宽频噪音对谷氨酸中毒损伤AD模型大鼠不同脑区NMDAR1(ζ1)、NMDAR2A(ε1)亚基表达的影响

目的 :观察AD大鼠模型颞叶和额叶在 98dB宽频噪音暴露 5min后不同脑区NMDAR1(ζ 1)、NMDAR2A(ε1)表达的影响。方法 :采用WesternBlot及RT PCR技术 ,结合ABR测定方法。结果 :①AD模型组大鼠、空白对照组大鼠在 98dB宽频噪音暴露 5min后额叶、颞区、海马及小脑NMDAR1(ζ 1)亚基表达无明显差异 ,但AD模型组表达明显弱于空白对照组 ;②生理盐水组加噪音后NMDAR1(ζ 1)亚基小脑表达最强 ,颞叶最弱 ;NMDAR2A(ε1)表达最强为颞叶 ,海马最弱。③在海马三组大鼠NMDAR1(ζ 1)、NMDAR2A(ε 1)亚基表达有较明显的下调趋势 ;④空白对照组大鼠NMDAR1(ζ 1)、NMDAR2A(ε1)亚基mRNA表达各区无差异。⑤AD模型组大鼠颞叶、海马NMDAR2A(ε 1)表达明显减弱 ,最弱为小脑 ,额叶次之。结论 :噪音刺激抑制AD大鼠模型海马NMDAR1(ζ 1)亚基表达 ,且不在mRNA水平。噪音刺激抑制AD模型大鼠颞叶、海马NMDAR2A(ε 1)亚基表达 ,且有部位差异 ,在mRNA水平已调节。

运动神经元病的谷氨酸中毒学说

肌萎缩侧索硬化 (AmyotrophicLateralSclerosis,ALS)是选择性侵犯上下运动神经元的神经系统变性疾病 ,病因不明 ,目前尚无有效治疗。主要的发病机制假说之一为谷氨酸中毒学说。目前已经证实肌萎缩侧索硬化存在谷氨酸代谢、摄取异常 ,认为其选择性运动神经元损伤可能是通过Ca2 + -AMPA/Kanait受体介导的兴奋性中毒发生的 。

突触后致密物蛋白质95基因沉默及对神经病理性疼痛大鼠疼痛行为的干预

目的评估小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)对突触后致密物蛋白质95(postsynaptic density protein95,PSD-95)基因的沉默效率及PSD-95基因沉默对谷氨酸诱导的神经细胞毒性与信号转导的影响,观察用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术沉默大鼠脊髓PSD-95基因治疗神经病理性疼痛的效果。方法用神经母细胞瘤/大鼠神经胶质细胞瘤杂交瘤细胞(NG108-15细胞)筛选大鼠PSD-95基因特异的siRNA,并用谷氨酸刺激PSD-95基因沉默的NG108-15细胞,检测细胞生长活力与信号通路蛋白质表达与磷酸化的改变。建立大鼠神经病理性疼痛的坐骨神经慢性压迫(chronic constrictioni njury,CCI)模型,预防性及治疗性鞘内给予PSD-95siRNA,留取脊髓标本,实时定量PCR(real-time PCR,RT-PCR)分析PSD-95 mRNA表达水平,并测定大鼠后足机械痛阈及热痛阈的变化。结果序列特异性最高的siRNA在最佳转染条件下使PSD-95基因表达水平下降91.5%;PSD-95基因沉默既可增强神经细胞对谷氨酸毒性的耐受能力,又可抑制Ca2+/钙调蛋白依赖的蛋白质激酶IIα(CaMKIIα)异构型磷酸化。正常大鼠鞘内注射PSD-95siRNA可降低大鼠脊髓背角PSD-95mRNA的表达水平38%(P<0.05),但对痛阈无显著影响;CCI模型大鼠鞘内注射PSD-95 siRNA可明显缓解神经病理性疼痛。结论 PSD-95基因在神经病理性疼痛的发生中起重要作用。鞘内注射PSD-95siRNA可以显著缓解CCI模型大鼠机械性和热痛觉过敏,PSD-95 siRNA可能成为有效控制神经病理性疼痛的基因治疗方法。

突变型人胰高血糖素样肽-1对神经细胞损伤的保护

目的研究突变型人胰高血糖素样肽-1(mutated human glucagon-like peptide-1,mGLP-1)对谷氨酸诱导的人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y细胞损伤的影响。方法环磷酸腺苷(cAMP)试剂盒检测细胞内cAMP含量,比较mGLP-1和天然人胰高血糖素样肽-1(natural human glucagon-like peptide-1,nGLP-1)与GLP-1受体结合的能力;以谷氨酸诱导SH-SY5Y细胞损伤,同时用mGLP-1处理SH-SY5Y细胞,采用MTT法检测细胞存活率;乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测细胞LDH的释放量;DAPI染色法观察细胞凋亡形态学特征;钙流法检测胞内钙离子浓度变化;通过检测丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性、总谷胱甘肽(total GS)含量的变化判断细胞氧化损伤程度。结果 mGLP-1与nGLP-1类似,都能提高细胞内cAMP水平;mGLP-1能缓解谷氨酸诱导的细胞损伤,增加细胞存活率,降低LDH释放量;mGLP-1对谷氨酸导致的细胞内钙离子变化没有修复作用;mGLP-1能抑制氧化损伤指标MDA含量升高,促进抗氧化系统指标SOD活性增强和total GS含量增加。结论 mGLP-1可导致细胞内cAMP含量增加。mGLP-1对谷氨酸所致神经细胞损伤具有保护作用,这可能是mGLP-1通过对神经细胞的抗氧化损伤作用实现的,而不是改善谷氨酸导致的钙稳态失衡。mGLP-1的保护作用与nGLP-1类似,而mGLP-1在体内稳定性更强,半衰期更长;提示mGLP-1可能对相关神经退行性疾病的治疗具有更佳的潜在价值。