谷氨酸温度敏感突变株CN1021发酵条件的研究

采用温度敏感型菌株强制发酵谷氨酸,不需要控制生物素亚适量,仅需通过物理方式(变换温度)就可完成谷氨酸生产菌由生长型细胞向产酸型细胞的转变,从而避免了因原料的影响而造成产酸不稳定的现象,发酵稳定且粗放,发酵周期短,设备利用率高.

谷氨酸温度敏感突变株的驯化及发酵条件研究

利用谷氨酸温度敏感突变株高产甘蔗糖蜜的性能,在甘蔗糖蜜浓度为80g/L的发酵培养基中进行定向驯化。试验结果表明:该驯化方法可有效地提高该菌株的产酸率和糖酸转化率,在优化的发酵条件下,L-谷氨酸的平均产量为126g/L,糖酸转化率61.24%。

响应面法优化谷氨酸温度敏感突变株生产L-谷氨酸

采用响应面分析法对谷氨酸温度敏感突变株产生谷氨酸的培养基成分进行优化。首先利用Plackett-Burman试验设计筛选出影响谷氨酸产量的三个主要因素:糖蜜,玉米浆和MgSO4。在此基础上用最陡爬坡实验逼近最大响应区域,再利用Box-Behnken试验设计及响应面分析法进行回归分析。通过求解回归方程得到最佳浓度:糖蜜30.59ml/L,玉米浆33.82ml/L,MgSO42.99g/L,谷氨酸产量理论最大值达87.68g/L。经模型验证,预测值与验证试验平均值接近,在优化条件下谷氨酸产量提高了21.5%。

L-谷氨酸温度敏感突变株的细胞融合育种及发酵条件

以黄色短杆菌为出发菌株,定向选育出具有寡霉素抗性、谷氨酸氧肟酸盐抗性的温度敏感突变株TMGO106,将其与产酸率高(10.5％)的天津短杆菌融合,得到融合子CM1021,此菌株系温度敏感突变株,可用于谷氨酸强制发酵。经培养及发酵条件优化,在6m^3发酵罐上发酵32h,谷氨酸产率达14.6％,糖酸转化率达62.8％,达到国际先进水平。

L-谷氨酸温度敏感突变株的选育

采用黄色短杆菌TJ1为出发菌株,根据代谢控制发酵原理,利用紫外线、硫酸二乙酯进行诱变,定向选育出具有寡霉素抗性、谷氨酸氧肟酸盐抗性的温度敏感突变株TMGO106。然后,以温度敏感突变株TMGO106和产酸率高(10.5%以上)的天津短杆菌TG961为亲株,通过原生质体融合技术,成功地选育出了产酸率高的融合子CN1021(13.6g/dl,糖酸转化率达60%),在6m3发酵罐上中试其L-谷氨酸产量达14.6%,糖酸转化率达62.8%,并且该菌株系温度敏感型菌株,可用于谷氨酸强制发酵。

应用MATLAB软件构建谷氨酸温度敏感突变株补料分批发酵动力学模型

根据已建立的谷氨酸发酵数学模型,应用MATLAB软件对模型进行最优参数估计和非线性曲线拟合,得到的结果相对误差较小,全局收敛性最小。通过与实际发酵过程比较,较好地反映了谷氨酸补料分批发酵过程。

甜菜碱对谷氨酸温度敏感突变株发酵的影响

考察了甜菜碱添加对温敏菌发酵谷氨酸产酸的影响。以谷氨酸温度敏感突变株CN1021为供试菌株,采用10L发酵罐发酵培养。结果表明,在发酵6h添加1.5g/L甜菜碱发酵产酸达172.9g/L,谷氨酸产量比未添加甜菜碱的对照样提高了10.9g/L。

黄色短杆菌氟基丙酮酸敏感型突变株的诱变选育

以黄色短杆菌 (Br.FlavumC - 12 )为出发菌株 ,亚硝基胍 (NTG)为诱变剂 ,通过诱变选育 ,筛选出氟基丙酮酸 (FP)敏感的菌株 ,以希望达到降低L

何谓温度敏感型突变株? 利用温度敏感型突变株进行谷氨酸发酵时,影响产酸的关键是什么?

在正常培养温度下，菌体生长良好，当温度提高到一定程度时（如30℃提高到40％），停止生长，而只产酸，具有这种特性的菌株就称为温度敏感型突变株。谷氨酸温度敏感型突变株的位置是发生在决定与谷氨酸分泌有密切关系的细胞膜结构的基因上，发生碱基的转换或颠换，一个碱基为另一个碱基所置换，这样为基因所指导释出的酶，在高温下失活，导致细胞膜某些结构的改变。

酵母DNA修复基因RAD16温度敏感突变株的分离及人类互补基因的鉴定

用PCR介导的基因重组法敲除酵母RAD16基因,用羟胺处理酵母RAD16基因表达质粒,获得RAD16基因突变库,并将其转化RAD16基因敲除的酵母细胞.用平皿复制法获得温度敏感突变株rad16-ts2,经互补试验证实,该突变表型为RAD16基因突变所致.将人cDNA表达文库转化rad16-ts2后筛选温度敏感拯救(rescue)表型,回收拯救表型酵母细胞中的质粒.测序结果表明,所获得的人cDNA克隆为HLTF/Zbu1/SMACA3基因.比较分析显示,人类该基因编码蛋白质氨基酸序列与酵母Rad16的同一性为32%,相似性则达50%.人HLTF/Zbu1/MACA3基因在HeLa细胞中过表达,可显著抑制过氧化氢损伤和UV照射诱导的细胞凋亡.

啤酒酵母DNA修复基因RAD24温度敏感突变株的分离及其特性的初步研究

以ＹＣｐｌａｃ系列带Ｔｒｐ、Ｈｉｓ和Ｕｒａ标志基因的载体为骨架构建含野生型和经羟胺处理的突变型的啤酒酵母ＲＡＤ２４基因质粒，用质粒替换方法分离ＲＡＤ２４基因温度敏感突变株（ｒａｄ２４－ｔｓ３）．紫外生存试验发现，ｒａｄ２４－ｔｓ３对紫外线敏感；同位素（３Ｈ－ＴｄＲ，３Ｈ－ＵＲ，３Ｈ－Ｌｅｕ）参入试验表明，该突变株ＤＮＡ、ＲＮＡ及蛋白质合成均较野生型明显降低．

酿酒酵母温度敏感性突变株的选育

为获得酵母胞内产物的高效分泌，以酿酒酵母二倍体（2n）及单倍体（n）为出发菌，经紫外诱变处理，筛选获得5株可能具有温度敏感性的突变株。为进一步鉴定，以野生菌Y1为对照菌，测定其胞外核酸、蛋白质及果糖-1，6-二磷酸（FDP）的含量，发现突变菌株Ts4（2n）自溶程度最高，其核酸、蛋白质渗透率达1．709，1．483，胞外FDP浓度为38μg／mL，较Y1（2n）提高了24．1％。此外突变株Ts2＊（n）、Ts3＊（n）也会发生一定程度的自溶。因此，该试验共获得温度敏感性突变株3株，即Ts4{（2n）、Ts2＊（n）和Ts3＊（n）。

温度敏感突变株在病毒学研究中的应用

本文根据病毒温度敏感突变(ts)株的特征,介绍了该突变林在病毒学研究中的应用情况;并简要介绍应用于预防病毒性疾病中的状况。

棒状链霉菌突变株CCRC11518-Ⅲ_(50)克拉维酸发酵条件的研究

通过单因子和多因子摇瓶正交优化试验,确定了克拉维酸产生菌棒状链霉菌突变株Streptomyces clavuligerusCCRC11518-Ⅲ50的三角瓶发酵条件.发酵培养基组成(ρ/g L-1):甘油30,大豆蛋白胨60,麦芽浸膏7.5,K2HPO4·3H2O 1.0,MgSO4·7H2O 2.0,FeSO4-7H2O 1.0;培养基初始pH 6.5;接种量15％;培养基装量20 mL/250 mL三角瓶;培养温度25℃;发酵时间72 h.克拉维酸效价由优化前的834.8 μg mL-1提高到1 082.615 μg mL-1,提高了29.7％.还在1 600 mL发酵罐中进行了初步放大试验.当接种量15％,通气量1:0.5,转速450 r min-1,25℃发酵60h克拉维酸效价达到高峰1 025 μg mL-1.

AcMNPV突变株的蛋白表达时相研究

将苜蓿银纹夜蛾多核衣壳核型多角体病毒(Autograph Colifornica nuclear polyhedrosis virus,AcMNPV)的野生型株HR3和温度敏感突变株ts317、ts538、ts8感染草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)Sf21细胞,并在允许温度(25℃)或非允许温度(33℃)下培养,分别采用过氧化物酶标记的抗P47蛋白、抗P143蛋白、抗多体蛋白和抗病毒结构蛋白的单克隆抗体检测病毒增殖过程各蛋白出现的时间。结果表明:1)P47蛋白是一种晚期(12hpi)表达蛋白,各突变株在允许温度(25℃)能够表达,但在非允许温度(33℃)不能表达。2)P143蛋白是一种早期(8hpi)表达蛋白,在允许温度和非允许温度时都能表达,ts8的表达量较少。3)在非允许温度条件下,蛋白质的合成速度高于允许温度。4)野生型和突变株ts317的病毒结构蛋白(P80、GP64、VP39、P24和PTP)在允许温度增殖下都能检测到,ts538和ts8表达量相对少些。5)除了GP64和P24外,ts538和ts8感染的细胞在非允许温度下不能表达病毒的结构蛋白。6)野生型毒株HR3在允许温度和非允许温度下的蛋白表达无明显差异。

禽病原性大肠杆菌iro和tsh基因缺失株的构建

通过SSH和SCOTS研究,铁系统(Iro)和温度敏感性血凝素(Tsh)在禽病原性大肠杆菌(APEC)的感染中可能发挥重要作用。基因检测发现,在243个禽源大肠杆菌分离株中,有205株为iro+菌株,其中高、中度和低致病株分别为89.8%(184/205)、8.8%(18/205)和1.5%(3/205);有167株为tsh+菌株,高、中度、低致病株分别为87.4%(146/167)、12.6%(21/167)和0%(0/167),结果显示iro+或tsh+株大多数为高致病株。为了确定iro和tsh基因在APEC致病力中的作用,以APECE037株为基础,通过自杀性载体分别构建了iro和tsh基因缺失突变株E037(Δiro)、E037(Δtsh)和E037(ΔiroΔtsh)。动物感染性试验表明,突变株在鸡体内的繁殖能力和致病性均明显下降,但两个基因的协同致病作用不显著。进一步证实Iro和Tsh为APEC重要的致病因子。

甘蔗糖蜜发酵生产谷氨酸的研究

研究了以甘蔗糖蜜为原料,采用温度敏感型突变株发酵生产L-谷氨酸的补料分批发酵工艺条件。结果表明,优化条件下,在10L自控发酵罐中发酵生产L-谷氨酸的平均产量为125g/L,糖酸转化率为60.14%。

L-谷氨酸生产菌的选育及其发酵条件的研究

采用黄色短杆菌(Brevibacterium flavum)T1为始发菌株,根据代谢控制发酵原理,利用紫外线、硫酸二乙酯进行诱变,定向选育出具有寡霉素抗性、谷氨酸氧肟酸盐抗性的温度敏感突变株 TM106。然后,以温度敏感突变株 TM106和产酸率高(10.5%以上)的天津短杆 TG961为亲株。通过原生质体融合技术,成功地选育出了产酸率高的融合子CM021,并且该菌株系温度敏感型菌株,可用于谷氨酸强制发酵。在摇瓶条件下,产酸达13.6g/dl;在6m^3发酵罐上进行中试,产酸达14.6g/dl,转化率达62%。