新疆传统发酵乳制品中产γ-氨基丁酸乳酸菌的筛选与益生特性研究

采用传统分离方法结合分子学鉴定对新疆传统发酵乳制品中的乳酸菌多样性进行初步分析,并利用薄层色谱法、Berthelot法、高效液相色谱法对产γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)的乳酸菌进行筛选与定量,选择产量较高的菌株进行耐酸、耐胆盐能力初探与益生特性评价。结果表明:新疆传统发酵乳制品中以乳杆菌属为优势菌属,短乳杆菌与瑞士乳杆菌为主要优势菌种;其中短乳杆菌在GABA合成方面较有优势,并得到一株产量为(4.17±0.05)mg/mL的短乳杆菌NL8;与具有GABA合成能力的戊糖片球菌NL56相比,NL8在低pH值与人工胃肠液处理后,存活率更高(p<0.05),且通过加入0.5%谷氨酸钠,NL56与NL8的耐酸能力均得到显著改善(p<0.05);NL8相比NL56具有较弱的胆盐耐受能力,胆盐浓度高于0.3%后受到强烈抑制;NL8具有一定的抗氧化能力,其中DPPH自由基清除能力最强,其无细胞提取物对DPPH清除能力可达(42.29±0.87)%;NL8对4种指示菌均有一定的抑制作用,其中对大肠杆菌和肠炎沙门氏菌的抑制作用最强,抑菌圈直径可达(18.62±0.58)mm和(18.13±0.56)mm。

杀鱼爱德华氏菌新型抗酸系统GadBCD的抗酸作用与致病作用

本研究鉴定了鱼类重要致病菌杀鱼爱德华氏菌(Edwardsiella piscicida)抗强酸系统GadBCD及其功能。通过序列分析和共转录实验表明:GadBCD系统由1个谷氨酸脱羧酶、1个谷氨酰胺酶和3个转运体组成,它们组成1个操纵子。qRT-PCR发现强酸和高温刺激细菌时gadBCD表达基本不变,但过氧化氢和宿主血清刺激时gadBCD表达显著上调。利用同源重组构建了GadBCD系统缺失突变株ΔgadP,通过比较野生株和ΔgadP的生长曲线以及酸性压力下存活率等实验,发现GadBCD系统不仅是杀鱼爱德华氏菌抗中强酸的重要参与者,也是抗强酸所必需的;通过比较野生株和ΔgadP在生物膜形成、运动性、抗宿主血清杀伤、感染细胞等方面的差异,发现GadBCD参与了细菌的毒力。综上所述,GadBCD系统是杀鱼爱德华氏菌重要的抗强酸系统,并参与了细菌的致病作用。