Rho激酶抑制剂盐酸法舒地尔对脑缺血再灌注损伤大鼠海马谷氨酸6受体表达及神经细胞凋亡的影响

目的探讨Rho激酶抑制剂盐酸法舒地尔对大鼠脑缺血再灌注损伤的神经保护作用。方法将清洁级sD大鼠随机分成假手术组、缺血再灌注组、生理盐水组、盐酸法舒地尔组。盐酸法舒地尔组于缺血前30rain腹腔注射盐酸法舒地尔（15mg／kg）进行干预，生理盐水组腹腔注射等量的生理盐水。采用免疫共沉淀和免疫印迹的方法检测盐酸法舒地尔对缺血再灌注6hGluR6的磷酸化水平及蛋白表达的影响；采用TUNEL染色方法检测盐酸法舒地尔对缺血再灌注3d大鼠海马CAl区神经元凋亡的影响。结果1．与假手术组相比，缺血再灌注组6hGluR6丝氨酸的磷酸化水平增高（P〈0．05）；与缺血再灌注组及生理盐水组相比，盐酸法舒地尔组可明显抑制GluR6丝氨酸的磷酸化高峰（P〈0．05）。2．与假手术组大鼠海马CAl区每1mm长度范围内TUNEL阳性细胞数（8．60±2．19）相比，缺血再灌注组3d时TUNEL阳性细胞数（40．20±2．77）增多（P〈0．05）。与缺血再灌注组及生理盐水组（41．80±3．03）相比，盐酸法舒地尔组（19．80±2．86）降低（P〈0．05）。结论盐酸法舒地尔能抑制脑缺血／再灌注诱导的GluR6磷酸化水平，减少海马CAl区神经元的凋亡，对脑缺血再灌注损伤有神经保护作用。

精神分裂症及攻击行为与离子型谷氨酸受体-6基因多态性关联研究

目的探讨中国汉族人群离子型谷氨酸受体-6(GluR6)基因多态性与精神分裂症及攻击行为是否关联。方法收集40个精神分裂症核心家系(包括20个患者有攻击行为和20个患者无攻击行为),采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术对GluR6基因单核苷酸多态性rs6922753T/C和rs2227283G/A分型,进行传递不平衡检验(TDT)。结果rs6922753多态性(2=4.67,υ=1,P<0.05)、rs2227283多态性(2=11.11,υ=1,P<0.01)及单体型TG(2=11.27,υ=1,P<0.01)、CA(2=6.33,υ=1,P<0.05)与精神分裂症相关联;rs2227283多态性与攻击行为显著相关联(2=8.89,υ=1,P<0.01)。结论在中国汉族人群中GluR6基因或邻近基因可能是精神分裂症的易患基因之一,并可能影响患者攻击行为的发生。

谷氨酸受体-6在海人藻酸致痫大鼠发病机制中的作用

目的研究谷氨酸受体-6(GluR6)在癫痫发病中的分子机制。方法采用海人藻酸(KA)腹腔注射SD大鼠,用免疫沉淀、免疫印迹的方法检测在KA注射后不同时间点海马CA3区GluR6.PSD95.MLK3信号模块的组装。同时使用免疫组化和免疫印迹的方法观察小肽Tat-GluR6-9c对MLK3磷酸化水平的影响。结果KA诱导了大鼠海马CA3区GluR6.PSD95.MLK3信号模块的组装,在KA刺激6 h和12 h达到结合高峰,1 d后开始降低;而Tat-GluR6-9c抑制了KA注射6 h MLK3的激活(P<0.05)。结论KA受体GluR6通过GluR6.PSD95.MLK3信号模块,激活了MLK3,参与了KA诱导的脑损伤。

谷氨酸受体6基因多态与孤独症的关联分析

目的在中国上海地区汉族孤独症家系中探讨谷氨酸受体6(GluR6或GRIK2)基因多态与孤独症是否关联。方法采用PCR—RFLP法对入组的38个孤独症核心家系成员的GRIK2基因的两个单核苷酸多态性(rs6922753和rs2227283)分型,并进行传递不平衡检验。结果 rs6922753多态的 C和T等位基因未发现显著性的偏移传递方式,rs2227283多态在母系传递中出现显著性的偏移,A等位基因较G等位基因传递明显增加。结论 GRIK2基因与孤独症存在传递的连锁不平衡,可能为孤独症的易感基因。

新疆汉族乙醇依赖患者家庭暴力行为与谷氨酸受体6基因多态性关联分析

目的探讨谷氨酸受体-6(GluR6)基因rs6922753、rs2227283位点多态性与新疆汉族乙醇依赖患者家庭暴力行为之间的关系。方法 184例乙醇依赖患者按照有无家庭施暴分为施暴组104例和无施暴组80例,采用聚合酶链反应产物直接测序法检测2组患者GluR6基因rs6922753、rs2227283位点的多态性分布。应用SPSS 17.0软件分析基因多态性与暴力行为的相关性。结果在施暴组与无施暴组之间,rs6922753位点基因型频率分布差异有统计学意义(P=0.018),等位基因频率分布差异有统计学意义(P=0.007)。在施暴组与无施暴组之间,rs2227283位点基因型频率分布差异有统计学意义(P=0.023),等位基因频率分布差异有统计学意义(P=0.019)。与rs6922753 CC比较,rs6922753 TT使家庭暴力的发生风险升高了2.859倍。与rs6922753 CC+CT相比较,rs6922753 TT使家庭暴力的发生风险升高了2.116倍。与rs2227283 GG比较,rs2227283 AG使家庭暴力的发生风险升高了1.194倍。结论新疆汉族乙醇依赖患者家庭暴力行为可能与GluR6基因多态性具有关联性。

首发精神分裂症与离子型谷氨酸受体6基因多态性的关联研究

目的探讨中国北方汉族人群离子型谷氨酸受体-6(GluR6)基因多态性与首发精神分裂症是否关联。方法随机抽取95例首发精神分裂症患者作研究,以84例正常人作对照。分别采用full Cold-PCR联合限制性片段长度多态性(RFLP)技术和PCR-RFLP技术检测研究对象GluR6基因外显子15rs2227283(G/A碱基改变)及内含子13rs995640(A/G碱基改变)的单核苷酸多态性(SNP)。结果 GluR6基因rs995640多态性(χ2=0.562,υ=1,P=0.565)在病例组和对照组的基因型和等位基因分布频率无显著性差异;而rs2227283多态性(χ2=14.816,υ=1,P<0.001)则与精神分裂症显著相关。经多因素分析控制年龄、性别因素后各组基因型分布无显著性差异。结论在中国北方汉族人群中,GluR6基因内含子13rs995640多态性可能不是首发精神分裂症的一个危险因素而外显子15rs2227283多态性则可能与首发精神分裂症的易患性有关。

谷氨酸受体-6基因多态性与阿尔茨海默病患者攻击症状相关性研究

目的:探讨谷氨酸受体-6(GluR6或GRIK2)基因多态性与阿尔茨海默病(AD)患者攻击症状的相关性。方法:采用简易智力状态检查量表(Mini-mental State Examination,MMSE)评估88例AD患者认知功能,柯恩-曼斯菲尔德激越情绪行为量表(Cohen Mansfield emotional behavior scale,CMAI)评估患者攻击症状严重程度;采用DNA测序技术检测其GRIK2基因rs9390757、rs9399721、rs2227283等11个位点基因多态性;分析11个位点的基因多态性与患者攻击症状严重程度的相关性。结果:MMSE评分与病程存在负相关(r=-0.421,P<0.001),CMAI评分与年龄、病程、MMSE总分无相关。携带rs9390757 C等位基因(β=0.322,P<0.01)、rs9399721 C等位基因(β=0.276,P<0.01)的患者CMAI分值更高,携带rs2227283 A等位基因(β=-0.274,P<0.05)的患者CMAI分值更低。结论:GRIK2基因多态性是AD患者攻击行为易感性的潜在遗传机制之一。

鞘内注射谷氨酸受体6反义寡核苷酸对骨癌痛小鼠痛行为的影响

目的：探讨鞘内注射谷氨酸受体6（ GluR6）反义寡核苷酸对骨癌痛小鼠痛行为的影响。方法将32只雄性小鼠随机分为NS组、同义组、错义组、反义组，各8只。对小鼠左侧股骨远端骨髓腔接种NCTC2472纤维肉瘤细胞，建立骨癌痛模型。造模后1～6 d，四组分别鞘内给予生理盐水5μL及同义寡核苷酸、错义寡核苷酸、反义寡核苷酸各5μg，1次／d。于造模前及造模后第5、7、10、14天测量小鼠左侧足底机械性缩足反射阈值（ PWMT）和热缩足反射潜伏期（ PWTL）。结果造模第5、7天，反义组的PWMT、PWTL维持在基础值水平；造模后第10天，反义组左侧足底PWMT开始下降，第14天PWTL开始缩短，与术前比较差异有统计学意义（P均＜0．05），但与同义组、错义组、NS组相比较，反义组PWMT、PWTL明显增加（P均＜0．05）。结论鞘内注射GluR6反义寡核苷酸能改善骨癌痛小鼠的痛行为。

牛磺酸与大鼠视网膜代谢型谷氨酸受体基因表达

目的探讨膳食添加牛磺酸大鼠在光照和暗环境中视网膜代谢型谷氨酸受体6亚型(mGluR6)的mRNA表达的相互关系。方法36只断乳大鼠随机分为3组:对照组、牛磺酸低剂量组及牛磺酸高剂量组(分别在饲料中添加0.3%和0.6%的牛磺酸),营养干预4周后,再随机分为光照组和暗环境组,继续喂养3d。用RTPCR技术检测光照和暗环境下大鼠视网膜mGluR6的mRNA表达。结果暗环境下mGluR6的mRNA表达显著高于光照环境。在光照及暗环境中牛磺酸高、低剂量组mGluR6的mRNA表达均较对照组增加,以光照状态下的增加更为明显;光照时,高剂量组的mRNA表达明显高于低剂量组;暗环境下,高、低剂量组之间差异无统计学意义。结论在光照及暗环境中,牛磺酸可明显增加大鼠mGluR6的mRNA表达,有助于其参与调节视网膜的视杆信号传递。

脑缺血/再灌注通过神经性一氧化氮合酶诱导KA受体亚基GluR6巯基亚硝基化的研究

目的探讨脑缺血/再灌注是否通过神经性一氧化氮合酶(n NOS)诱导KA受体亚基Glu R6巯基亚硝基化。方法将28只SD大鼠随机分成4组,每组7只:假手术组、脑缺血/再灌注6 h组、脑缺血/再灌注6 h合并给药组、脑缺血/再灌注6 h溶剂对照组。采用四动脉结扎法构建大鼠全脑缺血模型,给予SD大鼠腹腔注射n NOS的抑制剂7-硝基吲唑。主要应用"生物素转化法"、SDS-PAGE、免疫印迹等方法对Glu R6的蛋白表达及其巯基亚硝基化水平进行研究。结果脑缺血/再灌注组与假手术组相比Glu R6的巯基亚硝基化水平显著升高,差异有统计学意义(P<0.05);脑缺血/再灌注联合n NOS的抑制剂7-NI组与脑缺血/再灌注组相比,Glu R6的巯基亚硝基化水平显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);各组Glu R6的蛋白表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论在脑缺血/再灌注早期n NOS诱导Glu R6的巯基亚硝基化,为缺血性脑损伤疾病的治疗提供了新的理论依据。

GluR-6和GABRG2基因多态性与精神分裂症患者精神症状的关系

目的探讨谷氨酸受体6基因(GluR6)和γ-氨基丁酸γ2受体基因(GABRG2)基因多态性与精神分裂症患者精神症状的关系。方法以聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法对600名研究对象的GluR6基因rs2227283(G/A碱基改变)和GABRG2基因rs211014(T/G碱基改变)单核苷酸多态性(SNP)进行检测。同时采用阳性与阴性症状量表(PANSS)、修订版外显攻击量表(MOAS)以及自制的一般情况调查表对研究组和对照组1的研究对象进行测查。使用SPSS13.0对数据进行统计分析。结果(1)GluR6基因的rs2227283位点等位基因分布与精神分裂症的阳性症状被害妄想相关(F=4.641,P=0.032);(2)rs2227283等位基因A与兴奋、情绪退缩、关注身体健康以及不合作等阴性症状相关联(P<0.05),rs211014等位基因G与幻觉行为、兴奋、自罪感、动作迟缓以及不寻常思维内容等阳性症状相关(P<0.05)。结论GluR6基因rs2227283位点多态性可能与攻击行为及阴性症状有关联,GABRG2基因rs211014位点多态性可能与攻击行为及阳性症状有关联。

首发精神分裂症与reelin和GluR6基因多态性的关系

目的探讨中国北方汉族人群离子型谷氨酸受体-6(GluR6)和颤蛋白(reelin)基因多态性与首发精神分裂症是否关联。方法随机选取234例首发精神分裂症患者,以237例健康人作对照。用full Cold-PCR联合限制性片段长度多态性(RFLP)技术,检测GluR6基因外显子15rs2227283(G/A碱基改变)和reelin基因外显子6rs84446(A/G碱基改变)的单核苷酸多态性(SNP)。结果 reelin基因rs84446多态性,在女性病例组和对照组间基因型分布频率存在显著性差异(χ2=6.236,υ=2,P=0.044),而等位基因分布频率无显著性差异(χ2=0.054,υ=1,P=0.932);在男性病例组和对照组间基因型和等位基因分布频率均无显著性差异;GluR6基因rs2227283多态性(χ2=6.009,υ=1,P=0.015)与精神分裂症显著相关联。结论在中国北方汉族人群中,reelin基因rs84446多态性可能是女性首发精神分裂症一个危险因素。GluR6基因rs2227283多态性可能与首发精神分裂症有关联。

谷氨酸受体6研究进展

背景海人藻酸（kainatereceptor，KA）受体属于离子型谷氨酸受体，它有5个主要亚族：谷氨酸受体（glutamatereceptor，G1uR）5、GluR6、GIuR7、KA受体1、KA受体2。以往对于GluR6的分子特性及生理功能所知甚少，近年来，随着分子生物学及药理学技术的发展大大加快了对GluR6亚基的研究进程。GluR6亚基可与KA受体家族中其他亚基相结合而发挥作用，广泛的分布于中枢和外周神经系统内，可调节神经系统中的各种生理病理功能。目的探讨谷氨酸受体6在中枢神经系统中的多种作用。内容综述了GluR6亚基的结构、分布、激活机制及其在中枢神经系统中的生理和病理生理功能。趋向GluR6亚基有望成为临床治疗的新靶点。

mGluR6对大鼠胚胎神经干细胞生物学功能的影响

目的:探讨代谢型谷氨酸受体6(mGluR6)对大鼠胚胎神经干细胞生物学功能的影响。方法:利用MTT比色法分析mGluR6过表达载体、mGluR6siRNA在不同时间对大鼠胚胎神经干细胞活力的影响,神经球测量方法分析mGluR6对大鼠神经球增殖的影响,流式细胞术分析mGluR6对大鼠NSCs细胞周期及凋亡的影响。结果:MTT结果表明,在处理24h,48h和72h后,过表达mGluR6显著增强大鼠NSCs的细胞活力,促进NSCs增殖,神经球直径显著增大;mGluR6siRNA抑制大鼠NSCs的增殖。过表达mGluR6后,与对照组相比G1/G0期和细胞比率显著下降,S期细胞比率显著上升,促进了细胞G1到S期转换;沉默mGluR6后,G1/G0期和细胞比率显著增加,S期细胞比率显著下降,抑制了大鼠NSCs细胞G1到S期转换。应用流式细胞术显示,过表达mGluR6 48h后,大鼠NSCs细胞早凋和晚凋均显著下降;沉默mGluR6显著诱导大鼠NSCs的早凋和晚凋。结论:mGluR6可促进大鼠胚胎神经干细胞的增殖,抑制NSCs凋亡。

预缺血抑制脑缺血诱导GluR6巯基亚硝基化机制的研究

目的 观察预缺血对SD雄性大鼠全脑缺血/再灌注后海马CA1区锥体细胞的保护作用,并探讨其可能的机制.方法 采用四动脉结扎法构建大鼠预缺血模型和全脑缺血模型,缺血6 min后分别灌注6 h或5天.大鼠随机分为假手术组、缺血/再灌注组、预缺血/再灌注组、预缺血/再灌注溶剂对照组和预缺血/再灌注给药组.预缺血/再灌注给药组腹腔注射5 mg/kg MK801.主要运用SDS-PAGE、免疫印迹和焦油紫染色法等技术检测相关信号蛋白的表达、活化水平及神经元细胞的死亡情况.结果 大鼠缺血/再灌注6 h,预缺血/再灌注组和预缺血/再灌注溶剂对照组的GluR6的巯基亚硝基化水平较缺血/再灌注组明显降低,而预缺血/再灌注给药组较缺血/再灌注组没有明显变化;各组间GluR6的蛋白表达量并没有明显变化.大鼠缺血/再灌注5天后,预缺血/再灌注组和预缺血/再灌注溶剂对照组海马CA1区细胞的存活数量较缺血/再灌注组明显增加,而预缺血/再灌注给药组较缺血/再灌注组没有明显变化.结论 预缺血通过NMDA受体下调大鼠全脑缺血/再灌注诱导的KA受体亚基GluR6的巯基亚硝基化,从而发挥拮抗缺血性脑损伤的作用.

NMDA受体介导脑缺血/再灌注诱导GluR6巯基亚硝基化的研究

目的:研究脑缺血再灌注以及联合给予脑缺血和NMDA(N-甲基-D-天冬氨酸)受体抑制剂MK801对大鼠海马CA1区Glu R6巯基亚硝基化以及海马CA1区锥体细胞凋亡的影响。方法:采用四动脉结扎法构建大鼠全脑缺血再灌注模型,给予SD大鼠腹腔注射NMDA受体特异性抑制剂MK801(3 mg/kg)。主要运用'生物素转化法'(Biotin-Switch method)、SDS-PAGE、免疫印迹、焦油紫染色等方法对Glu R6的巯基亚硝基化(S-亚硝基化)、蛋白表达水平以及海马CA1区锥体细胞的凋亡水平进行研究。结果:脑缺血/再灌注显著促进Glu R6的巯基亚硝基化以及海马CA1区锥体细胞的凋亡,给予NMDA受体特异性抑制剂MK801能够显著抑制脑缺血/复灌诱导增加的Glu R6的S-亚硝基化以及海马CA1区锥体细胞的凋亡。结论:脑缺血/再灌注早期NMDA受体介导了Glu R6的巯基亚硝基化以及海马CA1区锥体细胞的凋亡,从而为临床治疗缺血再灌注脑损伤提供了理论依据。

酒依赖共病双相障碍患者暴力攻击行为与GluR6基因多态性关联分析

目的 探讨谷氨酸受体-6基因rs6922753、rs2227283多态性与酒依赖共病双相障碍患者暴力攻击行为之间的关系。 方法 入组对象按照民族及有无暴力攻击行为分组。采用聚合酶链式反应（PCR）产物直接测序的方法检测424例酒依赖共病双相障碍患者GluR6基因rs6922753、rs2227283多态性分布。应用SPSS17.0软件包分析基因多态性与酒依赖合并双相障碍导致的暴力攻击行为的相关性。 结果 汉族与维吾尔族酒依赖共病双相障碍患者有暴力攻击行为组与无暴力攻击行为组rs6922753位点等位基因频率差异无统计学意义（χ2=1.261, P=0.262; χ2=0.315,P=0.574）。两民族两组rs6922753位点基因型频率差异无统计学意义（χ2=1.383,P=0.501; χ2 =0.346,P=0.841）。汉族与维吾尔族酒依赖共病双相障碍患者有暴力攻击行为组与无暴力攻击行为组rs2227283位点等位基因频率差异无统计学意义（χ2=0.114,P=0.735; χ2=0.128,P=0.721）。两民族两组rs2227283位点基因型频率差异无统计学意义（χ2=0.169,P=0.919; χ2=0.123,P=0.940）。 结论 酒依赖共病双相障碍患者暴力攻击行为与谷氨酸受体6 rs6922753、 rs2227283两位点基因多态性可能不具有关联性。

全脑缺血再灌注诱导大鼠海马CA1区GluR6巯基亚硝基化的机制

目的用大鼠全脑缺血模型探讨全脑缺血再灌注诱导大鼠海马CA1区GluR6巯基亚硝基化的机制。方法将78只雄性SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、全脑缺血再灌注组(I/R组)、给药组(7-NI组、GSNO组、SNP组、NS102组)及溶剂对照组[生理盐水(Saline)组、DMSO组],每组6只。采用四动脉结扎去结扎法构建大鼠全脑缺血再灌注模型。运用生物素转化法检测蛋白质的巯基亚硝基化,聚丙烯酰胺凝胶电泳、免疫印迹方法对GluR6巯基亚硝基化水平进行分析研究。结果全脑缺血再灌注后,I/R组GluR6巯基亚硝基化水平高于Sham组,差异有统计学意义(P<0.05),7-NI组GluR6巯基亚硝基化水平相比I/R组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05),溶剂DMSO组与I/R组相比差异无统计学意义(P>0.05);GSNO组和SNP组GluR6巯基亚硝基化水平比I/R组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05),溶剂Saline组与I/R组相比差异无统计学意义(P>0.05);NS102预处理组GluR6巯基亚硝基化水平比I/R组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05),溶剂DMSO组与I/R组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论7-NI、GSNO、SNP和NS102都能抑制脑缺血再灌注诱导的GluR6巯基亚硝基化。nNOS介导产生的内源性NO介导全脑缺血再灌注诱导的大鼠海马CA1区GluR6巯基亚硝基化,并受外源性NO影响;全脑缺血再灌注通过激活KA受体诱导大鼠海马CA1区GluR6发生巯基亚硝基化。