耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)重组亚单位疫苗FnBPA的免疫保护作用研究

目的评价耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)候选疫苗抗原FnBPA活性片段的免疫原性以及其在抵抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染中的免疫保护作用。方法构建pGEX-6p-2-FnBPA表达载体,经可溶表达及亲和纯化后的重组蛋白免疫Balb/c小鼠。末次免疫后的第7天,分离免疫小鼠的血清ELISA检测IgG及其亚型抗体水平,同时测定体外抗体介导的调理吞噬作用。末次免疫后的第14天,经尾静脉感染ATCC国际标准株MRSA-252,统计分析感染后各组的小鼠的生存率以及检测脾脏,肾脏的细菌定植量。结果成功构建、表达及纯化了FnBPA活性片段,重组蛋白纯度可达90%;免疫后诱导小鼠机体产生了高效价的IgG抗体,并在体外能发挥抗体介导的调理吞噬作用;在感染保护评价实验中,与对照组相比,实验组的生存率显著提高(P<0.01),并显著降低了脾脏与肾脏的细菌定植量(P<0.05)。结论耐甲氧西林金黄色葡萄球菌重组亚单位疫苗FnBPA具有良好的免疫原性和免疫保护作用,可以作为MRSA疫苗研究的重要候选抗原。

金黄色葡萄球菌IsdA的B细胞免疫显性表位的鉴定及免疫保护效果的评价

目的系统筛选鉴定金黄色葡萄球菌Isd A的B细胞免疫显性表位,并评价其免疫保护效果。方法采用氨基酸步移策略,合成18 mer氨基酸重叠肽段。ELISA系统筛选鉴定Isd A的B细胞免疫显性表位肽段。免疫显性表位肽与KLH偶联后免疫Balb/c小鼠。分离免疫小鼠血清,ELISA检测免疫显性表位肽诱导的Ig G抗体水平,并测定表位肽诱导产生抗体所介导的调理吞噬作用。末次免疫后2周,经尾静脉感染S.aureus Newman,监测感染攻毒后各组的小鼠的生存率以及检测主要靶器官肾脏的细菌定植量。结果 Isd A49-66aa、Isd A91-108aa、Isd A217-234aa、Isd A259-276aa均能与Isd A抗血清产生强烈Ig G抗体反应。抗Isd A49-66aa、抗Isd A91-108aa、抗Isd A217-234aa和抗Isd A259-276aa血清均能与重组的Isd A产生较强的抗原抗体反应。与Alum组相比,免疫Isd A49-66aa、Isd A91-108aa、Isd A217-234aa、Isd A259-276aa后血清中的抗体能够显著增强抗体介导的中性粒细胞的调理吞噬作用(P<0.05),同时均显著提高了小鼠的生存率,并在感染后的第3天均显著降低肾脏的细菌定植(P<0.05)。结论成功鉴定出Isd A49-66aa、Isd A91-108aa、Isd A217-234aa、Isd A259-276aa为Isd A的B细胞免疫显性表位,显性表位肽Isd A49-66aa、Isd A91-108aa、Isd A217-234aa、Isd A259-276aa具有良好的免疫原性和免疫保护作用,可以作为金葡菌疫苗研究的重要候选表位疫苗组分。

空肠弯曲菌PEB1的B细胞免疫优势表位的鉴定及保护效果的评价

目的利用表位预测分析技术筛选空肠弯曲菌(C. jejuni)黏附蛋白PEB1的B细胞免疫优势表位,并评价其免疫保护效果。方法采用氨基酸步移策略,合成18 mer氨基酸重叠肽段。ELISA系统筛选鉴定PEB1的B细胞免疫优势表位。采用KLH偶联免疫优势表位肽免疫BALB/c小鼠,ELISA测定优势表位肽诱导的IgG抗体效价。末次免疫后7 d,经口灌胃感染C. jejuni 11168,在感染后的28 d,定量检测感染攻毒后各组小鼠的空肠组织C. jejuni的定植量以及q RT-PCR技术检测炎性细胞因子TNF-α的相对表达水平。通过HL-60细胞调理吞噬实验测定表位肽诱导产生抗体所介导的调理吞噬杀伤功能。免疫B细胞缺失小鼠,感染攻毒后检测肠组织C. jejuni的定植量。结果 PEB155-72aa、PEB197-114aa、PEB1211-228aa均能与PEB1抗血清产生强烈IgG抗体反应。抗PEB155-72aa、抗PEB197-114aa和PEB1211-228aa血清均能与重组的PEB1产生较强的抗原抗体反应。与CFA/IFA组相比,免疫PEB155-72aa、PEB197-114aa、PEB1211-228aa后血清中的抗体能够显著增强抗体介导的HL-60细胞的调理吞噬作用(P <0. 01),均显著降低C. jejuni在空肠组织中的定植量,同时也均显著降低炎性细胞因子TNF-α的相对表达水平(P <0. 01)。PEB155-72aa-KLH+CFA/IFA组,PEB197-114aa-KLH+CFA/IFA组,PEB1211-228aa-KLH+CFA/IFA组中,免疫B cell Knock out(B细胞缺失)小鼠攻毒后,C. jejuni在空肠组织中的定植量均显著高于WT(野生型)小鼠的定植量(P <0. 01)。结论成功鉴定出3个具有良好免疫原性和免疫保护作用的优势B细胞抗原表位(PEB155-72aa、PEB197-114aa、PEB1211-228aa),可用于C. jejuni疫苗的后续开发研究。