调节因子X1在胃癌组织中的表达及其对胃癌细胞侵袭的影响

目的检测调节因子X1（RFXl）在胃癌组织中的表达情况，并探讨其对胃癌细胞侵袭能力的影响。方法60例胃癌及癌旁胃黏膜组织标本来自2012年3一10月在郑州大学附属肿瘤医院普通外科进行治疗的胃癌患者的手术标本：胃癌SGC7901细胞株为郑州大学附属肿瘤医院中心实验室保存。免疫组织化学法检测RFXl在胃癌及癌旁胃黏膜组织中的表达，同时分析RFXl表达与胃癌患者临床病理因素的关系。将表达RFXl的质粒转染胃癌细胞SGC7901，再通过Transwell侵袭实验检测转染细胞侵袭能力的改变：采用Westernblot法检测胃癌细胞中细胞外信号调节激酶（ERK）的表达水平。结果RFXl在60例胃癌及癌旁胃黏膜组织中的阳性表达率分别为31．7％（19／60）和55．0％（33／60），差异有统计学意义（P=0．010）。胃癌组织中RFXl的阳性表达与患者的淋巴结转移和TNM分期有关，RFXl低表达者更易发生淋巴结转移（P=0．020），TNM分期更晚（P=0．042）。Transwell侵袭实验显示，RFXl转染的胃癌细胞，其透膜细胞数为17．7±3．1，显著低于对照组的35．0±2．0（P=0．013）。Westernblot结果显示，胃癌细胞转染RFXl后，磷酸化ERK蛋白表达水平下调。结论RFXl可抑制胃癌细胞的侵袭转移，可能是一种抑癌基因。

转录因子RFX1上调FZD2促进乳腺癌增殖、侵袭和转移

目的探讨转录调节因子X1(RFX1)在乳腺癌中的表达及功能,探索其在乳腺癌中的调控机制。方法通过实时荧光定量PCR检测乳腺癌及配对乳腺癌旁组织中RFX1的相对表达量;通过生物信息学、染色质免疫沉淀技术(ChIP)和荧光素酶实验验证转录因子RFX1的靶基因;通过Western blot、CCK8、Transwell和划痕实验明确RFX1对乳腺癌增殖、侵袭、转移和上皮-间质转化(EMT)的影响。结果RFX1在乳腺癌组织中的表达高于癌旁正常组织(P<0.01),其表达水平与乳腺癌分期、类型和淋巴结转移状态有关(P<0.01)。体外实验结果表明RFX1促进乳腺癌细胞的增殖、迁移、转移和EMT过程,差异具有统计学意义(P<0.05)。生物信息学方法预测RFX1靶向调控FZD2,过表达RFX1使FZD2启动子区转录活性增强(P<0.01)。挽救实验提示外源性下调RFX1后乳腺癌细胞的增殖、侵袭、迁移和上皮-间质转化被FZD2逆转,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论RFX1通过上调FZD2促进乳腺癌细胞的增殖、侵袭和转移。这一发现为乳腺癌的治疗提供了新的思路和靶点。

慢病毒介导的调节因子XⅠ过表达及其对胶质瘤细胞增殖的抑制作用

目的:构建调节因子X1(regulatory factor X1,RFX1)过表达慢病毒载体,并观察其对F98细胞增殖的影响。方法:运用PCR技术扩增RFX1,并将其插入慢病毒空载体质粒p ITA,构建p ITA-RFX1慢病毒质粒,经琼脂糖凝胶电泳和测序鉴定正确。将包装慢病毒共转染293T细胞,然后感染F98细胞。利用Western印迹和激光共聚焦验证RFX1过表达情况,用流式细胞仪和CCK-8试剂盒观察转染前后细胞增殖情况。结果:电泳和测序显示慢病毒载体p ITA-RFX1构建成功,将其感染F98细胞后过表达RFX1蛋白,同时可以明显抑制细胞的增殖。结论:过表达慢病毒载体构建成功,上调RFX1可以降低恶性胶质瘤细胞的增殖。

NFY和RFX1对人PNRC启动子的调控作用

探讨核因子Y(nuclear factor Y,NFY)和调节因子X1(regulatory factors that bind to the X box,RFX1)对人PNRC(proline-rich nuclear receptor coactivator)基因的调控作用及机制.根据凝胶电泳迁移率变化实验,分析NFY和RFX1与PNRC启动子区域的结合.将含有NFY和RFX1的真核表达质粒(pCMV-NFY,pCMV-RFX1)和含有PNRC启动子的荧光素酶报告基因质粒共转染HepG2细胞,检测转染细胞的荧光素酶活性,并用RT-PCR和Western印迹检测PNRC的表达情况.Quick-Change法对PNRC启动子区NFY和RFX1结合位点进行突变,将包含突变点的重组荧光素酶报告质粒与含有NFY和RFX1的真核表达质粒共同转染HepG2细胞,检测各组荧光素酶活性.结果发现,NFY和RFX1能与PNRC启动子区域特异性结合;转染pCMV-NFY和pCMV-RFX1可抑制PNRC启动子活性并下调PNRC在HepG2细胞中的表达;包含NFY和RFX1结合位点的突变质粒与pCMV-NFY和pCMV-RFX1共转染后,NFY和RFX1对PNRC启动子活性的抑制作用消失.以上结果提示,NFY和RFX1能调控PNRC基因的表达,其机制是与PNRC启动子区域的特异性结合位点相结合,发挥其反式抑制作用.

过表达RFX1对胶质瘤细胞增殖和侵袭的影响

目的:探讨过表达调节因子X1基因(regulatory factor X1,RFX1)对神经胶质瘤细胞株F98细胞增殖和侵袭能力的影响及其作用机制。方法:用慢病毒转染法将RFX1转染到F98细胞,构建过表达RFX1的F98细胞株(F98-RFX1组),同时设立空质粒对照组(F98-Vector组)和正常培养组(F98组)。用计数法观察过表达RFX1对各组F98细胞增殖的影响,用AnnexinV/PI染色法流式细胞术检测过表达RFX1对F98细胞凋亡的影响,用Transwell小室法检测过表达RFX1对F98细胞侵袭能力的影响。结果:成功建立过表达RFX1胶质瘤F98细胞株。过表达RFX1组胶质瘤F98细胞的增殖能力显著低于F98组[48 h:(12.08±2.17)×10~4/ml vs(23.67±4.51)×10~4/ml,P<0.05]和F98-Vector组[96 h:(8.17±0.31)×10~4/ml vs(18.58±1.18)×10~4/ml;P<0.05];过表达RFX1组细胞的凋亡水平明显上升[(21.89±2.33)%vs(3.38±1.39)%、(10.42±1.83)%,P<0.05];过表达RFX1组细胞侵袭能力显著下降[(33.3±7.99)vs(56.5±13.9)、(60.6±11.8)个,P<0.01]。结论:RFX1可以调控增殖和侵袭相关基因的表达,进而抑制胶质瘤细胞的增殖和侵袭能力、促进细胞凋亡。