乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒反式调节靶基因的抑制性消减杂交和基因芯片分析结果的比较

目的:筛选与克隆HBV和HCV蛋白反式调节靶基因,阐明HBV和HCV感染后慢性肝脏疾病的发病机制.方法:应用抑制性消减杂交(SSH)技术及表达谱基因芯片(cDNAmicroarray)技术筛选并克隆HBV和HCV蛋白反式调节的靶基因.以HBV和HCV蛋白的表达质粒转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3.1(-)为平行对照,制备转染后的细胞裂解液,提取mRNA并逆转录为cDNA,经RsaI酶切后,将实验组cDNA分成两组,分别与两种不同的接头衔接,再与对照组cDNA进行2次消减杂交及2次抑制性聚合酶链反应(PCR),将产物与T/A载体连接,构建cDNA消减文库,并转染大肠杆菌进行文库扩增,随机挑选克隆PCR扩增后进行测序及同源性分析.同时进行表达谱基因芯片技术分析.结果:成功构建人HBV和HCV蛋白反式调节基因差异表达的cDNA消减文库,对HBV和HcV蛋白反式调节的靶基因同时进行基因表达谱芯片的分析.在SSH分析中,文库扩增后均得到200-800bp插入片段.对插入片段测序,并通过生物信息学分析获得其全长基因序列.对于不同的肝炎病毒蛋白反式调节的靶基因类型,以及不同的分析技术研究的结果进行比较分析,发现了一系列的共同调节的靶基因,说明不同的肝炎病毒蛋白反式调节具有共同的作用途径.结论:筛选到的反式调节靶基因,包括一些与细胞生长调节、信号转导、肿瘤免疫发生及细胞凋亡密切相关的蛋白编码基因,推测了HBV和HCV蛋白可能存在的调控机制,有助于阐明HBV和HCV蛋白的反式调节在慢性肝脏疾病的发生发展中的作用.

应用抑制性消减杂交技术筛选双环醇调节靶基因

目的:应用抑制性消减杂交(suppression subtractive hybrid- ization,SSH)技术构建双环醇处理的人肝癌细胞系HepG2 差异表达基因的cDNA消减文库,筛选并克隆双环醇调节相关基因,阐明双环醇对肝细胞调节作用的分子生物学机制. 方法:以双环醇处理HepG2细胞,同时以二甲基硫氧化物(DMSO)处理的相同细胞系作为对照;24 h后制备细胞裂解液,提取mRNA并逆转录为cDNA,经RsaI酶切后,将实验组cDNA分成两组,分别与两种不同的接头衔接,再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性多聚酶链反应(PCR),将产物与T/A载体连接,构建cDNA消减文库, 并转染大肠杆菌进行文库扩增,随机挑选克隆PCR扩增后进行测序及同源性分析. 结果:成功构建双环醇处理HepG2细胞差异表达基因的cDNA消减文库.文库扩增后得到46个白色克隆,进行菌落PCR分析,均得到200-1000 bp插入片段.挑取含有插入片段的30个克隆进行测序,并通过生物信息学分析获得14 种已知基因序列. 结论:应用SSH技术成功构建了双环醇处理HepG2细胞差异表达基因的cDNA消减文库.该文库的建立为进一步阐明双环醇在体内的调节机制提供依据.

MicroRNA-766-3p靶向调控SIRT6抑制肝癌进展的实验研究

目的:探究miR-766-3p是否可通过调节靶基因SIRT6影响肝细胞癌(HCC)的发生与发展进程。方法:RT-PCR及Western blot检测miR-766-3p及SIRT6在HCC组织及癌旁组织中的表达;CCK-8、流式凋亡检测技术、划痕实验及Trans well小室检测miR-766-3p/SIRT6对HCC细胞生长、凋亡、转移及侵袭能力的影响;荧光报告基因实验及western blot技术检测miR-766-3p对SIRT6表达的影响。结果:miR-766-3p在HCC组织中低表达,而SIRT6高表达。过表达miR-766-3p通过与SIRT6的3’UTR区结合降低SIRT6的表达。上调miR-766-3p明显抑制HepG2细胞增殖、转移及侵袭能力,促进细胞凋亡;但SIRT6过表达后终止miR-766-3p的以上作用。结论:miR-766-3p通过靶向负调控SIRT6的表达抑制HCC进展。

PPP1R3基因多态性与中国汉族人群2型糖尿病的相关性研究

目的 旨在研究 1型蛋白磷酸酶骨骼肌特异的糖原靶向调节亚单位基因 (PPP1R3)Asp90 5Tyr以及 3′ -UTR5bpD/I多态性与安徽省汉人群的 2型糖尿病 (T2DM )相关性。方法 运用PCR -RFLP法对安徽省合肥地区 36 6例汉族受试者 (T2DM患者 2 6 2例 ,健康成人 10 4例 )进行基因型测定。结果 (1)PPP1R3基因Asp90 5Tyr以及 3′ -UTR 5bpD/I多态性的基因型及等位基因频率在T2DM与健康对照组间分布均没有显著性差异 (P >0 .0 5 )。 (2 )PPP1R3基因Asp90 5Tyr以及3′ -UTR 5bpD/I多态性间呈连锁不平衡 ,其分布频率在不同人群中不尽相同。结论 PPP1R3基因Asp90 5Tyr以及 3′ -UTR 5bpD/I多态性可能在安徽省合肥地区 2型糖尿病发病中不起重要作用。两种多态性的分布表现明显的种族性。

PPP1R3基因Asp905Tyr多态性与安徽汉族人2型糖尿病相关性研究

目的研究 1型蛋白磷酸酶骨骼肌特异的糖原靶向调节亚单位基因 (PPP1R3) Asp90 5 Tyr多态性与安徽汉族人 2型糖尿病 (T2 DM)相关性。方法选取安徽省合肥地区汉族 T2 DM患者 2 6 2例 ,健康成人 10 4例 ,运用聚合酶链反应限制性酶切片段长度多态性技术 (PCR- RFL P)进行基因型测定。以体质指数 (BMI) 2 5为分割点 ,将病例组和对照组进行分层分析。结果 1PPP1R3基因 Asp90 5 Tyr多态性与安徽汉族人 2型糖尿病没有明显的相关性。 2以 BMI<2 5基因型Tyr/ Tyr组为参照组 ,BMI≥ 2 5携有 Asp90 5等位基因个体的糖尿病发病风险明显增加 (OR=3.6 9;95 % CI:1.38～ 8.89;P=0 .0 0 6 )。结论 PPP1R3基因 Asp 90 5 Tyr多态性可能不是安徽省汉族人 2型糖尿病主要的致病因素。肥胖与 Asp90 5等位基因间的交互作用可增加糖尿病的发病风险。

微小RNA-92与恶性肿瘤关系的研究进展

微小RNA（miRNAs）是一类内源性的高度保守的非编码蛋白质的单链小分子RNA。它们通过与靶基因结合,在转录后水平导致靶mRNA的翻译抑制或降解,调节靶基因的表达^（[1]）。微小RNA-92（miR-92）是近年来发现的一种新型miRNA,含有22个核苷酸，定位于人染色体13q31．3。

microRNA-145在肿瘤中的作用

microRNA（miRNAs）是一类非编码蛋白质的单链小RNA，由内源基因编码，主要功能是负性调节靶基因的表达。目前发现microRNA多定位于肿瘤相关的脆性位点，与肿瘤的发生密切相关。miR-145是近年来新发现的一类具有肿瘤抑制作用的microR-NA，可以靶向多个肿瘤相关基因，参与肿瘤生长、转移侵袭和肿瘤血管生成。并且，miR-145可以调控细胞重新编程基因OCT4、SOX2、KLF4和C-MYC的表达，由于这些基因也具有癌基因的特性，因此miR-145在肿瘤干细胞中的作用也受到关注。本文就miR-145在肿瘤中的这些作用进行综述。

雄激素在心血管疾病中作用的相关信号通路

雄激素作为男性最重要的类固醇激素，对心血管疾病的病理生理过程有重要的意义，其作用多通过雄激素受体（androgenreceptor，AR）起作用。既往关于雄激素对心血管疾病作用机制的研究主要集中于雄激素与AR结合后作为转录因子参与核内基因的转录过程，调节靶基因的表达，即雄激素的基因作用”[2]。近年来大量研究发现，雄激素还可以通过非基因作用影响细胞的生长、分化、增殖、凋亡，进而参与心血管疾病的调节旧。。本文主要就雄激素作用对心血管系统的基因作用和非基因作用可能涉及的信号转导通路做一综述。

心血管疾病标志物的新秀:循环microRNA

心血管疾病是西方国家患病率和病死率第一位的疾病。现在已有证据证实microRNAs(miRNA)是调节包括心血管疾病在内的许多疾病的关键调节因子。最近发现,通过不同的载体,miRNA可以传输至细胞外,这一发现再次激起了国内外学者的研究热情,通过检测循环中的miRNA可以提供疾病诊断及治疗的信息。与传统的生物标志物相比,循环miRNA有显著的优越性,这种存在于细胞外的miRNA已被证明能在循环血液中稳定存在,因此检测循环血液中的miRNA成为可能。尽管部分miRNA精确的细胞来源还不十分确定,但前期的研究已经证明了miRNA能作用于受体细胞,并调节靶基因的转录并影响蛋白的合成。许多miRNA的表达是细胞或组织特异性的,而它们的表达水平也与相应组织或细胞的病理或生理过程有关,异常的表达反应了机体的病理状态。因此循环miRNA作为一种新的疾病标志物得到了越来越多的重视。在正常人和肿瘤等疾病患者体内循环miRNA的表达谱存在明显的差异,因次,循环miRNA很可能成为诊断疾病的非侵入的、准确的新型生物标志物,有广阔的前景。本综述将首先讨论循环miRNA,作为存在于细胞外的核酸,在循环血液中是如何稳定存在并发挥调节作用的。其次总结循环miRNA作为新型标志物在心血管及相关领域的最新进展,包括:心肌梗死[1],心力衰竭[2],动脉粥样硬化[3]和高血压[4]等。

微小RNA与内分泌肿瘤

微小RNA（microRNA,miRNA）是一种能够调节蛋白质编码基因的非编码RNA.成熟的miRNA长度约22个核苷酸,在动植物中均有表达,通过与靶mRNA的3′非翻译区（3′-untranslated region）互补结合,降解靶mRNA或抑制其翻译,在转录后水平调节靶基因的表达,从而参与调控细胞生长、干细胞分化、发育时序、信号转导等重要的生物学过程,许多人类肿瘤的发生、发展和预后都与miRNA的异常缺失、突变或过表达密切相关.现将miRNA与内分泌肿瘤的最新研究进展综述如下.

RNA结合蛋白HuR的研究进展

RNA结合蛋白HuR是胚胎致死异常视觉（ELAV）基因家族中的成员,又被称为类胚胎致死性异常视觉基因1（ELAV1）。ELAV家族目前已鉴定的成员包括HuR、HuB、HuC与HuD 4种,它们在细胞中主要通过基因的转录后调控机制来调节靶基因的表达,

骨肉瘤中cyclinD1和p53蛋白的表达及其意义

骨肉瘤是原发恶性骨肿瘤,青少年多见,男性略多于女性,临床表现为疼痛、肿块、功能障碍、病理性骨折、贫血等,多采取手术切除结合放化疗治疗,但复发率和转移率均较高,预后差,死亡率高[1],早期诊断及治疗具有重要意义。骨肉瘤发生机制可能与多种基因同时改变有关,cyclinD1蛋白能够调节细胞周期,p53蛋白调节靶基因的转录,抑制细胞增殖,两种蛋白在骨肉瘤细胞增殖、迁移过程中发挥着积极的不可替代的作用。

丙型肝炎

原卟啉钠抑制丙型肝炎病毒的体外实验研究，干扰素刺激基因ISG20真核表达载体的构建及其抗丙型肝炎病毒复制作用的研究，抗-HCV阳性反应血清的HCV核酸检测分析，聚乙二醇干扰素α-2b联合利巴韦林治疗慢性丙型肝炎的病毒学应答，丙型肝炎病毒F反式调节靶基因反式激活基因的筛选和生物信息学分析。

PPP1R3基因多态性与 2型糖尿病相关性研究(英文)

目的 应用病例对照分析法对骨骼肌糖原相关蛋白磷酸酶 1的糖原靶调节亚单位基因多态性与 2型糖尿病相关性进行研究。方法 应用寡核苷酸连接测定技术和直接电泳的方法 ,对该基因的Asp90 5Tyr和 3’非翻译区ARE多态性位点基因型进行了测定。结果 BMI 2 5携带Asp90 5等位基因组能增加 2型糖尿病的危险 (OR =3 6 6 ;95 %CI:1 4 8- 9 0 6 ) ;ARE多态性与 2型糖尿病未见相关 (OR =1 15 ;95 %CI:0 6 2 - 2 14)。结论 Asp90 5协同肥胖增加 2型糖尿病的危险。在中国人群中 ,该基因的Asp90 5Tyr和ARE多态性不是致糖尿病基因主要的变异。

PPP1R3基因3′端非翻译区5 bp缺失/插入多态性与2型糖尿病相关性研究

目的 研究 1型蛋白磷酸酶骨骼肌特异糖原靶向调节亚单位 (PPP1R3)基因 3′-非翻译区 5 bp缺失 /插入 (deletion/insertion,D/I)多态性与 2型糖尿病 (type 2 diabetes,T2 DM)的相关性。方法 选取安徽省合肥地区汉族 T2 DM患者 2 6 8例 ,正常对照 10 6名 ,用聚合酶链反应扩增片段长度多态性技术进行基因型测定。结果 (1) PPP1R3基因 3′-非翻译区 5 bp D/I多态性的基因型及等位基因频率在 T2 DM与正常对照组间分布差异无显著性 (P>0 .0 5 )。(2 ) T2 DM或正常对照组中不同基因型间发病年龄、病程、空腹血糖、餐后 2 h血糖、空腹胰岛素、胰岛素敏感指数、体重指数、腰臀围比、收缩压、舒张压差异均无显著性 (P>0 .0 5 )。(3) PPP1R3基因 3′-非翻译区 5 bp D/I多态性频率与日本人群和加拿大人群相近。明显低于 Pima印第安人、瑞典的白人。结论 PPP1R3基因 3′-非翻译区 5 bp D/I多态性与安徽省合肥地区 2型糖尿病发病无明显关联 ,具有明显的种族差异。

PPP1R3基因Asp905Tyr多态性与安徽省汉族人群2型糖尿病相关性研究

目的 研究1型蛋白磷酸酶的骨骼肌特异糖原靶向调节亚单位基因(PPP1R3)Asp905Tyr多态性与安徽省汉族人群2型糖尿病相关性。方法 选取安徽省合肥地区汉族2型糖尿病患者262例,健康成人104名,运用聚合酶链反应限制性片段长度多态性技术(PCR-RFLP)进行基因型测定。以体重指数(BMI)25kl/m^2为分割点,将病例组和对照组进行分层分析。结果 PPP1R3基因Asp905Tyr多态性与安徽省汉族人群2型糖尿病没有明显的相关性;以BMI<25kg/m^2基因型Tyr/Tyr组为参照组,BMI≥25kg/m^2携有Asp 905等位基因个体的糖尿病发病风险明显增加(OR=3.69,95％CI:1.38～8.89,P=0.006)。结论 PPP1R3基因Asp 905Tyr多态性可能不是安徽省汉族人群2型糖尿病主要的致病因素。肥胖与Asp905等位基因间的交互作用可增加糖尿病的发病风险。

microRNA表达谱在动脉粥样硬化脑梗死调控中的研究进展

microRNA是一类由内源基因编码的广泛存在于真核细胞中的长21～ 25个核苷酸的小分子非编码核糖核酸,其与靶基因特定结合后,可能通过脱腺苷化诱导靶mRNA降解、抑制蛋白翻译的起始或多肽链的延长、降解新生的蛋白等方式调节靶基因的作用.这种复杂的调节网络既可以通过一个miRNA来调控多个基因的表达,也可以通过几个miRNAs的组合来精细调控某个基因的表达.miRNA的表达模式具有分化的位相性和时序性,即不同组织器官及生理时相miRNA表达谱均会有所不同.

miRNA及其在职业医学中的研究进展

miRNA是内源性非编码小RNA家族成员之一，长度约为22个核苷酸，广泛存在于植物、动物体。它通过与靶基因的结合来抑制mRNA的翻译或诱导其降解从而调节靶基因的表达，在细胞的增殖、分化、凋亡、个体的生长发育以及疾病的发生和发展中发挥着重要作用。