谷氨酰胺酶抑制剂CB-839介导T细胞效应抑制肺癌细胞中αKGA、Gln转化的作用机制

目的研究谷氨酰胺酶抑制剂CB-839(简称CB-839)介导T细胞效应抑制肺癌细胞α-酮戊二酸(αKGA)、谷氨酰胺(Gln)转化的作用机制。方法10只SPF级健康SD裸鼠均建立肺癌动物模型,分为模型组及抑制剂组,模型组裸鼠常规饲养;抑制剂组裸鼠皮下注射CD-839,测量两种肿瘤体积。人肺癌细胞A549购自上海匹拓公司,将肺癌细胞分为Ⅰ组(肺癌细胞常规培养)、Ⅱ组(肺癌细胞+0.25μmol/L浓度CB-839)、Ⅲ组(肺癌细胞+0.50μmol/L浓度CB-839)、Ⅳ组(肺癌细胞+1.00μmol/L浓度CB-839)。MTT法测A549细胞增殖,流式细胞仪测A549细胞凋亡及CD80、CD86、主要组织相容性复合体Ⅱ(MHCⅡ)水平,RT-qPCR测谷氨酸脱氢酶(GLUD1)mRNA、谷氨酰胺酶(GLS)mRNA水平,αKGA试剂盒测αKGA水平。结果培养24、48及72 h时Ⅰ组肺癌A549细胞吸光度(A值)高于Ⅱ组,差异有统计学意义(P<0.05);培养24、48及72 h时Ⅳ组肺癌A549细胞A值与Ⅲ组比较,明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ及Ⅳ组肺癌A549细胞凋亡率分别为(3.02±0.39)%、(4.72±0.52)%、(7.95±0.84)%及(13.22±1.28)%。与Ⅲ组相比,Ⅳ组肺癌A549细胞中CD80、CD86、MHCⅡ水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。Ⅳ组肺癌A549细胞中αKGA水平与Ⅲ组比较,明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。GLUD1 mRNA与GLS mRNA呈正相关(r=0.671,P<0.001),GLUD1 mRNA与αKGA呈正相关(r=0.708,P<0.001)。GLS mRNA与αKGA呈正相关(r=0.671,P<0.001)。结论CB-839可能通过介导T淋巴效应提高CD80、CD86、MHCⅡ水平,抑制αKGA及Gln相关基因转化,从而降低肺癌细胞活性,促进其凋亡,为今后肺癌的临床治疗及新药研发提供参考依据。

谷氨酰胺酶抑制剂CB-839对耐药小细胞肺癌细胞H69AR的杀伤作用研究

目的研究谷氨酰胺酶抑制剂CB-839对耐药小细胞肺癌细胞H69AR的细胞毒性作用。方法培养耐药小细胞肺癌细胞H69AR,将对数生长期耐药小细胞肺癌细胞H69AR随机分为8组:对照组仅加等量的培养液,其余7组实验组以倍比稀释的方式分别给予质量浓度为1.6×10^(-2),3.2×10^(-2),6.3×10^(-2),1.25×10^(-1),0.25,0.5,1μmol·L^(-1)的谷氨酰胺酶抑制剂CB-839。用噻唑蓝(MTT)法检测各组H69AR细胞活力的变化;用倒置显微镜观察H69AR细胞经CB-839作用后的形态学变化;用Western blotting法检测凋亡相关蛋白Cleaved Caspase3及细胞自噬标志蛋白LC3的表达。CB-839处理耐药小细胞肺癌细胞H69AR,分为CB-839组、氯喹组和CB-839联合自噬抑制剂氯喹组,用MTT法检测H69AR细胞活力的变化。结果不同质量浓度的CB-839作用H69AR细胞72 h后,H69AR细胞的活力均降低且呈明显的剂量依赖性,其中6.3×10^(-2),1.25×10^(-1),0.5,1μmol·L^(-1)实验组的细胞活力分别为74.3%,58.7%,41.7%,29.2%,差异有统计学意义(P<0.05)。通过倒置显微镜观察,CB-839作用H69AR细胞72 h后,0.25,0.5,1μmol·L^(-1)实验组的细胞密度随着药物质量浓度升高而显著降低,且形态发生皱缩和坏死。Western blotting实验结果表明,CB-839诱导H69AR细胞发生细胞凋亡,并激活细胞自噬活动。当使用自噬抑制剂氯喹抑制细胞自噬时,CB-839对H69AR细胞的杀伤作用显著增强。结论谷氨酰胺酶抑制剂CB-839对耐药小细胞肺癌细胞H69AR具有显著杀伤作用,在该过程中,H69AR细胞自噬活动增强,抑制自噬能进一步提高CB-839的抗肿瘤效应。

谷氨酰胺∶6-磷酸果糖酰基转移酶抑制剂细胞筛选模型的建立

目的 建立己糖胺途径的关键酶谷氨酰胺∶6 磷酸果糖酰基转移酶(glutamine∶fructose 6 phosphateamidotransferase,GFAT)抑制剂的细胞筛选模型。方法 用改进的GDH法测定GFAT的活性。以速效胰岛素依赖的葡萄糖摄取观察细胞对胰岛素的反应性;用长效胰岛素诱导HIRc细胞,形成己糖胺途径过度活跃和胰岛素抵抗的细胞模型,并应用该细胞模型和GDH法筛选GFAT抑制剂。结果 用25nmol·L-1长效胰岛素刺激HIRc细胞36h,可明显激活己糖胺途径,使GFAT活性上升47%;同时产生胰岛素抵抗,使速效胰岛素依赖的葡萄糖摄取能力降低21%。Azaserine可明显抑制该模型中GFAT的活性。结论 长效胰岛素既可过度激活HIRc细胞己糖胺途径,又可使其产生胰岛素抵抗。该模型可用于筛选GFAT抑制剂。

谷氨酰胺酶新型抑制剂及其抗肿瘤活性研究进展

肿瘤细胞利用各种代谢途径以满足增殖的能量和生物合成需求。除葡萄糖外,谷氨酰胺也是肿瘤细胞生长的重要前体物质及能量来源。谷氨酰胺酶(glutaminase,GSL)活性与Ras、c-Myc等癌基因以及Rho GTP酶相关。诸多临床前研究已证实谷氨酰胺酶抑制剂不仅具有抗肿瘤活性,还可以明显增强耐药肿瘤细胞对靶向药物的敏感性。目前新型GSL抑制剂CB-839已进入Ⅰ期临床试验,有望成为癌症治疗的新型药物。本文就谷氨酰胺代谢及其新型抑制剂抗肿瘤研究进展做一综述。

CB-839通过抑制谷氨酰胺代谢对巨噬细胞向M1型极化的影响

目的:研究谷氨酰胺酶抑制剂CB-839对巨噬细胞极化分型的影响。方法:准备小鼠骨髓来源巨噬细胞(bone marrow-derived macrophages,BMDM)和RAW264.7细胞,分为对照组和CB-839处理组。以CCK8检测巨噬细胞的增殖,用ELISA法检测M1型巨噬细胞相关因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白介素1β(IL-1β)以及M2型巨噬细胞相关因子肿瘤生长因子β(TGF-β)和IL-10,用流式细胞术检测M1型表面标志物CD86和M2型表面标志物CD206,用Western blot检测iNOS和Arg1蛋白表达水平。结果:CCK8结果显示CB-839并不影响BMDM和RAW264.7细胞的增殖,CB-839处理组的TNF-α和IL-1β的水平与CD86、iNOS的表达水平较对照组显著上升,TGF-β和IL-10的水平与CD206、Arg1的表达较对照组显著下降。结论:CB-839在不影响细胞增殖的前提下可以促进巨噬细胞向M1型极化。

组织型转谷氨酰胺酶在幼鼠肾间质损伤中的表达及意义

组织型转谷氨酰胺酶（tTG）在肾小管间质纤维化（RIF）形成过程中可能具有重要的致病作用。但相关机制尚未明了。本研究采用免疫组织化学染色，探讨单侧输尿管结扎模型（UUO）幼年大鼠肾间质纤维化病程进展过程中tTG、转化生长因子（TGF）-β1、α-平滑肌肌动蛋白（SMA）的组织定位表达趋势、相关性及病理意义，以及给予血管紧张素转换酶抑制剂苯那普利和血管紧张素Ⅱ1型（AT1）受体阻断剂氯沙坦干预治疗的影响。

谷氨酰胺酶1抑制剂对四氯化碳诱导的小鼠肝纤维化的影响

目的 探讨谷氨酰胺酶1(glutaminase 1,GLS1)特异性抑制剂BPTES[bis-2-(5-phenylacetamido-1,3,4-thiadiazol-2-yl)ethyl sulfide]对四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4)诱导的小鼠肝纤维化模型肝纤维化的影响。方法 经雄性C57BL/6J小鼠腹腔注射橄榄油(对照组)、10%CCl4(10μL/g,模型组)或10%CCl4(10μL/g)+BPTES(10 mg/kg,处理组),每组10只,每周注射2次,共4周,构建肝纤维化模型。采用天狼猩红染色法观察小鼠肝脏组织中胶原沉积情况;qRT-PCR和免疫组织化学染色法检测小鼠肝脏组织中肌动蛋白2(actin alpha 2,Acta2)、Ⅰ型胶原a1(collagen typeⅠalpha1,Col1a1)、GLS1基因及GLS1蛋白表达水平。结果 与对照组小鼠相比,模型组小鼠肝脏组织整体增大,表面不光滑,呈颗粒状,同时肝脏质量与胫骨长度比显著增加(t=2.979,P <0.05);与对照组相比,模型组小鼠肝脏组织中天狼猩红染色阳性的胶原沉积面积显著增加(t=7.661,P <0.01),Acta2和Col1a1基因相对表达量均显著增加(t分别为4.335和5.319,P均<0.01),GLS1 mRNA和蛋白表达水平均显著增加(t分别为5.319和9.725,P <0.01);与模型组小鼠相比,BPTES处理组小鼠肝脏质量减轻,肝脏组织中天狼猩红染色阳性的胶原沉积面积显著减少(t=7.427,P <0.01),Atca2和Col1a1基因相对表达量均显著降低(t分别为3.713和2.628,P均<0.05)。结论 抑制GLS1活性可显著改善CCl4诱导的肝纤维化程度,为肝纤维化治疗提供了新思路。

基于谷氨酰胺代谢抗肿瘤药物的研究进展

谷氨酰胺作为多种肿瘤的条件性必需氨基酸,对肿瘤的发生发展影响巨大。近年来有关谷氨酰胺代谢的研究进展迅速,涉及的相关药物已有多个处于临床前及临床研究。谷氨酰胺参与肿瘤细胞内能量生成、维持氧化还原平衡、促进大分子合成、传递信号等,其转运体和代谢酶是潜在的肿瘤治疗靶点。本文基于谷氨酰胺代谢抗肿瘤药物的研究进行综述,旨在为相关新药的研发提供参考。

组蛋白去乙酰化酶抑制剂治疗多聚谷氨酰胺病的研究进展

近年研究发现基因转录异常可导致亨廷顿病（Huntington’s disease，HD）等多聚谷氨酰胺（polyglutamine，PolyQ）病中的神经元功能异常。组蛋白去乙酰化酶（histone deaeetylases，HDACs）作为一种转录抑制因子，可与辅阻遏物复合体相互作用导致染色质重塑，最终抑制目的基因的转录。PolyQ蛋白与基因转录调控因子异常的相互作用可能是PolyQ病转录失调的原因之一。作者就PolyQ病转录失调的可能发生机制，尤其是组蛋白乙酰转移酶（histone acetyltransferases，HATs）和HDACs在其中所起的作用，以及组蛋白去乙酰化酶抑制剂（histone deaeetylases inhibitors，HDACIs）的治疗潜能等方面予以综述。

化合物C19抑制谷氨酰胺酶C活性研究

线粒体中的谷氨酰胺酶C(GAC)在多种肿瘤中高表达,导致谷氨酰胺代谢增强而促进癌症发生发展,因此成为具有巨大潜力的抗肿瘤药物研发靶点。目前已发现的GAC抑制剂结构特征较为集中,鲜有全新结构骨架的抑制剂报道。本文构建了大肠杆菌原核表达体系,通过溶菌酶与超声方法裂解菌体,结合钴离子磁珠分离纯化技术得到了高纯度的人源GAC蛋白。在此基础上,建立热漂移检测、药物亲和反应的靶点稳定性分析、蛋白质交联技术和GAC酶活性检测方法,完善小分子与GAC蛋白的相互作用验证体系。利用这一体系,对最新报道自Enamine数据库中筛选到的化合物C19进行全面的分子-蛋白间相互作用确证和体外药效学研究。实验结果表明,C19直接与GAC蛋白相互作用,干扰GAC活性四聚体形成,进而降低其酶催化活性。通过抑制GAC的生物学功能,C19剂量依赖性地降低GAC介导的谷氨酰胺代谢,减少肿瘤细胞中GAC酶催化产物谷氨酸的含量,进而显著抑制A549和NCI-H1299非小细胞肺癌细胞增殖。综上,C19可作为先导化合物,对后续靶向GAC药物的结构设计提供新的思路。

阻断肾型谷氨酰胺酶合成通路在肿瘤治疗中的研究进展

肿瘤代谢为近些年的研究热点。谷氨酰胺代谢在肿瘤的发生发展中发挥着重要的作用,谷氨酰胺代谢不仅能回补肿瘤细胞的三羧酸循环,还能为快速增殖的肿瘤细胞提供氮源以合成蛋白质、氨基己糖和核苷酸等生物大分子。谷氨酰胺酶为谷氨酰胺代谢的起始酶,大量研究显示谷氨酰胺酶在肿瘤细胞中异常表达,且异常表达的谷氨酰胺酶在肿瘤的生长增殖、侵袭转移及预后中发挥着重要的作用。本文综述了肿瘤细胞中调控肾型谷氨酰胺酶的合成通路,并介绍了相关通路抑制剂在抗肿瘤中的应用及其广阔前景,为肿瘤的治疗提供新的思路。

几种除草剂靶酶及其抑制剂的研究进展

根据作用靶标对除草剂进行分类,对于新型除草剂的设计能够起到很大的帮助。迄今为止,人们已发现除草剂的不同作用位点近30种,涉及到50余种不同化学结构的化合物。文中介绍了谷氨酰胺合成酶(GS)、咪唑甘油磷酯脱水酶(IGPD)、乙酰辅酶A羧化酶(ACCace)、八氢番茄红素脱氢酶(PDS)及其各自抑制剂的研究进展。分别从酶的生理功能、酶学特征、抑制剂作用机理、抑制剂的研究、抗性等方面进行了不同程度的阐述。

腹腔疾病相关抗体与银屑病活动的相关性研究

Background: Antigliadin antibodies (AGA) have been reported in patientswith p soriasis. Objectives: To determine ifAGA and other coeliac disease (CD)-associ ated antibodies correlate with clinical features and activity in patients with p soriasis. Methods: Patients with psoriasis (n = 130) were investigated for serum IgG and IgA AGA, IgA antitransglutaminase antibody and IgA antiendomysial antib ody. Disease characteristics and associated bowel and joint symptoms were determ ined. All patients were invited to undertake endoscopy with duodenal biopsy. Res ults: A significantly higher proportion of patients with elevatedCD-associated antibody levelswas currently on or had previously required systemic immunosuppr essants (methotrexate, ciclosporin or etretinate; P = 0· 04) or psoralen plus u ltraviolet A phototherapy (P = 0· 03). One case of CD was diagnosed. Conclusion s: The presence of CD-associated antibodies in psoriasis patients correlates w ith greater disease activity.