2型糖尿病患者胰岛细胞自身抗体、抗谷氨酸脱羧酶抗体水平与糖尿病微血管并发症的关系

目的探讨抗胰岛细胞抗体(ICA)、抗胰岛素抗体(IAA)及抗谷氨酸脱羧酶抗体(GADA)与2型糖尿病(T2DM)患者发生糖尿病微血管并发症(DMAP)的关系。方法对2023年11月-2024年3月本院收治的114例T2DM患者临床资料进行回顾性分析,根据是否发生DMAP将患者分别分入单纯T2DM组(n=61)和并发症组(n=53)。检测所有患者入院时IAA、ICA及GADA水平。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析IAA、ICA及GADA对DMAP的评估价值,采用多因素logistic回归分析探讨DMAP的影响因素。结果并发症组患者的ICA、IAA、GADA水平均高于单纯T2DM组,差异均有统计学意义(P<0.05)。ICA、IAA及GADA评估T2DM患者发生DMAP的曲线下面积(AUC)分别为0.792、0.736、0.805,联合检测的AUC为0.912。并发症组患者T2DM病程≥8年比例、有饮酒史比例均高于单纯T2DM组患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。logistic回归结果显示:T2DM病程≥8年(OR=2.314,95%CI:1.136~4.714)、ICA≥4183.62 RU/mL(OR=4.221,95%CI:1.849~9.633)、IAA≥5587.37 RU/mL(OR=3.449,95%CI:1.654~7.192)、GADA≥3667.92 IU/mL(OR=5.150,95%CI:2.058~12.888)是T2DM患者发生DMAP的危险因素(P<0.05)。结论ICA、IAA及GADA与T2DM患者发生DMAP密切相关,联合检测有助于DMAP的评估。

谷氨酸脱羧酶1在精神疾病中的研究进展

谷氨酸脱羧酶(glutamic acid decarboxylase, GAD)是γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid, GABA)的合成酶,主要在脑和胰岛中存在。GABA的异常表达与多种疾病相关,多项研究表明其合成酶GAD1可能参与精神疾病的发病过程,现就GAD1研究的新进展及其可能的致病机制进行综述。

抗谷氨酸脱羧酶65抗体相关脑炎1例

抗谷氨酸脱羧酶65抗体相关自身免疫性脑炎是由于免疫系统对中枢神经系统抗原产生抗原抗体反应而导致的疾病,常见的临床症状为局灶性发作癫痫、精神症状等为主要临床特点,其在临床工作中比较罕见,值得影像科医生的重视与学习。

谷氨酸脱羧酶(GAD)的研究进展

谷氨酸脱羧酶(GAD,EC4.1.1.15)是生物体内广泛存在的一种酶,有重要的生理学作用,能催化谷氨酸脱羧生成重要的抑制性神经递质γ-氨基丁酸(GABA)。GAD用于医疗和食品中具有很大潜力,本文综述了GAD的研究进展和应用。

抗谷氨酸脱羧酶65抗体相关性僵人综合征并自身免疫性多内分泌腺病综合征Ⅱ型1例并文献复习

目的报告1例抗谷氨酸脱羧酶65抗体相关性僵人综合征(SPS)并发自身免疫性多内分泌腺病综合征Ⅱ型(APS-Ⅱ)的病例,旨在提高临床医师对该病的认识。方法回顾性分析2022年安徽省某神经病学研究所附院收治的1例51岁女性,临床以反复腰痛、腰腹及双下肢僵硬伴无力为特点的病例资料,并复习相关文献。结果患者临床以反复腰痛、腰腹及双下肢僵硬伴无力为特点,早期误诊为分离转换障碍,后检查发现血清及脑脊液抗谷氨酸脱羧酶65抗体阳性,甲状腺球蛋白抗体及过氧化酶抗体滴度升高,空腹及餐后2 h血糖、糖化血红蛋白升高,神经电生理提示静息状态下以体轴肌为主的连续性运动单位电位发放,诊断为抗谷氨酸脱羧酶65抗体相关性SPS、APS-Ⅱ(桥本甲状腺炎、1型糖尿病),予免疫治疗和对症治疗后病情改善。结论抗谷氨酸脱羧酶65抗体相关性SPS并发APS-Ⅱ临床虽具有一定特异性,但由于临床罕见,易误诊、漏诊,尤其是病程早期。

谷氨酸脱羧酶(GAD_(65))自身抗体的放射配体检测法

为建立一种诊断和预测胰岛素依赖型糖尿病（ＩＤＤＭ）的免疫学定量检测指标，改良了Ｐｅ－ｔｅｒｓｅｎ的谷氨酸脱羧酶自身抗体（ＧＡＤ－Ａｂ）放射配体分析法，以试管内转录和翻译的标记６５ｋＤ谷氨酸脱羧酶作抗原，以蛋白Ａ凝胶作为抗体沉淀剂，用液闪仪测ｃｐｍ值。对１５例初发ＩＤＤＭ和４０例对照的测定结果显示：ＩＤＤＭ组ｃｐｍ值显著高于对照组（Ｐ＜０．００１）；以对照组ｘ±２ｓ作为阳性标准，则ＩＤＤＭ组阳性率为６７％（１０／１５），对照组为２．５％（１／４０）。故改良的ＧＡＤ－Ａｂ放射配体分析法对初发ＩＤＤＭ诊断的特异性为９７．５％，敏感性为６７％。且操作简便，易于推广。

芜青中谷氨酸脱羧酶(Gad)酶性质的时空差异

该文对芜青中谷氨酸脱羧酶(Gad)粗酶的提取和优化、酶活力最适反应条件、时空分布差异及光照影响等进行对比分析,同时利用超高效液相色谱法技术(UPLC)分析测定反应产物γ-氨基丁酸(Gaba)的含量.实验结果表明,提取Gad粗酶时加入纤维素酶能提高约70%酶活力.在最适条件对比实验中,对芜青芽苗、块根、茎生长点、茎及顶端分生组织分别进行测定,其中芽苗与顶端分生组织中的酶活力较高.光照对萌发中芽苗的Gad酶活力有较大影响,避光条件下酶活力下降约75%.结果表明,芜青芽苗Gad酶活力好且易于获取,转化谷氨酸反应生成γ-氨基丁酸的转化率高.

大鼠谷氨酸脱羧酶(GAD)毕赤酵母表达重组子的构建

目的 :构建大鼠谷氨酸脱羧酶(glutamicaciddecarboxylase,GAD)巴斯德毕赤酵母(Pichiapastoris)表达重组子 ,探索一条真核细胞高效表达rGAD的新途径。方法 :以 pUC18_GAD质粒为模板PCR扩增出大鼠GAD65基因 ,将其克隆入PGEM_Teasy载体 ,继而将其克隆到毕赤酵母分泌型质粒表达载体 pPIC9K中 ,重组质粒线性化后PEG法转染入毕赤酵母菌株GS115,PCR筛选转化子。结果 :DNA序列分析和PCR鉴定表明成功构建了大鼠谷氨酸脱羧酶 (GAD)毕赤酵母表达重组子。结论

抗谷氨酸脱羧酶65抗体脑炎及相关自身免疫性多内分泌腺病综合征

抗谷氨酸脱羧酶65(GAD65)抗体脑炎是自身免疫性脑炎的一种亚型,常表现为僵人综合征、小脑性共济失调、颞叶癫痫等神经综合征,早期识别诊断并给予免疫治疗对于患者的预后有极大改善。目前对于抗GAD65抗体脑炎的诊断主要依赖于血清中检测出高滴度的GAD65抗体或脑脊液中GAD65抗体阳性,然而GAD65抗体与广泛的自身免疫性疾病相关,在非神经系统中可引起自身免疫疾病包括1型糖尿病和甲状腺炎等。因此,诊治抗GAD65抗体脑炎的过程中需要筛查潜在的内分泌腺体的变化,在多内分泌免疫环境下出现神经症状也需要考虑合并抗GAD65抗体脑炎的可能。

胰岛素自身抗体与C肽、谷氨酸脱羧酶抗体在鉴别诊断成人隐匿性自身免疫性糖尿病中的临床意义

目的探讨胰岛素自身抗体与C肽、谷氨酸脱羧酶抗体在鉴别诊断成人隐匿性自身免疫性糖尿病(latent autoimmune diabetes in adults,LADA)中的临床意义。方法选取2020年7月—2022年12月连江县医院收治的84例LADA患者作为观察组,另选取同期80例健康体检者、80例2型糖尿病患者作为对照1组、对照2组,分别以化学发光法测定胰岛素自身抗体、C肽、谷氨酸脱羧酶抗体水平(glutamate acid decarboxylase antibody,GAD-Ab)及统计阳性检出率,以受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC)分析单一指标检测及联合检测诊断及鉴别疾病的价值。结果观察组胰岛素自身抗体、GAD-Ab高于对照1组、对照2组,C肽低于对照1组、对照2组,差异有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线显示联合检测诊断价值和鉴别价值均更高。结论胰岛素自身抗体与C肽、GAD-Ab可用于LADA筛查,也可与2型糖尿病鉴别诊断,临床可加以借鉴并为后续治疗提供参考。

抗谷氨酸脱羧酶65抗体脑炎1例报告

抗谷氨酸脱羧酶65(GAD65)抗体是一种抗细胞内抗原抗体,抗GAD65抗体相关脑炎可表现为边缘叶脑炎症状,如精神行为异常、认知障碍及急性或亚急性癫痫发作等。本文回顾性分析江苏省人民医院神经内科癫痫中心收治的1例抗GAD65抗体脑炎患者,临床表现为记忆力下降及癫痫发作等;头颅MRI表现为左侧颞叶病灶;脑电图显示双侧前、中颞高波幅棘慢复合波放电。经激素及免疫抑制剂治疗后,疗效不佳。本文通过归纳抗GAD65抗体相关脑炎的临床特点,为同行提供参考。

HOB SMART 6500检测抗谷氨酸脱羧酶抗体的性能验证及评价

目的对HOB SMART 6500磁微粒化学发光法检测抗谷氨酸脱羧酶(GAD)抗体的性能进行验证。方法参考中国合格评定国家认可委员会(CNAS)、美国临床实验室标准化协会(CLSI)系列文件,制订方法学验证方案,对HOB SMART 6500检测抗GAD抗体的正确度、精密度、线性区间、可报告范围和参考范围进行验证。结果正确度偏倚<±10%;室内质控品QC1和QC2的重复性CV分别为3.75%和3.83%,中间精密度的CV分别为5.29%和4.40%;在试剂说明书给定的线性范围0.5~2000IU/mL内线性良好,线性相关系数R 2为0.9976;可报告范围为0.5~10000IU/mL;参考区间为0.5~10.00IU/mL。结论HOB SMART 6500磁微粒化学发光法检测抗GAD抗体的性能验证良好,能够满足临床检测的需求。

大鼠大脑组织中谷氨酸脱羧酶GAD67基因的克隆和序列测定

目的 克隆大鼠脑组织中谷氨酸脱羧酶GAD6 7基因 .方法 采用RT -PCR方法 ,大鼠脑组织中的mRNA逆转录成cDNA ,再以cDNA为模板 ,扩增谷氨酸脱羧酶GAD6 7基因片段 ,克隆入T载体 ,并经序列测定 .结果 RT -PCR法扩增出一特异产物与预期长度 1795bp相符 ,T载体克隆测序与大鼠谷氨酸脱羧酶GAD6 710 0 %同源 .结论 采用RT -PCR和T载体技术获得了大鼠脑组织中的谷氨酸脱羧酶GAD6 7基因克隆 ,为该基因的体外表达打下基础 .

水稻谷氨酸脱羧酶基因(OsGAD3)分子进化与表达分析

利用分子克隆技术从8个水稻品种中克隆到谷氨酸脱羧酶基因OsGAD3,并进行了相关的生物信息学及表达谱分析.结果表明,不同水稻品种OsGAD3的核苷酸序列差异性很小,都在1%以内,在氨基酸序列上都具有保守的结构域,在C末端均具有类似于OsGAD1结合CaM的关键氨基酸位点,但不同于OsGAD2.系统进化树分析表明,不同水稻品种的OsGAD3在进化上可以分为粳稻和籼稻两大类,与水稻常规分类相一致.此外,对不同水稻品种的谷氨酸脱羧酶基因的表达谱分析发现,OsGAD1、OsGAD2、OsGAD3、OsGAD4和OsGAD5在测试的11种水稻叶片中都有表达,但表达特征存在一定的差异性,可能与品种特性相关.

大叶落地生根谷氨酸脱羧酶基因(KdGAD)的克隆与表达

为研究大叶落地生根中胎生苗发育的分子机制,利用RACE-PCR技术从大叶落地生根中克隆了1个新的谷氨酸脱羧酶基因(Kd GAD)。该基因开放阅读框长度为1 509 bp,编码502个氨基酸残基,分子量为5.657×104,等电点为5.43。其氨基酸序列与蓖麻的同源性最高,与人参的进化关系最近,含有保守的Ser(S)-x-x-Lys(K)基序和Trp(W)残基。实时荧光定量PCR分析结果表明,该基因在大叶落地生根的茎中表达量最高,且受渗透胁迫(甘露醇处理)的诱导下调表达。

茶树谷氨酸脱羧酶基因(GAD)的原核表达及酶活快速检测

L-谷氨酸经脱羧酶反应可生成γ-氨基丁酸(GABA),此过程受谷氨酸脱羧酶(glutamic acid decarboxylase,GAD)催化。从茶树转录组库中筛选GAD基因,通过NCBI比对获得其cDNA序列(GenBank登录号为KT728367.1)。序列分析表明,GAD基因的ORF全长为1 482 bp,共编码493个氨基酸,该蛋白为细胞质蛋白,分子量为55.49 kDa,理论等电点为5.44。从舒茶早茶树根部中克隆该基因,并构建pMAL-c5X-GAD表达载体,经IPTG诱导,SDS-PAGE检测,得到分子量约为55 kDa的目的蛋白。体外酶活反应后用薄层色谱法(TLC)分析,经BAW(Butanol:Acetic acid:H_2O,4:1:2)和75%苯酚水溶液(Phenol:H_2O,3:1)2种展开剂分离酶促产物,均可检测到GABA的生成。通过实时荧光定量PCR对GAD基因在不同茶树组织的表达水平进行检测,发现GAD在根中表达量最高,而在芽中表达量最低,在其他组织中表达各不相同,其表达具有组织特异性。

发芽糙米与稻谷的谷氨酸脱羧酶活力及γ-氨基丁酸含量比较

比较了糙米与稻谷发芽期间及培养结束后的静置过程中谷氨酸脱羧酶(GAD)活力、γ-氨基丁酸(GABA)及谷氨酸(Glu)含量变化情况。结果表明,糙米和稻谷在(32±1)℃条件下,以1.2 L/min的通气量,用含有0.1%L-谷氨酸、0.1%抗坏血酸的培养液浸渍发芽,生长速率和呼吸速率均以糙米为快。培养结束时,发芽糙米中GABA含量和Glu含量分别比发芽稻谷增加64.05%和14.68%,空气中放置8 h后发芽糙米中GABA含量比发芽结束时增加了24.32%,整个发芽和静置期间发芽糙米中GAD活力始终高于发芽稻谷。

比色法快速测定乳酸菌谷氨酸脱羧酶活力及其应用

基于Berthelot显色测定ω 氨基酸的反应 ,探讨了比色法快速测定谷氨酸脱羧酶活力的测定条件。结果表明 ,该方法灵敏度较高 ,重现性好 ,成本低 ,快捷 ,可替代氨基酸分析仪分析法。对乳酸菌谷氨酸脱羧酶提取液的适宜反应底物体系为 0 2mol LMacIlvaine ,pH4 7,内含 0 1mmol LPLP (5 磷酸吡哆醛 ) ,1 0mmol L底物L MSG (L 谷氨酸钠 )。 2 0 0 μL底物溶液和 1～ 1 0 0 μL酶液在 3 0℃反应 ,然后冰浴中加入 2 0 0 μL 0 2mol L硼酸缓冲液 (pH9 0 )终止反应 ,再加入 1mL 6%苯酚和 40 0 μL次氯酸钠 ,沸水浴加热 1 0min后 ,迅速冷却 2 0min ,在 63 0nm测定吸光值 ,酶反应产物γ 氨基丁酸的定量以标准曲线确定 。

Lactococcus lactis谷氨酸脱羧酶的分离纯化及部分酶学性质

采用溶菌酶处理、超声破碎、硫酸铵分级、3次DEAE SepharoseCL 6B层析、SephacrylS 200凝胶过滤等手段,从乳酸菌细胞中分离纯化得到谷氨酸脱羧酶(GAD;EC4.1.1.15).纯化酶的比活力为14.4U/mg,纯化倍数31,回收率3.8%,SDS PAGE得到亚基的相对分子质量为65000.L 谷氨酸是测试的18种氨基酸中的惟一作用底物,表明乳酸菌GAD具有高度的底物专一性.酶在pH值3.6～5.4时具有活性,pH值4.7时活性最高,pH值6.0以上时没有活力.耐热性实验表明,pH值4.7条件下处理5h后,60℃时该酶仍能保持80%以上的活性,80℃以上迅速失活,由Lineweaver Burk作图得到的GAD的Km值为1.9mmol/L.