调衡方抗荷瘤小鼠Lewis肺癌转移的实验研究

探讨了调衡方对小鼠Lewis肺癌自发性肺转移的作用及其机制.将传代培养的Lewis肺癌细胞接种于C57BL小鼠右腋皮下建立Lewis肺癌模型,灌胃给药12d后观察肺表面转移率;常规石蜡切片HE染色,观察肺内转移灶的数量和大小;并采用免疫组化等方法检测肺组织中CD4^+、CD8^+T细胞量及血清中恶性肿瘤特异性生长因子(tumor specific growth factor,TSGF)的水平.结果显示调衡方在25、50g/kg剂量下,可增加荷瘤小鼠肺组织中CD4^+、CD8^+ T细胞量,对外周血中TSGF的水平及瘤块的增长有显著地抑制作用.研究结果显示调衡方通过抑制小鼠外周血TSGF的水平及增加CD4^+、CD8^+ T细胞量,从而抑制肿瘤细胞的侵袭转移.

调衡方对Lewis肺癌荷瘤小鼠免疫功能调节的实验研究

目的:研究调衡方对小鼠Lewis肺癌自发性肺转移的作用并探讨其作用机制.方法:将传代培养的Lewis肺癌细胞接种于C57BL小鼠右腋皮下建立Lewis肺癌模型;灌胃给药12 d后观察瘤组织中淋巴细胞与瘤细胞形态学的变化;常规石蜡切片HE染色.观察瘤组织癌细胞形态的变化;免疫组化法检测瘤组织中CD4+,CD8+的表达水平及其血清IL-2的活性.结果:调衡中、大剂量组可见瘤组织Lewis肺癌细胞大量坏死和凋亡,荷瘤对照组对肿瘤细胞形态无明显影响;调衡中剂量组和调衡大剂量组瘤组织中CD4+与CD8+表达均增多,而阳性组、调衡小剂组、热休克组则主要是CD8+表达升高.调衡方在25 g/kg剂量下,对Lewis肺癌荷瘤小鼠外周血IL-2活性水平有显著地增强作用.结论:调衡方对Lewis肺癌荷瘤小鼠的抑瘤作用机制可能与增强小鼠外周血IL-2的活性有关及增强CD4+,CD8+的表达水平,从而阻止了肿瘤细胞的侵袭转移.

调衡方多糖增强体外培养巨噬细胞的吞噬能力

目的研究调衡方多糖对巨噬细胞吞噬功能的影响,探讨其多糖对巨噬细胞吞噬作用的免疫调节机制。方法依照中药多糖的制备方法从调衡方中提取粗多糖;从小鼠腹腔分离提取并培养巨噬细胞;(500、200、10)μg/m L调衡方多糖处理巨噬细胞48 h,光学显微镜下观察活细胞的形态,墨汁吞噬实验以及金黄色葡萄球菌吞噬实验观察巨噬细胞的吞噬能力,酶细胞化学染色观察巨噬细胞胞内酸性磷酸酶的变化。结果与对照组比较,(500、200、10)μg/m L调衡方多糖处理巨噬细胞后,巨噬细胞体积显著增大,对墨汁和金黄色葡萄球菌的吞噬能力均显著提高,酸性磷酸酶的活性也明显增强,并与多糖浓度呈正相关。结论调衡方多糖能增强巨噬细胞的吞噬功能,并提高细胞内酸性磷酸酶的活性。

调衡方联合TP方案治疗晚期非小细胞肺癌临床研究

目的:观察调衡方联合TP方案治疗晚期非小细胞肺癌的疗效。方法:100例晚期非小细胞肺癌患者随机分为治疗组50例和对照组50例,治疗组采用调衡方联合TP方案治疗,对照组单用TP方案治疗,疗程均为2周期。观察两组治疗后近期疗效、T细胞免疫功能和毒副反应的发生情况。结果:两组患者在T细胞免疫功能、毒副反应发生方面具有显著性差异(P<0.05)。结论:调衡方联合TP方案治疗晚期非小细胞肺癌可以明显改善患者T细胞免疫功能,减低TP方案的毒副反应,提高治疗效果和患者的生活质量。

中药调衡方对S_(180)与H_(22)荷瘤小鼠TNF与LAK细胞活性的影响

目的:研究调衡Ⅰ、Ⅱ号对S180与H22荷瘤小鼠抑瘤作用的免疫机制。方法:建立小鼠S180与H22实体瘤模型,用酶标仪检测S180与H22荷瘤小鼠外周血TNF(肿瘤坏死因子)及LAK细胞(淋巴因子激活杀伤细胞)的活性水平。结果:调衡Ⅰ、Ⅱ号方在31.5g/kg、42g/kg剂量下,对S180与H22荷瘤小鼠外周血TNF与LAK细胞活性水平有显著地增强作用。结论:调衡Ⅰ、Ⅱ号对S180与H22荷瘤小鼠的抑瘤作用机制可能与提高小鼠外周血TNF与LAK细胞的活性有关。

调衡方多糖对Lewis肺癌荷瘤体红细胞免疫功能的影响

目的观察调衡方多糖对Lewis肺癌荷瘤小鼠红细胞补体受体1(CR1)功能及活性的影响,探讨该方多糖对荷瘤体红细胞作用的免疫调节机制。方法按照常规法在小鼠右腋皮下接种Lewis肺癌细胞,建立转移性肺癌模型;灌胃给药8d后,次日检测调衡方多糖对瘤体及脾脏、胸腺指数的影响;用红细胞免疫花环实验观察血液中红细胞免疫黏附肿瘤细胞的能力;红细胞免疫复合物花环实验观察荷瘤小鼠红细胞C3b受体的活性;比色法测定荷瘤小鼠红细胞膜唾液酸含量。结果调衡方多糖既可提高脾脏、胸腺指数及抑瘤作用,又可提升荷瘤小鼠红细胞免疫花环率;使荷瘤小鼠红细胞的活性与CR1受体的数量、荷瘤小鼠红细胞膜唾液酸含量增加。结论提示调衡方多糖发挥抑瘤与免疫调节作用的机制可能与其提升Lewis肺癌荷瘤小鼠红细胞膜上唾液酸的量有关,进而使CR1的数量与活性增加,使红细胞的黏附功能增强。

调衡方多糖佐助的树突状细胞肿瘤疫苗增强S180荷瘤小鼠免疫功能并抑制肿瘤生长

目的研究S180荷瘤小鼠经调衡方多糖(ThPP)佐助的树突状细胞(DC)疫苗的免疫治疗作用及其机制。方法获取小鼠骨髓源性细胞体外培养,经细胞因子与ThPP佐助为成熟的DC,观察ThPP对DC表面的CD80与CD86表达的影响。再以S180瘤细胞作为抗原刺激DC使其成为DC肿瘤疫苗。将S180瘤细胞接种小鼠左前肢腋窝使成荷瘤模型,并按体质量将小鼠分为荷瘤空白组、环磷酰胺阳性对照组、ThPP与肿瘤坏死因子α(TNF-α)佐助的DC疫苗组,对荷瘤小鼠分别治疗于接种瘤细胞后第5天与第10天。于第12天处死荷瘤小鼠,称质量并观察抑瘤情况,分离培养腹腔巨噬细胞及免疫组织化学染色法测其CD11b、白细胞介素12(IL-12)的表达;用ELISA检测小鼠血清IL-12、TNF-α的水平;另外设置的4组荷瘤小鼠,按相同方法治疗后观察生存期。结果TNF-α组、ThPP组中的CD80、CD86表达量均高于空白对照组,ThPP组较明显。与荷瘤空白组比较,ThPP组、TNF-α组、阳性对照组的抑瘤率与生存期均显著延长。ThPP组小鼠血清IL-12、TNF-α水平高于环磷酰胺阳性对照组和荷瘤空白组,与TNF-α组类似。ThPP组巨噬细胞的CD11b表达量低于荷瘤空白组与环磷酰胺阳性对照组,而ThPP组巨噬细胞的IL-12表达量高于荷瘤空白组与环磷酰胺阳性对照组,与TNF-α组类似。结论ThPP佐助的DC肿瘤疫苗能抑制S180荷瘤小鼠的肿瘤生长,延长其生存期,与促进DC成熟增加IL-12、TNF-α分泌有关。

调衡方对Lewis肺癌荷瘤体巨噬细胞吞噬功能的影响

目的研究调衡方对Lewis肺癌荷瘤小鼠巨噬细胞形态、数量及活性的影响,探讨调衡方对荷瘤体巨噬细胞作用的免疫调节机制。方法将传代培养的Lewis肺癌细胞接种于小鼠右腋皮下建转移肺癌模型;灌胃给药8 d后,从小鼠腹腔分离抽取巨噬细胞并培养;调衡方各组巨噬细胞培养48 h后,在显微镜下观察活细胞的形态,墨汁吞噬试验以及金葡菌吞噬试验观察巨噬细胞的吞噬能力,细胞酶化学染色观察巨噬细胞胞内酸性磷酸酶的变化,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测各培养组M?上清中IL-1、IL-6、TNF-α表达水平。结果调衡方小、中、大剂量各组巨噬细胞培养48 h后,与对照组比较,巨噬细胞体积显著增大,对墨汁和金葡菌的吞噬能力均显著提升,酸性磷酸酶的活性也明显增强,且能抑制炎性因子IL-1、IL-6、TNF-α分泌,这均与给药浓度呈正相关。结论调衡方能增强巨噬细胞的吞噬功能,进而提高胞内酸性磷酸酶等的活性,通过抑制巨噬细胞分泌炎性因子(IL-1、IL-6、TNF-α)有控制巨噬细胞向M2型极化的可能,并减轻肿瘤浸润程度,降低肿瘤发展及转移,而发挥抗肿瘤免疫调节的作用。

调衡方治疗子宫肌瘤临床疗效观察

目的探讨调衡方治疗子宫肌瘤的临床疗效。方法给予调衡方加减(山药、莪术、生黄芪、西洋参、天花粉、生鸡内金、天冬、水蛭等)水煎剂,1剂/d,早晚空腹各服1次,每次200 mL。月经干净后3 d开始服用,每月连服15剂,经期停服。1个月经周期为1个疗程。共治疗3个月经周期。治疗前后B超检查判断疗效。结果共治疗108例子宫肌瘤患者,总有效率达92.59%,其中治愈率36.11%,显效率33.33%,有效率23.15%。结论调衡方治疗单发性子宫肌瘤能提高机体免疫力,抑制肿瘤细胞增殖而起到治疗作用。

调衡方多糖对巨噬细胞免疫调节作用及信号通路影响

目的研究调衡方多糖(Tiaoheng prescription polysaccharides,ThPPs)对巨噬细胞的调节作用及相关信号通路的影响,探讨其调节机体免疫的作用机制。方法获取小鼠腹腔巨噬细胞(macrophage,Mφ)并体外培养,随机分为空白对照组,LPS模型组(1μg·mL^(-1)),ThPPs小剂量(50μg·mL^(-1))、中剂量(150μg·mL^(-1))、大剂量(250μg·mL^(-1))组。干预24 h后收集细胞,采用CCK-8法考察其增殖活性;采用格里斯试剂法(Griess)检测细胞上清液中一氧化氮(NO)的分泌量;用免疫组化法测巨噬细胞表面白介素-12(IL-12)的表达量;采用实时荧光定量PCR测定Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(MyD88)、核因子-κB(NF-κB)、肿瘤坏死因子受体相关因子-6(TRAF-6)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的mRNA表达情况。Western blotting法检测TLR4、NF-κB、TNF-α的蛋白表达情况。结果ThPPs中、高剂量组与空白组比较,可显著增强Mφ对NO、IL-12分泌的功能(P<0.01);Real-time PCR与免疫印迹法显示ThPPs中、高剂量组与空白组比较,可显著上调TLR4、TNF-α、NF-κB、MyD88与TRAF-6的基因表达及TLR4、TNF-α、NF-κB的蛋白表达(P<0.01)。结论实验结果显示ThPPs可增强Mφ对NO、IL-12分泌的功能,上调TLR4、TNF-α、NF-κB、MyD88与TRAF-6的基因表达及TLR4、TNF-α、NF-κB的蛋白表达,而IL-12及TNF-α又是调控辅助性T细胞(Th)及Mφ分型的关键细胞因子。ThPPs激活Mφ信号通路可能与增强Mφ对NO、IL-12分泌的功能及活化NF-κB通路有关。

调衡方对荷瘤机体实验与理论探讨研究报告

本实验从荷瘤机体"免疫监视-抑瘤-平衡系统"出发,多方面研究了调衡方对S180、H22、EAC、lewis荷瘤小鼠的抑瘤及抗转移作用,证明了该方对不同的荷瘤机体均具有抑瘤作用,可能的抑瘤机制一为直接抑制肿瘤细胞的增殖,一为通过增强荷瘤机体的免疫功能来抑制肿瘤细胞的增殖。本研究的结果不但可为研究中药抗肿瘤提供丰富的基础研究依据,而且为后续进一步研究调衡方的抗肿瘤及抗转移等方面奠定了新的思路和科学依据。

调衡方对Lewis肺癌荷瘤小鼠瘤组织与肺组织Foxp3、IL-10、TGF-β表达的影响

目的研究调衡方对Lewis肺癌荷瘤小鼠血清白细胞介素-10(IL-10)、转化生长因子-β(TGF-β)水平及瘤组织、肺脏组织中Foxp3、IL-10、TGF-β表达的影响,探讨调衡方对荷瘤体免疫抑制细胞的调节机制。方法将60只雄性C57BL/6小鼠随机分为正常组、荷瘤组、贞芪组及调衡方高、中、低剂量组,每组10只。除正常组外,其余组均将传代培养的Lewis肺癌细胞接种于小鼠右腋皮下建立肺癌模型。接种24 h后,贞芪组给予贞芪扶正胶囊41.5 g/kg灌胃,调衡方低、中、高剂量组分别给予调衡方流浸膏12.5 g/kg、25 g/kg、50 g/kg灌胃,荷瘤组给予等容量生理盐水灌胃,均1次/d,连续8 d。灌胃结束后,HE染色观察瘤组织及肺组织细胞形态,ELISA法检测血清IL-10、TGF-β水平,免疫组化法检测瘤组织及肺组织中Foxp3、IL-10、TGF-β表达情况。结果HE染色显示:荷瘤组小鼠瘤组织中瘤细胞坏死面积很小,有少量的凋亡瘤细胞;肺组织可见细胞排列混乱的肿瘤转移灶,病理性的核分裂较多,肿瘤实、间质间边缘不清。调衡方各组瘤组织中多处瘤细胞核固缩,瘤细胞胞膜皱缩不完整,瘤细胞残留坏死物随处可见,尤其是调衡方高、中剂量组明显;调衡方低剂量组肺组织可见肿瘤细胞,调衡方中、高剂量组未见明显的肿瘤细胞聚集,且调衡方高剂量组细胞排列与正常肺组织形态接近。荷瘤组血清IL-10、TGF-β水平均明显高于正常组(P均<0.05);贞芪组和调衡方各组血清IL-10、TGF-β水平均明显低于荷瘤组(P均<0.05),调衡方高剂量组均明显低于调衡方低、中剂量组(P均<0.05);调衡方各组血清IL-10水平与贞芪组比较差异均无统计学意义(P均>0.05),调衡方高剂量组血清TGF-β水平明显低于贞芪组(P<0.05)。贞芪组和调衡方各组瘤组织及肺组织中Foxp3、IL-10、TGF-β蛋白表达阳性率均明显低于荷瘤组(P均<0.05),调衡方高剂量组均明显低于调衡方低剂量组(P均<0.05)。结论调衡方可能通过下调Lewis肺癌荷瘤小鼠Foxp3、IL-10、TGF-β表达,改善肿瘤微环境中免疫抑制状况而发挥抑瘤作用。

调衡方对Lewis肺癌细胞增殖及JAK-STAT信号通路的影响

目的:观察调衡方对Lewis肺癌细胞增殖凋亡及JAK-STAT通路的影响。方法:实验动物分为4组,灌服给药,制备调衡方小、中、大剂量含药血清,正常血清。又将细胞分为5组,即正常血清组(不含药血清),小、中、大剂量含药血清组,中剂量含药血清+AG490(JAK-STAT信号通路特异性抑制剂)干预组,分别孵育Lewis肺癌细胞株24 h后,MTT法检测对Lewis肺癌细胞增殖的影响,吖啶橙染色观察Lewis肺癌细胞凋亡状况,RT-PCR法检测其对Lewis肺癌细胞Stat3、Stat5 mRNA的影响。结果:Lewis肺癌细胞经调衡方中、大剂量含药血清作用后,与对照组比较,细胞内Stat3含量降低至0.622±0.004、0.62±0.007(P<0.01),Stat5表达分别降低至0.700±0.034、0.649±0.033(P<0.01)。结论:调衡方含药血清能显著抑制Lewis肺癌细胞增殖,促进其凋亡,其机制可能与下调stat3、stat5的基因表达,抑制细胞信号转导通路有关。