国产多孔钽对MG63细胞中Ⅰ型胶原、谷氨酰转氨酶2和钙结合蛋白A4表达的影响

背景:目前有证据已证实国产多孔钽具有良好的生物相容性及促成骨性能,但具体的成骨机制及对成骨因子的影响尚不明确。目的:观察国产多孔钽材料对MG63细胞Ⅰ型胶原、谷氨酰转氨酶2及钙结合蛋白A4表达的影响。方法:将对数生长期的MG63细胞接种于24孔板,分3组培养:空白组加入常规培养基,钽浸提液组加入多孔钽材料浸提液,钽支架组加入多孔钽材料与常规培养基。培养第1,3,5,7,9天,CCK-8法检测各组细胞增殖;培养第5天,采用ELISA酶联免疫吸附法检测各组细胞分泌Ⅰ型胶原、谷氨酰转氨酶2和钙结合蛋白A4的水平,Western-blot法检测各组细胞中钙结合蛋白A4、Ⅰ型胶原、谷氨酰转氨酶2蛋白的表达。结果与结论:(1)随着培养时间的延长,各组细胞数量呈逐渐增加趋势,3组不同时间点的细胞增殖比较无差异(P> 0.05);(2)钽支架组Ⅰ型胶原、谷氨酰转氨酶2分泌高于空白组、钽浸提液组(P <0.05),钽浸提液组Ⅰ型胶原、谷氨酰转氨酶2分泌高于空白组(P <0.05);钽支架组钙结合蛋白A4分泌低于其他两组(P <0.05);(3)钽支架组中Ⅰ型胶原、谷氨酰转氨酶2蛋白表达均高于空白组、钽浸提液组(P <0.05),钽浸提液组中Ⅰ型胶原、谷氨酰转氨酶2蛋白表达高于空白组(P <0.05);钽支架组钙结合蛋白A4蛋白表达均低于空白组、钽浸提液组(P <0.05);(4)结果表明,国产多孔钽材料可促进MG63细胞分泌Ⅰ型胶原、谷氨酰转氨酶2,抑制其分泌钙结合蛋白A4。

神经型一氧化氮合酶调控谷氨酰胺转氨酶2抑制心力衰竭模型大鼠心脏收缩功能的作用机制

[目的]探讨神经型一氧化氮合酶(nNOS)调控谷氨酰胺转氨酶2(TG2)抑制心力衰竭心脏收缩功能的作用机制.[方法]向渗透压泵储药仓内注入血管紧张素Ⅱ后植入于大鼠背部颈后皮下组织,灌注速度为125 ng/(min·kg),制作高血压诱导的心力衰竭模型.假手术组进行同样的手术,但不植入胶囊渗透压泵.[结果]与假手术组比较,心力衰竭组左心室射血分数LVEF(P=0.03)与左心室缩短分数(P=0.04)均明显降低,心肌细胞收缩时肌节缩短长度明显降低(P<0.001),TG2活性及三磷酸腺苷含量均明显降低(P<0.01).应用TG2活性抑制剂(Cystamine,500μmol/L)后,假手术组的心肌细胞收缩时肌节缩短长度明显下降(P<0.05);心力衰竭组nNOS蛋白表达水平升高,心肌细胞内TG2-SNO/TG2比值升高(P<0.05),给予nNOS抑制剂SMTC后恢复至正常水平(P<0.05).使用SMTC或L-VNIO(100μmol/L)抑制假手术组及心力衰竭组细胞内nNOS活性后,心肌细胞内TG2活性升高(对照组分别与SMTC、L-VNIO比较,P<0.05),先应用L-VNIO(100μmol/L)抑制心力衰竭组心肌细胞中nNOS活性,心肌细胞的肌节收缩幅度增加(P<0.05),再追加TG2活性抑制剂(Cystamine,500μmol/L)抑制心肌细胞中TG2活性,结果显示心肌细胞的肌节收缩幅度被抑制(P<0.05);相反,先应用Cystamine再追加L-VNIO时心肌细胞的肌节长度未发生改变(Cystamine,P>0.05;Cystamine+L-VNIO,P>0.05).[结论]心力衰竭模型大鼠心肌细胞内nNOS增多可抑制TG2活性,从而导致心肌细胞肌节缩短长度降低,认为其可能是导致心功能降低的原因.

肝细胞肝癌组织中miR-143-3p、GFPT2表达变化及意义

目的探讨肝细胞肝癌(HCC)组织中微小RNA-143-3p(miR-143-3p)、谷氨酰胺果糖-6-磷酸转氨酶2(GFPT2)的表达变化及临床意义。方法选取HCC患者106例,术中收集其HCC组织与癌旁正常组织(距离肿瘤边缘>5 cm)。用实时荧光定量PCR法检测组织中miR-143-3p、GFPT2 mRNA的表达,Pearson相关法分析HCC组织中miR-143-3p与GFPT2 mRNA表达的相关性,分析HCC组织中miR-143-3p、GFPT2 mRNA表达与患者临床病理特征的关系,Kaplan-Meier法分析miR-143-3p、GFPT2 mRNA表达与患者预后的关系。结果与癌旁正常组织比较,HCC组织中miR-143-3p相对表达量低(P=0.000),GFPT2相对表达量高(P=0.000)。HCC组织中miR-143-3p与GFPT2 mRNA表达呈负相关(r=-0.558,P=0.000)。HCC组织中miR-143-3p、GFPT2 mRNA表达与肿瘤门静脉侵犯、TNM分期有关(P均<0.05)。106例HCC患者随访2~60(32.7±6.5)个月,随访期间死亡65例。以HCC组织中miR-143-3p相对表达量均数0.843为临界值,分为miR-143-3p高表达组51例、miR-143-3p低表达组55例。与miR-143-3p高表达组比较,miR-143-3p低表达组5年总体生存率(OS)低(P=0.012),生存时间短(P=0.000)。以HCC组织中GFPT2 mRNA相对表达量均数1.623为临界值,分为GFPT2高表达组52例、GFPT2低表达组54例。与GFPT2低表达组比较,GFPT2高表达组5年OS低(P=0.000),生存时间短(P=0.000)。结论HCC组织中miR-143-3p低表达,GFPT2高表达;二者均参与HCC的发生发展,并影响患者预后。

不同状态BMP-2对体外EMSCs成骨分化的作用

[目的]探讨骨形成蛋白(BMP-2)与组织型谷氨酰胺转氨酶(tTG, TG2)交联形成固化型和BMP-2游离型细胞生长因子,两种不同状态的BMP-2对鼻粘膜间充质干细胞(EMSCs)向成骨细胞分化的影响;[方法]体外培养、扩增并鉴定EMSCs;实验分四组:TG2+BMP-2、BMP-2、TG2和空白对照;四组细胞均采用定向成骨诱导培养基培养7 d;检测各组碱性磷酸酶活性及形成的钙结节面积大小;免疫印迹法检测成骨诱导相关蛋白表达水平;MTT法检测TG2、BMP-2和TG2+BMP-2对EMSCs增殖的影响。[结果]成骨诱导7 d后,TG2+BMP-2组细胞碱性磷酸酶活性较高,形成的钙结节较大,骨相关蛋白表达水平较高;TG2+BMP-2,TG2和BMP-2对EMSCs增殖能力无明显影响。[结论] TG2+BMP-2交联固化型细胞生长因子对EMSCs向成骨细胞分化表现出较强的促进作用,是组织工程化骨中理想的诱导成骨的细胞因子,具有广阔的应用前景。

TG2对大鼠鼻粘膜间充质干细胞体外的影响

[目的]探讨组织型谷胺酰氨转胺酶2(TG2)对大鼠鼻粘膜来源的间充质干细胞体外增殖以及定向成骨分化的影响。[方法]体外分离培养大鼠鼻粘膜间充质干细胞,采用MTT和免疫荧光法检测不同浓度的TG2对大鼠鼻粘膜间充质干细胞增殖能力的影响。通过茜素红染色、碱性磷酸酶染色、蛋白质印迹法和免疫荧光观察TG2对大鼠鼻粘膜间充质干细胞体外成骨分化能力的影响。[结果]谷胺酰氨转胺酶2能促进鼻粘膜间充质干细胞增殖(P<0.05),并能提高ALP活性(P<0.05),同时增强矿化钙结节形成能力,并对成骨相关标记蛋白COL I和OCN的表达具有上调作用。[结论]谷胺酰氨转胺酶2可提高大鼠鼻粘膜来源的间充质干细胞的增殖能力以及其向成骨细胞分化的潜能。

PPP2R2A在乳腺癌细胞中结合GFPT2并导致其去磷酸化

PPP2R2A是PP2A磷酸酶的调控亚基之一,以往的研究报道显示,PPP2R2A可促进肿瘤细胞生存和生长。本研究通过串联亲和纯化联合HPLC-Chip-ESI/MS/MS筛选PPP2R2A的相互作用蛋白质,分析结果显示,L-谷氨酰胺-D-果糖-6-磷酸转氨酶1(Glutamine-fructose-6-phosphate transaminase 1,GFPT1)和L-谷氨酰胺-D-果糖-6-磷酸转氨酶2(Glutamine-fructose-6-phosphate transaminase 2,GFPT2)是PPP2R2A可能的结合蛋白。通过免疫荧光共定位、GST Pull-down和免疫共沉淀等方法,进一步确认了PPP2R2A和GFPT1及GFPT2的相互结合。通过shRNA下调PPP2R2A后,GFPT2的磷酸化水平显著增加,但GFPT1的磷酸化水平改变不明显。GFPT2是O-GlcNAC糖基化修饰通路中的一个限速酶,在乳腺癌细胞MDA-MB-231中下调PPP2R2A后,蛋白质O-GlcNAC糖基化修饰水平增加。这些结果表明,PPP2R2A可直接结合GFPT2,并导致其去磷酸化,进而影响细胞内O-GlcNAC糖基化修饰。

血浆长链非编码RNA H19在原发性肝癌诊断中的价值

目的探讨血浆长链非编码RNA印迹母系表达转录体(H19)在原发性肝癌(primary hepatic carcinoma,PHC)中的临床诊断意义。方法收集并检测180例PHC患者和211例非肝癌患者血浆中H19、甲胎蛋白(AFP)、γ-谷氨酰基转氨酶2(γ-GT2)、异常凝血酶原(AP)、α-L-岩藻糖苷酶(AFU)和碱性磷酸酶-1(ALP-1)的表达水平,Logistic回归和受试者工作(ROC)曲线分析其特异性、灵敏度等指标。结果 H19在PHC患者血浆中的表达水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.01);H19的AUC值为0.868,约登指数为0.702,H19相对表达水平临界阈值设定为0.073时,诊断灵敏度为77.78%,特异度为92.42%;H19+AFP的AUC为0.949,灵敏度为86.11%,特异度为92.42%,约登指数为0.753,其约登指数最高;H19+AFP+γ-GT2联合检测时,AUC可达0.961,灵敏度为91.67%,特异度为91.00%,约登指数为0.827。结论 H19在PHC患者中表达水平明显升高并可作为PHC临床诊断的独立标志物;H19+AFP+γ-GT2联合检测具有较好的诊断效能。