采用TG和DSC方法研究糖类对谷氨酰胺转胺酶热稳定性的影响

谷氨酰胺转胺酶(TGase)是一种催化蛋白质分子间产生共价交联的硫醇酶类,但其热稳定性较差。在40～60℃之间,通过添加海藻糖、蔗糖和葡萄糖作为TGase的保护剂,TGase酶活残留率均比对照组升高,其中海藻糖的保护最为显著。采用TG和DSC分析方法,与对照组相比,三种糖中海藻糖提高了TGase的相变温度(Tm),△Tm值为29℃,相变热焓△H上升26.4J/g,失重率降低了2.8%。对应于上述热力学参数,葡萄糖和蔗糖的加入则并未表现与海藻糖相同的趋势。

谷氨酰胺转胺酶(MTG)分批发酵中温度对S.mobaraense生长及产酶影响的模型化

研究了 2 .5L小罐培养过程中控制温度为 2 5℃～ 35℃时对细胞生长和MTG合成的影响 .结果表明 :当控制相对较低的温度时 ,细胞生长的延滞期较长 ,当控制温度较高时 ,细胞生长的延滞期较短 ,达到最大DCW和最高MTG酶活的时间均较短 ;通过研究各种不同模型对细胞生长的影响得到最适合描述S .mobaraense生长与温度之间的关系方程为Schoolfield方程 ;通过对最大DCW和最大MTG酶活进行数学模拟 ,发现方程X(U) =-a0 (θ -θ0 ) 2 +X1(U1) +a1{ 1-exp[a2 ·(θ-θ1) ) ]}能较好地描述最大DCW和最大MTG酶活与温度之间的关系 ;通过研究延滞时间与温度之间的关系 ,得到描述两者之间关系的最适关系式为 :λ =l/ (A0 +A1·T +A1·T2 +A2 ·T3 +A) 4·T4 ) ;通过对单一温度以及分阶段控制温度的细胞生长及产酶的模型预测值及实验值进行比较 ,发现模型预测值与实验结果较吻合 .图 6表 6参

发酵法生产谷氨酰胺转胺酶(MTG)的中试研究

比较了摇瓶和 2 .5L种子罐所培养的种子液 ,并在 5L罐上考察了以种子罐培养种子时不同接种量对发酵过程的影响。在将 5L小罐实验结果放大到 30 0L和 3m3 罐的中试规模时 ,分别采用以vvm相等和KLa相等的原则 ,对通风量进行放大 ,以P V相等为依据对搅拌转速进行放大。结果表明 ,当采用种子罐培养种子液时 ,适宜的种龄为 18～ 2 0h ,接种量为 2 % ,30 0L罐中酶活和生产强度分别达到 3.12u mL和 78.0u L·h ,均高于 5L罐的水平 ,3m3 罐酶活为 2 .70u mL ,接近于 5L罐的酶活水平 ,表明本研究所采用的通气量。

高效谷氨酰胺转胺酶(TG酶)产品在食品加工中的应用

庞博谷氨酰胺转胺酶(TG酶)是经太空菌种选育发酵,精制提取而成,能高效催化蛋白质分子间或分子内的谷氨酰胺残基进行酰胺基转移反应,使蛋白分子形成共价交联,从而可以有效地提高蛋白性食品的弹性、持水能力、原料利用率、质地口感及营养价值等,现已广泛应用于肉制品、鱼制品、乳制品、植物蛋白制品、面制品等。根据大量的应用试验数据表明,庞博TG酶在加℃～45℃、pH6～7的条件下,只需添加0.1%～0.3%的量,即可达到明显的效果。在肉制品加工中,用TG酶处理的碎肉或块状肉成型后经冷冻、切片、烹饪等不会重新开散,提高制品的外观、质构和原料的利用率及产品的附加值;在鱼制品中,一般鱼肉蛋白在低湿下形成凝胶,但当原料品质比较差时,如冻鱼,就可通过酶TG酶来提高产品的凝胶强度减少蒸煮损失和产品品质;在乳制品中,如奶酪生产中经酶处理后,乳清蛋白与酪蛋白结合交联在一起,可提高奶酪的产量等;在植物蛋白制品中,大豆蛋白经酶处理后其凝胶性、对酸稳定性、乳化稳定性都有很大的改善。

微生物谷氨酰胺转胺酶(MTG)的分离纯化

利用产谷氨酰胺转胺酶的H-197菌株发酵产生MTG,发酵液通过高速离心、冷冻浓缩、乙醇沉淀、冷冻干燥,制得粗酶粉,粗酶粉溶解后经过Sephadex G-75柱得到较纯酶样.结果表明:经冷冻浓缩、乙醇沉淀后其活力回收率为44.6%,酶的比活为0.83 U/mg,较浓缩前增加了2.43倍;粗酶经Sephadex G-75凝胶过滤层析后得到较纯的酶,酶的比活力为1.44 U/mg,最终纯化倍数达7.08.

微生物谷氨酰胺转胺酶(MTG)分批发酵模型的建立

在本文中,以本实验优化好的工艺条件,建立了关于微生物谷氨酰胺转胺酶分批发酵的数学模型方程细胞生长的动力学方程、产物合成的动力学方程和底物消耗的动力学方程。并对所建立的动力学方程进行了生物统计分析,结果表明所建立的模型具有一定的可信度。

微生物谷氨酰胺转胺酶(MTG)分批发酵模型的建立

以实验室优化好的工艺条件,建立了关于微生物谷氨酰胺转胺酶分批发酵的数学模型方程——细胞生长的动力学方程、产物合成的动力学方程和底物(葡萄糖)消耗的动力学方程。并对所建立的动力学方程进行了生物统计分析,结果表明所建立的模型具有一定的可信度。

谷氨酰胺转胺酶(MTG)的中试生产条件

考察了 5L小罐中淀粉预处理方式对微生物谷氨酰胺转胺酶 (MTG)酶活的影响 ,探讨了MTG中试生产过程的逐级放大原则 ,并将 5L小罐实验结果放大到 30L小试和 30 0L中试规模 .研究结果表明 :采用经液化处理的工业淀粉培养基进行发酵 ,MTG酶活、MTG生产强度及MTG产率分别比未用液化淀粉培养基提高了 32 % ,32 %和70 % ;以单位培养液体积中空气流量 (qv/V)相同及消耗的功率 (p0 /V)相同的原则为放大依据 ,将 5L罐实验结果放大至 30L小试及 30 0L中试规模 .30L罐发酵MTG酶活和MTG生产强度均高于 5L罐 .30 0L罐中MTG酶活达到3.15u/mL ,MTG的平均比合成速率达到 2 .6 8uh-1g-1,接近于 5L罐的MTG平均比合成速率 ,表明本研究所采用的通气量、搅拌转速等放大原则是可行的 .图 3表 2参

微生物谷氨酰胺转胺酶(MTGase)的分子生物学研究进展

谷氨酰胺转胺酶具有催化蛋白质分子内和分子间的交联,蛋白质和氨基酸之间的连接以及蛋白质分子内谷氨酰胺基水解的功能,被广泛应用于食品、医药及纺织等领域。微生物来源的谷氨酰胺转胺酶具有非Ca2+依赖性和底物特异性低等特点,在研究开发中更为引人注目。本研究综述了微生物谷氨酰胺转胺酶基因表达研究方面的进展,归纳了微生物谷氨酰胺转胺酶的基因序列特点及酶学特性,分析了该酶的结构与功能之间的关系,指出基因工程技术生产谷氨酰胺转胺酶的优势及存在的问题。认为应该进一步加强谷氨酰胺转胺酶的表达策略研究以及分子改造研究,以期提高该酶的产量、催化活力及热稳定性等。

粘虫谷氨酰胺转胺酶(MsTGase)活力测定条件的正交优化及其在幼虫体内的分布

【目的】本研究旨在优化Grossowicz氧肟酸比色法测定粘虫Mythimna separata谷氨酰胺转胺酶(Ms TGase)活力的组合条件,以Ms TGase酶活力为依据分析其在不同龄期幼虫体内的分布规律。【方法】取4龄粘虫幼虫,通过组织匀浆和沉析纯化制备Ms TGase,采用Grossowicz比色法测定Ms TGase酶活力,并对Grossowicz比色法的多重实验因素进行正交优化,进一步结合差速离心法分析不同龄期幼虫体内和亚细胞组分(细胞核和细胞碎片,线粒体,微粒体以及胞质溶胶)中Ms TGase酶活力。【结果】结果表明,酶浓度、底物浓度、反应体系pH值、反应温度及钙离子浓度等实验因素都对Ms TGase酶活力测定结果产生显著影响,其影响大小顺序为:酶浓度>温度> p H>底物浓度>Ca2+浓度。Ms TGase酶比活力测定的最优化条件:酶浓度20 mg/m L、底物浓度0. 04 mol/L、反应体系pH值6. 5、测定温度37℃,不添加钙离子。在1-5龄幼虫中以4龄幼虫的Ms TGase酶活力最高,其比活力也显著高于其他龄期的,且在1-5龄幼虫胞质溶胶中Ms TGase酶活力分别占各亚细胞组分酶活力总和的39%,25%,48%,60%和61%。【结论】所获得的最优化条件适用于粘虫Ms TGase酶活力测定。Ms TGase在粘虫体内呈显著的龄期表达特征和亚细胞分布规律。

谷氨酰胺转胺酶对大豆面包品质及加工特性的影响

研究在含12.5%大豆粉的面粉中添加不同水平的谷氨酰胺转胺酶(TG)(0.25%、0.50%、0.75%和1.00%)对形成面团的粉质特性、拉伸特性、超微结构以及面包烘焙品质的影响。结果表明:混合粉中添加不同水平的TG后与未加TG的混合粉相比,面团的吸水率增加,面团的形成时间和稳定时间增加,面团的弱化度有所下降。添加不同水平的TG后,面团的抗拉伸阻力Rmax增加,延伸性下降。在0.50%～0.75%范围内添加TG可改善富含大豆粉面团的超微结构和面包的烘焙品质。

微生物谷氨酰胺转胺酶改善羊毛织物性能

以微生物发酵生产的谷氨酰胺转胺酶(MTG)作为羊毛织物的酶整理剂,探讨了MTG在羊毛织物防毡缩和强力损伤恢复中的作用。对所用的羊毛纤维进行了氨基酸分析,从理论上为MTG的作用提供了依据。经过高锰酸钾和蛋白酶预处理后再利用MTG处理,与对照样相比,织物强力提高了30%,毡缩率从处理前的9.35%下降至2.30%。与树脂整理方法比较,结果表明强力不及树脂整理方法,毡缩率达到了与之相当的效果,并且处理液的COD值只有树脂整理的1/3。

谷氨酰胺转胺酶的功能性质及其在食品中的应用方法

本文主要论述了微生物谷氨酰胺转胺酶的性质、功能及其在食品加工工业以及开发新型食品中的应用。

微生物谷氨酰胺转胺酶的应用进展

谷氨酰胺转胺酶是一种催化酰基转移反应的转移酶，它可使酪蛋白、肌球蛋白、谷蛋白和乳球蛋白等分子之间产生交联，改变蛋白质的功能性质。简述了谷氨酰胺转胺酶在食品应用的一些最新进展。

谷氨酰胺转胺酶对豆腐凝胶强度的影响

本文主要研究谷氨酰胺转胺酶(TGase)对豆腐的凝胶强度的影响。运用单因素及正交实验法得出:在豆浆中蛋白质浓度为9%的条件下,TGase酶的添加量0.8 U/g蛋白质,离子强度0.3、pH 7.0时,在50℃下加热1.5 h时凝胶强度为148.6 g,并且具有良好的感官品质。

谷氨酰胺转胺酶对饺子粉品质改良效果的研究

研究分析了添加不同剂量谷氨酰胺转氨酶（M-TG）对小麦粉的粉质参数和拉伸参数,生饺子皮的色泽、质构特性和蒸煮干物质失落率,以及熟饺子皮的质构特性。结果表明,在0~45 mg/kg范围内,随着M-TG添加量的增加,面团的形成时间、稳定时间、评价值以及生饺子皮的亮度、熟饺子皮的回复性均不断增加,弱化度逐渐降低;当M-TG酶的添加量高于45 mg/kg时,其对面团的粉质特性、饺子皮的品质特性有弱化作用。当添加量为45 mg/kg时,生饺子皮的干物质失落率最小,饺子皮的综合评分最高。因此,M-TG对饺子粉品质有明显的改善作用,确定其最佳添加量为45 mg/kg。

Streptomyces hygroscopicus产谷氨酰胺转胺酶摇瓶发酵条件的优化

介绍了吸水链霉菌 (Streptomyceshygroscopicus)WSH0 3 -1 3的筛选过程 ,重点考察了在摇瓶条件下 ,不同碳、氮源对吸水链霉菌生长和产酶的影响 ,利用正交实验 ,确定了复合碳、氮源的浓度 ,并对种龄、接种量、初始 pH值、培养温度和培养时间等条件进行了研究。通过对发酵过程的优化 ,酶活达到 4 46u/mL ,比初始条件下提高了 3 0 9倍。

Streptomyces hygroscopicus谷氨酰胺转胺酶酶原基因的鉴定及在大肠杆菌中的表达

【目的】鉴定来源于吸水链霉菌的谷氨酰胺转胺酶基因;研究其在大肠杆菌系统的克隆与表达;分析该酶与其同源酶的活性中心氨基酸序列。【方法】从本实验室筛选的吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus;CCTCC M203062)发酵液中,分离纯化得到谷氨酰胺转胺酶酶原(pro-MTGase),测得N-端前十个氨基酸序列并与其它链霉菌来源的相应基因序列比较设计引物,扩增得到pro-MTGase基因,将该基因插入到表达载体pET-20b(+)信号肽pelB下游,构建分泌型表达载体pET/pro-MTG,并转化不同的大肠杆菌宿主BL21(DE3)和Rosetta(DE3)pLysS。【结果】获得了pro-MTGase的完整基因序列,多重碱基序列比对表明其与S.platensis和S.caniferus的pro-MTGase基因同源性高达92%。利用Rosetta(DE3)pLysS通过降温至24℃诱导策略,获得部分胞外表达的酶原。SDS-PAGE显示,胞外表达重组蛋白的分子量约为44kDa,与吸水链霉菌表达的天然酶原相符。诱导4h后发酵液中的重组酶原经胰蛋白酶活化为成熟酶后测得最高酶活为0.24U/mL。【结论】该研究是对吸水链霉菌的谷氨酰胺转胺酶基因的首次报道,也是国内首次利用大肠杆菌实现pro-MTGase的胞外可溶性表达。

微生物谷氨酰胺转胺酶研究进展

微生物谷氨酰胺转胺酶是一种在食品、医药、纺织、化妆品等领域具有广泛应用前景的酶制剂。就其理化性质、作用机理、工业化生产、在食品工业上的应用及当前国内外研究热点进行了概述。并讨论了微生物谷氨酰胺转胺酶在我国生产及应用中存在的问题和困难,对未来的研究方向做出展望。

谷氨酰胺转胺酶对酪蛋白的改性效应

羊乳中的酪蛋白经商品级谷氨酰胺转胺酶作用后,产物经SDS-PAGE检测,发现生成了相对分子量较大的聚合物。聚合的最佳条件为:酶量/酪蛋白=15U/g;最适pH:6.0～8.0;最适反应温度:50℃;反应时间:120min。其中β-酪蛋白最易被催化,其次为αs-1酷蛋白,αs-2酷蛋白,k-酪蛋类白不易被催化。经谷氨酰胺转胺酶改性后的酪蛋白溶液,其粘度增加,乳化能力提高,起泡性下降。