基质γ-羧基谷氨酸蛋白对冠心病的诊断价值研究

目的探讨基质γ-羟基谷氨酸蛋白(MGP)对冠状动脉粥样硬化性心脏病(CHD)的诊断价值。方法采用酶联免疫吸附法检测健康者和不同冠状动脉钙化积分(CACS)CHD患者血清MGP水平,并进行统计分析。以受试者工作特征曲线(ROC曲线)分析MGP对CHD的诊断价值。结果 CHD患者与健康者之间,以及不同CACS水平CHD患者之间血清MGP水平比较差异有统计学意义(P<0.05)。CACS与血清MGP水平呈正相关(P<0.05)。MGP诊断CHD的ROC曲线下面积为0.667,诊断阈值为70.69pg/mL,诊断灵敏度为58.80%,特异度为83.70%,约登指数为0.425。结论 CHD患者血清MGP水平存在明显异常,血清MGP水平与CACS呈正相关。MGP对CHD的诊断价值明显,对疾病的临床预防和早期诊断具有重要作用。

基质γ-羧基谷氨酸蛋白与血管硬化

基质γ-羧基谷氨酸蛋白是一个基质维生素K依赖蛋白,它在抑制血管钙化方面起着重要作用。本文就其在血管钙化中的研究进展作一综述。

基质γ-羧基谷氨酸蛋白与肾结石形成

肾结石形成以肾小管或肾间质的结晶异常沉积为特征,是一个多蛋白相互作用和多信号通路参与的复杂的生物学过程。与血管钙化机制类似,肾脏通过表达和分泌一些大分子蛋白参与和影响肾脏钙化。本文简介基质γ-羧基谷氨酸蛋白与肾结石形成的关系。

基质谷氨酸蛋白在家猪主动脉瓣间质细胞钙化中的表达

目的研究家猪主动脉瓣间质细胞（AVIC）体外钙化诱导过程中基质谷氨酸蛋白（MGP）的变化。方法处死健康成年雄性家猪6只,取下心脏,分离、培养AVIC,并进行细胞表型鉴定。取2~5代AVIC,分为在标准培养基中培养的对照组与在钙化诱导培养基（标准培养基内加入钙化诱导剂）中培养的钙化诱导组,分别采用茜素红染色及Western blot、半定量聚合酶链反应技术检测2组细胞在1、7、14 d的钙化情况及MGP在蛋白及mRNA水平的表达情况。结果对照组细胞在7、14 d出现少量钙化结节[每孔（2.38±0.97）个、（9.47±1.59）个],钙化诱导组细胞在7、14 d出现明显钙化结节[每孔（37.55±6.70）个、（78.29±9.14）个];钙化诱导组细胞在7、14 d钙化情况明显高于对照组（P〈0.05）。在7、14 d,钙化诱导组细胞内活化型MGP蛋白水平及MGP mRNA表达水平明显低于对照组（P〈0.05）。结论在钙化诱导条件下,AVIC内钙化抑制剂MGP抑制钙化能力下调。

强直性脊柱炎患者血清非磷酸化基质γ-羧基谷氨酸蛋白和巨噬细胞集落刺激因子水平与骨代谢生物化学指标的相关性

目的研究强直性脊柱炎患者血清非磷酸化基质γ-羧基谷氨酸蛋白(dp MGP)、巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)水平与骨代谢生物化学指标的相关性。方法选择信阳市中心医院2014年4月至2016年8月收治的强直性脊柱炎患者82例为观察组,另选取体检健康者54例作为对照组。采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验测定2组患者血清中M-CSF、骨碱性磷酸酶(BALP)、骨钙素(OC)水平,采用竞争性酶联免疫吸附试验检测血清dp MGP水平,分析dp MGP、M-CSF与BALP、OC的相关性。结果观察组患者血清中dp MGP、M-CSF水平高于对照组(P<0.05);2组研究对象血清中BALP、OC水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。2组研究对象血清dp MGP水平与BALP、OC无相关性(r=-0.326、0.427,P=0.084、0.125);血清M-CSF水平与BALP、OC呈负相关(r=-0.357、-0.538,P=0.043、0.047)。结论强直性脊柱炎患者血清M-CSF水平与BALP、OC呈负相关,可通过检测M-CSF水平来判断骨代谢情况。

出生年干支运气与肝细胞核因子-1β-血管紧张素转换酶2-基质γ羟基谷氨酸蛋白通路血清表达水平的关联性研究

目的:探讨血清肝细胞核因子-1β(Hepatocyte Nuclear Factor 1β,HNF-1β)-血管紧张素转换酶2(Angiotensin Converting Enzyme 2,ACE2)-基质γ羟基谷氨酸蛋白(Matrix Gamma Hydroxyglutamate Protein,MGP)通路与人群出生时干支运气的相关性。方法:按照随机数字表法,收集2021年1-2月体检的健康人群64例,通过酶联免疫吸附测定法检测血清中HNF-1β、ACE2、MGP浓度。结果:血清ACE2水平在男性体内低于女性,且与年龄呈负相关;出生年是丁干,火行,丑、卯、辰、巳、酉支以及阳明、太阴、太阳司天的人群的血清ACE2水平较低;出生年是戊、庚、壬干,子、申支,水行,及少阴、少阳、厥阴司天人群的血清ACE2较高(P <0.05)。出生年是水运、寅、午、酉、戌支人群血清MGP水平较高,出生年是金运、申、丑、亥支人群的血清MGP水平较低(P <0.05)。HNF-1β与MGP呈正相关,ACE2与MGP呈负相关(P <0.05)。结论:出生年干支运气会影响HNF-1β-ACE2-MGP通路的指标水平,初步揭示了运气学说的科学性。

毛果杨富含谷氨酸蛋白PtrGARP1基因启动子特性

为了研究PtrGARP1与杨树木质化生长的相关性,明确木材发育及形成的分子机制,以毛果杨幼树为材料,提取各组织的cDNA进行PCR扩增,并构建植物表达载体在模式植物拟南芥中进行PtrGARP1组织表达分析。结果显示,PtrGARP1基因在毛果杨木质化组织内高丰度表达,且表达水平与幼茎木质化程度同步增加;用Gateway技术构建该基因启动子融合报告基因GUS的ProPtrGARP1::GUS植物表达载体,转化野生型拟南芥获得5个稳定表达的转基因株系;GUS活性染色分析显示,PtrGARP1基因启动子活性集中在转基因植株发达的维管组织内。这个结果暗示着PtrGARP1与杨树木质化生长相关,可能参与木材发育及形成。

谷氨酸转运蛋白EAAT2参与早产儿脑损伤作用机制研究进展

早产儿每年约占全世界所有新生儿的11%,有较高的伴发神经精神疾病、发育障碍及终身残疾的风险。谷氨酸(glutamic acid,GLU)作为重要的兴奋性神经递质,对中枢神经系统的功能正常起重要作用。兴奋性氨基酸转运蛋白2(EAAT2)是主要的谷氨酸转运蛋白,负责清除高达95%的细胞外谷氨酸,防止神经元兴奋性毒性和过度兴奋。增强EAAT2表达和转运功能作为成人神经系统疾病的潜在治疗方法备受关注,但在预防早产儿脑损伤中的作用仍有待探索。本文就EAAT2在早产儿脑损伤中的相关机制进行综述,为预防早产儿脑损伤的研究提供新方向。

完全弗氏佐剂致痛大鼠脊髓中谷氨酸转运蛋白表达的变化

目的:观察完全弗氏佐剂(CFA)致痛大鼠脊髓中谷氨酸转运蛋白表达的变化规律。方法:取8只大鼠足底注射CFA100μL建立疼痛模型,观察大鼠致痛后10d内热痛阈及触诱发痛阈的变化。另取20只大鼠经足底注射CFA100μL建立疼痛模型后观察大鼠脊髓内谷氨酸转运蛋白表达的变化。结果:CFA致痛后大鼠痛阈均显著低于致痛前(P<0.01),其中以致痛后3d内痛阈降低最为显著,以后痛阈逐渐升高,10d后痛阈恢复至基础值的70%左右。免疫组化染色可见在正常未致痛时,大鼠脊髓中均有两种谷氨酸转运蛋白GLT-1及EAAC1的阳性表达。致痛1、3d后,脊髓中GLT-1及EAAC1表达明显升高。致痛后7、10d表达逐渐降低,接近致痛前的表达水平。结论:足底注射CFA后可致大鼠痛阈显著降低,脊髓中谷氨酸转运蛋白也呈先升高后逐渐降低的变化,谷氨酸转运蛋白可能参与了大鼠炎性疼痛脊髓可塑性变化。

丙泊酚对大鼠缺氧后海马细胞谷氨酸转运蛋白表达及其功能的影响

目的观察缺氧后丙泊酚对体外培养海马神经细胞谷氨酸转运蛋白(EAAT2)表达及谷氨酸摄取功能的影响。方法取10个月龄SD大鼠海马区神经细胞进行培养,制备缺氧模型后随机分为对照组和丙泊酚组。采用用Western blot及Northern blot分别测定缺氧后EAAT2蛋白和基因表达;NF-κB正义寡核苷酸和反义寡核苷酸转染各组培养细胞后,行NF-κB和EAAT2蛋白测定;同位素标记法测定谷氨酸摄取量。结果与对照组相比,丙泊酚处理后海马细胞EAAT2蛋白及mRNA均增加。NF-κB正义寡核苷酸转染培养细胞后,丙泊酚处理可明显抑制细胞核内NF-κB的表达,并上调EAAT2的表达,提高谷氨酸摄取率。结论缺氧后丙泊酚处理可通过NF-κB通路上调海马细胞EAAT2的表达,提高谷氨酸摄取率,降低兴奋性神经毒性损伤。

谷氨酸发酵废水中提取菌体蛋白研究进展

对味精废液的特性、谷氨酸菌体蛋白的提取工艺、主要提取方法进行了综述。随着我国畜牧业的快速发展,蛋白质饲料短缺现象越来越严重,开发利用谷氨酸菌体蛋白,不但可缓解我国蛋白质饲料短缺现象,还可减轻对环境的污染,具有重大的经济效益和环境效益。菌体蛋白是废弃资源的综合利用,成本相对较低,经济效益突出,可实现变废为宝,因此开发利用菌体蛋白具有广阔的发展前景。

不同疟区恶性疟原虫地理株谷氨酸富有蛋白基因R2区序列分析及分型

[目的 ]测定云南与海南两省不同疟区恶性疟原虫分离株谷氨酸富有蛋白 (GLURP)基因的部分序列及了解其分型。[方法 ]采用套式PCR方法特异性扩增GLURP基因R2区片段 ,并将该基因片段克隆于T载体 ,用双脱氧末端终止法测定不同长度的阳性克隆核苷酸序列 ,并应用DNAStar软件对云南与海南两省分离株GLURP基因及蛋白序列进行比较和分析。[结果 ]首次发现云南与海南两省恶性疟原虫至少存有 7个大小不同的GLURP等位基因型虫株 ,其基因片段变化范围为 6 0 0～ 15 0 0bp。不同分离株的GLURP基因R2区具高度保守性 ,其由编码 19～ 2 0个氨基酸的碱基的基本重复单位构成 ,该基因具有长度的多态性 ,表现在碱基基本重复单位的数目不同。序列分析结果表明 ,我国不同分离株之间或同一地区不同株之间GLURP基因及氨基酸序列具有高度的同源性 ,无明显的地理差异。 [结论 ]不同分离株GLURP基因结构的高度保守性及碱基重复片段数目的多态性 ,对研究疫苗候选抗原和建立疟原虫基因分型方法具有一定理论价值。

电针对阿尔茨海默病大鼠海马谷氨酸受体相互作用蛋白1、2表达的影响

目的探讨电针对Aβ25-35所致的阿尔茨海默病(AD)模型大鼠海马神经元突触后膜α-氨基-3-羟基-5-甲基-4-异唑丙(AMPA)受体相关蛋白谷氨酸受体相互作用蛋白(GRIP)1、GRIP2表达的影响。方法 40只雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组和电针组,每组10只。采用海马CA1区注射寡聚态Aβ25-35制备模型,假手术组在相同部位用同样方法注射等量的生理盐水。造模成功后第2天开始,电针组选取双侧肾俞、百会穴进行治疗,每天1次,每周6次,共2周。治疗结束后行免疫组化检测GRIP1、GRIP2的表达量。结果正常组与假手术组GRIP1、GRIP2蛋白表达无显著性差异(t<1.7438,P>0.05)。与假手术组比较,模型组、电针组GRIP1、GRIP2蛋白表达显著下降(t>9.5928,P<0.001)。与模型组比较,电针组大鼠GRIP1、GRIP2蛋白表达升高(t>9.5326,P<0.05)。结论电针可能通过增加与AMPA受体定位插入相关的突触后蛋白GRIP1、GRIP2的数量,使突触后膜上的AMPA受体数量增多。

谷氨酸菌体蛋白的酶解试验研究

以味精生产中的废弃物——谷氨酸菌体蛋白为原料 ,经过稀酸预处理后 ,用蛋白酶水解获得复合氨基酸水解液。通过正交试验确定最佳酶解条件为 :酶添加量 4%、温度 40℃、初始 p H=7.5、水解时间 1 2 h、底物质量比为 1∶ 30 ,此条件下水解率为 75 .3%。水解液中含有 1 7种氨基酸 ,其中必需氨基酸约占 5 0 %。

miR-376c-3p通过靶向谷氨酸受体相互作用蛋白1影响乳腺癌细胞的增殖和迁移

目的:探讨miR-376c-3p在乳腺癌中的表达水平、生物学功能及分子调控机制。方法:通过实时荧光定量PCR检测乳腺上皮MCF-10A细胞及乳腺癌细胞中miR-376c-3p表达水平;然后,用miR-376c-3p mimic转染乳腺癌MCF-7与MDA-MB-231细胞,用平板克隆实验、划痕实验以及Transwell实验分别检测其增殖与迁移能力。利用Starbase数据库预测miR-376c-3p的下游靶基因,并通过蛋白质印迹实验进行验证。结果:与人乳腺上皮MCF-10A细胞相比,乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞中miR-376c-3p表达水平显著降低(P<0.01);平板克隆实验显示,过表达miR-376c-3p可以显著抑制乳腺癌细胞增殖(P均<0.05);Transwell实验和划痕实验表明,miR-376c-3p表达上调可抑制乳腺癌细胞迁移能力;通过生物信息学预测分析,结果显示miR-376c-3p可以与谷氨酸受体相互作用蛋白1(glutamate receptor interacting protein 1,GRIP1)结合,且蛋白质印迹实验证实过表达miR-376c-3p可以抑制乳腺癌细胞GRIP1表达,同时波形蛋白表达水平明显下调,E-钙黏蛋白表达明显上调。结论:在乳腺癌细胞中,miR-376c-3p表达下调;在体外,过表达miR-376c-3p可显著抑制乳腺癌细胞的增殖和迁移能力,可能通过靶向GRIP1调节乳腺癌细胞上皮间质转化进程。

絮凝过滤回收谷氨酸发酵废醪菌渣蛋白的试验研究

采用絮凝与真空过滤相结合的技术，回收谷氨酸发酵废醪菌渣蛋白。通过二次正交旋转组合试验设计，分析了混凝剂量、絮凝剂量、废醪ｐＨ值３ 个因素对相对过滤比阻、悬浮物去除率和滤饼湿基含水率的影响规律，提出了最优絮凝过滤回收菌渣蛋白工艺参数。

牛磺酸对糖尿病大鼠视网膜谷氨酸转运蛋白mRNA表达的影响

目的探讨牛磺酸对糖尿病大鼠视网膜超微结构及谷氨酸转运蛋白(GLAST)mRNA表达的影响。方法糖尿病大鼠接受牛磺酸处理3个月后,用RT-PCR技术检测对视网膜GLAST mRNA表达的影响,透射电镜观察视网膜超微结构的变化。结果糖尿病大鼠成模1个月始,视网膜中GLAST mRNA表达减弱,且随病程延长表达下降显著视网膜膜盘排列紊乱,线粒体肿胀;牛磺酸干预能上调糖尿病视网膜GLAST mRNA的表达,并使视网膜膜盘排列明显变整齐,线粒体肿胀减轻。结论牛磺酸通过上调GLAST mRNA的表达改善糖尿病大鼠视网膜GLAST功能,降低谷氨酸兴奋毒性,从而保护神经视网膜。

抑郁小鼠大脑GABA及谷氨酸囊泡转运蛋白表达变化

目的研究抑郁症发病中GABA及谷氨酸囊泡转运蛋白表达的变化。方法小鼠随机分为对照组和造模组,使用社会失败模型对对照组小鼠造模,之后将其分为对抑郁症敏感组及对抑郁症不敏感组。将3组小鼠分别提取突触蛋白,并使用Western blot检测VGAT及VGLUT1表达丰度。结果对抑郁症敏感组小鼠与对照组小鼠相比,在接触区域的停留时间显著降低,且在角落区域的停留时间显著增加,差异有统计学意义(P<0.05);在前额叶皮层、海马中和对照组与对抑郁症不敏感组比较,对抑郁症敏感组VGLUT1及VGAT的表达水平显著增加,差异有统计学意义(P<0.05)。对抑郁症不敏感组与对照组相比其VGAT及VGLUT1水平的表达差异均无统计学意义(P>0.05)。在纹状体,虽然对抑郁症敏感组的小鼠VGAT及VGLUT1的表达水平均有增加(P<0.05),但是对抑郁症不敏感的小鼠这些蛋白表达也显著增加。结论在抑郁症发病中前额叶皮层及海马兴奋性与抑制性囊泡转运异常,这可能与抑郁症神经递质紊乱有关。

慢性肾脏病患者血浆非活性形式非羟化基质γ羧基谷氨酸蛋白的检测及意义

目的探讨慢性肾脏病（CKD）患者血浆非活性形式非羟化基质γ羧基谷氨酸蛋白（dp-ucMGP）的检测及意义。方法检测120例CKD分级为2。5D级患者血浆dp-ucMGP水平，并接受多层螺旋CT扫描量化主动脉钙化情况，对患者的病死率进行前瞻性研究。结果随着CKD分级进展，患者血浆dp-ucMGP水平逐步增加，2-3级、4-5级和5D级CKD患者血浆dp-ucMGP水平比较差异有统计学意义（P〈0．05）。CKD分级、血红蛋白、CT计分、C反应蛋白、年龄和香豆素应用与血浆dp-ucMGP水平具有独立相关性。此外，血浆dp-ucMGP水平和年龄与CT计分呈正相关。随访（712±411）d，死亡38例（其中23例为心血管事件）。初步分析显示，血浆dp-ucMGP≥915pmol／L与总病死率具有相关眭；但是经年龄和CT计分校正后其相关性消失。结论随着CKD分级进展，患者血浆dp-ucMGP水平逐步增加，且与严重的主动脉钙化相关。血浆dp-ucMGP可以作为CKD患者血管钙化的客观指标。

八肋游仆虫一种富含谷氨酸的蛋白GARP的表达与纯化

为研究游仆虫中含有三核苷酸重复序列的GARP基因编码的GARP蛋白在细胞中的功能,利用定点突变技术,将GARP基因中的TGA突变为通用半胱氨酸密码子TGT。突变后的GARP基因构建于原核表达载体pRSETc中,得到重组质粒pRSETc-GARP,将pRSETc-GARP质粒转化至大肠杆菌BL21（DE3）中,经IPTG诱导,带有纯化标签的重组蛋白His6-GARP获得可溶表达,表达产物与抗His抗体在约26 kDa处有很强的交叉反应。His6-GARP蛋白在不同pH条件下通过两次阴离子交换层析和一次凝胶层析三步纯化达到电泳纯。