AMPA谷氨酸受体亚基-2在大鼠脊髓损伤急性期对少突胶质前体细胞凋亡的影响

目的:探讨AMPA谷氨酸受体亚基-2 (AMPA-GluR2)在大鼠脊髓损伤急性期对少突胶质前体细胞(oligodendrocyte precursor cells,OPCs)凋亡的影响。方法:60只SD雌性大鼠随机分为假手术组(Sham组,n=15),脊髓损伤组(SCI组,n=15),AMPA受体拮抗剂NBQX组(n=15)和Ca2+通透性AMPA受体拮抗剂JSTx组(n=15)。SCI组、NBQX组和JSTx组应用Allen′s打击法建立大鼠脊髓(T9)损伤模型。采用BBB评分评估各组大鼠脊髓损伤后运动功能恢复情况。HE染色观察脊髓损伤后病理学改变。免疫组化和免疫蛋白印迹(Western blot)法检测AMPA-GluR2在各组大鼠脊髓组织中的表达情况。免疫荧光标记OPCs并应用TUNEL法检测其在各组中的凋亡情况。结果:SCI组BBB评分较假手术组降低(P<0.05),脊髓损伤后3d NBQX组(3.60±0.65)和JSTx组(3.80±0.76)BBB评分较SCI组(1.50±0.35)高(P<0.05),NBQX组和JSTx组之间无差异(P>0.05)。HE染色结果显示SCI组和两个拮抗剂组的脊髓组织均存在损伤,脊髓组织腹侧和腹外侧白质病理学损伤评分显示NBQX组(1.60±0.42)与JSTx组(1.50±0.35)评分较SCI组(2.30±0.20)低(P<0.05)。AMPA-GluR2免疫组化结果显示,脊髓损伤后3d SCI组阳性细胞数(6.15±0.52)较假手术组(13.25±0.21)明显减少(P<0.05),NBQX组(2.10±0.42)和JSTx组(4.45±0.54)阳性细胞数较SCI组少(P<0.05),NBQX组阳性细胞数最少,与JSTx组比较有显著性差异(P<0.05)。Western blot结果显示,脊髓损伤后3d SCI组和两个拮抗剂组AMPA-GluR2表达水平均较假手术组(0.94±0.07)降低(P<0.05),NBQX组(0.37±0.07)及JSTx组(0.54±0.12)较SCI组(0.69±0.03)低(P<0.05),且NBQX组AMPA-GluR2表达水平最低(P<0.05)。免疫荧光显示,脊髓损伤后3d各组大鼠脊髓组织均存在免疫荧光标记的OPCs;TUNEL法检测OPCs凋亡指数表明,NBQX组(0.21±0.02)和JSTx组(0.17±0.01)较SCI组(0.42±0.02)均降低(P<0.05),且JSTx组较NBQX组降低(P<0.05)。结论:大鼠脊髓损伤急性期OPCs凋亡与脊髓组织中AMPA-GluR2表达下降有关。

GluA1相互作用蛋白GNAI2和SRSF10对肝细胞癌预后的影响及诊断模型的建立

目的:探讨AMPA型谷氨酸受体亚基1(glutamate A1,GluA1)相互作用蛋白GNAI2、SRSF10对HCC药物相关靶点、预后指标及诊断模型的作用和影响。方法:蛋白质组学方法获得GluA1相互作用蛋白。Xena数据库(https://xenabrowser.net/)中获取肝细胞癌(liver hepatocellular carcinoma,LIHC)转录组数据以及对应的临床数据,保留在75%样本中表达的基因和其中原发肿瘤和癌旁组织样本用于后续分析。R语言的limma包标准流程对样本进行差异分析。对GluA1相互作用蛋白及差异基因取交集,并进行表达量分析、单因素COX分析和生存曲线分析。PDBePISA数据库验证候选蛋白集与GluA1在分子结构上的对接。string数据库分析候选蛋白集与肝癌相关药物的作用靶点。多因素COX分析患者的预后指标,logistic回归模型构建肝癌诊断模型。结果:获得6个候选蛋白,即KIF1A、GNAI2、RPL3、ARPC1A、EIF3H和SRSF10与GluA1具有很强的亲和力。其中GNAI2和SRSF10是肝细胞癌药物Regorafenib的二级作用靶点,其在单因素以及多因素COX分析中对患者的生存均存在影响(P<0.05),GNAI2(P=0.000339),SRSF10(P=0.0404),并且GNAI2、SRSF10在疾病组中比正常组中高。Z值分别为GNAI2:3.584、SRSF10:2.049。HR分别为GNAI2:2.38,SRSF10:1.18,均为不利预后因素,有希望作为独立于其他因素的预后指标。在肝癌患者的诊断模型中,HR系数分别为GNAI2:11.8455,SRSF10:-0.2037,且该模型在训练集上的曲线下面积为0.971,性能优异。结论:GluA1相互作用蛋白GNAI2和SRSF10是肝细胞癌治疗药物Regorafenib的二级作用靶点,意味着其可能会成为独立于其他因素的预后指标,且具备一定的诊断意义。

GRIN1在脑胶质瘤中的表达及其临床意义

目的探讨谷氨酸受体亚基1(GRIN1)在脑胶质瘤中的表达及其临床意义。方法计算机检索CGGA数据库和GE⁃PIA数据库,下载脑胶质瘤基因表达谱数据和对应的临床数据,采用生信分析方法分析胶质瘤组织GRIN1表达变化及其与胶质瘤病人预后的关系。收集2017年1月至2020年12月手术切除脑胶质瘤标本67例,采用免疫组化染色方法检测GRIN1的表达,病人随访时间截止2021年8月1或病人死亡,记录病人生存情况。结果生信分析结果显示,胶质瘤组织GRIN1表达水平明显降低(P<0.001),而且,随胶质瘤病理级别增高而明显降低(P<0.001);GRIN1高表达组胶质瘤病人中位生存期较低表达组明显缩短(P<0.0001)。67例胶质瘤分析结果显示,级胶质瘤GRIN1低表达率明显增高(P<0.05),随胶质瘤病理级别增高而明显增高(P<0.05);多因素Cox比例回归风险模型分析结果显示,GRIN1低表达是脑胶质瘤生存预后不良的独立危险因素(P<0.05),生存曲线分析显示,GRIN1低表达组胶质瘤病人中位生存期较高表达组明显缩短(P<0.05)。结论胶质瘤GRIN1呈低表达,随病理分级增高而明显降低,与胶质瘤病人预后不良的密切相关。

肌萎缩性侧索硬化症和兴奋性氨基酸

以α-氨基-3-羟基-4异恶唑-丙酸(AMPA)受体介导的Ca^(2+)通透性增加,Ca^(2+)流入比例增大而导致神经细胞死亡的理论已经明确。AMPA受体的谷氨酸受体2(GluR2)亚基的Q/R部位编辑率低下是散发性肌萎缩性侧索硬化(ALS)运动神经元死亡的主要原因。变异的铜-锌超氧化物歧化酶(SOD1)相关的家族性ALS(ALS1)是以AMPA受体含GluR2亚基的比例减少为基础;以延髓脊髓性肌萎缩症(SMBA)为代表运动神经元的死亡,不是AMPA受体所介导。ALS GluR2 Q/R部位核糖核酸(RNA)编辑的恢复可以考虑成为ALS治疗的特异方法,而AMPA受体拮抗剂可以防止ALS1运动神经元的变性。

亚急性1-溴丙烷吸入对雄性大鼠海马区SYP、GluR2、NR2B蛋白表达影响

目的探讨亚急性1-溴丙烷（1-BP）吸入染毒对雄性大鼠大脑海马区突触特异性标志物突触素（SYP）、谷氨酸受体2亚基（GluR2）、N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基（NR2B）蛋白表达的影响。方法将48只无特定病原体级成年雄性Wistar大鼠按体质量随机分为对照组和低、中、高剂量组4组,每组12只。采用动式吸入染毒法,对照组给予新鲜空气,各剂量组分别予质量浓度为1 250、2 500和5 000 mg/m31-BP吸入,每天染毒6 h,每周染毒5 d,连续4周。染毒结束后处死大鼠,取出全脑,分离大脑（含海马组织）、脑干和小脑,分别采用实时荧光定量聚合酶链反应和免疫印迹法检测大鼠海马组织SYP、GluR2、NR2B的mRNA和蛋白相对表达水平。结果高剂量组大鼠于染毒第3周时出现反应迟钝和后肢肌力下降等表现。高剂量组大鼠染毒第1～4周体质量均低于同时间点对照组（P〈0.01）。高剂量组大鼠全脑、大脑和脑干质量均低于对照组（P〈0.05）。高剂量组大鼠海马组织海马3区和齿状回区可见少量神经元细胞坏死。各组大鼠海马组织SYP、GluR2和NR2B的mRNA相对表达水平分别比较,差异均无统计学意义（P〉0.05）。各组大鼠海马组织SYP蛋白相对表达水平比较差异无统计学意义（P〉0.05）;高剂量组大鼠海马组织GluR2蛋白相对表达水平低于对照组（P〈0.05）,NR2B蛋白相对表达水平高于对照组（P〈0.05）。结论大鼠海马组织GluR2和NR2B蛋白可作为1-BP中枢神经毒性的生物标志物,但其具体的生理意义尚需进一步研究。

全脑缺血再灌注诱导大鼠海马CA1区GluR6巯基亚硝基化的机制

目的用大鼠全脑缺血模型探讨全脑缺血再灌注诱导大鼠海马CA1区GluR6巯基亚硝基化的机制。方法将78只雄性SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、全脑缺血再灌注组(I/R组)、给药组(7-NI组、GSNO组、SNP组、NS102组)及溶剂对照组[生理盐水(Saline)组、DMSO组],每组6只。采用四动脉结扎去结扎法构建大鼠全脑缺血再灌注模型。运用生物素转化法检测蛋白质的巯基亚硝基化,聚丙烯酰胺凝胶电泳、免疫印迹方法对GluR6巯基亚硝基化水平进行分析研究。结果全脑缺血再灌注后,I/R组GluR6巯基亚硝基化水平高于Sham组,差异有统计学意义(P<0.05),7-NI组GluR6巯基亚硝基化水平相比I/R组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05),溶剂DMSO组与I/R组相比差异无统计学意义(P>0.05);GSNO组和SNP组GluR6巯基亚硝基化水平比I/R组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05),溶剂Saline组与I/R组相比差异无统计学意义(P>0.05);NS102预处理组GluR6巯基亚硝基化水平比I/R组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05),溶剂DMSO组与I/R组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论7-NI、GSNO、SNP和NS102都能抑制脑缺血再灌注诱导的GluR6巯基亚硝基化。nNOS介导产生的内源性NO介导全脑缺血再灌注诱导的大鼠海马CA1区GluR6巯基亚硝基化,并受外源性NO影响;全脑缺血再灌注通过激活KA受体诱导大鼠海马CA1区GluR6发生巯基亚硝基化。