调衡方多糖佐助的树突状细胞肿瘤疫苗增强S180荷瘤小鼠免疫功能并抑制肿瘤生长

目的研究S180荷瘤小鼠经调衡方多糖(ThPP)佐助的树突状细胞(DC)疫苗的免疫治疗作用及其机制。方法获取小鼠骨髓源性细胞体外培养,经细胞因子与ThPP佐助为成熟的DC,观察ThPP对DC表面的CD80与CD86表达的影响。再以S180瘤细胞作为抗原刺激DC使其成为DC肿瘤疫苗。将S180瘤细胞接种小鼠左前肢腋窝使成荷瘤模型,并按体质量将小鼠分为荷瘤空白组、环磷酰胺阳性对照组、ThPP与肿瘤坏死因子α(TNF-α)佐助的DC疫苗组,对荷瘤小鼠分别治疗于接种瘤细胞后第5天与第10天。于第12天处死荷瘤小鼠,称质量并观察抑瘤情况,分离培养腹腔巨噬细胞及免疫组织化学染色法测其CD11b、白细胞介素12(IL-12)的表达;用ELISA检测小鼠血清IL-12、TNF-α的水平;另外设置的4组荷瘤小鼠,按相同方法治疗后观察生存期。结果TNF-α组、ThPP组中的CD80、CD86表达量均高于空白对照组,ThPP组较明显。与荷瘤空白组比较,ThPP组、TNF-α组、阳性对照组的抑瘤率与生存期均显著延长。ThPP组小鼠血清IL-12、TNF-α水平高于环磷酰胺阳性对照组和荷瘤空白组,与TNF-α组类似。ThPP组巨噬细胞的CD11b表达量低于荷瘤空白组与环磷酰胺阳性对照组,而ThPP组巨噬细胞的IL-12表达量高于荷瘤空白组与环磷酰胺阳性对照组,与TNF-α组类似。结论ThPP佐助的DC肿瘤疫苗能抑制S180荷瘤小鼠的肿瘤生长,延长其生存期,与促进DC成熟增加IL-12、TNF-α分泌有关。

调衡方多糖增强体外培养巨噬细胞的吞噬能力

目的研究调衡方多糖对巨噬细胞吞噬功能的影响,探讨其多糖对巨噬细胞吞噬作用的免疫调节机制。方法依照中药多糖的制备方法从调衡方中提取粗多糖;从小鼠腹腔分离提取并培养巨噬细胞;(500、200、10)μg/m L调衡方多糖处理巨噬细胞48 h,光学显微镜下观察活细胞的形态,墨汁吞噬实验以及金黄色葡萄球菌吞噬实验观察巨噬细胞的吞噬能力,酶细胞化学染色观察巨噬细胞胞内酸性磷酸酶的变化。结果与对照组比较,(500、200、10)μg/m L调衡方多糖处理巨噬细胞后,巨噬细胞体积显著增大,对墨汁和金黄色葡萄球菌的吞噬能力均显著提高,酸性磷酸酶的活性也明显增强,并与多糖浓度呈正相关。结论调衡方多糖能增强巨噬细胞的吞噬功能,并提高细胞内酸性磷酸酶的活性。

调衡方多糖对Lewis肺癌荷瘤体红细胞免疫功能的影响

目的观察调衡方多糖对Lewis肺癌荷瘤小鼠红细胞补体受体1(CR1)功能及活性的影响,探讨该方多糖对荷瘤体红细胞作用的免疫调节机制。方法按照常规法在小鼠右腋皮下接种Lewis肺癌细胞,建立转移性肺癌模型;灌胃给药8d后,次日检测调衡方多糖对瘤体及脾脏、胸腺指数的影响;用红细胞免疫花环实验观察血液中红细胞免疫黏附肿瘤细胞的能力;红细胞免疫复合物花环实验观察荷瘤小鼠红细胞C3b受体的活性;比色法测定荷瘤小鼠红细胞膜唾液酸含量。结果调衡方多糖既可提高脾脏、胸腺指数及抑瘤作用,又可提升荷瘤小鼠红细胞免疫花环率;使荷瘤小鼠红细胞的活性与CR1受体的数量、荷瘤小鼠红细胞膜唾液酸含量增加。结论提示调衡方多糖发挥抑瘤与免疫调节作用的机制可能与其提升Lewis肺癌荷瘤小鼠红细胞膜上唾液酸的量有关,进而使CR1的数量与活性增加,使红细胞的黏附功能增强。

调衡方多糖对巨噬细胞免疫调节作用及信号通路影响

目的研究调衡方多糖(Tiaoheng prescription polysaccharides,ThPPs)对巨噬细胞的调节作用及相关信号通路的影响,探讨其调节机体免疫的作用机制。方法获取小鼠腹腔巨噬细胞(macrophage,Mφ)并体外培养,随机分为空白对照组,LPS模型组(1μg·mL^(-1)),ThPPs小剂量(50μg·mL^(-1))、中剂量(150μg·mL^(-1))、大剂量(250μg·mL^(-1))组。干预24 h后收集细胞,采用CCK-8法考察其增殖活性;采用格里斯试剂法(Griess)检测细胞上清液中一氧化氮(NO)的分泌量;用免疫组化法测巨噬细胞表面白介素-12(IL-12)的表达量;采用实时荧光定量PCR测定Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(MyD88)、核因子-κB(NF-κB)、肿瘤坏死因子受体相关因子-6(TRAF-6)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的mRNA表达情况。Western blotting法检测TLR4、NF-κB、TNF-α的蛋白表达情况。结果ThPPs中、高剂量组与空白组比较,可显著增强Mφ对NO、IL-12分泌的功能(P<0.01);Real-time PCR与免疫印迹法显示ThPPs中、高剂量组与空白组比较,可显著上调TLR4、TNF-α、NF-κB、MyD88与TRAF-6的基因表达及TLR4、TNF-α、NF-κB的蛋白表达(P<0.01)。结论实验结果显示ThPPs可增强Mφ对NO、IL-12分泌的功能,上调TLR4、TNF-α、NF-κB、MyD88与TRAF-6的基因表达及TLR4、TNF-α、NF-κB的蛋白表达,而IL-12及TNF-α又是调控辅助性T细胞(Th)及Mφ分型的关键细胞因子。ThPPs激活Mφ信号通路可能与增强Mφ对NO、IL-12分泌的功能及活化NF-κB通路有关。