植物丝氨酸:乙醛酸氨基转移酶研究进展

在植物、动物、微生物的细胞内普遍存在丝氨酸:乙醛酸氨基转移酶,在高等植物中此酶是过氧化物酶体中的标志性酶,在植物的整个生命活动中起着重要的作用。对植物中丝氨酸:乙醛酸氨基转移酶的研究进展进行了综述。

血清谷氨酸氨基转移酶与高尿酸血症的相关性分析

目的分析血清谷氨酸氨基转移酶(ALT)升高与高尿酸血症发生的相关性。方法以69例高尿酸血症患者为观察组,以60例健康人群为对照组;分别对两组对象的血清ALT和血清尿酸(SUA)水平进行检测,对观察组患者的血清炎性因子[肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、C反应蛋白(CRP)、白细胞介素6(IL-6)]及脂肪因子[血清游离脂肪酸(FFA)、血清脂联素(APN)]水平进行检测。统计两组对象ALT升高的发生率,对比分析不同ALT升高程度下观察组患者血清炎性因子及脂肪因子的水平。结果观察组患者ALT升高的发生率及ALT水平均高于对照组(P<0.05)。针对观察组患者,在SUA水平上,ALT重度升高组、中度升高组、轻度升高组、未升高组依次升高(P<0.05);在血清TNF-α、CRP、IL-6及FFA水平上,ALT重度升高组、中度升高组、轻度升高组、未升高组依次升高(P<0.05),在血清APN水平上,重度升高组、中度升高组、轻度升高组、未升高组依次降低(P<0.05)。结论血清ALT升高与SUA的发生密切相关,二者指标变化趋势一致,相互影响,而影响机制可能与血清炎性因子及脂肪因子的改变有关。

甲醇利用菌MB200丝氨酸乙醛酸氨基转移酶基因(sga)的克隆、突变及对产L-丝氨酸的影响

sga基因是大多数Methylobacteriumsp.中丝氨酸循环途径里的一个关键酶基因,与单碳化合物的同化及二碳化合物的代谢有着密切的关系。根据已报道的M.extorquensAM1的sga基因序列,合成寡核苷酸引物,用本实验室保存的甲醇利用菌M.sp.MB200的染色体DNA为模板,通过PCR方法扩增出sga基因,测序分析表明该基因与M.extorquensAM1的sga基因在核苷酸水平上有93%的同源性,氨基酸水平上具有85%的同源性。利用自杀质粒pK18mob构建含有sga基因部分片段的重组质粒,通过三亲本结合后导入原始菌株MB200中,经过进一步同源单交换,sga基因被pK18mob插入突变,利用PCR和Southern杂交进行验证,选择发生正向突变的突变株MB200sTB用于进一步研究分析。分析结果表明突变菌株的丝氨酸乙醛酸氨基转移酶(SGAT)的酶活性消失,同时失去了在以甲醇为唯一碳源的培养基上生长的能力,不能再合成L-丝氨酸,但仍能以二碳化合物和多碳化合物进行生长。

血浆谷氨酸脱氢酶活性测定在肝胆疾病中的临床应用评价

目的：探讨血浆谷氨酸脱氢酶（glutamate dehydrogenase,GLDH）活性测定在肝脏疾病中的临床意义。方法：采用速率法检测229例肝功能异常者（急性肝损伤25例;慢性乙型肝炎60例;肝硬化47例;肝衰竭31例;胆道梗阻性疾病29例;肝癌37例）及120例健康体检者（作为对照组）的血浆GLDH活性,并与AST、ALT、ALT、GGT等常用肝胆疾病指标进行比较分析。结果：本室采用速率法测定GLDH活性的参考区间为4.4～13.3 U/L。胆道梗阻性疾病和肝癌患者血浆GLDH较对照组明显升高（P〈0.05）,胆道梗阻性疾病患者的GLDH/AST比值也明显高于对照组（P〈0.05）。血浆GLDH浓度与AST浓度呈显著的正相关（r=0.230,P〈0.001）。血浆GLDH浓度与肝损伤程度相关,随病情好转而降低。结论：胆道梗阻性疾病和肝癌患者血浆GLDH升高最为明显,GLDH可作为判断肝细胞损伤程度和疗效观察的指标。

血清谷氨酸脱氢酶活性检测在肝胆疾病中的临床价值

目的探讨谷氨酸脱氢酶(GLDH)活性变化在肝细胞损伤性疾病中的临床价值,以指导临床治疗,并对预后进行判断。方法采用酶速率法同时检测120名健康体检者和180例肝胆疾病患者(包括急性肝炎40例、肝癌32例、肝硬化28例、胆道肿瘤25例、胆结石25例、其他疾病30例)血清GLDH、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性,并进行对比分析。结果肝细胞损伤性疾病组(包括急性肝炎、肝癌、肝硬化)、胆道肿瘤组、胆结石组和其他疾病组血清GLDH、AST、ALT活性正常对照组(P均<0.05);GLDH的平均升高倍数(8.8倍)高于AST(4.2倍)。急性肝炎组ALT的平均升高倍数(67.3倍)远高于GLPH(11.6倍);肝癌组GLDH的平均升高倍数(15.4倍)高于ALT(4.5倍);其他疾病组二者升高倍数相当。GLDH和AST相关性分析显示:在肝癌中、肝胆结石疾病患者中有明显相关性(r=0.86,P<0.01),在急性肝炎和胆道肿瘤患者中有相关性(r=0.72,P<0.05),而在肝硬化及其他肝胆疾病患者中无明显相关性(r=0.41,P>0.05)。结论GLDH对肝细胞病变的诊断具有重要价值;在肝细胞损伤累及线粒体时,GLDH的升高幅度往往比AST、ALT高,特异性也较好,可作为肝细胞损伤的特异性指标。

人肝过氧化物酶体中的丙氨酸乙醛酸转氨酶及其在临床诊断上的应用

过氧化物酶体是细胞质中的一种细胞器,它与脂类代谢及过氧化氩的产生和分解有关。不同的病理过程对过氧化物酶体有不同的影响。作者以蔗糖密度梯度离心法对肝的去细胞核后部份的分析,发现丙氨酸乙醛酸转氧酶(AGT)与过氧化氢酶在同一比重层。过氧化氢酶已知是过氧化物酶体酶,这证明AGT 也是分布在过氧化物酶体中。AGT

以葡萄糖为底物合成2-吡咯烷酮重组谷氨酸棒杆菌的构建及发酵研究

2-吡咯烷酮(2-pyrrolidone)因在纺织和制药行业的广泛应用而受到越来越多的关注。通过对合成2-吡咯烷酮途径的关键酶CoA转移酶的挖掘及功能的研究,首次探索了从谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)中建立2-吡咯烷酮合成途径,为未来可持续合成2-吡咯烷酮工业指明了方向。首先通过敲除N-乙酰谷氨酸激酶基因(argB)阻断L-精氨酸合成途径,促使更多葡萄糖流向L-谷氨酸。其次,通过表达将L-谷氨酸转化为γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)的谷氨酸脱羧酶(Gad)突变体,获得合成GABA的重组菌。同时,异源表达经N-端RBS优化的丙酸厌氧菌(Anaerotignum propionicum)来源的CoA转移酶,实现了GABA向2-吡咯烷酮的转化。最终,构建的C.glutamicum EAGAN2重组菌株在5 L发酵罐补料分批发酵72 h时,积累了(8±0.3)g/L的2-吡咯烷酮。该研究首次在谷氨酸棒杆菌中建立了2-吡咯烷酮合成途径,实现了以廉价原料葡萄糖为底物一步法合成2-吡咯烷酮。

表达大肠杆菌谷氨酸-1-半醛氨基转移酶对红色荧光报告蛋白尿卟啉原Ⅲ甲基化酶的影响

谷氨酸-1-半醛氨基转移酶(Glutamate-1-semiadhyde aminotransferase,GSAT)是尿卟啉原Ⅲ生物合成上游途径的一个酶,尿卟啉原Ⅲ是红色荧光报告蛋白尿卟啉原Ⅲ甲基化酶(Uroporphyrinogen Ⅲ methyltransferase,UPMT)的底物。为了探明大肠杆菌共表达GSAT对UPMT荧光强度的影响,通过PCR扩增玉米upmt基因,将其插入pETDuet-1质粒中第2个顺反子中,构建的载体命名为pETU,表达UPMT的N端含有组氨酸标签;通过PCR扩增大肠杆菌编码GSAT的hemL基因,定点突变去除hemL基因中NcoⅠ序列,亚克隆至pET-51b质粒,再将获得的hemL基因插入pETU质粒的第一个顺反子中,构建pETeGU载体。表达GSAT的N端含有Strep标签。和单独表达upmt基因相比,表达2个基因后,蛋白印迹分析表明没有明显改变UPMT表达量,光谱扫描分析显示没有改变荧光物质的组成,但是增强了重组细胞的红色荧光物质三甲基咕啉的含量,该物质在354nm有特异吸收。用2mmol/L的GSAT抑制剂3-氨基-2,3二羟基苯甲酸处理后,表达两种酶的菌落荧光消失,表明重组GSAT可能增加内源尿卟啉原Ⅲ水平,从而增强重组UPMT催化产生的红色荧光。

谷氨酸依赖型氨基转移酶的高通量筛选方法及其应用

目的:建立谷氨酸依赖型氨基转移酶-谷氨酸脱氢酶偶联反应的96孔板高通量筛选方法,并用于大肠杆菌氨基转移酶Wec E突变库的筛选。方法:通过优化偶联指示酶-谷氨酸脱氢酶、信号分子NADH浓度及双酶偶联反应时间,建立了光学法测定氨基转移酶活性的氨基转移酶-谷氨酸脱氢酶偶联反应方法;通过定点饱和突变技术构建了大肠杆菌氨基转移酶WecE的突变库;采用96孔板高通量初筛、摇瓶复筛获得了高活性的转氨酶突变体,并对纯化的突变体进行催化活力分析。结果:建立了谷氨酸依赖型氨基转移酶目标反应与0.5 U/ml L-谷氨酸脱氢酶和0.4 mmol/L NADH信号指示反应相偶联的筛选方法;构建了氨基转移酶WecE Tyr 321饱和突变库,通过96孔板高通量筛选,获得了催化活性比野生型提高3.4倍的突变体Y321F。结论:所建立高通量筛选方法背景干扰小,准确性高,为谷氨酸依赖型氨基转移酶分子进化提供了可行性方案。

DEB-TACE治疗肝功能Child-Pugh评分8分肝细胞癌的疗效评价

目的探讨对于肝功能Child-Pugh评分8分的肝细胞癌使用载药微球经肝动脉化疗栓塞术(drug-eluting beads-transarterial chemoembolization,DEB-TACE)治疗的疗效。方法选取2021年11月—2022年11月安庆市立医院连续纳入20例肝功能Child-Pugh分级B级8分的肝癌患者,均接受DEB-TACE治疗。分析患者治疗前后肝功能及发生不良反应的情况。结果20例患者均行CalliSpheres载药微球进行治疗,过程顺利。术后1个月,患者治疗效果为疾病进展(progressive disease,PD)2例、部分缓解(partial response,PR)11例、完全缓解(complete response,CR)2例、疾病稳定(sable disease,SD)5例,且客观缓解率(objective response rate,ORR)为65.0%(13/20)。7例后续接受了靶免系统治疗。术后1周天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate transaminase,AST)、总胆红素和谷氨酸氨基转移酶(alanine transaminase,ALT)水平都有所上升,与术前相比,差异有统计学意义(P<0.05);白蛋白水平变化较术前差异无统计学意义(P>0.05)。与术前对比,经手术治疗1个月后,患者的肝功能基本恢复至正常水平,差异无统计学意义(P>0.05)。患者仅发生了轻微不良反应,如疼痛、发热、恶心、呕吐等。结论DEB-TACE治疗肝功能Child-Pugh评分8分的肝细胞癌的近期疗效确切、安全性高。

止痛散治疗骨转移癌疼痛的临床观察

目的:观察止痛散治疗骨转移癌疼痛的临床疗效。方法:40例病例均采用止痛散加减治疗。结果:所有病例治疗后总有效率为95.0%,肝功能检查谷氨酸氨基转移酶明显下降,临床症状明显好转。结论:止痛散治疗骨转移癌疼痛疗效显著,值得在临床上推广应用。

慢性乙型肝炎HBV-DNA载量与炎性因子、肝脏酶学指标的相关性研究

目的探讨慢性乙型肝炎患者血清不同HBV-DNA载量与炎性因子、肝功能酶学指标的关系。方法对78例慢性乙型肝炎患者分别用实时荧光定量PCR技术检测血清HBV-DNA载量,并以此分为阴性组(17例)、低载量组(30例)、中载量组(19例)、高载量组(12例)4组,比较各组高敏C反应蛋白(hs-CRP)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素6(IL-6)、肝功能相关酶(ALT、AST、GGT)的水平,并探讨其相关性。结果随着HBV-DNA载量的增高,TNF-d、IL-6均明显升高,表现为高载量组>中载量组>低载量组>阴性组,组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。血清hs-CRP中载量组、低载量组间水平比较差异无统计学意义(P>0.05),其余2组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。各组间血清ALT、AST、GGT水平比较,表现为高载量组>中载量组>低载量组>阴性组,组间比较差异有显著统计学意义(P<0.05)。ALT与TNF-α、IL-6相关(r=0.68、0.56,P<0.05);ALT与hs-CRP无相关性(r=0.23,P>0.05)。结论炎性因子在乙肝的发病过程中有重要作用,综合检测血清炎性因子和肝脏酶学对了解乙肝体内免疫状态、临床诊断和预后有重要意义。

乙肝患者血清腺苷脱氨酶活性测定的临床意义

腺苷脱氨酶（ADA）活性检测是反映肝脏损伤的敏感指标，与谷氨酸氨基转移酶（ALT）等组成肝功能常规检查项目，能较全面地反映肝脏病的酶学改变。为了解ADA活性测定的临床意义，我们对303例乙型肝炎（乙肝）患者的血清进行ADA检测，现报道如下：

15,28日龄仔鹅血清与血浆生化指标的比较分析

为了比较仔鹅血清与血浆生化指标差异,试验选取健康的15,28日龄三花鹅公鹅各5只(不同日龄段鹅体重相近),每只鹅采集两份静脉血,每份2.0 mL,一份置于普通试管中用于制备血清,另一份置于肝素钠抗凝管中用于制备血浆,检测并比较分析不同日龄仔鹅血清和血浆体积及生化指标差异,包括电解质指标[钠(Na)、钾(K)、总钙(Ca)、无机磷(IP)、镁(Mg)、氯(Cl)]、肝脏功能指标[谷氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、AST/ALT、总胆红素(TBIL)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLO)、白球比(A/G)]、肾脏功能指标[尿酸(UA)、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)]、血脂成分[总胆固醇(TCHO)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)、三酰甘油(TG)]。结果表明:15,28日龄仔鹅血清和血浆体积,Na、K、Ca、IP、Mg、Cl、TBIL、TP、ALB、GLO、UA、BUN、Cr、TCHO、HDL、LDL、TG浓度,AST、ALT活性及AST/ALT、A/G均差异不显著(P>0.05)。说明可用血浆代替血清进行1~28日龄仔鹅生化指标检测。

外周血GLDH、GLDH/ALT水平对原发性胆汁性胆管炎患者疾病分期的诊断价值

目的探讨谷氨酸脱氢酶(GLDH)、GLDH/ALT比值对原发性胆汁性胆管炎(PBC)分期的诊断效能。方法选取已明确病理分期的PBC患者212例,检测其外周血中GLDH水平,并计算FIB-4、APRI、AAR、RPR等一系列无创性血清学指标。通过Spearman分析各指标与PBC分期的相关性,绘制受试者工作特征曲线评价其诊断效能。结果Ⅰ/Ⅱ期患者,GLDH及GLDH/ALT水平差异无统计学意义(P>0.05);Ⅱ/Ⅲ期及Ⅲ/Ⅳ期患者,GLDH及GLDH/ALT水平差异均有统计学意义(P<0.05);PBC病理分期与ALT(r=0.006,P=0.152)、GGT(r=-0.036,P=0.182)、GPRI(r=0.340,P=0.055)无明显相关性;与TBil(r=0.401,P=0.009)、DBil(r=0.403,P=0.007)、AST(r=0.217,P=0.019)、RDW(r=0.422,P<0.01)、FIB-4(r=0.774,P<0.01)、APRI(r=0.620,P<0.001)、AAR(r=0.359,P<0.01)、RPR(r=0.742,P<0.01)呈正相关;与PLT(r=-0.719,P<0.01)呈负相关;外周血GLDH(r=0.162,P=0.007)、GLDH/ALT(r=0.203,P<0.01)水平与PBC病理分期呈正相关。FIB-4对PBC各期的诊断效能最好,AUC分别为0.821、0.813、0.823;在≥S1期PBC患者中,GLDH/ALT的敏感度(93.75%)最好,≥S2期及≥S3期则为FIB-4敏感度(80.00%、93.75%)最好,而APRI和RPR则分别在≥S1/≥S2期(85.45%、92.19%)、≥S3期(88.52%)中特异度最好。多指标联合后,FIB4+APRI+AAR+GLDH+GLDH/ALT对≥S2期、≥S3期PBC的诊断效能(AUC=0.931/0.878)及敏感度(82.81%/81.67%)均有所提高,FIB4+APRI+AAR+GLDH+GLDH/ALT对≥S2期PBC诊断的特异度最高(92.73%),FIB4+GLDH+GLDH/ALT对≥S3期的特异度最高(87.5%)。结论外周血GLDH及GLDH/ALT水平对PBC疾病分期具有一定的诊断价值,并呈正相关,多种无创性血清学指标联合后诊断效能更佳。

cTnI、AST及CK在鉴别诊断大鼠骨骼肌与心肌损伤应用价值的比较

目的:探讨心肌肌钙蛋白I(cardiac troponin I,cTnI)在鉴别诊断大鼠骨骼肌与心肌损伤应用价值。方法:选取32只SD大鼠随机分为四组,心肌损伤组,单次背部皮下注射异丙肾上腺素;骨骼肌损伤组,单次单侧胫骨肌注射布比卡因;联合损伤组,单次单侧胫骨肌注射布比卡因及背部皮下异丙肾上腺素。正常对照组,不给予任何药物。予给药后24h,检测血清AST,CK及cTnI,常规HE染色观察骨骼肌和心肌受损情况。结果:心肌损伤组和联合损伤组血清cTnI均显著高于正常对照组和骨骼肌损伤组,差异具有统计学意义(P<0.01),而联合损伤组和心肌损伤组AST与骨骼肌损伤组比较,差异无统计学意义(P>0.05),心肌损伤组CK与骨骼肌损伤组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:cTnI在鉴别大鼠心肌及骨骼肌损伤上较AST、CK有较高的敏感性,并且在一定程度上能够降低误诊及漏诊率。

警惕7170S型全自动生化分析仪测定ALT、AST的漏报警现象

全自动生化分析仪是一种常用仪器,为保证结果的准确性,仪器均设定一些参数,对标本测定结果怀疑为异常时,出现一些报警提示符号,要求操作者对标本进行复查.

陇中消肿止痛合剂对软组织损伤患者血清CK、LDH、AST的影响

目的:探讨陇中消肿止痛合剂对闭合软组织损伤患者血清肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、谷氨酸氨基转移酶(AST)的影响。方法:将闭合软组织损伤患者59例随机分为治疗组30例,伤后常规治疗并口服陇中消肿止痛合剂。对照组29例常规治疗。比较2组患者入院后第1天(治疗前)、3天、7天、14天血清CK、LDH、AST的含量。结果:治疗前2组患者血清CK、LDH、AST含量比较差异无统计学意义(P>0.05);治疗第7天、14天2组患者血清CK、LDH、AST含量比较差异有统计学意义(P<0.05);治疗第7天、14天与治疗前血清CK、LDH、AST含量比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:陇中消肿止痛合剂能有效抑制和清除创伤后软组织损伤患者体内代谢毒物,减少并发症,促进康复。

丙肝患者血清HCV RNA与TNF-α之间的关系及其与肝损伤程度相关性的研究

目的 研究不同临床分型HCV感染者血清中HCV RNA与TNF-α之间的差异,探讨HCV RNA和TNF-α含量与肝损伤程度的关系.方法 收集HCV感染者45例,其中慢性肝炎轻度组11例,慢性肝炎重度组14例,肝硬化组11例,肝癌组9例,健康对照组20例.用ELISA法检测HCV IgG和TNF-α,制作标准曲线计算TNF-α含量.荧光定量PCR方法检测HCV RNA含量.血清ALT水平用HITACHI 7600型全自动生化分析仪采用速率法进行检测.HCV感染者血清HCV-RNA含量的对数值、TNF-α含量和ALT水平与正常对照组比较用t检验,各组之间的TNF-α含量和ALT水平及lg HCV RNA比较用方差分析,HCV RNA含量的对数值、TNF-α含量和ALT之间的相关性用直线相关性分析,用相关系数（r）表示.结果 丙肝患者各组之间ALT水平和TNF-α含量差异有统计学意义,F值分别为9.75和14.69,P〈0.001;用t检验得出：各组丙肝患者血清TNF-α水平均明显高于健康对照组（P〈0.001）,t值分别为6.596,9.857,6.673和8.358;各组患者血清ALT水平均明显高于健康对照组（P〈0.001）,t值分别为12.031,6.61,3.971和6.857;慢性肝炎重度组、肝癌组与慢性肝炎轻度组之间ALT含量比较,差异有统计学意义（P〈0.05）,t值分别为3.242和3.246;慢性肝炎重度组和肝癌组HCV RNA的对数值分别为6.05±0.8和5.76±1.05,均低于慢性肝炎轻度组,t值分别为2.573和2.393,差异有统计学意义（P〈0.05）.ALT水平与TNF-α含量之间呈正相关,r=0.341,P〈0.05.结论 不同临床类型HCV感染者血清中TNF-α和ALT含量存在差异,慢性肝炎轻度HCV感染者ALT水平明显低于其他临床类型组,HCV感染者血清ALT水平和TNF-α含量之间呈正相关.