α-硫辛酸对糖尿病小鼠骨骼肌谷氨酰胺6磷酸果糖转氨酶1表达的影响

测定了四氧嘧啶制成的糖尿病小鼠模型骨骼肌的谷氨酰胺-6磷酸果糖转氨酶1(GFAT1)的mRNA表达水平。给予α硫辛酸治疗的糖尿病小鼠,骨骼肌内丙二醛水平低于不予治疗的糖尿病小鼠,而骨骼肌内GFAT-1的mRNA表达水平也低于不治疗组。

N6-甲基腺苷阅读蛋白人类抗原R对结直肠癌细胞的迁移、侵袭和糖酵解的影响及其与磷酸果糖激酶1的关系

目的探讨N6-甲基腺苷(m^(6)A)阅读蛋白人类抗原R(HuR)对结直肠癌细胞迁移、侵袭及糖酵解能力的影响及其与6-磷酸果糖激酶1(PFK1)的关系。方法收集2022年4—12月在郑州大学附属郑州中心医院首次确诊为结直肠癌的33例患者的组织标本,通过实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测结直肠癌患者的癌组织、癌旁组织中HuR和PFK1 mRNA表达量,检测正常肠上皮细胞NCM460以及结直肠癌细胞HCT8、SW480、SW620、HCT116、LoVo、RKO和COLO205中HuR mRNA表达量;使用小干扰RNA构建敲减HuR的结直肠癌细胞模型,通过细胞划痕实验、Transwell实验分别检测HuR对结直肠癌细胞迁移和侵袭能力的影响;通过qRT-PCR、Western bolt实验分别检测PFK1 mRNA及其蛋白表达量;采用葡萄糖含量试剂盒、丙酮酸含量试剂盒分别检测葡萄糖摄取量、丙酮酸生成量;通过生物信息学分析探讨HuR与PFK1的关系,采用放线菌素D实验评估HuR对PFK1 mRNA稳定性的影响。结果在结直肠癌组织中,HuR、PFK1在mRNA水平上呈高表达;在结直肠癌细胞系中,HuR在mRNA水平上呈高表达;下调HuR可以显著抑制结直肠癌细胞迁移、侵袭能力,同时可以降低葡萄糖消耗量及丙酮酸生成量;敲低HuR可以抑制PFK1 mRNA的稳定性,降低其在mRNA和蛋白水平的表达量。PFK1上存在m^(6)A修饰位点。结论m^(6)A阅读蛋白HuR可能通过识别结合PFK1上的m^(6)A位点降低PFK1 mRNA稳定性,从而调控结直肠癌细胞的迁移、侵袭和糖酵解能力。

重组人干扰素α1b联合1,6-二磷酸果糖治疗儿童轮状病毒肠炎价值研究

探讨对儿童轮状病毒肠炎患者采用重组人干扰素α1b联合1,6-二磷酸果糖治疗的效果。方法 筛选2021年3月-2022年4月期间在昆明市禄劝县医院儿科内进行诊治的94例轮状病毒肠炎患儿,随机分组,比较对照组(单独重组人干扰素α1b治疗)和观察组(联合1,6-二磷酸果糖治疗)患儿的临床疗效、退烧等相关用时、治疗前后淋巴细胞表面抗原水平、心肌酶水平、不良反应。结果 观察组患儿的临床治疗效果更高(P<0.05),该组患儿退烧、止泻用时均显著短于对照组(P<0.05),脱水纠正用时之间无明显差异(P>0.05),两组患儿治疗后的淋巴细胞表面抗原水平之间存在较大的差异(P>0.05),且该组患儿的肌酸激酶等心肌酶水平均低于对照组(P<0.05),两组患儿的不良反应之间不存在较大的差异(P>0.05)。结论 在儿童轮状病毒肠炎的治疗中,重组人干扰素α1b联合1,6-二磷酸果糖的治疗方式具有良好的应用效果,其在提高临床疗效、促进恢复、提升免疫功能以及改善心肌状况中都表现出明显的优势。

谷氨酰胺∶6-磷酸果糖酰基转移酶抑制剂细胞筛选模型的建立

目的 建立己糖胺途径的关键酶谷氨酰胺∶6 磷酸果糖酰基转移酶(glutamine∶fructose 6 phosphateamidotransferase,GFAT)抑制剂的细胞筛选模型。方法 用改进的GDH法测定GFAT的活性。以速效胰岛素依赖的葡萄糖摄取观察细胞对胰岛素的反应性;用长效胰岛素诱导HIRc细胞,形成己糖胺途径过度活跃和胰岛素抵抗的细胞模型,并应用该细胞模型和GDH法筛选GFAT抑制剂。结果 用25nmol·L-1长效胰岛素刺激HIRc细胞36h,可明显激活己糖胺途径,使GFAT活性上升47%;同时产生胰岛素抵抗,使速效胰岛素依赖的葡萄糖摄取能力降低21%。Azaserine可明显抑制该模型中GFAT的活性。结论 长效胰岛素既可过度激活HIRc细胞己糖胺途径,又可使其产生胰岛素抵抗。该模型可用于筛选GFAT抑制剂。

利用柞蚕核型多角体病毒表达系统表达谷氨酰胺果糖-6-磷酸酰胺转移酶

谷氨酰胺果糖-6-磷酸酰胺转移酶(glutamine:fructose-6-phosphate amidotransferase,GFAT)是己糖胺生物合成途径(HBP)中的限速酶,与蛋白质糖基化修饰密切相关。本研究克隆的柞蚕GFAT基因(ApGFAT)CDS由2 022个碱基构成,编码674个氨基酸。将该基因连接到柞蚕杆状病毒转移载体pApM748BE后与ApNPV-Δph/egfp+共转染Tn-High Five细胞获得重组病毒。将重组病毒注射到柞蚕蛹体内,收集发病蛹血淋巴,用镍离子螯合柱纯化得到纯化蛋白,SDS-PAGE和Western blot检测表明,ApGFAT蛋白在柞蚕蛹体内得到成功表达,酶活力为0.978μmol/(min·mg)。

人谷氨酰胺:6-磷酸果糖酰胺转移酶的体外表达、纯化及活性检测

目的:制备重组谷氨酰胺∶6-磷酸果糖酰胺转移酶(GFAT),检测其活性。方法:利用RT-PCR扩增人肝脏cDNA中GFAT1基因全长片段,克隆到表达载体pET32b中;在大肠杆菌Origami(DE3)中诱导表达,用镍离子螯合柱(Ni-NTA)纯化重组GFAT1;用体外酶学的方法检测GFAT的活性。结果:构建了pET32b-GFAT1质粒,经诱导表达及纯化,得到具有一定生物活性的GFAT。结论:利用原核表达系统可得到具有良好生物学活性的重组人GFAT1。

松墨天牛谷氨酰胺6-磷酸果糖酰胺转移酶基因克隆与表达

谷氨酰胺6-磷酸果糖酰胺转移酶(glutamine-fructose-6-phosphate aminotransferase,GFAT)是己糖胺通路(HBP)的限速酶,参与几丁质的合成和蛋白质的糖基化。本研究利用RACE克隆了松墨天牛GFAT基因(Ma GFAT),Gen Bank登录号为KT362367,其长度为2624 bp,开放阅读框为2061 bp,编码686个氨基酸。序列对比分析显示Ma GFAT与赤拟谷盗相似性最高,为88%,在系统发育树上位于同一分支。采用RT-q PCR方法检测Ma GFAT在松墨天牛不同组织及不同发育时期的表达情况,结果表明:Ma GFAT在各虫态中,成虫中的表达量最高;在成虫部位中,翅的表达量最高;在幼虫各组织中,体壁的表达量最高。本文为研究GFAT结构与功能的关糸奠定基础,为阐明GFAT在松墨天牛几丁质合成中的作用提供参考。

1,6-二磷酸果糖联合西药改善慢性心力衰竭患者心功能的meta分析和GRADE质量评价

目的 系统评价1,6-二磷酸果糖联合西药改善慢性心力衰竭(CHF)患者心功能的效果及证据级别。方法 检索中国知网、万方数据库、维普网、中国生物医学文献服务系统、Pub Med、Web of Science建库至2022年11月有关1,6-二磷酸果糖用于治疗CHF患者的随机对照研究。利用Endnote 20.0、Review Manager 5.4.1、GRADE profiler进行文献管理、meta分析和结局指标的证据质量评价。结果 共纳入9篇文献,涉及771例观察对象,其中试验组388例,对照组383例。meta分析结果显示,试验组左室射血分数(MD=5.00,95%CI:4.91~5.09,P=0.000 01)、E/A(MD=0.10,95%CI:0.04~0.16,P=0.000 08)、心排血指数(MD=0.61,95%CI:0.38~0.83,P=0.00001)、心排血量(MD=0.73,95%CI:0.36~1.10,P=0.0001)高于对照组。GRADE质量评价提示纳入文献证据级别为低级。结论 1,6-二磷酸果糖联合西药可改善CHF患者心功能,但仍需高级别证据支持。

1,6-二磷酸果糖对模拟急进高原环境下大鼠的预防性保护作用研究

探索预防性灌胃给予1,6-二磷酸果糖对模拟高原低压低氧环境下大鼠的保护作用。方法 将36只Wistar大鼠随机、平均分为3组,低压低氧给药组(FDP组),低压低氧组(HG组),常压常氧组(NG组)。利用大型多因素复合环境模拟舱模拟海拔高度6000 m环境,大鼠进舱2 d后收样并检测各项病理生理指标。FDP组大鼠灌胃给药剂量为500 mg/kg,总给药时长为6d,其中舱外给药4d,大鼠进舱后继续给药2 d。HG组与NG组根据大鼠体重给予相同用药量体积的生理盐水灌胃6d。给药结束,在模拟海拔3000m环境,每组中6只大鼠进行游泳力竭实验,另外6只大鼠麻醉后腹主动脉取血进行血气分析、血液常规检查及氧化应激指标检测;之后处死大鼠立即取心、肾、肺等器官,固定,进行组织HE染色和病理分析。结果 在缺氧条件下大鼠游泳时长显著缩短,而FDP组游泳时长与HG组相比显著延长(P<0.05)。低压低氧条件下大鼠血清中T-SOD水平降低,MDA水平升高,说明大鼠出现氧化应激损伤;FDP组与HG相比T-SOD数值增高(P<0.05),MDA数值降低(P<0.05),说明FDP缓解了氧化应激损伤。低压低氧条件下大鼠出现明显心肌、肺、肾组织损伤,FDP组与HG组相比损伤减轻。结论 预防性服用FDP能延长低压低氧条件下大鼠游泳时间,减轻氧化应激反应以及减轻大鼠重要脏器损伤,改善高原反应。

重组人干扰素α2b联合1,6-二磷酸果糖治疗儿童轮状病毒肠炎的效果及心肌保护作用

目的 探究重组人干扰素α2b(RHIα2b)联合1,6-二磷酸果糖(FDP)治疗儿童轮状病毒肠炎(RVE)的效果及心肌保护作用。方法 选取安徽省淮南市第一人民医院2019年6月至2022年6月收治的78例RVE患儿,按照随机数字表法分为两组,各39例。对照组采用RHIα2b治疗,观察组采用RHIα2b联合FDP治疗。治疗7 d后评估两组临床疗效,比较两组治疗前后免疫功能及心肌谱酶水平,比较两组住院时间、止泻时间及脱水纠正时间,观察两组不良反应发生情况。结果 观察组临床疗效优于对照组(P<0.05)。治疗后,两组CD3+、CD4+/CD8+水平高于治疗前,且观察组高于对照组(P<0.05)。治疗后,两组肌酸激酶、肌酸激酶同工酶及乳酸脱氢酶水平低于治疗前,且观察组低于对照组(P<0.05)。观察组住院时间、止泻时间短于对照组(P<0.05);两组脱水纠正时间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。两组用药过程中均未见皮疹、发热、心悸等不良反应。结论 RHIα2b联合FDP能够提高RVE患儿的治疗效果,改善免疫功能,对患儿心肌起到一定的保护作用,加速患儿康复,安全有效。

电针介导AMPK/GFAT-1/VEGF对缺血性脑卒中小鼠脑血流量及运动功能的影响

目的观察电针“百会”“大椎”穴对缺血性脑卒中小鼠脑血流量及运动功能的影响,揭示腺苷酸活化蛋白激酶(adenosine 5′-monophosphate-activated protein kinase,AMPK)/谷氨酰胺-6-磷酸果糖转氨酶-1(glutamine-fructose-6-phosphate aminotransferase-1,GFAT-1)/血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)分子通路参与电针减轻血管损伤,改善肢体运动功能的作用机制。方法将C57雄性小鼠随机分为假手术组、模型组、电针组,每组6只。采用光栓法制备缺血性脑卒中小鼠模型。采用走格子测试和爬杯实验评估小鼠运动功能;TTC染色和激光散斑血流成像仪评估脑梗死体积与脑血流灌注量变化;Western blot法检测AMPK、磷酸化AMPK(phosphorylated AMPK,p-AMPK)、GFAT-1、VEGF的表达水平。结果与假手术组比较,模型组小鼠运动功能受损(P<0.05),脑梗死体积增加(P<0.05),脑血流灌注量减少(P<0.05),AMPK、p-AMPK、VEGF蛋白表达水平显著降低(P<0.05),GFAT-1蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。与模型组比较,电针组小鼠运动功能显著改善(P<0.05),脑梗死体积显著减小(P<0.05),脑血流灌注量显著增加(P<0.05),AMPK、p-AMPK、VEGF蛋白表达水平均显著升高(P<0.05),GFAT-1蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。结论电针可能通过介导AMPK/GFAT-1/VEGF分子通路,参与改善脑皮质缺血所致脑血管损伤和运动功能障碍。

果糖-1,6-二磷酸醛缩酶和丙糖磷酸异构酶共表达对蓝藻光合作用效率的影响

以转高等植物ALD和TPI基因的鱼腥藻 712 0为对象 ,研究了ALD和TPI两个酶表达量对细胞光合固碳效率的影响。考察了初始pH、NaHCO3浓度和CO2 浓度对转基因藻和野生藻生长、光合活性及无机碳亲和力的影响。结果表明 ,转基因藻在较高碳源浓度下 ,其生长速率和光合放氧活性比野生藻有显著的提高 ,并且可以比野生藻耐受更高的pH。在含有 2 %CO2 的空气中 ,转基因藻对外源无机碳的亲和力比野生藻提高了 4 0

1，6-二磷酸果糖对反复热性惊厥大鼠海马区超微结构损伤保护作用的研究

目的1,6-二磷酸果糖(FDP)作为细胞代谢的能量物质已被证实在辅助治疗缺氧缺血性脑病及心肌受损性疾病方面具有重要作用。该研究探讨FDP对大鼠热性惊厥性海马超微结构损伤是否具有保护作用。方法36只21日龄雄性SD大鼠均分为热性惊厥组(FS),高剂量果糖干预组(HD)及低剂量果糖干预组(LD)。水浴法建立热性惊厥模型;高、低剂量果糖干预组于惊厥前30min各腹腔注射FDP50mg/100g及25mg/100g大鼠体重;而FS组腹腔注射相同体积的0.9%氯化钠溶液。应用透射电镜分别观察海马CA1区神经元、细胞器的病理超微结构改变和神经突触参数变化特征。结果果糖干预组在神经元变性坏死、线粒体肿胀、内质网脱颗粒及高尔基体扩张等方面较FS组减轻,差异有显著性。果糖干预组同FS组相比,脑海马CA1区神经突触间隙缩窄(F=7.29,P<0.01),突触后致密物质厚度增加(F=12.47,P<0.01),突触活性带长度延长(F=14.75,P<0.01),突触界面曲率增加(F=3.77,P<0.05),差异有显著性。在改善上述超微结构损伤方面,HD与LD组比较差异无显著性。结论FDP可以减轻反复热性惊厥大鼠海马区超微结构受损程度,但有效而适宜的用药剂量仍需进一步探讨。

1-6二磷酸果糖联合黄芪注射液治疗病毒性心肌炎Meta分析

目的评价1-6二磷酸果糖联合黄芪注射液治疗病毒性心肌炎的疗效。方法计算机检索Cochrane图书馆临床对照试验资料库、MEDLINE、EMbase、万方、维普、CNKI、CBM,手工检索1-6二磷酸果糖联合黄芪注射液治疗病毒性心肌炎1995年3月—2011年12月发表的相关文献,应用Rev Man 5.0软件对数据进行Meta分析。结果试验组患者症状缓解与对照组相比差异有统计学意义[Z=5.66(P<0.001),比值比(OR)=5.65,95%CI(3.10,10.30)];心电图改善总有效率试验组均高于对照组,差异有统计学意义[Z=3.31(P=0.000 9),OR=3.81,95%CI(1.73,8.43)];肌酸激酶同工酶的降低试验组均优于对照组,差异有统计学意义[加权均属差(WMD)=-9.27,95%CI(-78.17,-4.47),P=0.000 2]。漏斗图近似对称,发表偏倚不大。结论 1-6二磷酸果糖联合黄芪注射液治疗病毒性心肌炎在临床症状改善、心电图改善、降低心肌肌酸激酶同工酶方面疗效确切。

1，6-二磷酸果糖联合辅酶Q10治疗小儿病毒性心肌炎20例疗效观察

目的观察1，6-二磷酸果糖加辅酶Q10治疗小儿病毒性心肌炎的疗效。方法对1999年1月至2006年12月收治的小儿病毒性心肌炎患儿49例采用完全随机设计方法分成治疗组20例和对照组29例。治疗组给予1，6-二磷酸果糖100～250mg／（kg·d）静脉滴注，辅酶Q10 1～2mg／（kg·d）口服；对照组给予能量合剂静脉滴注，1次／d。10～14d为1个疗程，观察2组临床症状、心电图、心肌酶及心功能变化，并进行疗效评定。结果治疗组与对照组的总有效率分别为95．0％与72．4％，2组比较有统计学意义（P〈0．05）。结论1，6-二磷酸果糖加辅酶Q10治疗小儿病毒性心肌炎有较好疗效。

姬松茸配伍1,6-二磷酸果糖抗疲劳研究

目的研究姬松茸配伍1,6-二磷酸果糖(FDP)抗疲劳作用及机制,寻找最佳配伍剂量,为研发姬松茸配伍FDP抗疲劳口服制剂提供动物实验依据。方法试验采用不同剂量姬松茸和FDP及其配伍剂量灌胃小鼠,通过对力竭游泳时间、血乳酸含量、肝糖原含量、SOD活力、乳酸脱氢酶活力的测定,观察姬松茸及其配伍FDP抗疲劳效果,并探讨其可能的抗疲劳机制。结果姬松茸10 g/kg、FDP 200 mg/kg剂量组效果显著。析因分析得出在配伍剂量下姬松茸与FDP存在交互关系,配伍剂量组强于单剂量组,更强于对照组。结论姬松茸与FDP配伍可显著增强乳酸脱氢酶活力,减少无氧运动后乳酸的堆积,提高机体对抗疲劳的能力;显著提高运动后小鼠肝糖原水平,增加有氧运动糖分供给;配伍还能够提高超氧化物歧化酶活力,加快清除自由基,增强保护组织细胞生物膜作用,延缓疲劳发生。姬松茸与FDP配伍抗疲劳作用显著。

1,6-二磷酸果糖注射液(瑞安吉)治疗急性脑梗死的多中心、随机、双盲、安慰剂对照临床研究

目的评价1,6-二磷酸果糖注射液(FDP)治疗急性缺血性卒中的临床有效性及安全性。方法多中心、随机、双盲、安慰剂对照研究。症状发生在72h以内的颈内动脉系统的急性脑梗死患者,被随机分配至FDP或安慰剂2个治疗组,治疗10d。除研究用药外,两组均同时应用治疗急性脑梗死常用的药物。有效性终点为治疗11d及21d时的卒中神经功能缺损评分。安全性及耐受性评价指标为实验室检查、不良事件发生率及病死率。结果自2001年11月至2002年7月在4个中心共入选200例患者,FDP组101例,安慰剂组99例。治疗11d时两组神经功能缺损评分差异无显著性(P=0.062)。21d时FDP治疗组神经功能改善优于安慰剂组(P=0.0438)。FDP组除5例发生注射部位相关的疼痛外,无其他不良反应发生。结论初步研究结果显示:FDP治疗症状发生在72h以内的急性脑梗死是有效安全的药物。

甘蔗果糖-1,6-二磷酸酯酶的cDNA片段克隆及序列分析

植物生长发育所需要的光合产物大部分以蔗糖的形式供应和运输,其中果糖-1,6-二磷酸酯酶(fructose-1,6-bisphosphatase,FBPase)水解果糖-1,6-二磷酸(FBP)形成F6P和无机磷。根据GenBank登录的甘蔗细胞质型FBPase基因(GenBank登录号x89006)的序列设计引物,从甘蔗叶片cDNA文库和茎中扩增出FBPase基因的cDNA片段sfbp1和sfbp2,并构建到pMD18-T载体进行序列测定和分析。结果表明,sfbp1和sfbp2长均是1180bp,包含完整的开放读码框,编码332个氨基酸。sfbp1核苷酸序列及其推演的氨基酸序列与甘蔗FBPase基因进行序列比对,相似性均是99%。采用DNAMAN比对分析sfbp1和sfbp2的cDNA序列及其推演的氨基酸序列,结果表明,相似性分别是99.93%和99.7%。采用ExPASy软件预测推演的sfbp1的分子量大小为36.074kD,理论等电点为5.83。

果糖-1,6-二磷酸对糖尿病大鼠心肌凋亡相关蛋白的影响

目的观察果糖-1,6-二磷酸(FBP)对糖尿病大鼠心肌凋亡相关蛋白的影响。方法通过一次性腹腔注射链脲佐菌素建立SD大鼠糖尿病模型,分成模型对照组(DM组)和FBP组,FBP组给予FBP 500 mg/(kg.d)腹腔注射,DM组及正常对照组(NC组)给予等量生理盐水腹腔注射。1个月后处死大鼠,取心肌组织行HE染色,免疫组织化学染色进行Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达的半定量分析。结果与NC组比较,DM组大鼠心肌局灶性空泡变性,Bcl-2/Bax表达减低,Caspase-3表达增加。而FBP干预可以在一定程度上逆转上述变化。结论FBP可以通过降低凋亡基因蛋白的表达而保护糖尿病大鼠心肌。

安定、1,6-二磷酸果糖治疗小儿惊厥持续状态

目的:寻找儿童惊厥持续状态的治疗方法。方法:将符合条件的病例随分为两组,对照组采用安定及常规治疗,治疗组在上述治疗的基础上加用1,6-二磷酸果糖治疗。比较两组抽搐停止和意识恢复的时间及死亡率。结果:治疗组抽搐停止和意识恢复的时间均较对照组明显缩短,u>7,P<0.01,差异具有非常显著性。结论:采用安定、1,6-二磷酸果糖联合应用抢救儿童惊厥持续状态疗效好,值得临床应用。