靶向抑制乳腺癌细胞GLS1基因表达对癌细胞凋亡的影响

目的探讨抑制乳腺癌细胞谷氨酰胺酶(GLS) 1基因表达对癌细胞凋亡的影响。方法参照Lipofectamine^(TM) 2000说明将合成的GLS1 siRNA及无干扰作用的siRNA转染MCF-7细胞,分别为GLS1-siRNA组和阴性对照组,并设置空白对照组,转染48 h后,Western印迹检测GLS1、凋亡相关蛋白survivin、p53及磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/丝氨酸苏氨酸激酶(AKT)信号通路PI3K和磷酸化(p-AKT)的蛋白表达; 3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法检测GLS1-siR-NA转染24、48和72 h的细胞活力;流式细胞仪检测GLS1-siRNA转染48 h的细胞凋亡率。结果转染GLS1-siRNA的MCF-7细胞GLS1蛋白表达显著低于空白对照组(P<0. 05);与空白对照组比较,GLS1-siRNA组细胞在转染24、48和72 h的细胞活力均显著降低,细胞凋亡率显著升高,survivin、PI3K和p-AKT蛋白表达均显著降低,p53蛋白表达显著升高(P<0. 05)。结论抑制GLS1基因在乳腺癌中的表达可降低细胞活力,促进细胞凋亡及下调PI3K/AKT信号通路,其中诱导细胞凋亡的方式是下调survivin表达和上调p53表达。

TGM1基因表达沉默对角质形成细胞细胞周期及相关蛋白表达的影响

目的：观察转谷氨酰胺酶1基因（ TGM1）表达沉默前、后对角质形成细胞的细胞周期及细胞周期相关蛋白表达的影响，探讨其机制。方法利用流式细胞仪（ FCM ）检测 RNA 干扰（ RNAi）技术沉默TGM1基因表达前、后人永生化角质形成细胞（ HaCaT细胞）的细胞周期状况；应用免疫细胞化学SP 法和Western 印迹法检测RNAi 技术沉默 TGM1基因表达前、后细胞周期蛋白（cyclin）D1、cyclin B1、细胞周期蛋白依赖激酶4（CDK4）的表达差异。结果 TGM1基因沉默后，小干扰RNA（ siRNA）－TGM1转染组处于 G0／G1期的细胞数（78．27％±1．83％）明显高于阴性对照组（56．84％±2．72％，P＜0．05）和空白对照组（57．19％±3．72％，P＜0．05）；而S期和G2／M期的细胞数，siRNA－TGM1转染组（32．78％±5．48％、3．66％±0．30％）明显低于阴性对照组（57．32％±2．91％、9．39％±0．68％，均 P＜0．05）和空白对照组（55．71％±2．84％、9．77％±0．52％，均 P ＜0．05）。免疫细胞化学检测结果显示， TGM1基因沉默后 cyclinD1、cyclin B1、CDK4呈阴性表达；Western印迹法检测结果显示， TGM1沉默后cyclin D1、cyclin B1、CDK4的蛋白条带亮度明显降低。结论 TGM1基因沉默后能阻断HaCaT细胞的细胞周期，使细胞周期停留在S期，不能进入G2／M期，无法完成DNA的合成，未完成细胞的分裂；TGM1基因沉默可能通过抑制细胞周期相关蛋白cyclin D1、cyclin B1、CDK4的表达影响表皮细胞的细胞周期。