细胞周期蛋白激酶抑制调控蛋白p21在HHV-8病毒裂解复制周期的作用

目的研究细胞周期蛋白激酶抑制调控蛋白p21对人类疱疹病毒8型(human herpesvirus 8,HHV-8)病毒裂解复制周期的影响。方法组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase,HDAC)抑制剂SAHA预处理后,倒置荧光显微镜观察红色荧光蛋白(RFP)阳性的iSLK.219细胞数,实时定量PCR检测TREx-K-Rta BCBL-1细胞中HHV-8病毒相关基因的mRNA水平。脂质体转染p21-siRNA后,免疫印迹法检测iSLK.219和TREx-K-Rta BCBL-1细胞中p21蛋白表达,计算RFP阳性iSLK.219细胞百分率,检测TREx-K-Rta BCBL-1细胞中ORF50和PAN的mRNA水平,CCK-8法和台盼蓝染色观察细胞存活情况。结果SAHA显著增强iSLK.219细胞RFP阳性率、TREx-K-Rta BCBL-1细胞中HHV-8裂解复制周期相关基因ORF50、PAN及K8.1的mRNA水平和p21蛋白表达,差异有统计学意义(P<0.05)。siRNA沉默p21后,iSLK.219细胞RFP阳性率、TREx-K-Rta BCBL-1细胞中HHV-8裂解复制周期相关基因ORF50和PAN mRNA水平显著下降,差异有统计学意义(P<0.05),且保护SAHA介导的TREx-K-Rta BCBL-1细胞死亡。结论抑制HDAC活性通过调控p21促进HHV-8病毒裂解复制。

紫心甘薯IbMYB1上游7个调控蛋白的互作与表达分析

【目的】对前期筛选到的紫心甘薯IbMYB1上游7个调控蛋白(IbERF1、IbPDC、IbPGP19、IbSCF、IbWRKY1、IbJOX4和IbEIN3-2)的互作与表达进行分析,进一步阐明花色素苷在特定时空合成与积累的调控网络。【方法】采用酵母双杂交和双分子荧光互补试验,对7个调控因子之间的相互作用进行检测,使用荧光定量PCR对紫心甘薯和白心甘薯根不同发育时期花色素苷合成调控和筛选的上游调控因子进行基因表达特征分析。【结果】IbERF1与IbSCF、IbWRKY1存在相互作用。双分子荧光互补试验证实了酵母双杂交的试验结果。IbERF1基因在紫心甘薯根不同时期的表达量均低于白心甘薯,且随着根中花色素苷的积累其表达量逐渐降低,IbWRKY1和IbSCF基因在紫心甘薯和白心甘薯根不同发育时期中的表达量,与花色素苷的积累无明显的相关关系。【结论】IbMYB1上游调控蛋白IbERF1、IbSCF可分别与IbWRKY1形成复合物,以转录复合体的形式共同调控IbMYB1表达。推测IbERF1可能负调控花色素苷的合成,IbSCF和IbWRKY1参与紫心甘薯花色素苷的合成与调控,可能还存在更为复杂的机制。

下调细胞膜调控蛋白Paralemmin-3表达对肺泡巨噬细胞极化的调控作用

目的探讨下调细胞膜调控蛋白Paralemmin-3(PALM3)表达对肺泡巨噬细胞极化的影响。方法(1)取大鼠肺泡巨噬细胞NR8383细胞,采用免疫荧光法检测其PALM3的表达情况。(2)采用100 ng/mL脂多糖、20 ng/mL白细胞介素(IL)-4分别刺激NR8383细胞极化为M1型、M2型肺泡巨噬细胞,并取未干预的正常NR8383细胞作为M0型肺泡巨噬细胞。检测NR8383细胞中的PALM3 mRNA、蛋白表达水平。(3)将NR8383细胞分为Control-siRNA组、PALM3-siRNA组和正常对照组。将Control-siRNA、PALM3-siRNA分别转染至Control-siRNA组、PALM3-siRNA组的NR8383细胞,不对正常对照组进行干预。评估转染效果后,使用100 ng/mL脂多糖、20 ng/mL IL-4刺激各组NR8383细胞。检测各组上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)及IL-10含量,以及细胞中CD80、诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)、CD206、精氨酸酶1(ARG1)的mRNA表达水平。结果(1)PALM3分子在NR8383细胞中有表达并定位于细胞膜。(2)M1型肺泡巨噬细胞、M0型肺泡巨噬细胞、M2型肺泡巨噬细胞中PALM3的mRNA和蛋白表达水平依次降低(P<0.05)。(3)经转染siRNA及脂多糖刺激后,与正常对照组及Control-siRNA组相比,PALM3-siRNA组NR8383细胞M1型表面标志物CD86和iNOS的mRNA表达水平下调,上清液TNF-α含量降低(P<0.05)。经转染siRNA及IL-4刺激后,与正常对照组及Control-siRNA组相比,PALM3-siRNA组NR8383细胞M2型表面标志物CD206和ARG1 mRNA表达水平上调,上清液IL-10含量升高(P<0.05)。结论PALM3表达于肺泡巨噬细胞的细胞膜,且在M1型肺泡巨噬细胞中呈高表达,下调PALM3的表达可抑制肺泡巨噬细胞的M1型极化并促进其M2型极化,有助于抑制促炎因子及促进抗炎因子的释放。

芽孢产生和萌发过程中关键调控蛋白

芽孢是芽孢杆菌属或梭菌属细菌在面对艰难环境(高温、高压、干旱等)时形成的休眠体,其独特结构赋予了芽孢极强抗性而且很难被杀灭。当外界环境变化至适合微生物生长时,芽孢会通过萌发变成具有正常新陈代谢功能的营养体细胞,进而引起食品的腐败变质甚至引发食源性疾病。因此,芽孢的存在一直是食品安全的重要威胁。为了防控食品中芽孢数量,需要对芽孢萌发机理进行深入地研究。近年来,关于萌发机理的研究逐渐增多,在此基础上对参与萌发过程中的重要调控蛋白进行归纳和总结,并对芽孢研究的发展方向提出展望,为食品中芽孢调控技术的发展提供参考。

次乌头碱对心肌细胞Ca^(2+)调控蛋白mRNA表达的影响

目的考察次乌头碱(HA)对原代培养乳大鼠心肌细胞L-钙通道、钙调蛋白(CaM)、肌质网雷诺定受体(RyR2)mR-NA表达的影响。方法体外培养乳大鼠心肌细胞,采用RT-PCR法测定L-钙通道α1C亚基、CaM及RyR2mRNA的表达。结果 HA作用15 min时,60、120μΜ/L能提高心肌细胞膜L-钙α1C mRNA的表达(P<0.05);30、60、120μΜ/L能使CaMmRNA的表达增高(P<0.01);60、120μΜ/L能提高RyR2mRNA表达(P<0.05);60μM/L作用心肌细胞5 min时引发L-钙通道α1CmRNA表达增多(P<0.05);30、60μM/L作用15、60 min时可引起CaM mRNA表达增多(P<0.01)。结论 HA(≥60μΜ/L)可通过增加心肌细胞L-钙通道、CaM、RyR2mRNA的表达,参与细胞内钙超载及心律失常的发生过程,在乌头类天然药物中毒时干预上述靶点基因改变可缓解中毒性心律失常的发生。

锌铁调控蛋白ZIP的结构和功能

锌铁调控蛋白ZIP隶属金属离子转运体超家族 ,其基因家族成员首先在植物中被发现 ,随后在多种动植物水平被克隆。ZIP转运体可转运众多阳离子 ,包括Ca2 + ,Fe2 + ,Mn2 + 及Zn2 + 等。了解ZIP转运体在动植物中如何发挥离子转运功能 ,对从分子水平认识金属离子缺乏或蓄积的机理有着重要的理论意义和广泛的应用价值。本文就最近在拟南芥Arabidopsis中发现的一个新的金属离子转运体家族

穴位埋线对溃疡性结肠炎淋巴细胞凋亡调控蛋白的影响

目的探讨穴位埋线法治疗溃疡性结肠炎(UC)的临床疗效及作用机理。方法将90例患者随机分为埋线组(30例)、埋线加西药组(30例)和西药组(30例),观察3组患者治疗前后主要症状和体征积分值及淋巴细胞凋亡调控蛋白CD95(Apo-1/Fas)、Apo-2.7及Bcl-2水平的改变。结果埋线组、西药组、埋线西药组临床总有效率分别为90%、80%、96.7%。埋线加西药组疗效优于西药组,差异有显著性意义(P<0.05)。埋线组及埋线加西药组治疗后Apo-1、Apo-2.7及Bcl-2的水平高于同组治疗前及同期西药组水平,差异有显著性意义(P<0.01)。而西药组治疗前后差异无显著性意义(P>0.05)。结论穴位埋线对溃疡性结肠炎具有良好的治疗作用,能促进患者淋巴细胞凋亡,同时对西药柳氮磺胺吡啶治疗溃疡性结肠炎具有协同作用。

苦参碱对白血病细胞癌基因和细胞周期调控蛋白表达的影响

目的：探讨在苦参碱诱导下，白血病细胞株Ｋ５６２增殖和分化时相关癌基因及细胞周期调控蛋白表达的改变及意义。方法：应用分子生物学 Ｎｏｒｔｈｅｒｎ Ｂｌｏｔ和 Ｄｏｔ Ｂｌｏｔ杂交技术检测人红白血病细胞株 Ｋ５６２在苦参碱作用后的ｃ－ｍｙｃ、Ｎ－ｒａｓ 及 ｐ５３ ｍＲＮＡ表达；同时用 Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔｔｉｎｇ－ＥＣＬ分析苦参碱作用前、后２４、４８、７２，小时Ｋ５６２ 细胞ＣｙｃｌｉｎＤ１，ＣｙｃｌｉｎＥ，Ｃｄｋ２，Ｃｄｋ５的不同表达水平。结果：在增殖的 Ｋ５６２细胞（培养４８小时）中，伴随着 ＤＮＡ合成增加，ＣｙｃｌｉｎＥ和 Ｃｄｋ２保持高表达；而在苦参碱作用２４小时分化启动的细胞中，随着ＤＮＡ合成减少，Ｎ－ｒａｓ、ｐ５３ｍＲＮＡ表达增强； ｃ－ｍｙｃ ｍＲＮＡ表达明显受抑；同时 ＣｙｃｌｉｎＤ， Ｃｄｋ５表达增强。结论：苦参碱抑制 Ｋ５６２细胞增殖并诱导分化可能与相关癌基因表达和 ＣｙｃｌｉｎＤ１／Ｃｄｋ５，ＣｙｃｌｉｎＥ／Ｃｄｋ２不同表达有关。

牛源金黄色葡萄球菌铁离子调控蛋白保守性和免疫效果研究

为评价金黄色葡萄球菌铁离子调控蛋白B(IsdB)作为奶牛乳腺炎疫苗抗原的可能性,对我国分离的不同克隆复合群(CCs)3株菌的isdB基因进行序列测定、比对分析,并对XJ43(CC97)菌株的isdB基因进行原核表达、纯化,通过小鼠主动和被动免疫试验评价了其免疫保护效果。Blast分析显示,来源于不同克隆复合群菌株的isdB基因序列的同源性大于95%,说明isdB基因高度保守;IsdB蛋白主动免疫能显著降低攻毒菌对免疫鼠的损伤或免疫鼠的死亡率,而被动免疫不能降低小鼠的死亡率;用活的强毒力菌刺激产生的血清则能极显著地增加小鼠的存活率。本研究表明,虽然IsdB蛋白的主动免疫可以显著减弱金黄色葡萄球菌的致病作用,但以此单一成分为抗原的金黄色葡萄球菌疫苗的免疫保护效果具有很大的局限性。

坎离煎对心衰兔心肌细胞凋亡调控蛋白表达的干预作用

目的观察中药验方坎离煎对心衰时心肌细胞凋亡的影响。方法40只家兔随机分为假手术组、模型组、开搏通组和坎离煎组。以结扎兔冠状动脉前降支的方法造成心肌梗死后心衰模型,造模后分别以坎离煎和开搏通干预,2周后处死取样,作心肌凋亡调控蛋白bcl-2和bax检测,比较各组间差异。结果坎离煎和开搏通都能够促进心衰兔心肌bcl-2表达,增加bcl-2/bax的比值,起到抑制细胞凋亡的作用,坎离煎在促进bcl-2表达方面优于开搏通(P<0.01);坎离煎和开搏通均能明显改善心衰兔水钠潴留状态。结论坎离煎通过抑制心肌细胞凋亡而减少心衰进程中的心肌细胞丢失,以保存心脏的功能,这可能是该药振奋心脏阳气的作用机制之一。

c-myc、Rb及细胞G_1期调控蛋白在乳腺癌中的表达

目的 探讨乳腺癌中c-myc、Rb蛋白及cyclin E、cyclin D1等细胞G1期调控蛋白的表达、相互关系及其意义。方法 应用免疫组化检测57例乳腺癌患者组织中4种蛋白的表达情况。结果 c-myc、cyclin E及cyclin D1在乳腺癌中表达的阳性率均高于乳腺纤维腺瘤(p<0.05);Rb在乳腺癌中的阳性率低于乳腺纤维腺瘤(p<0.05)。乳腺浸润性导管癌中cyclin E的表达与c-myc蛋白正相关。乳腺导管内癌中cyclin D1的表达与Rb蛋白正相关。结论 在乳腺浸润性导管癌发展的不同阶段,细胞周期异常的机制可能不同。cyclin D1在乳腺导管内癌中的过表达可能部分依赖于Rb蛋白的表达。c-myc引起的细胞周期调控异常在乳腺癌发病中为较晚期事件。细胞周期调控成分的异常与乳腺癌的发病机制关系密切。

Bc1-2家族是人参皂甙Rg1抗黑质神经元凋亡的重要调控蛋白

目的 探讨Bc1 2、Bc1 x1和Bax蛋白在人参皂甙Rgl抗帕金森病 (PD)小鼠模型黑质神经元凋亡过程中的可能作用。 方法 PD模型组单纯以 1 甲基 4 苯基 1,2 ,3,6 四氢吡啶 (MPTP)腹腔注射C5 7BL小鼠 ;预防组预先 3d腹腔注射Rg1(2 5、5 0、10 0mg kg) ,再注射MPTP ,以Niss1染色、TH组织化学染色、TUNEL染色观察黑质神经元的变化 ;免疫组织化学染色检测Bc1 2、Bc1 x1和Bax蛋白表达。 结果 5 0和 10 0mg kgRg1预处理PD模型鼠能使黑质致密带 (SNc)部位的Niss1和TH染色阳性神经元增多 ,TUNEL染色阳性率降低 ,以及Bc1 2和Bc1 x1表达增加 ,Bax表达减少。 结论 Rg1预处理对PD模型鼠黑质神经元凋元有明显的保护作用 ;Bc1 2和Bc1

有丝分裂调控蛋白DIS3的表达调控对3株人骨髓瘤细胞增殖能力的影响

目的:探究有丝分裂调控蛋白DIS3的表达调控对3株人骨髓瘤细胞增殖能力的影响。方法:选取人骨髓瘤细胞株NCI-H929、RPMI 8226和U266B1为研究对象,分别设计并构建DIS3基因过表达载体和DIS3-siRNA。细胞实验分为对照组、DIS3过表达-空载体组、DIS3-siRNA阴性对照组、DIS3过表达组以及DIS3-siRNA组共5组。细胞培养24、48和72 h后,应用MTT法检测3种细胞株的增殖能力;收集培养了72 h的细胞样本,应用RT-qPCR和Western blot分别检测增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表达变化。结果:MTT检测显示,与同时间点(24、48或72 h)DIS3过表达-空载体组比较,DIS3过表达组细胞增殖能力显著降低(P<0.05;P<0.01);与同时间点(24、48或72 h)DIS3-siRNA阴性对照组比较,DIS3-siRNA组细胞增殖能力均显著增加(P<0.01)。qRT-PCR和Western blot检测显示,与DIS3过表达-空载体组比较,DIS3过表达组细胞中PCNA的mRNA及蛋白表达量均显著降低(P<0.01);而与DIS3-siRNA阴性对照组比较,DIS3-siRNA组细胞中PCNA的mRNA及蛋白表达量均显著升高(P<0.01)。结论:过表达DIS3能显著降低3株人骨髓瘤细胞的增殖能力,这可能与降低PCNA的表达密切相关。

缺血/再灌注心肌肌浆网肌钙调控蛋白mRNA表达的变化

目的:研究缺血/再灌注损伤心肌肌浆网四种钙调控蛋白mRNA表达的变化。方法:将SD大鼠分为正常对照组和缺血/再灌注损伤组,采用Langendorff离体灌流技术,全心停灌15 min后行45 min复灌制备缺血/再灌注模型,记录心脏收缩功能各项参数(左室发展压、+dp/dt-max-、dp/dt-max),进行心律失常评分,同时对两组心肌标本进行半定量RT-PCR检测,测定SERCA、PLBI、P3R2和RyR2四种蛋白质的mRNA表达水平的变化。结果:与正常对照组比较,各时间点缺血再灌注心脏左室发展压、+dp/dt-max-、dp/dt-max均显著下降,再灌注阶段的心律失常评分明显增高,同时发现心脏SERCA,IP3R2,RyR2mRNA表达降低,然而PLB mRNA表达未出现变化。结论:缺血再灌注损伤造成心脏功能减退,心律失常增多,并可诱导心室肌钙调控蛋白SERCAI、P3R2、RyR2mRNA表达下调。

大蒜素对大鼠溃疡性结肠炎淋巴细胞凋亡及其调控蛋白的影响

目的:通过观察大鼠溃疡性结肠炎淋巴细胞凋亡及其调控蛋白Bcl-2和Bax的表达及大蒜素对其的影响,探讨大蒜素(Allitridi,Alt)对溃疡性结肠炎肠黏膜的保护作用及其机制.方法:用三硝基苯磺酸(TNBS)建立大鼠溃疡性结肠炎模型.将动物随机分为空白对照组(Normalgroup)、三硝基苯磺酸组(TNBSgroup)、三硝基苯磺酸+生理盐水组(TNBS+NSgroup)、三硝基苯磺酸+大蒜素组(TNBS+Altgroup)四组.利用DNA缺口末端标记技术(TUNEL法)和Bcl-2、Bax蛋白免疫组化染色,分别检测溃疡性结肠炎大鼠肠组织中的淋巴细胞凋亡和淋巴细胞Bcl-2和Bax的表达,生化检测一氧化氮(NO)含量,并观察肠道大体形态和组织学改变.结果:和三硝基苯磺酸组相比,三硝基苯磺酸+大蒜素组中淋巴细胞凋亡增加(2.1±1.0vs5.9±2.0,P<0.01),Bcl-2表达阳性淋巴细胞减少及一氧化氮(NO)含量下降(10.0±2.5vs31.0±6.0,197±11vs523±40,P<0.01).损伤指数明显下降(1.6±0.5vs5.8±0.7,2.1±0.6vs6.1±0.6,P<0.01).结论:大蒜素可以通过促进淋巴细胞凋亡和清除NO自由基而对TNBS诱导的溃疡性结肠炎肠黏膜有保护作用.

杀香鱼假单胞菌Ⅲ型分泌系统转录调控蛋白ExsA突变株的构建及其对大黄鱼的毒力特征分析

杀香鱼假单胞菌是大黄鱼内脏白点病的致病菌,感染该菌常会导致养殖大黄鱼很高的死亡率和严重的经济损失。病原株NB2011编码典型的Ⅲ型分泌系统,可能是该菌重要的毒力因子,ExsA是控制此分泌系统表达的重要调控蛋白。为确认ExsA在NB2011致病过程中的作用,开发有效疫苗,实验采用双交换同源重组法构建了ExsA内部序列被卡那霉素基因替换的突变株,检测突变株与野生株对鼠巨噬细胞J774的黏附、内化和胞内增殖特性,并比较对大黄鱼的毒力变化,同时,通过透射电子显微镜观察人工感染后大黄鱼内脏组织的病理变化。研究表明,巨噬细胞对突变株的内化率降低,内化的细菌在12 h内被清除,野生株在内化后虽然一段时间内数量稍有下降,12~24 h期间数量急剧上升;突变株对大黄鱼的96 h LD_(50)为2.59×10~7/mL,比野生株高数百倍;电镜切片中未观察到组织内有菌体的存在,表明突变株的毒力明显减弱,可以作为弱毒疫苗的开发对象。

IBDV感染鸡免疫器官淋巴细胞中细胞凋亡调控蛋白的动态表达

用鸡传染性腔上囊病病毒(IBDV)SNJ93株、BC6/85株、B87株感染SPF鸡后观察免疫器官淋巴细胞中Bcl 2和Bax蛋白的分布定位和动态变化。结果,B87株接种组的腔上囊、脾、胸腺淋巴细胞中这两种蛋白在各检测时间均为阴性反应;SNJ93与BC6/85攻毒组胸腺淋巴细胞中这两种蛋白呈现阴性反应,SNJ93攻毒组腔上囊和脾淋巴细胞在48h即开始出现Bcl 2和Bax阳性反应,腔上囊淋巴细胞内这两种蛋白在感染后72、96、120h呈现明显的强阳性反应,以后开始降低,脾淋巴细胞中这两种蛋白在感染后72、96h出现强阳性反应;BC6/85攻毒组腔上囊淋巴细胞中只在96、120h出现阳性反应,脾淋巴细胞中只在96h呈现阳性反应。用免疫组化法检测Bax和Bcl 2,有可能为IBDV毒力划分增添新的依据。

尖锐湿疣患者外周血淋巴细胞凋亡调控蛋白的表达和血清中白细胞介素2水平的研究

为研究尖锐湿疣 (CA)患者外周血淋巴细胞 (PBL C)凋亡调控蛋白表达水平和血清中白介素 2 (IL- 2 )水平在 CA免疫发病机制中的作用。采用流式细胞仪及间接免疫荧光素标记法和 EL ISA法 ,检测了 6 0例不同病程 CA患者PBL C凋亡调控蛋白 Fas/Fas- L 的表达水平和血清中 IL- 2水平。发现 CA短病程组 PBL C的 Fas、Fas- L 表达水平均明显高于健康对照组 (P<0 .0 5 ) ,而 CA长病程组 PBL C的 Fas、Fas- L 表达水平明显高于 CA短病程组 (P<0 .0 5 )和健康对照组 (P<0 .0 1) ,短、长病程组 CA患者血清 IL- 2的水平明显低于健康对照组 (P<0 .0 1) ,CA患者 PBL C Fas/Fas-L 表达水平与血清中 IL- 2的水平呈负相关 (P<0 .0 1)。结果表明 :CA患者 PBL C有凋亡异常 ,并且与血清中 IL- 2的水平呈负相关 ,患者 PBL C凋亡异常在