丙泊酚诱导LPS刺激的树突细胞向调节性树突细胞分化的研究

①目的探讨丙泊酚(Propofol)诱导脂多糖(LPS)刺激的树突细胞(DC)向分泌白细胞介素(IL)-10的树突细胞亚群-CD11clowCD45RBhigh DC分化。②方法采用磁珠分选技术获得C57BL/6小鼠脾脏树突细胞,将提取的DC分为6个组,分别加入同体积的生理盐水(NS组),LPS 1μg/mL(L组),LPS 1μg/mL+5μg/mL丙泊酚(P1组)、LPS 1μg/mL+10μg/mL丙泊酚(P2组)、LPS 1μg/mL+20μg/mL丙泊酚(P3组)后进行培养24小时,分别用流式细胞仪检测各组细胞表面分子CD40、CD80、CD86、I-a/e的表达情况,采用ELISA法检测培养液中IL-10的含量。③结果与NS组相比,L组DC表面分子CD40、CD80、CD86和I-a/e的表达均明显增强(P<0.05),同时IL-10的分泌升高;而与L组相比,较大剂量丙泊酚能显著降低DC表面分子CD80、CD40和I-a/e的表达并增强CD86的表达及IL-10的分泌(P<0.05),且一定的剂量效应关系。④结论丙泊酚可能通过介导IL-10的分泌促进DC向CD11clowCD45RBhigh DC方向分化从而抑制早期炎症反应。

调节性树突细胞与免疫负向调控

树突状细胞（dendritic cells,DCs）是具有最强抗原提呈功能的专职抗原提呈细胞（antigen-presentingcell,APC）,由于它能高水平表达MHCⅡ类分子且高效率提呈抗原,有强大的激活CD8＋、CTL及CD4＋T辅助细胞的能力,

调节性树突细胞在肿瘤微环境中的研究进展

在恶性肿瘤微环境中，存在一类具有强大免疫抑制活性的树突状细胞（dendritic cells，DCs），称为调节性树突细胞（regulatory dendritic cells，DCreg）。这些具有负向调控的DCreg通过多种途径促进肿瘤细胞的生长，同时逐渐恶化的肿瘤微环境又会诱导产生更多的DCreg。因此，有必要探讨DCreg的性质和功能，明确其在肿瘤微环境下的发生发展机制，进而为揭示肿瘤免疫逃逸和靶向消除肿瘤提供一定的科学依据。

小鼠调节性树突状细胞分泌的外泌体诱导免疫耐受的实验研究

本研究探讨小鼠调节性树突状细胞(rDC)分泌的外泌体(regulatory exosomes,rDex)诱导免疫耐受的作用,并与正常未成熟树突状细胞的外泌体(immature exosomes,iDex)诱导免疫耐受的作用进行比较。取C57BL/6(H-2b)小鼠骨髓细胞诱导未成熟树突状细胞(iDC),TGF-β1联合IL-10诱导调节性树突状细胞(rDC),流式细胞术检测两种DC的表型。采用超速离心结合膜超滤的方法分别提取rDex和iDex。建立小鼠皮肤移植模型,以C57BL/6小鼠为供者,以BALB/c(H-2d)小鼠为受者,按对受者处理的不同实验分3组,iDex组术前7、3天受者经尾静脉注射10μg供者的iDex,rDex组术前7、3天受者经尾静脉注射10μg供者的rDex,另设PBS对照组,观察移植皮肤存活情况。通过单向混合淋巴细胞反应(MLR)观察供者及非亲缘异基因供者DBA/2对同种异基因小鼠T细胞增殖情况。结果表明:TGF-β1、IL-10可下调DC表面共刺激分子CD80、CD86、CD40的表达。移植皮片平均存活时间(MST),在对照组为7.8天,iDex组为10.7天,rDex组为18.8天;iDex组的移植皮片MST明显长于对照组(p(0.05);rDex组的移植皮片MST明显长于iDex组(p(0.01)。MLR结果证明iDex组和rDex组B/C小鼠均对C57小鼠的脾细胞产生特异性耐受,尤其是rDex组;对非亲缘异基因DBA供者的脾细胞两组仍表现出强烈的免疫应答。结论:iDex和rDex均有诱导免疫耐受的作用,且rDex作用较iDex作用好。

间充质干细胞诱导小鼠CD8α^+ CD11b^+ jagged2^(high)调节性树突状细胞的方法

目的:研究小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)体外诱导CD8α+CD11b+jagged2high调节性树突状细胞(DCregs)的方法。方法:应用4种细胞因子体外刺激BALB/c(H-2d)小鼠骨髓有核细胞(BMCs)3 d,流式细胞术(FCM)分选树突状细胞(DCs),与BMSCs共培养10 d,诱导DCregs产生。FCM分析共培养前后DCs的表型、细胞周期及Notch信号通路中Jagged1、Jagged2配体的表达变化。结果:小鼠BMSCs在体外成功诱导新型DCs转变为DCregs,其CD86、CD80、CD40、MHC-II表达均明显下降(P<0.05),而CD205、Jagged1、Jag-ged2表达均明显上升(P<0.05);细胞周期中(G2+S)期细胞增加。结论:MSC可诱导DC细胞向DCregs转化,该MSC-DCregs具有致免疫耐受性表型,增殖能力提高;MSC诱导免疫耐受的机制可能与上调DC的Jagged1和Jagged2基因表达,激活T细胞Notch信号通路相关。

调节性树突状细胞对脓毒症的调控效应及潜在问题

失控性炎症反应是严重脓毒症免疫功能紊乱的重要病理生理基础之一，控制烧（创）伤早期过度炎症反应已成为防止并发脓毒症和降低死亡率的关键。因此，对严重烧（创）伤后炎症因子及其受体过度表达进行负向调控，同时维持机体免疫反应平衡状态，已成为防治脓毒症免疫功能障碍的根本策略。为下调损伤早期过度炎症反应，人们曾对急、危、重症患者采用拮抗炎症因子的治疗策略，

调节性树突状细胞的研究进展

树突状细胞(DC)是专职抗原呈递细胞,可将特异性抗原捕获、加工、呈递给淋巴器官,特异性致敏原始T细胞。一群可诱导外周免疫抑制的树突状细胞亚群——调节性树突状细胞(DCregs),通过诱导T细胞亚群向调节性T细胞(Treg)分化和下调Th1/Th2的比值影响机体免疫状态。获取足量调节性树突状细胞进行过继治疗,可为临床自身免疫病和炎症性疾病的治疗开辟了一条新路。

调节性树突状细胞在肾移植中的应用分析

如何减少免疫抑制剂的应用是器官移植领域拟攻克的难题之一。细胞治疗被认为是替代免疫抑制剂、具有临床应用前景的有效解决方法,而调节性树突状细胞(DCreg)因其诱导免疫耐受特性受到重点关注。肾脏是实体、非免疫器官,肾移植术后受者机体和移植肾局部微环境的特殊性是否影响DCreg的应用是研究关注的焦点。本文从肾脏免疫的角度对DCreg在肾移植中的应用进行了分析。

调节性树突状细胞对白细胞介素-10缺陷小鼠结肠炎模型的治疗作用

背景:目前认为克罗恩病(CD)的主要病理机制是黏膜反应性T细胞过度增生和活化。调节性树突状细胞(DCreg)对CD4^+T细胞增殖具有强烈抑制作用。目的:探讨DCreg对病理改变与人类CD类似的白细胞介素(IL)-10缺陷小鼠结肠炎模型的治疗作用。方法:以小鼠内皮型脾脏基质细胞诱导CD117阳性骨髓来源造血前体细胞分化为DCreg.通过观察其对CD4^+T细胞增殖的抑制作用进行质控。予IL-10基因敲除小鼠腹腔注射DCreg 2×10~6/只,每周采集血清测定IL-6和肿瘤坏死因子(TNF)-α水平,第8周取肠组织行组织病理学检查和IL-6、TNF-α水平测定。结果:经DCreg治疗后,62.5%(5/8)的小鼠结肠黏膜腺体轻度增生,未见明显免疫细胞浸润.37.5%(3/8)肠道黏膜组织结构接近正常;对照组小鼠结肠黏膜腺体增生明显,伴免疫细胞浸润和成纤维细胞增生。治疗组小鼠血清和结肠黏膜组织培养上清IL-6和TNF-α水平较对照组显著降低。结论:DCreg过继回输对缓解IL-10缺陷小鼠结肠炎具有明显疗效。

小鼠骨髓来源调节性树突状细胞的体外诱导分化及鉴定

目的建立小鼠骨髓来源调节性树突状细胞(DCreg)体外诱导培养和扩增的方法,并进行生物学及功能鉴定。方法取小鼠骨髓单个核细胞(BM-MNCs),用重组小鼠白细胞介素4(rm IL-4)及重组小鼠粒-巨噬细胞集落刺激因子(rm GM-CSF)诱导分化,第6天细胞中含大量DCreg;取部分细胞加脂多糖(LPS),继续培养2 d(第8天)分化为成熟DC(m DC)。观察培养过程中细胞形态变化,流式细胞术检测DCreg特异性表面分子CD11b和共刺激分子CD40、CD86。取小鼠脾脏分离的CD8+T细胞,随机分为3组;A、B组将细胞分别与DCreg、m DC以5∶1、10∶1、20∶1混合培养4 d,C组细胞不处理。采用CFSE标记法检测CD8+T细胞增殖情况,Real-time PCR检测CD8+T细胞免疫功能分子穿孔素(Prf1)和颗粒酶B(Gzm B)mRNA。结果新分离的BM-MNCs呈圆形,体积较小;诱导第6天细胞集落数量增多,体积增大,细胞表面突起增多,CD11b阳性细胞比例达96.1%±2.7%。与m DC相比,DCreg中CD40、CD86表达阳性率降低(P均<0.05)。与B组比较,A组细胞增殖率降低(P均<0.05);与B、C组比较,A组Prf1、Gzm B mRNA表达量降低(P均<0.05),与C组比较,B组Gzm B mRNA表达量升高(P均<0.05)。结论 rm GM-CSF联合rm IL-4可成功诱导小鼠BM-MNCs向DCreg分化,且纯度高,并具有免疫抑制功能。

IL-6对脓毒症小鼠调节性树突状细胞分化与功能影响的研究

目的:探讨IL-6对脓毒症小鼠脾脏调节性树突状细胞(DCregs)的免疫调节作用。方法:85只雄性BALB/c小鼠随机分为5组:假手术组(n=5),除不行盲肠结扎穿孔(CLP)外,其余操作同模型组;CLP组和3个IL-6治疗组(n=20)均采用CLP方法制备脓毒症模型。假手术组于手术当天处死,其余4组小鼠分别于CLP模型制作后1、2、3、4 d处死,获取脾脏DC细胞和T细胞, 3个IL-6治疗组细胞分别给予IL-6(50、100、200μg/kg)体外刺激24 h,收集DC细胞和T细胞,并进一步分离和培养DCregs(CD11c-CD45RBhigh DCregs)和CD4^+T淋巴细胞,观察各组小鼠DCregs细胞比例和DCregs分泌IL-10的变化。以假手术组CD4^+T细胞为对照组,将CLP小鼠的DCregs分别和CLP小鼠CD4^+T淋巴细胞(IL-6未刺激组)、经IL-6刺激的CLP小鼠CD4^+T淋巴细胞+IL-10抗体、经IL-6刺激的CLP小鼠CD4^+T淋巴细胞+IL-10同型对照抗体混合培养24 h,观察各组CD4^+T淋巴细胞增殖及细胞培养上清中IFN-γ、IL-4水平的变化。结果:IL-6可呈剂量依赖性促进DCregs分化及促进Dcregs分泌IL-10;IL-6还抑制了CLP小鼠CD4^+T淋巴细胞增殖和诱导Th2极化,降低CLP小鼠IL-4的水平,这一作用与IL-10的分泌相关。结论:IL-6可诱导CLP小鼠DC向调节性DC细胞亚群分化并诱导IL-10的分泌,诱导CD4^+T淋巴细胞向Th2分型,从而调节机体免疫功能。

脾脏调节性树突状细胞腹腔回输对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠视神经的保护作用及其机制

目的探讨脾脏调节性树突状细胞(CD11c^-CD45RB^high DC)腹腔回输对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠视神经的保护作用及其机制。方法无菌条件下制备小鼠脾脏DC,经抗CD45RB磁珠阳选获得CD45RBhigh DC,剪切掉细胞上的磁珠,再加入抗小鼠CD11c磁珠,MS磁性分离柱阴选部分即为CD11c^-CD45RB^high DC,经标染的抗CD11c单克隆抗体-别藻蓝蛋白和抗CD45RB单克隆抗体-藻红蛋白染色,上流式细胞仪鉴定。取C57BL/6小鼠50只适应性饲养7 d,随机分为对照组、模型组及低、中、高剂量组,每组10只。对照组常规饲养,不建模,模型组及低、中、高剂量组采用MOG35-55诱导EAE模型。低、中、高剂量组建模当日分别腹腔回输脾脏CD11c^-CD45RB^high DC 1×10^5、5×10^5、10×10^5个/只,对照组与模型组同期腹腔注射等量PBS。模型组及低、中、高剂量组建模当日开始,对照组同期,每日观察其神经功能并进行神经症状评分。模型组及低、中、高剂量组建模第1~3、7、15天,对照组同期,尾静脉取血,采用ELISA法检测血浆IL-6、TNF-α、IL-4,采用流式细胞仪计数CD4^+T细胞。各组末次尾静脉取血后,心脏灌注处死,自筛板后0.5 mm处取球后视神经组织,分别行HE染色和LFB染色,观察视神经组织病理学变化。结果通过磁珠分选仪获取脾脏CD11c^-CD45RB^high DC,经流式细胞仪检测,CD11c^-CD45RB^high DC纯度>85%。连续观察15 d,对照组未出现明显神经功能异常,神经症状评分均为0分。模型组及低、中、高剂量组建模第1~9天均未出现明显神经功能异常,神经症状评分均为0分;模型组建模第10、15天神经症状评分均高于低、中、高剂量组(P均<0.05),而低、中、高剂量组两两比较P均>0.05。模型组及低、中、高剂量组建模第1~3天血浆IL-6、TNF-α水平均高于对照组同期(P均<0.05);低、中、高剂量组建模第1~3天血浆IL-6、TNF-α水平均低于模型组同期,建模第2、3、7、15天CD4^+T细胞计数均低于模型组同期(P均<0.05)。建模第7、15天,低、中、高剂量组血浆IL-6、TNF-α水平与模型组、对照组同期比较P均>0.05。模型组及低、中、高剂量组建模第1~3、7、15天以及对照组同期血浆IL-4水平比较P均>0.05。建模第15天,HE染色和LFB染色可见,对照组视神经无炎症细胞浸润和脱髓鞘、液泡变性等病理改变,模型组视神经可见明显炎症细胞浸润和脱髓鞘、液泡变性等病理改变,而低、中、高剂量组视神经炎症细胞浸润和脱髓鞘、液泡变性等病理改变较模型组视神经明显减轻,尤其以高剂量组最为明显。结论脾脏CD11c^-CD45RB^high DC腹腔回输可能通过抑制促炎症细胞因子分泌,减少CD4^+T细胞浸润,纠正Th1/Th2细胞平衡紊乱,从而减轻EAE小鼠视神经免疫损伤。

调节性树突状细胞的获取途径及其诱导免疫耐受的临床应用

树突状细胞(DCs)是体内作用最强的抗原提呈细胞,具有双向免疫调节功能,既可诱导免疫应答,又可诱导免疫耐受。调节性树突状细胞(DCreg)具有负向免疫调节功能,可降低T细胞的免疫活性,诱导免疫耐受。DCreg可通过不同机制经药物、细胞因子、局部微环境产生,其诱导的免疫耐受作用在器官移植、自身免疫性疾病中具有重要的临床意义。近期,DCreg的耐受性和安全性已在1型糖尿病和类风湿关节炎的临床试验中得到证实。本文就DCreg的获取途径及其诱导免疫耐受的临床应用综述如下。

间充质干细胞诱导的CD8α^+ Jagged2^(high) CD11b^(high)调节性树突状细胞防治小鼠aGVHD

目的:观察间充质干细胞诱导的CD8α+Jagged2highCD11bhigh调节性树突状细胞(MSC-DCregs),对小鼠急性移植物抗宿主病(a GVHD)的影响。方法:体外诱导MSC-DCregs。以C57BL/6(H-2b)小鼠为供鼠、接受清髓性全身照射(TBI)预处理的BALB/c(H-2d)小鼠为受鼠进行移植。分为以下5组:为正常对照组;TBI组;移植组:移植物为1×107骨髓细胞(BMCs);a GVHD组:移植物为1×107BMCs+1×107脾细胞(Sp Cs);MSC-DCregs组:移植物为1×107BMCs+1×107Sp Cs+1×106MSC-DCregs。监测植入情况、H2-Kb嵌合率、a GVHD评分、生存和病理学改变。结果:处理1 0 d后所有小鼠造血恢复,30 d后嵌合率检测转为供鼠型。a GVHD组和MSC-DCregs组中位生存期分别为27 d和33 d,MSC-DCregs组生存期较a GVHD组延长(P<0.01),临床评分比a GVHD组低(P<0.01),33 d的皮肤、肝脏病理学改变均优于a GVHD组。结论:MSC-DCregs具有防治a GVHD的作用,其相关作用机理待进一步研究。

调节性树突状细胞与免疫耐受

树突状细胞是专职抗原递呈细胞,可以双向调节免疫反应。调节性树突状细胞是树突状细胞中具有免疫调节功能的一个群体,在维持免疫平衡,诱导免疫耐受中发挥重要作用。近年来,调节性树突状细胞在肿瘤、感染、移植耐受及免疫性疾病的发病机制与治疗中的作用成为免疫学领域的研究热点。现就调节性树突状细胞的生物学特性、培养、诱导免疫耐受的机制及在临床中的应用予以综述。

树突状细胞分类及调节性树突状细胞获取方式的研究进展

树突状细胞(DC)虽然数量少,但其在机体免疫系统中发挥的作用却逐渐受到认可和重视。研究表明DC由不同的亚群组成,具有不同的处理抗原的能力和激活不同效应淋巴细胞等能力。其中,调节性树突状细胞(DCreg)是一群具有负向免疫调控功能的DC亚群。DCreg能够通过不同的机制诱导机体免疫耐受,在器官移植、自身免疫性疾病、肿瘤等不同领域均发挥着重要作用。但DC在体内分布广泛,且含量少,生理情况下半衰期短,建立成熟的DC培养技术,特别是如何获取足量的DCreg,是目前免疫学界研究的重要领域。本文就DC的分类和DCreg体外获取方式进行综述。

调节性DC与调节性T细胞的相互作用

近年来研究发现调节性树突状细胞(Dendritic cells,DC)能够下调免疫应答和介导外周免疫耐受,调节性DC诱导的免疫耐受与其未成熟或半成熟状态密切相关。大量研究表明调节性DC和调节性T细胞(Regulatory T cells,Treg)之间存在着复杂的双向调控:调节性DC可扩增和诱导产生Treg,还可影响Treg向局部组织和外周淋巴器官归巢;Treg则妨碍DC与非调节性T细胞的结合并抑制DC的活化、成熟和刺激T细胞增殖的能力。总之,调节性DC与Treg相互协同以精细调控机体的免疫应答。

调节性免疫细胞在异种移植免疫中的作用

异种移植是未来解决器官短缺最有前景的方法。近年来基因编辑和免疫学技术的进步推动了异种移植的快速发展,但是异种移植的临床应用仍然存在诸多难以克服的障碍,其中排斥反应是引起异种移植失败的最重要原因。调节性免疫细胞是机体内一群具有负性调节功能的免疫细胞,能够抑制同种异体移植排斥反应,延长移植物的存活时间。本文总结了近几年调节性免疫细胞在异种移植应用的研究进展,为异种移植排斥反应预防和治疗提供参考。

树突状细胞体内回输对烫伤小鼠过度炎症反应的调控作用

目的:观察树突状细胞(DCs)与调节性树突状细胞(CD11c^(low)CD45RB^(high)DCs)体内回输对烫伤所致腹腔炎症反应的影响。方法:采用15%体表面积Ⅲ度烫伤[(99.0±0.5℃)沸水中8 s]小鼠模型。伤后即刻腹腔注射林格液(1 ml/只)抗休克治疗(烫伤组,n=21)或者腹腔注射加入自小鼠脾脏分离纯化而得DCs(10~6/ml,DCs组,n=21)或CD11c^(low)CD45RB^(high)DCs(10~6/ml,CD11c^(low)CD45RB^(high)DCs组,n=21)的林格液(1 ml/只)治疗。DCs和CD11c^(low)CD45RB^(high)DCs的分离纯化采用MiniMACS免疫磁性分离系统进行;应用流式细胞术检测DC表型表达及各组小鼠腹腔液中炎症因子水平。结果:CD11c^(low)CD45RB^(high)DCs组小鼠伤后12、24、48 h腹腔液IL-6含量分别为(296.57±11.40)、(152.89±6.03)、(53.18±3.25)pg/ml,DCs组则分别为(602.44±20.64)、(304.35±9.46)、(118.30±8.90)pg/ml,均明显低于烫伤组[分别为(896.21±24.63)、(451.74±13.22)、(199.02±7.83)pg/ml,P<0.01]。同时,CD11c^(low)CD45RB^(high)DCs组腹腔液MCP-1含量[分别为(1 308.40±87.90)、(472.00±29.37)、(61.29±5.20)pg/ml]、DCs组MCP-1含量[分别为(1 708.36±103.22)、(789.23±49.02)、(86.33±6.11)pg/ml]均较烫伤组明显降低[分别为(2 019.59±129.66)、(1 067.90±65.88)、(152.87±14.28)pg/ml,P<0.01]。与烫伤组伤后12、24、48 h腹腔液TNF-α[分别为(81.63±6.02)、(54.74±4.01)、(29.45±2.51)pg/ml]比较,CD11c^(low)CD45RB^(high)DCs组和DCs组小鼠腹腔液TNF-α水平显著下降(P<0.01)。并且CD11c^(low)CD45RB^(high)DCs组腹腔液中MCP-1、IL-6和TNF-α含量较同时相DCs组下降幅度更为明显(P<0.01)。结论:自身存在的CD11c^(low)CD45RB^(high)DCs和DCs具有抑制烫伤小鼠过度炎症反应的作用。