病理损伤严重,逃避潜伏期延长,穿越平台次数减少,损伤皮质中IL-6、TNF-α含量、神经元凋亡率、Caspase-3、Bax、Ace-FoxO1、Ace-PGC-1α蛋白表达升高,SIRT1蛋白表达降低(P<0.05);与Model组比较,SAT组小鼠脑皮层组织病理学损伤减轻,逃避潜伏期缩短,穿越平台次数增多,损伤皮质中IL-6、TNF-α含量、神经元凋亡率、Caspase-3、Bax、Ace-FoxO1、Ace-PGC-1α蛋白表达降低,SIRT1蛋白表达升高(P<0.05),而EX-527组对应指标变化呈相反趋势;EX-527逆转了SAT对TBI小鼠认知功能障碍的改善作用。结论SAT可能通过激活SIRT1/FoxO1/PGC-1α通路改善TBI小鼠认知功能障碍。

中药治疗下肢深静脉血栓相关信号通路研究进展

下肢深静脉血栓形成(DVT)是常见的血管外科疾病,可诱发肺动脉栓塞和深静脉血栓形成后综合征,进而严重影响患者的生活质量。既往研究发现,下肢深静脉血栓的形成和发病与炎症反应密切相关,其中核转录因子Kappa B、Toll样受体、肿瘤坏死因子等信号通路参与其中。研究证实,中医药治疗DVT效果显著,临床应用广泛。中药单体、有效成分和复方可通过调控上述信号通路抑制炎症反应,通过保护内皮细胞和抑制血小板活化等途径,从而干预DVF。本文对中药治疗DVT的相关信号通路进行归纳,旨在为中医药治疗DVT的基础研究提供理论参考,为中医药治疗深静脉血栓形成的临床应用提供依据。

多囊卵巢综合征伴胰岛素抵抗相关信号通路的研究进展

多囊卵巢综合征(PCOS)是一种好发于青春期及育龄期女性的涉及诸多因素的内分泌代谢性疾病,临床主要表现为闭经、体胖、多毛痤疮以及妊娠率显著降低,但目前其病因病机尚不清楚。胰岛素抵抗(IR)与多种慢性非传染性疾病(高血压、糖尿病、心脑血管疾病、PCOS等)相关,目前已知磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B、肝激酶B1/AMP活化的蛋白激酶、沉默信息调节因子1/叉头框转录因子O1、Toll样因子4/核因子κB信号通路参与了PCOS伴IR(PCOS-IR)的作用机制,因此充分认识PCOS-IR的发病机制在疾病预防中有重要临床意义。

SIRT1与神经细胞凋亡关系的研究进展

随着人类平均寿命的延长、人口老龄化的加剧,神经退行性疾病成为研究的焦点,其中神经细胞凋亡在神经退行性疾病中起重要作用。凋亡是由基因控制的细胞程序性死亡,通过线粒体途径,外在途径或死亡受体途径以及内质网途径在胚胎发育、免疫耐受、肿瘤发生、炎症转归及正常组织更新等病理、生理过程中发挥重要的调节作用。长寿蛋白SIRT1在神经系统中具有保护性作用,通过去乙酰化作用于靶蛋白如p53、叉头蛋白转录因子O、过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α、蛋白激酶B等影响凋亡因子、神经炎症、氧化应激、线粒体发生,达到对神经细胞凋亡的调控。

基于SIRT1/FoxO1通路探究小檗碱抑制卵巢颗粒细胞凋亡与自噬的调节机制

目的:通过观察小檗碱(BBR)对卵巢颗粒细胞衰老的影响,探究其保护作用及调节机制。方法:应用H_(2)O_(2)诱导建立人卵巢颗粒样肿瘤(KGN)细胞衰老模型;设置空白组、模型组、BBR高剂量(1μmol·L^(-1))组和BBR低剂量(0.5μmol·L^(-1))组,模型组与BBR组加入浓度为10μmol·L^(-1)H_(2)O_(2),孵育40 min。通过细胞增殖与活性检测(CCK-8)分析检测BBR对KGN细胞增殖的影响;通过β-半乳糖苷酶染色检测BBR对KGN细胞衰老状态的影响;应用流式细胞术检测BBR对KGN细胞凋亡和ROS含量的影响;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测BBR对KGN细胞抗凋亡蛋白B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)/促凋亡蛋白Bcl-2相关X蛋白(Bax)比值、胱天蛋白酶-3(Caspase-3)、叉头框转录因子O1(FoxO1)及过氧化氢酶(CAT)mRNA表达的影响;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测BBR对KGN细胞沉默信息调节因子1(SIRT1)、超氧化物歧化酶2(SOD2)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、FoxO1、自噬相关蛋白微管相关蛋白轻链3Ⅱ(LC3BⅡ)、自噬关键分子酵母Atg6(Beclin-1)及泛素结合蛋白p62蛋白表达的影响。结果:H_(2)O_(2)诱导40 min后,与空白组比较,模型组细胞增殖率显著下降(P<0.01);与模型组比较,BBR干预组细胞增殖率明显上升(P<0.05);β-半乳糖苷酶染色结果显示,与空白组比较,模型组细胞呈现明显的衰老状态(P<0.01),BBR干预组细胞衰老情况较模型组显著降低(P<0.01);流式细胞术检测显示,与空白组比较,模型组细胞凋亡率显著上升(P<0.01),BBR干预组细胞凋亡率较模型组明显降低(P<0.05);同时,与空白组比较,模型组ROS含量显著增加(P<0.01);与模型组比较,BBR干预组细胞ROS含量显著降低(P<0.01);Real-time PCR结果显示,与空白组比较,模型组KGN细胞CAT、Bcl-2/Bax mRNA表达明显降低,Caspase-3与FoxO1 mRNA表达明显增加(P<0.05);与模型组比较,BBR干预后KGN细胞CAT与Bcl-2/Bax mRNA表达明显增加(P<0.05),Caspase-3与FoxO1 mRNA表达较模型组明显降低(P<0.05)。Western blot结果显示,与空白组比较,模型组SIRT1、SOD2及p62蛋白水平显著降低(P<0.01),JNK、FoxO1、LC3BⅡ与Beclin-1蛋白水平明显升高(P<0.05);BBR干预后,SIRT1、SOD2及p62蛋白水平较模型组显著增加(P<0.01),JNK、FoxO1、LC3BⅡ与Beclin-1蛋白水平较模型组明显降低(P<0.05)。结论:BBR具有抑制卵巢颗粒细胞衰老效应,其机制与通过SIRT1/FoxO1通路介导抑制细胞凋亡与自噬有关。

miR-409-3p对川崎病幼鼠心肌损伤的调控作用及机制

为研究miR-409-3p通过沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,SIRT1)/叉头转录因子O1(forkhead transcription factor O1,FOXO1)信号通路对川崎病(Kawasaki disease,KD)幼鼠心肌损伤的影响,取SD幼年雄性大鼠,随机分为对照组、模型组、 miR-409-3p antagomir组、 miR-409-3p antagomir阴性对照组、 EX527(SIRT1抑制剂,1μg/kg)组、 miR-409-3p antagomir+EX527(1μg/kg)组,每组12只。采用qRT-PCR检测大鼠心肌组织miR-409-3p表达;ELISA检测大鼠血清中肌酸激酶同工酶(creatine kinase isoenzyme,CK-MB)、心肌肌钙蛋白I(cardiac troponin I,cTnI)、心肌肌钙蛋白T(cardiac troponin T,cTnT)、 TNF-α、 IL-17、 IL-18水平。结果显示,与模型组、 miR-409-3p antagomir+EX527组分别比较,miR-409-3p antagomir组大鼠心肌组织病理损伤减轻,血清CK-MB、 cTnI、 cTnT、 TNF-α、 IL-17及IL-18水平,心肌组织acely-FOXO1/FOXO1均降低(P<0.05),心功能指标左室射血分数(left ventricular ejection fraction,LVEF)、左室缩短分数(left ventricular fractional shortening,LVFS)及心肌组织SIRT1表达均升高(P<0.05);EX527组大鼠心肌组织病理损伤加重,血清CK-MB、 cTnI、 cTnT、 TNF-α、 IL-17及IL-18水平,心肌组织acely-FOXO1/FOXO1均升高(P<0.05),心功能指标LVEF、 LVFS及心肌组织SIRT1表达均降低(P<0.05)。大鼠心肌细胞中miR-409-3p可靶向下调SIRT1表达。该研究提示,miR-409-3p可靶向下调SIRT1表达参与KD幼鼠心肌损伤过程,下调miR-409-3p表达可通过激活SIRT1/FOXO1信号起到抗炎作用,进而减轻KD幼鼠心肌损伤。

葛根素在高糖条件下对大鼠足细胞自噬相关蛋白表达的影响

目的观察葛根素对高糖条件下大鼠足细胞沉默信息调控因子1(SIRT1)/叉头转录因子O3(FOXO3)自噬通路的影响。方法在高糖条件下,采用蛋白免疫印记、免疫荧光等方法检测足细胞自噬相关蛋白SIRT1、FOXO3a、p62和Beclin-1的表达。结果HG组足细胞Beclin-1表达较NG组下调,足细胞p62的表达较NG组上调,SIRT1/FOXO3自噬通路受到抑制,而应用葛根素后可使Beclin-1表达上调,p62的表达下调,SIRT1/FOXO3自噬通路恢复,差异有统计学意义(P<0.05,P<001)。结论葛根素可逆转高糖条件下足细胞自噬的抑制作用,有望成为一种治疗糖尿病肾病的新型药物。

下调miRNA-217对UVB诱导人皮肤成纤维细胞氧化损伤及Sirt1/FOXO1通路的影响

目的探讨下调微RNA-217(miRNA-217)对中波紫外线(UVB)诱导的人皮肤成纤维细胞(HFF-1)氧化损伤及沉默信息转录调节因子1(Sirt1)/叉形头转录因子1(FOXO1)信号通路的影响。方法将未损伤和UVB损伤的HFF-1细胞分为正常组、对照组、miRNA-217阴性对照(NC)组和miNAR-217抑制剂组。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测miRNA-217表达情况;细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测细胞生长情况;膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)法检测细胞凋亡情况;2′,7′-二氯荧光黄双乙酸盐(DCHF-DA)荧光探针法检测活性氧(ROS)表达;过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)试剂盒检测该指标水平;Western blot检测Sirt1、FOXO1和乙酰化FOXO1(Ac-FOXO1)蛋白表达。结果与对照组和miRNA-217 NC组比较,miRNA-217抑制剂组HFF-1细胞miRNA-217、凋亡率及MDA、ROS、Ac-FOXO1蛋白表达和Ac-FOXO1/FOXO1比值明显降低(P<0.05),细胞存活率、CAT、SOD表达水平、Sirt1和FOXO1蛋白表达均明显升高(P<0.05);对照组与miRNA-217 NC组上述各指标水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05);与正常组比较,对照组上述各指标变化呈相反趋势。结论下调miRNA-217可能通过促进Sirt1/FOXO1信号通路,保护UVB诱导下HFF-1细胞免受氧化损伤。

基于sirt1/FOXO1通路研究双氢青蒿素对CCl_(4)诱导大鼠急性肝损伤的保护作用

目的 基于沉默信息调节因子1(sirt1)/叉头框转录因子O1(FOXO1)通路研究双氢青蒿素对四氯化碳(CCl_(4))诱导大鼠急性肝损伤的保护作用的机制。方法 SD大鼠分为对照组、模型组、双氢青蒿素组、EX527组、双氢青蒿素+EX527组,每组12只,全自动生化分析仪测定大鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)含量;HE染色检测各组大鼠肝组织病理学变化,并进行病理评分;采用超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)检测试剂盒检测肝组织中SOD、MDA水平;酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组大鼠血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平;蛋白免疫印迹法检测sirt1/FOXO1通路相关蛋白表达。结果 与模型组相比,双氢青蒿素组SOD含量、sirt1蛋白表达升高,ALT、AST、TNF-α及IL-6水平、MDA含量、acely-FOXO1/FOXO1降低,差异有统计学意义(P<0.05);EX527组SOD含量、sirt1蛋白表达降低,ALT、AST、TNF-α及IL-6水平、MDA含量、acely-FOXO1/FOXO1升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与双氢青蒿素组相比,双氢青蒿素+EX527组SOD含量、sirt1蛋白表达降低,ALT、AST、TNF-α及IL-6水平、MDA含量、acely-FOXO1/FOXO1升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与EX527组比较,双氢青蒿素+EX527组SOD含量、sirt1蛋白表达升高,ALT、AST、TNF-α及IL-6水平、MDA含量、acely-FOXO1/FOXO1降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 双氢青蒿素可能通过激活sirt1/FOXO1通路,抑制氧化应激及炎症反应,进而减轻CCl_(4)诱导的大鼠急性肝损伤。

基于“异病同治”探讨活血解毒法治疗冠心病和认知功能障碍的机制

我国即将进入深度老龄化社会,多病共存逐渐增加,冠心病与认知功能障碍的发病率也逐年升高,两者相互影响,互为因果,成为危害老年人健康的重大慢病,积极探索对其的中西医结合防治方法具有重大的临床意义。中医对冠心病和认知功能障碍关系的认知最早见于《黄帝内经》,而随着对冠心病和认知功能障碍认识的不断深化,“瘀”与“毒”对两者并病的影响越来越得到学界关注。中医对冠心病和认知功能障碍病因病机的认识具有共通性,“异病同治”理论为中医临床辨治病机相同的不同疾病提供了理论基础,同时也符合现代医学对多病共存整体性和个体化的防治原则。基于此,本文系统提出了“瘀毒互结”为冠心病和认知功能障碍的重要病因病机,探讨了活血解毒方药可能通过调节神经酰胺代谢,激活沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1),抑制细胞焦亡、调节丝裂原活化蛋白激酶/核转录因子-κB(MAPK/NF-κB)信号通路、抑制线粒体分裂和调节DNA甲基化等方面异病同治冠心病和认知功能障碍的作用机制,以期为未来中医药防治冠心病和认知障碍研究提供思路。