卡介菌多糖核酸注射液辅助ALA-PDT治疗尖锐湿疣疗效及对患者血清LTN TGF-β1免疫功能细胞周期调节通路的影响

目的探讨卡介菌多糖核酸注射液辅助5-盐酸氨酮戊酸光动力疗法治疗尖锐湿疣患者的疗效和安全性,以及对血清淋巴细胞趋化因子、转化生长因子β1水平、免疫功能、细胞周期调节通路有丝分裂抑制因子p16、G1/S-特异性周期蛋白-D1、人视网膜母细胞瘤抑制蛋白pRb表达的影响.方法将60例尖锐湿疣患者按简单随机化分组法分为两组,每组30例,均予以5-盐酸氨酮戊酸光动力疗法治疗,观察组在此基础上予以卡介菌多糖核酸注射液治疗8周,治疗后观察1a.比较两组治愈率、复发率,治疗前后检测两组血清淋巴细胞趋化因子、转化生长因子β、全血CD3^+、CD4^+、CD8^+、CD4^+/CD8^+水平及细胞周期调节通路有丝分裂抑制因子p16、G1/S-特异性周期蛋白-D1、人视网膜母细胞瘤抑制蛋白pRb表达,随时记录治疗后出现的不良反应.结果(1)观察组治愈率(96.7%)显著高于对照组(73.3%),复发率(3.3%)显著低于对照组(26.7%)(P<0.05).(2)治疗后两组血清淋巴细胞趋化因子、转化生长因子β1及CD3^+、CD4^+、CD4^+/CD8^+水平较治疗前显著升高(P<0.01),观察组各项指标显著高于对照组(P<0.05或0.01);两组有丝分裂抑制因子p16、人视网膜母细胞瘤抑制蛋白pRb表达均较治疗前显著升高(P<0.01),观察组显著高于对照组(P<0.01),两组全血CD8^+水平、G1/S-特异性周期蛋白-D1表达均较治疗前显著降低(P<0.01),观察组显著低于对照组(P<0.01).(3)观察组不良反应发生率(6.7%)与对照组(3.3%)比较差异无统计学意义(P>0.05).结论卡介菌多糖核酸注射液辅助5-盐酸氨酮戊酸光动力疗法治疗尖锐湿疣患者具有协同增效作用,可提高治愈率,减少疾病复发,增强患者免疫功能,安全性高,下调G1/S-特异性周期蛋白-D1表达,上调有丝分裂抑制因子p16、人视网膜母细胞瘤抑制蛋白pRb、淋巴细胞趋化因子、转化生长因子β1表达可能是其发挥疗效的作用机制.

基于JAK/STAT-SOCS负反馈调节通路探讨电针远端腧穴对CSR大鼠的镇痛机制

目的:基于JAK/STAT-SOCS负反馈调节通路探讨电针远端腧穴对CSR大鼠镇痛机制的影响。方法:SPF级Wistar大鼠按随机数字表分为空白组、模型组、电针组,每组各20只。采用手术方法将尼龙渔线放至大鼠C6-7、T1神经根腋下复制CSR模型(空白组除外)。电针组大鼠造模后第3天开始电针双侧合谷、太冲穴,每天1次,每次20min。治疗后对3组大鼠采用YLS-3E型痛分析仪测量机械性痛阈,运用Real-TimePCR法检测CSR大鼠脊髓及神经组织SOCS1、SOCS3mRNA的表达,用ELISA法检测IL-1β、IL-6含量。结果:造模后模型组及电针组大鼠的痛阈值较空白组下降(P<0.05);治疗后电针组大鼠的痛阈值较模型升高(P<0.05)。模型组与空白组比较,SOCS1、SOCS3的mRNA含量显著升高(P<0.05);IL-1β、IL-6含量显著升高(P<0.05)。电针组与模型组比较,SOCS1、SOCS3的mRNA含量显著升高(P<0.05);IL-1β、IL-6含量显著降低(P<0.05)。结论:电针远端腧穴对CSR大鼠具有镇痛作用,电针通过上调JAK-STAT信号通路中相关负反馈调节因子SOCS1、SOCS3mRNA,进而减少炎症细胞因子的释放可能是其实现镇痛效应的机制之一。

牙周重建生物功能与调节通路关键基因的筛选

背景:在牙周重建组织工程学中,包含基因众多且无法通过生物实验逐一验证。借助生物信息学手段,整合分析相关基因,构建牙周重建相关的级联调控通路,从而找到开启牙周重建的关键基因。目的:文章以分析牙周重建生物过程和调节机制为着眼点,旨在筛选出牙周重建过程中关键性的启动基因,为牙周重建治疗寻找理想的基因靶点。方法:(1)采用GO功能注释体系,对参与牙周重建的干细胞分化、骨组织改建以及牙周软组织形成功能的基因做整合分析,找出各功能交集基因;(2)集成TRANSFAC、TarBase、TransmiR、miRTarBase及miRecords数据库,建立"牙周重建相关的级联调控通路",将牙周重建生物学过程内的所有基因映射到调控网络内,用广度优先算法将这一子网内的所有线性通路挖掘出来,找出调控上游基因。结果与结论:(1)干细胞分化、成骨细胞分化/成骨细胞增殖以及成纤维细胞增殖3种生物功能的交集基因是CDK6和SFRP1;(2)级联调控通路中,可以作为上游调控牙周重建的关键基因有3个一级基因:骨形态发生蛋白7、PAX2和SMAD3,有2个二级基因:RUNX2和JUN,有2个3级基因:ESR1和GNAS;上游起始基因多包含在成骨细胞分化/成骨细胞增殖功能过程中;(3)结果证实:SFRP1,骨形态发生蛋白7,PAX2,SMAD3,RUNX2,JUN,ESR1,GNAS基因在牙周重建过程中起关键作用。牙周重建过程极有可能开始于骨组织改建,包括成骨细胞分化和成骨细胞增殖,接下来是成纤维细胞增殖。

中风活心软胶囊通过靶向微小RNA-126诱导缺氧诱导因子-1α/促凋亡调节蛋白BNIP3信号通路促进自噬减轻脑缺血再灌注损伤大鼠神经损伤的作用机制研究

目的探讨中风活心软胶囊通过靶向微小RNA(miRNA)-126诱导缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)/促凋亡调节蛋白BNIP3信号通路促进自噬减轻脑缺血再灌注损伤大鼠神经损伤的作用机制。方法选取30只无特定病原体(SPF)级雄性SD大鼠,随机分为空白组、模型组与治疗组,每组10只。采用Zea Longa法建立右侧大脑中动脉缺血(MCAO)大鼠模型。治疗组给予中风活心软胶囊。采用改良神经功能损害评分(mNSS)评估大鼠神经功能缺损情况,透射电镜观察缺血半暗区皮质神经元及自噬囊泡超微结构,蛋白质免疫印迹(WB)法和实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)法分别检测缺血半暗区皮质雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、HIF-1α蛋白及其mRNA和miR-126的表达水平。结果模型组、治疗组mNSS评分均高于对照组,但治疗组低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组、治疗组缺血半暗区皮质mTOR、HIF-1α蛋白表达水平均高于对照组,但治疗组低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组、治疗组缺血半暗区皮质mTOR、HIF-1αmRNA表达水平均高于对照组,miR-126表达水平低于对照组,但治疗组mTOR、HIF-1αmRNA表达水平低于模型组,miR-126表达水平高于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗组缺血半暗区皮质神经元及电镜下自噬囊泡数量明显增加,细胞结构损坏减轻。结论中风活心软胶囊可显著提高脑缺血大鼠缺血半暗区皮质mTOR、HIF-1α因子表达,其作用机制可能是通过激活miR-126表达进而靶向调控mTOR/HIF-1α信号通路,促进自噬,从而发挥其脑保护效应。

二甲双胍调节MEK/ERK通路及基质金属蛋白酶在恶性肿瘤中应用的研究进展

二甲双胍是目前治疗2型糖尿病的一线用药,其通过改善胰岛素抵抗、抑制肝脏糖异生等途径降低血糖。近年发现,二甲双胍还可通过促分裂原活化的蛋白激酶激酶/胞外信号调节激酶信号通路以及基质金属蛋白酶诱导细胞周期停滞、促进细胞凋亡、抑制细胞侵袭迁移,并可与各种抗肿瘤药物联用发挥协同作用以抑制肿瘤进展。但目前仍缺乏二甲双胍可以抑制癌症患者病情进展的研究证据,未来还需要对二甲双胍在恶性肿瘤治疗中的作用及其有效性、安全性进行进一步研究。

舒芬太尼调节Ras/Raf/MEK/ERK信号通路对骨关节炎大鼠炎症反应和软骨细胞凋亡的影响

目的:探讨舒芬太尼(Suf)调节Ras/Raf/丝裂原激活蛋白激酶激酶(MEK)/细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路对骨关节炎(OA)大鼠炎症反应和软骨细胞凋亡的影响。方法:SD大鼠分为正常对照组(NC组)、空白对照组(Blank组)、低剂量Suf组(Suf-L组,1μg/kg)、高剂量Suf组(Suf-H组,5μg/kg)、双醋瑞因(DC组,54 mg/kg)、Suf-H+ML-099(Ras/Raf/MEK/ERK通路激活剂)组(5μg/kg Suf+11.7 mg/kg ML-099),每组12只。除NC组外,其他组大鼠均采用横断大鼠右膝关节内侧半月板胫骨韧带构建OA模型,成功建模后开始给药,而NC组、Blank组大鼠需腹腔注射,而NC组、Blank组大鼠腹腔注射且灌胃等量生理盐水,每天给药1次,持续给药3周。末次给药24 h后,监测大鼠压痛阈值、热痛阈值变化;ELISA检测血清中TNF-α、IL-1β、IL-6水平;番红O-固绿染色检测软骨组织病理变化;TUNEL染色检测软骨细胞凋亡;Western blot检测软骨组织中Ras/Raf/MEK/ERK信号通路蛋白及基质金属蛋白酶13(MMP-13)蛋白表达。结果:与NC组比较,Blank组大鼠压痛阈值、热痛阈值降低(P<0.05),软骨组织病理损伤严重,TNF-α、IL-1β、IL-6水平、Mankin评分、软骨细胞凋亡率、Ras、Raf、MEK、p-ERK1/2、MMP-13蛋白表达升高(P<0.05);与Blank组比较,Suf-L组、Suf-H组、DC组对应指标变化趋势与上述相反(P<0.05);ML-099减弱了高剂量Suf对OA大鼠的影响。结论:Suf可能通过下调Ras/Raf/MEK/ERK通路抑制OA大鼠炎症和软骨细胞凋亡。

蛋白酶体20S亚基β8调控丝裂原活化蛋白激酶激酶/细胞外信号调节激酶通路对肾透明细胞癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探究蛋白酶体20S亚基β8(PSMB8)对肾透明细胞癌(ccRCC)细胞增殖、迁移和侵袭的影响,以及是否通过调控丝裂原活化蛋白激酶激酶(MEK)/细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路发挥其作用。方法采用癌症基因组图谱数据库分析ccRCC与正常组织PSMB8 mRNA的表达水平,并通过实时荧光定量PCR、Western blot和免疫组织化学染色等方法进一步检测PSMB8在ccRCC组织和细胞中的表达情况。构建稳定过表达和敲减PSMB8的细胞株,分别采用CCK-8法和平板克隆实验检测细胞的增殖能力,划痕愈合实验和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭的能力。对PSMB8共表达基因进行京都基因与基因组百科全书通路富集分析,Western blot检测MEK/ERK通路相关蛋白的磷酸化水平,并加用ERK激动剂C16-PAF处理进行细胞功能学挽救实验。结果与正常组织比较,PSMB8 mRNA和蛋白在ccRCC组织中呈高表达(P均<0.001),且与临床患者的TNM分期显著相关(P<0.001);与阴性对照组比较,过表达PSMB8可以促进786-O、ACHN细胞的增殖(P=0.021,P=0.039)、迁移和侵袭(P均<0.001),敲减PSMB8可以抑制786-O、ACHN细胞的增殖(P=0.022,P=0.005)、迁移和侵袭(P均<0.001);PSMB8共表达基因通路富集分析提示其可能与丝裂原活化蛋白激酶通路相关(P<0.001);敲减PSMB8后786-O和ACHN细胞MEK1/2(P=0.017,P=0.016)、ERK1/2(P=0.010,P=0.040)蛋白磷酸化水平及ERK下游因子c-Myc(P=0.043,P=0.038)、c-Fos(P=0.025,P=0.008)和CyclinD1(P=0.006,P=0.047)转录水平均下调;与ERK激动剂C16-PAF处理组比较,敲减PSMB8+C16-PAF组明显抑制786-O、ACHN细胞的增殖(P=0.003,P=0.002)、迁移和侵袭能力(P均<0.001)。结论PSMB8通过激活MEK/ERK信号通路从而促进ccRCC细胞的增殖、迁移及侵袭。

花黄色素调节AMPK/SIRT1/NF-κB信号通路对冠心病大鼠心肌损伤的影响

目的:探讨花黄色素(SY)调控腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/沉默信息调节因子1(SIRT1)/核转录因子-κB(NF-κB)对冠心病(CHD)大鼠心肌损伤的影响。方法:将60只SD大鼠随机分为正常对照组(NC组,生理盐水)、模型组(Model组,生理盐水)、SY组(100 mg/kg SY)、EX-527组(47 mg/kg EX-527)、SY+EX-527组(100 mg/kg SY+47 mg/kg EX-527),每组12只,持续4周给予相应药物。试剂盒检测血清三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平和心肌白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平;苏木素-伊红(HE)染色法进行心肌组织病理学观察;末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)法检测心肌细胞凋亡情况;蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测心肌组织AMPK/SIRT1/NF-κB通路相关蛋白表达。结果:与NC组相比,Model组大鼠心肌细胞数量少且排列杂乱,细胞核皱缩,TC、TG、LDL-C、氧化修饰低密度脂蛋白(ox-LDL)、IL-6、TNF-α水平、心肌细胞凋亡率及NF-κB蛋白水平明显上升(P<0.05),SOD、GSH-Px水平及磷酸化-AMPK(p-AMPK)/AMPK、SIRT1蛋白水平明显下降(P<0.05)。与Model组比较,SY组大鼠心肌细胞数量增多且排列整齐有序,TC、TG、LDL-C、ox-LDL、IL-6、TNF-α水平、心肌细胞凋亡率及NF-κB蛋白水平明显下降(P<0.05),SOD、GSH-Px水平及p-AMPK/AMPK、SIRT1蛋白水平明显上升(P<0.05);而EX-527组以上指标呈现相反趋势。与SY组相比,SY+EX-527组大鼠心肌损伤加重,TC、TG、LDL-C、ox-LDL、IL-6、TNF-α水平、心肌细胞凋亡率及NF-κB蛋白水平明显上升(P<0.05),SOD、GSH-Px水平及p-AMPK/AMPK、SIRT1蛋白水平明显下降(P<0.05)。结论:SY可能通过调控AMPK/SIRT1/NF-κB通路降低氧化应激,减轻炎症反应,对冠心病大鼠心肌损伤起到一定改善作用。

汉黄芩素调节AMPK/SIRT1信号通路对骨质疏松大鼠骨折愈合的影响

目的 探究汉黄芩素(WOG)调节腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/沉默信息调节因子1(SIRT1)信号通路对骨质疏松(osteoporosis,OP)大鼠骨折愈合的影响。方法 将60只SPF级SD雌性大鼠随机分为假手术组(Sham组)、骨质疏松性骨折(OPF)模型组(Model组)、低剂量WOG组(WOG-L组,50mg/kg)、高剂量WOG组(WOG-H组,100 mg/kg)和高剂量WOG+AMPK抑制剂Compound C组(WOG-H+CC组,100 mg/kg WOG+0.2 mg/kg Compound C),每组12只。Model组、WOG-L组、WOG-H组、WOG-H+CC组采用双侧卵巢切除术与右侧股骨干骨折髓内固定术构建骨质疏松性骨折(OPF)大鼠模型。放射性检查评估骨折愈合情况。采用双能X线骨密度扫描仪检测大鼠股骨痂骨密度(BMD)。通过三点弯曲实验和压缩实验对大鼠股骨骨生物力学进行检测。比色法检测大鼠血清骨钙素(OC)、I型前胶原羧基端肽(PICP)水平。HE染色观察骨折处骨痂的病理学变化。Western blot法检测股骨组织中AMPK/SIRT1信号通路相关蛋白表达。结果 与Sham组相比,Model组大鼠骨折愈合评分、股骨上、下端骨痂BMD、骨痂最大位移、最大应力和最大负荷、血清OC、PICP水平、股骨组织中AMPK磷酸化水平、SIRT1蛋白表达显著降低(P <0.05),骨折端未见骨痂生长,骨折线清晰,骨小梁较细,数量减少,间隙增大,结构紊乱疏松。与Model组相比,WOG-H组大鼠骨折愈合评分、股骨上、下端骨痂BMD、骨痂最大位移、最大应力和最大负荷、血清OC、PICP水平、股骨组织中AMPK磷酸化水平、SIRT1蛋白表达显著升高(P <0.05),有连续性骨痂包绕贯穿于骨折端,髓腔再通,骨折线模糊不清,骨小梁形态较完整。Compound C减弱了WOG对OPF大鼠骨折愈合的促进作用。结论 WOG可能通过激活AMPK/SIRT1信号通路促进OPF大鼠的骨折愈合。

沉默信息调节因子1/叉头框蛋白O1信号通路调控铁死亡对多囊卵巢综合征大鼠卵巢颗粒细胞的影响实验研究

目的:探讨沉默信息调节因子1(SIRT1)/叉头框蛋白O1(FOXO1)信号通路调控铁死亡对多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠卵巢颗粒细胞的影响。方法:将30只雌性SD大鼠分为对照组(皮下注射豆油)和PCOS组(皮下注射脱氢表雄酮)。将对照组和PCOS组大鼠分离得到的卵巢颗粒细胞分为对照组、PCOS组,取一半PCOS组卵巢颗粒细胞为过表达SIRT1组(20μmol/L SIRT1激活剂SRT 2183干预)。RT-qPCR及Western blot检测细胞中SIRT1、FOXO1、溶质载体家族7成员11(SLC7A11)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、Bcl-2关联X蛋白(Bax)、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)mRNA及蛋白表达。Hoechst染色检测细胞活性氧(ROS)及线粒体活性氧(mtROS)水平。ELISA检测细胞中谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)、Fe^(2+)、卵泡刺激素(FSH)、睾酮(T)、黄体生成素(LH)水平。流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果:与对照组比较,PCOS组卵巢颗粒细胞中SIRT1、FOXO1、SLC7A11、GPX4、Bcl-2 mRNA及蛋白表达和GSH、FSH水平降低,Bax、Caspase-3 mRNA及蛋白表达和MDA、ROS、mtROS、Fe^(2+)、T、LH水平升高,卵巢颗粒细胞凋亡率增加(均P<0.05)。与PCOS组比较,过表达SIRT1组卵巢颗粒细胞中SIRT1、FOXO1、SLC7A11、GPX4、Bcl-2 mRNA及蛋白表达和GSH、FSH水平升高,Bax、Caspase-3 mRNA及蛋白表达和MDA、ROS、mtROS、Fe^(2+)、T、LH水平降低,卵巢颗粒细胞凋亡率减少(均P<0.05)。结论:SIRT1/FOXO1通路在PCOS卵巢颗粒细胞中下调,激活该通路可能通过下调铁死亡抑制PCOS卵巢颗粒细胞凋亡。

杨梅素调节JAK-STAT-IRF1信号通路对鼻咽癌细胞免疫逃逸的影响

目的探讨杨梅素对鼻咽癌细胞免疫逃逸的影响及对JAK-STAT-IRF1信号通路的调节作用。方法体外实验:培养人鼻咽癌CNE1细胞并分为对照组、杨梅素L组、杨梅素M组、杨梅素H组和杨梅素H+Broussonin E组,MTT法检测细胞增殖能力;Hoechst法检细胞凋亡;蛋白免疫印迹(Western blot)技术验证细胞叉头样转录因子3(Foxp3)、维甲酸相关孤核受体γt(RORγt)、磷酸化(p)-Janus激酶(JAK)1、JAK1、p-JAK2、JAK2、p-信号转导与转录激活子(STAT)1、STAT1、干扰素调节因子1(IRF1)蛋白表达。体内实验:建立BALB/c裸鼠鼻咽癌模型,随机分为模型组、杨梅素低剂量组、杨梅素中剂量组、杨梅素高剂量组和紫杉醇组,取瘤体并称重,流式细胞术检测巨噬细胞程序性死亡受体1配体(PD-L1)表达,Western blot法检测瘤体Foxp3、RORγt、p-JAK1、JAK1、p-JAK2、JAK2、p-STAT1、STAT1、IRF1蛋白表达。结果与对照组相比,杨梅素L、M、H组CNE1细胞增殖能力以及RORγt、p-JAK1/JAK1、p-JAK2/JAK2、p-STAT1/STAT1、IRF1蛋白表达降低,细胞凋亡率和Foxp3蛋白表达增加(P<0.05);与杨梅素H组相比,杨梅素H+Broussonin E组细胞增殖能力以及RORγt、p-JAK1/JAK1、p-JAK2/JAK2、p-STAT1/STAT1、IRF1蛋白表达升高,细胞凋亡率和Foxp3蛋白表达减少(P<0.05);与模型组对比,杨梅素低、中、高剂量组Foxp3蛋白表达增加,瘤体质量以及PD-L1、RORγt、p-JAK1/JAK1、p-JAK2/JAK2、p-STAT1/STAT1、IRF1蛋白表达减少(P<0.05)。结论杨梅素可能通过抑制JAK-STAT-IRF1信号通路的激活抑制鼻咽癌细胞免疫逃逸。

通络熄风汤通过调控Mst1/Sirt3信号通路对自发性高血压大鼠心肌损伤程度的影响

目的:探讨通络熄风汤改善高血压大鼠心肌损伤的作用机制。方法:6只Sprague-Dawley大鼠作为空白组,12只自发性高血压大鼠随机分为模型组和通络熄风汤组。空白组和模型组大鼠给予去离子水灌胃,通络熄风汤组给予中药配方颗粒通络熄风汤悬浮液灌胃治疗,连续干预8周。采用蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测心肌细胞中自噬受体蛋白1(SQSTM1/P62)、磷酸化哺乳动物无菌20样激酶1(p-Mst1)、沉默信息调节因子3(Sirt3)蛋白的含量,运用苏木精-伊红(HE)染色观察大鼠心肌组织结构变化,以评价通络熄风汤对高血压心肌损伤改善的效果及机制。结果:与模型组比较,通络熄风汤组能够显著改善高血压大鼠的收缩压及舒张压(P<0.01)。通络熄风汤治疗后大鼠心肌细胞与模型组比较,排列情况与坏死状态均有明显改善。通络熄风汤组大鼠心肌组织中的p-Mst1、P62蛋白含量较模型组降低(P<0.01),Sirt3蛋白含量升高(P<0.01)。结论:通络熄风汤可以介导Mst1/Sirt3信号通路对心肌组织细胞自噬水平进行调整,并且保护心脏功能。

番茄红素调节AMPK/SIRT1/NF-κB信号通路对过敏性结膜炎小鼠的治疗作用

目的基于腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/沉默信息调节因子1(SIRT1)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路探讨番茄红素(LYC)减轻过敏性结膜炎小鼠炎症的作用机制。方法利用卵清蛋白(OVA)致敏建立AC小鼠模型。将BALB/c小鼠分为正常组(NC组)、模型组(AC组)、LYC低组(5 mg/kg)、LYC中组(10 mg/kg)、LYC高组(20 mg/kg),LYC高+AMPK抑制剂(CC)组(0.2 mg/kg)。观察小鼠眼周情况,采用苏木精-伊红染色观察结膜组织病理学变化,采用流式细胞仪检测脾脏中Th17、Treg细胞比例,采用酶联免疫吸附试验试剂盒检测血清中炎症因子、免疫球蛋白(Ig)E、胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)水平,采用蛋白质印迹法检测结膜组织AMPK/SIRT1/NF-κB信号通路蛋白水平。结果与NC组比较,AC组小鼠眼部出现结膜充血、红肿、溢泪等现象,结膜组织嗜酸性粒细胞较多,Th17细胞比例、白细胞介素(IL)-17、IL-6、IgE、TSLP、磷酸化AMPK(p-AMPK)、核NF-κB p65水平升高,Treg细胞比例、IL-10、转化生长因子(TGF)-β、SIRT1水平降低(P<0.05)。与AC组比较,LYC中、高组小鼠眼部结膜充血、水肿、溢泪等明显减轻,结膜组织嗜酸性粒细胞较少,脾脏中Th17/Treg细胞比例趋向平衡,IL-17、IL-6、IgE、TSLP、核NF-κB p65水平降低,IL-10、TGF-β、p-AMPK、SIRT1水平升高(P<0.05)。CC可抵消LYC对AC小鼠的上述保护作用。结论LYC可减轻AC小鼠的过敏和炎症反应,维护机体免疫平衡,其机制可能与促进AMPK/SIRT1通路活化,抑制NF-κB通路活化有关。

基于SIRT1/NF-κB通路探究秦艽醇提物对脂多糖诱导大鼠背根神经节神经元炎性损伤的保护作用及机制

目的探讨秦艽醇提物对脂多糖诱导大鼠背根神经节神经元(DRGn)炎性损伤的保护作用及其机制。方法大鼠分为假手术组、模型组(建模)、阳性组(建模+16 mg/kg普瑞巴林)和给药组(建模+50 mg/kg秦艽醇提物),测定大鼠建模前及给药前后的机械性触痛阈值(PWPT)。制备正常大鼠血清和秦艽醇提物低、高剂量大鼠含药血清,分离培养DRGn细胞并分为对照组(10%正常大鼠血清)、脂多糖组(100 ng/ml脂多糖+10%正常大鼠血清)、秦艽醇提物低浓度组(100 ng/ml脂多糖+10%秦艽醇提物低剂量大鼠含药血清)、秦艽醇提物高浓度组(100 ng/ml脂多糖+10%秦艽醇提物高剂量大鼠含药血清)及沉默信息调节因子(SIRT)1抑制组(100 ng/ml脂多糖+10%秦艽醇提物高剂量大鼠含药血清+98 nmol/L烟酰胺)。CCK-8测定DRGn细胞活力,流式细胞仪检测DRGn细胞凋亡,酶联免疫吸附试验(ELISA)测定DRGn细胞培养液中白细胞介素(IL)-6、IL-18、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平,Western印迹检测DRGn细胞中SIRT1、乙酰化(Ac)-核因子(NF)-κB p65、NF-κB p65蛋白表达。结果给药前模型组、给药组PWPT较建模前均显著降低(P<0.05);给药后,给药组PWPT较给药前、模型组均显著升高(P<0.05),与阳性组差异无统计学意义(P>0.05);与对照组相比,脂多糖组DRGn细胞活力及细胞中SIRT1蛋白水平显著降低(P<0.05),细胞凋亡率、细胞中Ac-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白水平及细胞培养液中IL-6、IL-18、TNF-α水平显著升高(P<0.05);与脂多糖组相比,秦艽醇提物低、高浓度组DRGn细胞活力及细胞中SIRT1蛋白水平显著升高(P<0.05),细胞凋亡率、细胞中Ac-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白水平及细胞培养液中IL-6、IL-18、TNF-α水平显著降低(P<0.05),且呈剂量依赖性;与秦艽醇提物低、高浓度组相比,SIRT1抑制组DRGn细胞活力及细胞中SIRT1蛋白水平显著降低(P<0.05),细胞凋亡率、细胞中Ac-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白水平及细胞培养液中IL-6、IL-18、TNF-α水平显著升高(P<0.05)。结论秦艽醇提物可激活SIRT1,促进NF-κB p65去乙酰化,减轻脂多糖诱导大鼠DRGn细胞炎性损伤。

异钩藤碱对大鼠急性胰腺炎细胞的炎症和凋亡改善及ERK信号通路调控作用

目的观察异钩藤碱(LSO)对大鼠急性胰腺炎(AP)细胞炎症和凋亡改善及ERK信号通路调控作用。方法将AR42J细胞分为6组,对照组正常培养,模型组、LSO组、抑制剂组、LSO+抑制剂组、LSO+激活剂组加入100 nmol/L雨蛙素制备AP细胞模型,LSO组制模后加入40μmol/L LSO,抑制剂组制模后加入10μmol/L U0126,LSO+抑制剂组制模后加入40μmol/L LSO和10μmol/L U0126,LSO+激活剂组制模后加入40μmol/L LSO和0.1μmol/L C16-PAF。采用ELISA法、EdU法及Hoechst 33258染色法分别测定细胞培养液中的炎症因子(TNF-α、IL-6、IL-8、IL-1β)、细胞增殖率和凋亡率,qPCR法测定细胞中NLRP3、斑点样蛋白(ASC)、半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)mRNA,WB法测定细胞中ERK 1/2、p-ERK 1/2、NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白。结果与对照组比较,模型组细胞TNF-α、IL-6、IL-8、IL-1β、凋亡率、p-ERK 1/2蛋白及NLRP3、ASC、Caspase-1 mRNA和蛋白升高,增殖率降低(P均<0.05);与模型组比较,LSO组、抑制剂组细胞炎症因子(TNF-α、IL-6、IL-8、IL-1β)、凋亡率、p-ERK 1/2蛋白及NLRP3、ASC、Caspase-1 mRNA和蛋白降低,增殖率升高(P均<0.05);与LSO组比较,LSO+抑制剂组中U0126增强了LSO对细胞上述指标趋势的作用,而LSO+激活剂组中C16-PAF则逆转了LSO对细胞上述指标趋势的作用(P均<0.05)。结论LSO对大鼠急性胰腺炎细胞的炎症和凋亡有改善作用,可能通过调控ERK信号通路来实现。

动物食欲调节的中枢信号通路

下丘脑是动物食欲调节的中枢,外周食欲信号在下丘脑中经食欲调节网络整合,产生饱感或饥饿。其中,以5'-磷酸腺苷激活的蛋白激酶(AMPK)调控位点上的AMPK-ACC-CPT1和UCP2-FOXO1-pCREB信号通路以及雷帕霉素靶蛋白(mTOR)调控位点上的PI3K-Akt-mTOR和mTOR-4EBP1/p70S6K-NPY/AgRP信号通路尤为重要。AMPK和mTOR在AMPK-TSC-mTOR通路、固醇类调节因子绑定蛋白(SREBP)基因表达和吞噬启动激酶(Ulk1)活性通路上存在互作。外周营养和能量信号传输到下丘脑后,经过这些网络的传输和分析,作用于下丘脑中的食欲相关肽,最终调控动物的采食行为。

Mfn2通过Ras-Raf-ERK1/2信号通路抑制ARDS肺纤维化及其机制

目的探讨线粒体融合蛋白(Mfn)2通过细胞外信号调节激酶(Ras-Raf-ERK)1/2信号通路抑制急性呼吸窘迫综合征(ARDS)肺纤维化及其机制。方法离体培养人胚肺成纤维细胞(HELF),给予脂多糖(LPS)刺激建立ARDS细胞模型,构建腺病毒重组体Adv-Mfn21-264-GFP、Adv-Mfn2265-757-GFP、Adv-Mfn21-757-GFP,分别转染HELF,使其分别过表达Mfn2的N端GTP酶结构域(aa1-264)、C端跨膜区(aa265-757)及Mfn2的全长氨基酸残基(aa1-757),将细胞分为:Control组、Adv-vector组、LPS组、Adv-Mfn21-264-GFP组、Adv-Mfn2265-757-GFP组、Adv-Mfn21-757-GFP组;噻唑蓝(MTT)法观察各组HELF细胞增殖情况,并检测细胞内胶原蛋白的表达情况,Western印迹及实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测Ras信号通路Ras、Raf-1及ERK1/2的表达。结果Control组与Adv-vector组细胞增殖水平无明显差异(P>0.05);与Control组比较,LPS组第2、3、4、5、6天细胞增殖水平均明显增加(P<0.01);转染不同Mfn2基因片段后,与LPS组比较,Adv-Mfn21-264-GFP组、Adv-Mfn2265-757-GFP组、Adv-Mfn21-757-GFP组肺成纤维细胞增生受到抑制,细胞增殖水平明显下降(P<0.01);且LPS组较Control组细胞内胶原蛋白含量明显增加,Adv-Mfn21-264-GFP组、Adv-Mfn2265-757-GFP组、Adv-Mfn21-757-GFP组较LPS组细胞内胶原蛋白含量明显减少(均P<0.01);Western印迹及RT-PCR检测结果显示,与Control组比较,LPS组Ras、Raf-1、ERK1/2蛋白及基因表达明显增加,而转染不同Mfn2基因片段腺病毒后,与LPS组比较,Adv-Mfn21-264-GFP组、Adv-Mfn2265-757-GFP组、Adv-Mfn21-757-GFP组Ras、Raf-1、ERK1/2蛋白及基因表达明显下调(均P<0.05)。结论Mfn2可能通过N端GTP酶结构域、C端跨膜区调控Ras-Raf-ERK1/2信号通路影响成纤维细胞异常增殖抑制ARDS肺纤维化。

基于FXR-Srebp1c-FAS通路及CD36探讨祛痰活血方抗非酒精性脂肪性肝病的机制

目的 以内源性脂肪酸合成相关法尼醇X受体(farnesoid X receptor,FXR)-固醇调节元件结合蛋白-1c(sterol regulatory element-bindingprotein-1c,Srebp1c)-脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,FAS)通路及外源性脂肪酸摄入相关的白细胞分化抗原36(cluster of differentiation 36,CD36)为切入点,探讨祛痰活血方抗非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)的分子机制。方法 雄性C57BL/6J小鼠,随机分为对照组、模型组、祛痰活血方组和易善复组,每组各10只。模型组、祛痰活血方组和易善复组给予高脂饲料喂养,4周后祛痰活血方组和易善复组开始给药干预,给药8周后取各组小鼠血清用于生化检测;肝组织用于病理、肝脏总胆固醇(cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)含量及FXR、Srebp1c、FAS、CD36基因及蛋白表达的检测。结果 与对照组比较,模型组小鼠体质量、肝质量明显增加(P<0.05);肝组织病理结果及肝脏TC、TG含量的升高(P<0.01)均提示明显脂肪变性;肝组织FXR、Srebp1c的m RNA表达水平,以及CD36的m RNA和蛋白表达均明显上升(P<0.01),FAS蛋白表达下降(P<0.05);与模型组比较,祛痰活血组小鼠体质量、肝质量均明显降低(P<0.01);肝组织脂肪变性明显减轻;肝组织中FXR m RNA表达明显升高(P<0.01),Srebp1c、FAS、CD36的m RNA及蛋白表达均明显降低(P<0.05)。结论 外源性脂肪酸摄入增加可能是高脂引起的NAFLD的主要成因,祛痰活血方既抑制外源性脂肪酸摄入,亦减少内源性脂肪酸合成,双向调节改善NAFLD。

基于ERK/NF-κB通路探讨苦杏仁苷对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、侵袭、迁移的影响

目的探讨苦杏仁苷对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、侵袭、迁移及细胞外信号调节激酶(ERK)/核因子(NF)-κB通路的影响。方法将乳腺癌MDA-MB-231细胞随机分成对照组、紫杉醇组(10μg/ml)、苦杏仁苷低剂量组(20μg/ml)、苦杏仁苷高剂量组(40μg/ml);以上各组每孔设6个平行样,培养72 h。实验结束后,噻唑蓝(MTT)法测定乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖水平,Transwell小室测定乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭迁移水平,实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)及Western印迹法测定乳腺癌MDA-MB-231细胞ERK、NF-κB mRNA和蛋白表达水平。结果与对照组比较,紫杉醇组、苦杏仁苷低、高剂量组光密度(OD)值、细胞存活率、穿膜数、ERK、NF-κB mRNA和蛋白表达水平显著降低(P<0.05);与紫杉醇组比较,苦杏仁苷低剂量组上述指标显著升高(P<0.05),苦杏仁苷高剂量组上述指标无显著差异(P>0.05);与苦杏仁苷低剂量组比较,苦杏仁苷高剂量组上述指标显著降低(P<0.05)。结论苦杏仁苷能明显抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、侵袭、迁移,其机制可能与苦杏仁苷抑制ERK、NF-κB mRNA和蛋白表达进而抑制ERK/NF-κB通路的激活有关。

麻黄细辛附子汤对过敏性鼻炎小鼠神经通路的影响

目的:探索麻黄细辛附子汤(MXFD)及其拆方对过敏性鼻炎(AR)的作用机制,明确其是否通过2型固有淋巴样细胞(ILC2s)上的神经通路神经调节肽U(NMU)/神经调节肽U受体1(NMUR1)发挥抗过敏作用。方法:C57BL/6J小鼠分别按单味药、两味药、三味药组合给药分为7组,使用鸡卵清蛋白(OVA)制备AR模型,造模成功后给予不同组合的中药灌胃治疗14 d。过敏反应行为学评分法评价模型是否成功;免疫荧光双染法检测肺组织中活化T细胞核因子2(NFAT2)的含量;逆转录实时定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测肺组织中神经调节肽U受体1(NMUR1)的基因表达水平。结果:小鼠造模成功,各组NFAT2、NMUR1基因的表达水平均升高(均P<0.01)。中药治疗后,给药各组过敏反应行为学评分均降低(均P<0.01);NFAT2表达均降低(均P<0.01),麻黄组抑制效果最显著;除辛附组,其他组NMUR1的基因表达水平均降低(均P<0.01),麻附组、细辛组抑制效果最显著。结论:麻黄细辛附子汤可影响NMU/NMUR1通路抑制过敏性鼻炎,麻黄单用在抑制NFAT2环节效果最优,麻黄和附子合用、细辛单用抑制NMUR1表达效果最优。