针药联合对阿尔兹海默病模型大鼠小脑皮质谷氨酸受体2及Caspase-3表达的影响

目的观察针药联合对阿尔兹海默病(AD)模型大鼠小脑皮质谷氨酸受体(GluR2)及天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase-3)表达的影响,探讨小脑在AD发病机制中的作用。方法30只雄性SD大鼠随机分为5组:对照组(C组)、模型组(M组)、电针组(EA组)、天麻素组(Gas组)、针药联合组(EA+Gas组),每组6只。C组不作任何处理;M组大鼠给予双侧海马内微量注射5μL的Aβ1-42进行造模;EA组予以频率2 Hz、强度1mA的电针刺激,选取穴位“大椎”“百会”“足三里”,每日30 min,连续4周。Gas组予以腹腔注射Gas注射液(10 mg/kg),每天1次,连续4周;EA+Gas组同时予以电针和Gas治疗,连续4周。Morris水迷宫检测大鼠学习记忆行为能力,Nissl染色和免疫组化方法观察各组大鼠小脑皮质细胞形态和数量,Western Blot法检测各组GluR2和Caspase-3蛋白的表达。结果M组小脑皮质中浦肯野层细胞数量减少(P<0.05),GluR2表达降低(P<0.05),Caspase-3表达增高(P<0.05);各治疗组较M组的细胞形态趋于正常,GluR2的表达增加(P<0.05),Caspase-3的表达降低(P<0.05),其中以EA+Gas组改变最为明显。结论电针、天麻素及针药联合均可通过调节GluR2和Caspase-3的表达水平进而改善AD模型大鼠学习记忆能力,其中针药联合效果最佳。

大鼠神经系统内谷氨酸受体2/3亚型的定位分布

用特异性抗体的免疫细胞化学染色技术观察谷氨酸受体 2 / 3亚型 (GluR2 / 3)在大鼠神经系统的定位分布。结果显示GluR2 / 3样阳性神经元主要分布于大脑皮质、尾壳核、苍白球、隔核、海马CA1～CA4区、齿状回、乳头体、小脑Purkinje细胞层、动眼神经核、滑车神经核、臂旁核、三叉神经运动核、上橄榄复合体、三叉神经脊束核、面神经核、疑核、迷走神经背运动核、舌下神经核、楔束核、薄束核、延髓和脊髓背角I～Ⅱ层、背根节、三叉神经节等。本研究结果表明GluR2 / 3样阳性结构广泛分布于大鼠神经系统 ,为Glu发挥兴奋效应提供了作用位点。

背根神经节内代谢型谷氨酸受体2与酸敏感性离子通道3和辣椒素受体1的共存研究(英文)

代谢型谷氨酸受体(mGluR)2/3在伤害性信息从外周向脊髓传递的过程中发挥着重要作用。以往研究证明在大鼠中mGluR2参与了机械性超敏和热超敏的形成,因此本研究拟采用免疫荧光组织化学染色技术揭示背根节(DRG)中mGluR2和酸敏感性离子通道3(ASIC3),一个多觉机械性感受器,或者和热伤害性感受器辣椒素受体(TRPV1)的共存情况。结果显示:mGluR2主要存在于DRG神经元的胞浆中。计数结果显示DRG中35.85%的神经元呈mGluR2免疫阳性。在这些阳性神经元中,82.61%为小细胞(直径小于30μm);5.79%为中等细胞(直径为30～50μm);11.59%为大细胞(直径大于50μm)。进一步在免疫荧光双重标记切片上可观察到分别有42.45%和79.78%的小型mGluR2阳性神经元同时表达ASIC3或TRPV1免疫阳性。以上结果提示mGluR2主要存在于DRG中的小神经元中,这些神经元通常被认为是外周Aδ-或C-纤维传入的伤害性感觉神经元,在这类神经元中mGluR2与ASIC3或TRPV1均有大量共存,提示这些共存可能与机械性或热超敏的产生或者维持有着重要的联系。

GluR2/3受体在不同年龄大鼠背侧蜗神经核的表达

目的研究α-氨基羟甲基恶唑丙酸(α-amino-3-hydroxy-5-methyl-4-isoxazole-propionic acid,AMPA)受体亚型GluR2/3(Glutamate recptor 2/3)在不同周龄大鼠蜗神经核的表达。方法用免疫组化方法检测GluR2/3亚型在不同年龄(1～16周)SD大鼠(Sprague-Dawlay rat)背侧蜗神经核中的表达,免疫电镜技术检测其在细胞内的定位。结果1周龄大鼠蜗神经核中无明显表达,2周时开始出现该受体的表达,3周时亦有极少量表达,4周时表达有明显增加,以后依次递增,至9周时表达最强,以后逐渐下降,并稳定于16周。各周龄受体均表达于包膜及胞浆中。电镜下(6周、10周)时见胶体金主要沉积于线粒体,部分可见于粗面内质网及胞浆。结论出生后GluR2/3在蜗神经核的含量随年龄变化而变化,这种改变可能与听觉发育及可塑性相关。

大鼠单侧耳蜗损伤后蜗核中GluR2/3受体表达的变化

目的观察单侧耳蜗损伤后不同时段α-氨基-3-羧基-5-甲基异唑-4-丙酸(alpha-amino-3-hydoxy-5-methyl-4-isoxazolepropionate,AMPA)受体亚型谷氨酸受体2/3(glutamate receptor2and3,GluR2/3)在大鼠耳蜗核的表达的变化,为外周损伤后听觉中枢重组的分子机制提供可能的实验依据。方法手术破坏耳蜗各回,制造单侧耳蜗损伤模型;FITC标记免疫组织化学方法检测损伤后2、4、6、8、12、24h和3、7d的GluR2/3亚型在SD大鼠听觉中枢中的表达。结果①损伤后各组健侧GluR2/3受体表达的强弱各组间以及与对照组无显著性差异;②术后2h即可观察到术侧蜗核胞浆中受体表达增强,6h达到高峰,以后逐渐减弱,至第3d时低于正常水平;③正常对照组和健侧的蜗核中,GluR2/3受体主要分布在胞膜,膜周胞浆和突触上;而术侧蜗核中GluR2/3大都分布在胞浆中,胞膜上表达减弱。结论单侧耳蜗损伤后可导致术侧蜗核中GluR2/3在胞膜上的表达降低。

大鼠单侧耳蜗损伤后下丘中GluR2/3受体的变化

目的观察单侧耳蜗损伤后短时间内谷氨酸受体2/3(glutamate receptor 2 and 3,GluR2/3受体)在大鼠下丘的表达变化,为探讨外周损伤后听觉中枢重组的分子机制提供参考。方法36只大鼠随机分为9组,分别为耳蜗损伤造模后2 h、4 h、6 h、8 h、12 h、24 h、3 d、7 d及正常对照组,每组4只,前8组动物用手术方法制造单侧耳蜗损伤模型,正常对照组不做处理,造模完成后于相应时间点采用FITC标记免疫组化方法检测各组GluR2/3受体在下丘的表达变化。结果GluR2/3受体主要位于胞膜及膜周胞浆中,胞核周弱表达或无表达;造模术后不同时间各组术侧下丘中GluR2/3受体相对灰值比较,术侧与健侧比、手术组与对照组比较,差异均无统计学意义(均为P>0.05)。结论大鼠单侧耳蜗损伤7天内术侧下丘中GluR2/3表达未见明显差异。

运动通过上调mGluR2/3表达抑制帕金森病模型大鼠纹状体中等多棘神经元异常电活动

目的:探讨运动通过上调代谢型谷氨酸受体2/3(mGluR2/3)表达对帕金森病(PD)模型大鼠纹状体中等多棘神经元(MSNs)异常电活动的影响。方法:清洁级SD大鼠随机分为假手术安静组(Control组,n=9)和6-羟基多巴胺(6-OHDA)造模组(6-OHDA组,n=40)。6-OHDA造模组采用神经毒素6-OHDA注射于大鼠右脑内侧前脑束(MFB),建立偏侧损毁PD模型大鼠,假手术组于相同部位给予同等剂量的生理盐水作为对照组。采用阿扑吗啡(APO)诱导旋转行为测试评价PD模型的可靠性。经鉴定符合PD模型的大鼠随机分为6-OHDA安静组(PD组,n=9)、6-OHDA+运动组(PD+Ex组,n=9)和6-OHDA+运动+mGluR2/3拮抗剂组(PD+Ex+APICA组,n=9)。运动组于手术后1周开始进行跑台训练干预(11 m/min,30 min/day,5 d/week,4 weeks)。运动+mGluR2/3拮抗剂组每次运动前,采用微量注射泵将mGluR2/3拮抗剂APICA注射到纹状体内,注射体积为1μL。采用免疫组织化学染色技术检测黑质酪氨酸羟化酶(TH)免疫阳性细胞数量和纹状体TH免疫阳性纤维终末含量。采用免疫印迹技术检测纹状体mGluR2/3的表达水平。采用多通道电生理记录系统对各组大鼠清醒静止状态下纹状体神经元电活动进行记录。结果:APO诱导的旋转行为测试和TH免疫组织化学检测结果表明,PD大鼠模型可靠,成模率为67.5%。免疫印迹技术检测结果显示,与Control组相比,PD组纹状体mGluR2/3表达水平显著下调(P<0.01);与PD组相比,PD+Ex组纹状体mGluR2/3表达水平显著上调(P<0.05)。电生理分析结果表明,与Control组相比,PD、PD+Ex和PD+Ex+APICA组纹状体MSNs平均放电频率均显著增加(P<0.01);与PD组相比,PD+Ex组纹状体MSNs平均放电频率显著降低(P<0.05);与PD+Ex组相比,PD+Ex+APICA组纹状体MSNs平均放电频率显著增加(P<0.01)。与Control组相比,PD组纹状体神经元局部场电位(LFPs)在β频段(10~30 Hz)节律性振荡功率出现异常增加(P<0.01),PD+Ex组纹状体神经元LFPs在β频段(10~30 Hz)节律性振荡功率较PD组显著降低(P<0.05),PD+Ex+APICA组纹状体神经元LFPs在β频段(10~30 Hz)节律性振荡功率较PD+Ex组异常增加(P<0.01)。与Control组相比,PD组动作电位(spike)在β频段(10~30 Hz)诱发的LFP波形平均(STWA)值显著升高(P<0.01);与PD组相比,PD+Ex组STWA值显著降低(P<0.05);与PD+Ex组相比,PD+Ex+APICA组STWA值显著升高(P<0.01)。结论:PD模型大鼠纹状体MSNs兴奋性显著增加,LFPβ频段节律性振荡的功率显著增加,spike与LFPβ频段节律性振荡的同步化程度显著增加;运动干预可使PD模型大鼠纹状体MSNs兴奋性、LFPβ频段节律性振荡的功率以及spike与LFPβ频段节律性振荡的同步化程度均显著降低;纹状体微量注射GluR2/3拮抗剂可使运动的积极效应消失,进一步证实mGluR2/3在PD模型大鼠纹状体MSNs运动依赖可塑性中发挥了重要作用,并将成为PD治疗药物研发的新的靶向分子。

电针对急性心肌缺血大鼠海马谷氨酸系统的影响

目的 观察电针对急性心肌缺血(AMI)大鼠海马谷氨酸(Glu)、代谢型谷氨酸受体2/3(mGluR2/3)和凋亡相关蛋白表达的影响,探讨电针抗AMI的作用机制。方法 50只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、电针组和抑制剂组,每组10只。除假手术组外,其余各组采用左冠状动脉前降支结扎法建立AMI大鼠模型。电针组于双侧“神门”“通里”予电针刺激,30 min/次,1次/d,连续3 d;抑制剂组于造模后30 min经侧脑室注入mGluR2/3抑制剂LY341459。HE染色观察心肌组织形态,ELISA检测心肌组织胱天蛋白酶-3(Caspase-3)活性和海马组织Glu含量,免疫荧光染色检测海马组织mGluR2/3表达,TUNEL染色检测海马组织细胞凋亡情况,Western blot检测海马组织磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)和Caspase-3蛋白表达。结果 与假手术组比较,模型组大鼠心肌细胞稀疏、肿胀,炎性细胞浸润严重;心肌组织Caspase-3活性显著升高,海马组织Glu含量、mGluR2/3阳性表达及凋亡细胞数均显著增加(P<0.01),海马组织PI3K、Akt蛋白表达显著降低,Caspase-3蛋白表达显著升高(P<0.01);与模型组比较,电针组和抑制剂大鼠心肌细胞水肿减轻,炎性细胞浸润减少,心肌组织Caspase-3活性显著降低,海马组织Glu含量、mGluR2/3阳性表达及凋亡细胞数均显著减少(P<0.01),海马组织PI3K、Akt蛋白表达显著升高,Caspase-3蛋白表达显著降低(P<0.01)。结论 电针可改善AMI大鼠心肌损伤,其机制可能与激活PI3K/Akt信号通路,进而抑制海马组织mGluR2/3过度表达、减少Glu蓄积、抑制海马神经细胞凋亡,减轻神经毒性有关。

1,3-二氢苯并[b][1,4]二氮杂卓-2-酮类非竞争性mGluR2/3拮抗剂的三维定量构效关系

目的本研究采用比较分子力场分析法(comparative molecular field analysis,CoMFA)和比较分子相似性指数分析法(comparative molecular similarity indices analysis,CoMSIA),系统研究了30个1,3-二氢苯并[b][1,4]二氮杂卓-2-酮类非竞争性代谢型谷氨酸受体2/3(mGluR2/3)拮抗剂的三维定量构效关系。方法通过考察网格点步长对CoMFA研究统计结果和各种分子场组合、网格点步长和衰减因子对CoMSIA研究统计结果的影响,建立了3D-QSAR模型,发现立体场、静电场、疏水场和氢键受体场的组合可得到最佳模型。结果所建立的CoMFA和CoMSIA模型的交叉相关系数q2值分别为0.729和0.713,均具有较强的预测能力。结论利用CoMFA和CoMSIA模型的三维等值线图直观地解释了化合物的构效关系,阐明了化合物结构与生物活性的关系,为进一步结构设计和优化提供了重要依据。

谷氨酸及其受体在局灶性皮质发育不良模型大鼠大脑皮质中的表达

目的观察液氮损伤诱发局灶性皮质发育不良模型大鼠大脑皮质中谷氨酸(Glu)及N-甲基-D-天冬氨酸受体1(NMDAR1)、谷氨酸受体2(GluR2)的表达,探讨其表达情况与癫痫发作的关系及可能的发病机制。方法纳入36只大鼠,随机分成正常对照组、假手术组及手术组,创建局灶性皮质发育不良大鼠模型,HE染色,免疫组织化学方法(用SABC法)检测微脑回神经递质及受体变化,使用SAS 8.0统计学软件进行数据分析。结果手术组经液氮铜针处理,在大鼠损伤处形成微脑回畸形,畸形处皮质层Glu及NMDAR1、GluR2免疫阳性着色神经元表达较正常组及假手术组有所增多,光密度值比较差异无统计学意义(P>0.05),然而在微脑回皮质周围见到Glu及NMDAR1、GluR2免疫阳性着色神经元表达较正常组及假手术组有显著增加,光密度值比较差异亦有统计学意义(P<0.05),其他海马及杏仁核等脑区没有明显改变。结论微脑回畸形周围兴奋性神经递质Glu及其受体的增加可能是导致癫痫发生的机制之一。

GluR2Q在下丘脑乳头体上核内过度表达对于大鼠颞叶癫痫脑电的影响

目的 探讨下丘脑乳头体内兴奋性刺激对于颞叶癫痫脑电变化的影响。方法 利用 HVJ-脂质体转染法在下丘脑乳头体内转染兴奋性氨基酸受体亚基 Glu R2 Q,研究其对于海人酸 (kainic acid,KA)诱发的癫痫模型脑电变化的影响。结果 Glu R2 Q基因转染组大鼠癫痫连续性放电的开始时间明显早于 KA对照组 ,且持续时间较 KA对照组明显延长。结论 下丘脑内 Glu R2 Q基因转染能提高其兴奋性 。

GluR-6和GABRG2基因多态性与精神分裂症患者精神症状的关系

目的探讨谷氨酸受体6基因(GluR6)和γ-氨基丁酸γ2受体基因(GABRG2)基因多态性与精神分裂症患者精神症状的关系。方法以聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法对600名研究对象的GluR6基因rs2227283(G/A碱基改变)和GABRG2基因rs211014(T/G碱基改变)单核苷酸多态性(SNP)进行检测。同时采用阳性与阴性症状量表(PANSS)、修订版外显攻击量表(MOAS)以及自制的一般情况调查表对研究组和对照组1的研究对象进行测查。使用SPSS13.0对数据进行统计分析。结果(1)GluR6基因的rs2227283位点等位基因分布与精神分裂症的阳性症状被害妄想相关(F=4.641,P=0.032);(2)rs2227283等位基因A与兴奋、情绪退缩、关注身体健康以及不合作等阴性症状相关联(P<0.05),rs211014等位基因G与幻觉行为、兴奋、自罪感、动作迟缓以及不寻常思维内容等阳性症状相关(P<0.05)。结论GluR6基因rs2227283位点多态性可能与攻击行为及阴性症状有关联,GABRG2基因rs211014位点多态性可能与攻击行为及阳性症状有关联。

α-氨基-3-羟基-5-甲基异恶唑-4-丙酸受体与癫痫的研究进展

α-氨基-3-羟基-5-甲基异恶唑-4-丙酸受体(AMPA受体)是一种谷氨酸受体,由4个对Ca2+具有不同通透性亚单位组成。其表达或结构的变化可引起自发兴奋性突触后电流(sEPSCs)与微小兴奋性突触后电流(mEPSCs)的幅度和频率增加,提高痫性发作的易感性。亚基GluR2表达下降使AMPA受体对Ca2+的通透性增加,可能与兴奋性神经毒性,以及促进癫痫在海马内的转播有关。本文就AMPA受体与癫痫发生机制的研究进展作一综述。

α-氨基-3-羟基-5-甲基-4-异恶唑丙酸谷氨酸受体-2在脊髓损伤后少突胶质前体细胞凋亡中的作用

目的观察α-氨基-3-羟基-5-甲基-4-异恶唑丙酸(AMPA)谷氨酸受体-2(AMPA-GluR2)在大鼠脊髓损伤(SCI)后少突胶质前体细胞(OPCs)凋亡中的作用。方法原代培养OPCs,与脊髓组织块进行共培养。应用Western blot检测OPCs中AMPAR-GluR2表达,细胞流式技术检测OPCs凋亡。SD大鼠随机分为假手术组、SCI组,NBQX拮抗剂组和JSTx拮抗剂组(n=15)。Western blot检测脊髓组织中AMPA-GluR2的表达,原位缺口末端标记法(TUNEL)法检测OPCs的凋亡,动物后肢神经功能评分[Basso-Beattie-Bresnahan(BBB)评分]评估运动功能恢复。结果与SCI组织块共培养的OPCs凋亡率(36.5%)高于正常对照组(6.3%)(P<0.01),且AMPAR-GluR2在24 h和48 h表达SCI组(0.72±0.02,0.51±0.03)明显低于对照组(0.90±0.04,0.91±0.02)(P<0.01)。动物实验结果显示:OPCs凋亡指数:假手术组(0.13±0.01)<JSTx组(0.17±0.01)<NBQX组(0.21±0.02)<SCI组(0.42±0.02)(P<0.05);AMPA-GluR2表达:假手术组(0.94±0.07)>SCI组(0.69±0.03)>JSTx组(0.54±0.12)>NBQX组(0.37±0.07)(P<0.05);SCI后7 d BBB评分:假手术组(21.00±0.00)分>NBQX组(8.90±0.82)分和JSTx组(9.50±0.79)分>SCI组(6.50±0.61)分(P<0.05),NBQX组和JSTx组之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论SCI后OPCs凋亡与AMPAR-GluR2表达减少有关。

缺血缺氧后海马神经元突触后膜谷氨酸受体-2含量变化的研究

目的探讨缺血缺氧后大鼠海马神经元突触后膜谷氨酸受体-2(GluR2)含量变化情况。方法体外培养胚胎大鼠海马神经元,模拟临床缺血过程致神经元缺氧损伤,运用双重免疫荧光技术标记和共聚焦检测技术观察缺血缺氧后不同时间点海马神经元突触后膜GluR2含量变化情况。结果体外培养海马神经元进行模拟缺血处理后,膜表面的GluR2总含量、含有GluR2突触的相对含量以及含有突触部位GluR2的相对含量均明显降低,而且上述变化随着模拟缺血时间的延长而增加,各组间均存在显著性差异(P<0.05)。结论缺血缺氧损伤可致突触后膜表面GluR2含量降低并随着缺血时间的延长而增加,形成缺乏GluR2的新的AMPA受体通道,介导Ca2+的快速内流,引起神经元的延迟性死亡。

腺苷A_1受体阻断剂对学习记忆的影响及机制分析

目的 探讨腺苷A1 受体阻断剂对学习记忆的影响及其与胆碱能、氨基酸能神经的关系。方法 采用避暗实验、分光光度法和HPLC法 ,观察腺苷A1 受体特异性阻断剂 8 环戊 1 ,3 二丙基黄嘌呤 (DPCPX)对东莨菪碱(Scop)、2 氨基 5 磷戊酸 (AP5)致小鼠记忆障碍及脑胆碱酯酶 (AChE)活性、氨基酸水平的影响。结果 DPCPX可显著改善Scop致记忆障碍 ,但对AP5致记忆障碍无影响 ;在体内外高剂量DPCPX可显著抑制小鼠脑AChE活性 ;DPCPXicv可显著升高小鼠脑Glu和Asp含量 ,降低GABA含量 ,使脑内Glu GABA比值显著升高。结论 腺苷A1 受体特异性阻断剂DPCPX可显著改善Scop而不能改善AP5致记忆障碍 ,在高剂量时可影响脑AChE活性和脑氨基酸水平、升高脑内Glu GABA比值。

α-氨基-3羟基-5-甲基4-异恶唑丙酸受体亚基GluR2在缺血性脑损伤中的作用

背景谷氨酸离子型受体α-氧基-3羟基-5-甲基4异恶唑丙酸（α-amino-3-hydroxy-5-mnethylisoxazole-4-propionate．AMPA）在缺血性脑损伤的发生发展过程中起重要作用。AMPA受体的GluR2亚基对其Ca2＋通透性的调控逐渐受到人们的重视，这为缺血性脑损伤的治疗提供了新的契机。目的探讨AMPA受体GluR2亚基在缺血性脑损伤过程中的调控作用，寻找新的缺血性脑损伤的治疗靶点。内容综述缺血性脑损伤后AMPA受体Ca2＋通透性与GluR2亚基的关系及影响因素。趋向单纯针对GluR2亚基，阻断缺血，缺氧后因此产生的钙超载，这将成为治疗脑中风可能的有效靶点。

PICK1蛋白83位点氨基酸对PDZ结构域的影响

目的:研究PICK1(protein interacting with C kinase 1)蛋白PDZ结构域内83位点赖氨酸(K83)对PICK1和AMPA受体GluR2亚单位相互作用的影响。方法:利用计算机对PICK1 PDZ结构域和GluR2 C末端4个氨基酸残基进行对接模拟,然后将K83进行虚拟点突变,计算并观察突变后结构和键能的改变。利用实验室已有的野生型全长PICK1 cDNA质粒为模板,构建点突变质粒,与野生型GluR2共转到HEK293T细胞,观察两者在细胞内定位和分布的改变。结果:当野生型PICK1与GluR2共转染时,HEK293T细胞有大量PICK1和GluR2共定位的集簇(cluster)。当我们把构建的PICK1突变体与GluR2共转染时,不同的突变体表现出不一样的改变。结论:改变K83位点的氨基酸结构,很可能会改变PICK1 PDZ结构域与GluR2 C末端结合所形成的疏水、氢键、静电相互作用,使得PDZ结构域与GluR2 C末端的结合能力发生不同程度的改变。

左归降糖解郁方调控Glu-mGluR_(2/3)-PI3K信号通路在糖尿病并发抑郁症海马NVU神经元凋亡中的保护作用

目的:探讨左归降糖解郁方调控Glu-mGluR_(2/3)-PI3K信号通路在糖尿病并发抑郁症(DD)海马神经血管单元(NVU)中神经元凋亡的保护作用及其机制。方法:原代分离、纯化和培养SD大鼠海马神经元(Ne)、星形胶质细胞(As)与脑微血管内皮细胞(Bm),并对其进行免疫细胞化学染色鉴定;采用Transwell小室及高糖联合皮质酮干预构建DD海马NVU细胞模型;实验设正常对照组、模型对照组、10%空白血清对照组、mGluR_(2/3)激动剂5μmol/L组、PI3K阻断剂2μmol/L组、左归降糖解郁方32.8 g/kg 10%含药血清组。造模及给药18 h后,采用CCK8法检测NVU中海马神经元细胞存活力,采用ELISA法检测NVU中海马神经元细胞上清液谷氨酸(Glu)含量;采用免疫荧光联合高内涵细胞成像(HCA)分别检测NVU中AS细胞内代谢型谷氨酸受体2/3(mGluR_(2/3))蛋白表达水平和海马神经元细胞内的细胞外调节蛋白激酶(ERK)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、半胱天冬酶-9(Caspase-9)蛋白表达水平;采用Tunel染色NVU中海马神经元细胞凋亡水平。结果:与正常对照组比较,模型对照组海马神经元细胞存活率显著降低(P<0.01),细胞上清液中Glu含量显著升高(P<0.01),AS细胞内mGluR_(2/3)蛋白表达显著上调(P<0.01),Ne细胞内ERK、Casepase-9蛋白表达明显上调、PI3K蛋白表达明显下调(P<0.05或P<0.01),海马神经元细胞凋亡显著增加(P<0.01);与模型对照组比较,左归降糖解郁方32.8 g/kg 10%含药血清组海马神经元细胞存活力显著增加(P<0.05),Glu含量显著降低(P<0.05),mGluR_(2/3)、ERK、Casepase-9蛋白表达显著下调,PI3K蛋白表达明显上调(P<0.05或P<0.01),海马神经元细胞凋亡数量显著下降,且核固缩、染色质浓染等阳性特征明显减轻。结论:左归降糖解郁方可调控mGluR_(2/3)活化介导的Glu-mGluR_(2/3)-PI3K信号通路异常,这可能是其抑制糖尿病并发抑郁症海马神经元凋亡的重要机制。

微波辐射对家兔小脑运动性学习记忆和GluR2蛋白质磷酸化的影响

目的观察微波辐射对家兔小脑运动性学习记忆功能的损伤效应，检测微波辐射对谷氨酸受体2（GluR2）磷酸化的影响。方法选择建立牢固瞬膜条件反射的家兔，随机分为对照组和微波辐射组（辐射后0、3、24和72h等4个时相点），辐射组给予平均功率密度90mW/cm^2的微波辐射30min，测定辐射后家兔的即刻肛温并计算比吸收率（SAR）值；检测辐射后即刻家兔瞬膜条件反射的变化；蛋白质免疫印迹法检测家兔小脑GluR2及其磷酸化蛋白质的表达变化。结果90mW/cm^2微波辐射后即刻家兔肛温显著升高3．02℃，SAR值为8．74W／kg；瞬膜条件反射在辐射后0h显著降低，3h后基本恢复至正常水平；小脑GluR2的蛋白表达水平无显著变化但GluR2的磷酸化水平在微波辐射后即刻显著降低。结论90mW／cm^2的微波辐射30min能使家兔产生明显热效应，并影响小脑GluR2的磷酸化，最终导致小脑运动性学习记忆功能障碍。