断奶仔猪小肠黏膜脂肪酸结合蛋白和二肽转运载体1mRNA表达发育性变化及谷氨酰胺对其的影响

本试验旨在研究断奶仔猪小肠黏膜脂肪酸结合蛋白(I-FABP)和二肽转运载体1(PEPT1)mRNA表达的发育性变化及谷氨酰胺对其的影响。以69头(21±3)日龄断奶杜×长×大仔猪为试验动物,断奶当天选取3头猪进行屠宰,剩余66头随机分为2组,每组3个重复,每个重复11头。对照组饲喂基础饲粮,试验组饲喂基础饲粮+1%谷氨酰胺。断奶后第3、5、7、14天试验组和对照组分别选取3头猪进行屠宰(共计27头),取十二指肠、空肠和回肠黏膜组织样品,通过实时定量PCR法测定I-FABP和PEPT1 mRNA的表达量。结果表明:1)I-FABP和PEPT1 mRNA的表达量各肠段间无显著差异(P>0.05);2)I-FABP和PEPT1 mRNA在十二指肠、空肠和回肠的表达量均在断奶后急剧下降,断奶第3天的表达量最低,显著低于断奶当天(P<0.05),而后逐渐升高,第14天达到峰值;3)试验组I-FABP和PEPT1 mRNA表达量与对照组无显著差异(P>0.05),但试验组表现出促使十二指肠、空肠、回肠黏膜的I-FABP和十二指肠PEPT1 mRNA表达提前恢复至断奶前水平的趋势。结果提示,断奶仔猪I-FABP和PEPT1 mRNA表达量随时间而变化,谷氨酰胺对断奶后I-FABP和PEPT1 mRNA表达量的恢复有一定的促进作用。

底物结合对谷氨酰胺结合蛋白运动模式的影响

为了研究底物谷氨酰胺(glutamine,Gln)的结合对谷氨酰胺结合蛋白(glutamine binding protein,GlnBP)运动特点的影响,采用分子对接方法研究了未结合Gln的GlnBP开放构象结构(GlnBP_O)与Gln的结合模式,获得了GlnBP_O-Gln复合物结构,然后用分子动力学(molecular dynamics,MD)模拟方法研究所获得的复合物的运动模式,并与GlnBP_O的运动模式相比较.结果表明:Gln特异性地结合在GlnBP_O的大结构域上,并且Gln的结合增加了GlnBP_O的闭合运动的速度和幅度.

谷氨酰胺结合蛋白构象变化的分子动力学模拟

从谷氨酰胺结合蛋白单体(GlnBp)和谷氨酰胺结合蛋白复合物(GlnBP-Gln)的晶体结构出发分别做600ps的对比分子动力学(MD)实验。从体系的分子结构,铰链区柔性和口袋区相互作用三个方面分析了该体系的构象开合机制。结果表明,构象闭合直接导致了体积收缩;复合物铰链区的较大柔性赋予构象闭合以结构基础;其中His156、Lys115、Ala67三个残基对于GlnBP特异性结合底物Gln起着重要作用,而Lys115和Asp10的相互作用对于构象的闭合十分重要,这些模拟结果与实验数据相吻合。

谷氨酰胺结合蛋白结合底物前后的运动差异性研究

分别对谷氨酰胺结合蛋白单体及结合底物谷氨酰胺的复合物进行了10uns的分子动力学模拟,从分子整体,结构成簇,门距和门角等方面研究了该蛋白在结合底物前后的运动差异性。结果表明,单体的稳定性弱于复合物,单体大小结构域的开合运动幅度远大于复合物。该研究有助于揭示细胞外液结合蛋白的底物转运机制。

水解面筋蛋白高效制备谷氨酰胺结合肽的研究

采用食品级胃蛋白酶、胰蛋白酶、Protamex复合酶双酶组合对面筋蛋白进行水解制备Gln结合肽。先确定三种单酶各自对面筋蛋白适宜的初始pH、温度、酶浓度和底物浓度。并以双酶进行两两组合水解。在进行水解度控制实验时取样,分析水解液中氨基氮的含量,计算平均肽链长度,并用高效液相色谱分析水解液中Gln的得率。实验结果表明胰蛋白酶和胃蛋白酶联合水解的效果最好,条件为:胰蛋白酶在pH8.0,50℃,S%=12.8%(W/V),E%=9%(W/W)水解6h,再用胃蛋白酶pH2.0,40℃,E%=5%(W/W)条件下水解5h,可得到平均肽链长度为2.20个氨基酸残基的蛋白水解液,Gln得率最高,为60.43%。认为胰蛋白酶和胃蛋白酶组合是面筋蛋白中高效制备谷氨酰胺结合肽的最佳组合。

不同蛋白酶水解面筋蛋白制备谷氨酰胺结合肽的比较研究

选取食品级胰蛋白酶、胃蛋白酶、ProtamexTM复合蛋白酶、Alcalase碱性蛋白酶3.0T、Neutrase中性蛋白酶1.5 MG和FlavourzymeTM复合风味蛋白酶1000 MG以确定蛋白酶对酰氨基的水解能力。单酶在适宜的条件下水解面筋蛋白4 h后取样。试验采用双(1,1-三氟乙酸基)碘苯(BTI)保护肽中结合Gln,通过高效液相色谱测定肽中Glu含量间接测定Gln,分析水解液中氨基氮的含量,并计算平均肽链长度。结果发现胰蛋白酶、胃蛋白酶和Pro-tamexTM复合蛋白酶对酰氨基的水解能力较小,对酰氨基的破坏率分别为2.79%,1.90%和5.80%;而Alcalase碱性蛋白酶3.0T、Neutrase中性蛋白酶1.5MG和FlavourzymeTM复合风味蛋白酶1000 MG分别是32.25%,26.55%和16.38%。胰蛋白酶、胃蛋白酶和ProtamexTM复合蛋白酶水解面筋蛋白8 h后Gln的得率分别是77.86%,69.58%和87.70%。试验结果表明胰蛋白酶、胃蛋白酶和ProtamexTM复合蛋白酶为制备Gln结合肽的合适蛋白酶。

视黄醇结合蛋白检测及谷氨酰胺应用在严重脓毒症营养支持治疗中的价值

目的探讨视黄醇结合蛋白检测及谷氨酰胺应用在严重脓毒症患儿营养支持治疗中的价值。方法108例严重脓毒症患儿机体状况给予相应的营养支持,选择肠内营养(EN)或肠外营养(PN),或同时给予EN和PN,PN组分谷氨酰胺(Gln)组和非Gln组。对视黄醇结合蛋白(RBP)、血清白蛋白(ALB)、24h尿尿素氮、小儿危重症评分(PCIS)、患儿多器官功能障碍(MODS)数目、机械通气时间、存活和死亡患儿的危重评分(PCIS)及其器官受累数目,以及两组患儿的基础营养指标和代谢指标进行监测;并对存活患儿营养支持前0d、营养支持第3天和第7天的血清RBP、PA、ALB、Hb水平等进行比较。结果存活组患儿营养支持10d内热卡明显高于死亡组。存活组患儿PN时Gln组免疫球蛋白明显高于非Gln组,氮平衡状况也好于非Gln组。EN组与PN+EN组在治疗0d、3d时营养指标RBP、PA及氮平衡比较差异均有显著性(P<0.05),而ALB、Hb差异无统计学意义(P>0.05)。7d后两组各项指标比较差异无显著性(P>0.05)。死亡患儿的PCIS评分低于存活患儿,而器官受累数目多于存活组。存活儿与死亡患儿机体代谢状况及体液免疫指标比较差异有显著性(P<0.05)。EN组患儿住PICU时间与机械通气时间较PN+EN组患儿短(P<0.05)。结论严重脓毒症患儿机体表现为代谢率明显升高,能量消耗明显增加,蛋白分解利用大于合成,早期即出现血清RBP、PA水平的降低,呈现明显负氮平衡;病情越重,机体代谢指标、营养指标、免疫球蛋白水平等越低。对严重脓毒症患儿进行营养支持时加用Gln显得尤为重要。

γ谷氨酰胺转肽酶、一氧化氮与内皮素-1比值、视黄醇结合蛋白4与急性心肌梗死患者PCI治疗后血流分级的关联性

目的探讨γ谷氨酰胺转肽酶(gamma-glutamyl transferase,GGT)、一氧化氮与内皮素-1比值(nitric oxide and endothelin-1 ratio,NO/ET-1)、视黄醇结合蛋白4(retinol binding protein 4,RBP4)与急性心肌梗死患者经皮冠状动脉介入(percutaneous coronary intervention,PCI)治疗后血流分级的关联性。方法选取2018年3月至2021年3月山东国欣颐养集团肥城医院160例行PCI治疗的急性心肌梗死患者,根据PCI治疗后是否发生慢/无复流分为发生组(n=28)、未发生组(n=132)。比较两组患者基线资料、GGT、NO、ET-1、NO/ET-1、RBP4浓度,采用Spearman分析分析GGT、NO/ET-1、RBP4与心肌梗死溶栓试验(thrombolysis in myocardial infarction,TIMI)血流分级的相关性,采用多因素Logistic回归分析来分析血流分级的相关影响因素。结果两组患者Killip分级、Gensini评分比较,差异有统计学意义(P<0.05);发生组患者的GGT、RBP4浓度高于未发生组,NO/ET-1低于未发生组,差异有统计学意义(P<0.05)。患者的GGT、RBP4与TIMI血流分级呈负相关,NO/ET-1与TIMI血流分级呈正相关(P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,将Killip分级、Gensini评分控制后,GGT、NO/ET-1、RBP4仍与急性心肌梗死患者PCI治疗后慢/无复流的发生相关(P<0.05)。结论急性心肌梗死患者PCI治疗后慢/无复流患者GGT、RBP4浓度升高,NO/ET-1降低,均与心肌血流灌注有关,或可作为预测慢/无复流的一个方案,为临床提供重要的参考依据。

谷氨酰胺双肽对全胃切除术后机体蛋白合成的影响

目的探讨全胃切除术后给予含谷氨酰胺双肽的肠外营养对机体蛋白合成的影响。方法72例行全胃切除的胃癌患者,随机分为对照组36例和实验组36例。两组患者均接受等氮[0.2g/(kg·d)]、等能量[30kcal/(kg·d)]的肠外营养7d,实验组同时补充谷氨酰胺双肽,相当于谷氨酰胺[0.34g/(kg·d)]。在术前和术后第1、8天取外周血测定视黄醇结合蛋白(RBP)、白蛋白(ALB)、前白蛋白(PA)、转铁蛋白(TEN)。结果术后第8天,实验组RBP、PA、TEN均显著高于对照组(P<0.05)。结论全胃切除术后给予含谷氨酰胺双肽的肠外营养可促进机体蛋白质的合成,降低蛋白质分解,改善营养状况。

BTI保护法测定小麦水解蛋白中谷氨酰胺含量

根据蛋白中谷氨酰胺与BTI试剂反应后不再被酸解转化为谷氨酸的原理,介绍了测定蛋白质和肽中谷氨酰胺方法,主要包括样品的BTI处理、酸解、PITC衍生和HPLC色谱分析等。以小麦水解蛋白为例,测定结果为:结合态谷氨酰胺质量分数为(26.178±0.061)%,游离谷氨酰胺质量分数为(0.121±0.008)%,其他17种游离氨基酸质量分数为(2.053±0.034)%。丙氨酰-谷氨酰胺二肽标准品和游离氨基酸含量测定结果印证了该方法是可靠的,可测定蛋白质和肽分子中的谷氨酰胺含量。

血清I-FABP在诊断脓毒症大鼠急性肠功能障碍中的作用及谷氨酰胺对其表达的影响

目的探讨血清脂肪酸结合蛋白(intestinalfatty acid binding protein,I-FABP)在脓毒症鼠肠功能障碍评估中的作用及谷氨酰胺对其表达水平的影响。方法以健康SD大鼠腹腔注射大肠杆菌内毒素脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)建立脓毒症模型,随机分为3组,对照组不建模,仅给予百普素喂养,模型组建模后给予百普素喂养,谷氨酰胺组建模后同时给予百普素和谷氨酰胺喂养。评估血清I-FABP浓度与肠粘膜损伤指数的相关性及比较3组大鼠血清I-FABP含量。结果血清I-FABP浓度与肠粘膜损伤指数呈正相关(P<0.05);与对照组相比,模型组和谷氨酰胺组血清I-FABP浓度均明显增高(P<0.05);而谷氨酰胺组中血清I-FABP浓度显著低于模型组(P<0.05)。结论血清I-FABP可作为脓毒症肠功能障碍评估的无创性指标;谷氨酰胺能改善脓毒症鼠的肠粘膜的损伤程度。

强化谷氨酰胺的营养支持治疗用于ALL化疗患儿效果观察

目的探讨强化谷氨酰胺(Gln)的营养支持治疗改善急性淋巴细胞白血病(ALL)化疗患儿营养状况的可行性。方法将48例ALL化疗患儿随机分为对照组和治疗组各24例。两组均均采用VDLP方案化疗4周。治疗组化疗全程每天予强化Gln 0.4 g/(kg·d)的营养支持治疗;对照组营养配方中不添加谷氨酰胺,余与治疗组相同。化疗第1、2、3、4周比较两组一般营养指标(体重、身高、三头肌皮褶厚度)、生化指标[血清白蛋白(ALB)、前白蛋白(PA)、视黄醇结合蛋白(RBP)、尿肌酐—身高指数(CHI)及尿羟脯氨酸指数(UHI)]及水肿发生情况。结果营养状况一般指标:除第3周治疗结束治疗组三头肌皮褶厚度高于对照组(P<0.05)外,其余时间点两组一般指标差异无统计学意义。营养状况生化指标:第1周化疗结束两组血清ALB、PA、RBP及CHI、UHI差异无统计学意义。第2周治疗组PA和RBP高于对照组(P均<0.05),两组ALB及CHI、UHI差异无统计学意义。第3、4周两组血清ALB、PA、RBP及UHI均高于对照组(P均<0.05),两组CHI差异无统计学意义。水肿发生情况:两组患儿水肿发生率无明显统计学差异,但治疗组严重水肿发生的例数比对照组少。结论强化Gln的营养支持治疗改善ALL患儿全身营养状况效果确切。

采用放射性配体结合测定法检测幼儿组织谷氨酰胺转移酶自身抗体

目的:前瞻性筛查腹腔疾病(CD)易感性幼儿,测定其体内抗组织谷氨酰胺转移酶(tTG)自身抗体水平。方法:共有652名幼儿被纳入试验,其平均年龄为2.9岁(2.5-4.2岁),采用放射性配体结合测定法,检测抗组织谷氨酰胺转移酶免疫球蛋白A(IgA-tTG)和G (IgA-tTG);采用间接荧光免疫测定法,检测肌内膜抗体免疫球蛋白A(EMA)。对于自身抗体阳性儿童,平均1.2年(0.2-1.9年)后再次进行检测。对于自身抗体水平持续偏高的儿童,进行肠组织活检。结果:试验基准, 全部625名受试儿童中,3.2%(95%CI 1.9%-4.6%) 至少有1种自身抗体呈阳性:2.5%(95%CI 1.3%- 3.7%)出现IgA-tTG,1.7%(95%C1 0.7%-2.7%)

C/EBPα参与小鼠胰岛β细胞囊泡谷氨酰胺转运子2基因表达的调控

目的:探讨转录调节因子CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)在小鼠胰岛β细胞株MIN6的囊泡谷氨酰胺转运子2(VGLUT2)基因表达过程中的调控作用。方法:克隆小鼠VLGUT2基因的启动子区,并对其中C/EBPα的结合位点进行了核酸定点突变,以荧光素酶活力方法观察突变后的启动子活性改变情况。通过电泳迁移率实验(EMSA)检测C/EBPα与含有小鼠VGLUT2启动子区核酸序列的核苷核探针的结合能力,以CEBPαsiRNA特异性抑制转录调控因子C/EBPα的基因表达,通过荧光素酶,RT-PCR和Western blotting方法观察抑制C/EBPα基因表达后小鼠VGLUT2的基因表达情况。结果:在对小鼠VGLUT2启动子区C/EBPα结合位点进行核酸定点突变后,小鼠VGLUT2启动子活性下降约50%,EMSA实验表明C/EBPα可与小鼠VGLUT2启动子区结合,当以C/EBPαsiRNA特异性地下调C/EBPα的表达时,小鼠VGLUT2的启动子活性、mRNA和蛋白水平也相应各自下降约60%、40%及45%。结论:C/EBPα参与了小鼠VGLUT2的基因表达调控。

食管癌同步放化疗患者早期应用谷氨酰胺肠外营养支持对免疫指标和营养状况及并发症的影响

目的探究早期谷氨酰胺肠外营养支持对食管癌同步放化疗患者免疫指标和营养状况及并发症的影响。方法选取2020年1—10月本院收治的50例食管癌患者作为研究对象,按照随机数字表法分为实验组与对照组,每组25例。两组均行同步放化疗治疗,实验组给予早期丙氨酰谷氨酰胺注射液肠外营养支持,对照组自主进食。比较两组免疫指标[白细胞介素(IL)-8、血红蛋白(Hb)、转铁蛋白(TRF)和视黄醇结合蛋白(RBP)]、营养状况和并发症发生情况。结果治疗后,实验组IL-8水平明显低于对照组,Hb、TRF、RBP水平均明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。实验组营养风险发生率为12.00%,并发症发生率为12.00%,均明显低于对照组的40.00%、36.00%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论食管癌同步放化疗患者早期应用谷氨酰胺肠外营养支持,能提高其自身免疫力,改善其营养状况,减少并发症的发生,值得临床推广应用。

谷氨酰胺在腹部术后肠梗阻患者保守治疗中的意义

目的:探讨谷氨酰胺(Glutamine,Gln)在腹部术后肠梗阻患者保守治疗中保护肠黏膜屏障的作用.方法:将收治的58例有腹部手术史且临床诊断为肠梗阻的患者随机分为对照组与治疗组.对照组给予常规治疗:禁食、持续胃肠减压、维持水电解质和酸碱平衡、应用抗生素、生长抑素和全胃肠外营养(TPN)等;治疗组在上述常规治疗的基础上,给予Gln强化的TPN.治疗前对所有患者进行胃肠功能障碍评分,比较两组患者治疗前、治疗4d、治疗8d、治疗12d后血清D-乳酸浓度、肠脂肪酸结合蛋白(I FA B P)水平,记录患者肠道功能恢复时间(d),采用P e a r s o n相关、重复测量资料的方差分析及两独立样本均数比较t检验进行统计学分析.结果:肠梗阻患者外周血中D-乳酸浓度、IFABP水平与肠功能障碍评分值呈正相关(r=0.824,r=0.891,均P<0.001);随治疗时间延长,治疗组与对照组患者血清D-乳酸、IFABP水平均呈下降趋势,治疗组下降趋势更明显;治疗组肠道功能恢复时间短于对照组(6.83d±1.49d vs8.76d±1.53d),差异有统计学意义(P<0.001).结论:在腹部术后肠梗阻患者的常规治疗基础上应用Gln能保护肠黏膜屏障功能,降低肠黏膜通透性,促进肠道功能恢复.

丙氨酰谷氨酰胺治疗ICU脓毒症患者疗效及对血清CRP ETX和HBP水平的影响

目的:探讨丙氨酰谷氨酰胺治疗ICU脓毒症患者疗效及对血清C-反应蛋白(CRP)、内毒素(ETX)和肝素结合蛋白(HBP)水平的影响。方法:选取2019年2月至2021年2月我院ICU收治的152例脓毒症患者为对象,采用随机数字表进行简单随机分组,分为观察组和对照组各76例,对照组给予常规治疗,观察组在对照组基础上给予丙氨酰谷氨酰胺治疗,比较两组临床疗效、机械通气时间、住院时间、急性生理和慢性健康状况Ⅱ(APACHEⅡ)评分和血清CRP、ETX、HBP水平及肝功能指标[乳酸(LAC)、谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)]、营养指标[白蛋白(ALB)、血红蛋白(Hb)、转铁蛋白(TF)]和免疫指标[免疫球蛋白(IgA、IgG、IgM)和补体(C3、C4)]。结果:观察组治疗有效率高于对照组(84.00%vs66.77%)(P<0.05);观察组机械通气时间和住院时间短于对照组(P<0.05);治疗后两组APACHEⅡ评分和血清CRP、ETX、HBP、LAC、AST、ALT水平均降低,ALB、Hb、TF、IgA、IgG、IgM、C3、C4水平均升高(P<0.05),且观察组APACHEⅡ评分和血清CRP、ETX、HBP、LAC、AST、ALT水平低于对照组,ALB、Hb、TF、IgA、IgG、IgM、C3、C4水平高于对照组(P<0.05)。结论:丙氨酰谷氨酰胺治疗ICU脓毒症患者疗效显著,可降低血清CRP、ETX和HBP水平,改善机体营养状况和肝功能,提高免疫功能。

不同蛋白酶水解面筋蛋白制备谷氨酰胺结合肽的比较研究

选取食品级胰蛋白酶、胃蛋白酶、Protamex^(TM)复合蛋白酶、Alcalase碱性蛋白酶3.0T、Neutrase中性蛋白酶1.5MG和Flavourzyme^(TM)复合风味蛋白酶1000MG以确定蛋白酶对酰氨基的水解能力。单酶在适宜的条件下水解面筋蛋白4h后取样。试验采用双(1,1-三氟乙酸基)碘苯(BTI)保护肽中结合Gln,通过高效液相色谱测定肽中Glu含量间接测定Gln,分析水解液中氨基氮的含量,并计算平均肽链长度。结果发现胰蛋白酶、胃蛋白酶和Protamex^(TM)复合蛋白酶对酰氨基的水解能力较小,对酰氨基的破坏率分别为2.79%,1.90%和5.80%;而Alcalase碱性蛋白酶3.0T、Neutrase中性蛋白酶1.5MG和Flavourzyme^(TM)复合风味蛋白酶1000MG分别是32.25%,26.55%和16.38%。胰蛋白酶、胃蛋白酶和Protamex^(TM)复合蛋白酶水解面筋蛋白8h后Gln的得率分别是77.86%,69.58%和87.70%。试验结果表明胰蛋白酶、胃蛋白酶和Protamex^(TM)复合蛋白酶为制备Gln结合肽的合适蛋白酶。

釉质发育不全与结合上皮附着异常相关性研究进展

釉质发育不全为遗传性釉质病变,导致釉质的多种结构异常。正常情况下,结合上皮附着在釉牙骨质界。在生理结构和组织发生学上,釉质与结合上皮都有着密不可分的联系,且某种釉质发育不全相关基因缺失、蛋白缺陷,如αvβ6整合素、牙成釉细胞相关蛋白(odontogenic ameloblast-associated protein,ODAM)、釉成熟蛋白(amelotin,AMTN)、富含脯氨酸-谷氨酰胺分泌性钙结合蛋白1(secretory calcium-binding phosphoprotein proline-glutamine rich 1,SCPPPQ1),均可引起结合上皮的附着异常。本文从釉质与结合上皮的组织学联系、釉质发育不全与结合上皮附着异常相关的机制做一综述。

胃肠道适应性反应与胰岛素样生长因子系统:谷氨酰胺和IGF-Ⅰ的调节作用

大鼠小肠大部份切除后的适应性生长可以从饮食中补充谷氨酰胺（Gln）或胰岛素样生长因子（IGF-I）来增强。本研究的目的就是想了解Gln和IGF-I对大鼠肠切除后回肠适应性增生的潜在的协同作用。接受80％小肠切除的大鼠接受低Gln或含Gln的饮食和接受皮下注射重组人IGF-I或对照剂共7天。与接受低Gln和对照剂的大鼠相比，Gln和IGF-I分别都促进回肠的适应性增生（DNA含量）。接受IGF-I和Gln组的DNA含量是最高的。Gln和IGF-I一起增加了回肠的重量和蛋白含量。同时，血浆中Gln和IGF-I的增加也比单独给予Gln或IGF-I高。回肠IGF-ImRNA表达增加了2倍。给予IGF-I可以增强这种反应，但Gln不增强这种反应。相反，饮食补充Gln（而不是IGF-I）可以防止大部小肠切除诱发的肝脏IGF-ImRNA表达的下降。我们认为，肠外给予IGF-I和肠内给予Gln对大部小肠切除后回肠的适应性增生都各自具有促进作用并具有协同作用。这些发现支持了某些特定的营养素和生长因子可以联合起来促进肠道适应性生长并可能减轻短肠综合征的严重度。