谷胱甘肽亲和层析介质的制备条件及其层析特性研究

以琼脂糖凝胶4FF（Sepharose 4 Fast Flow）为基质,1,4-丁二醇二缩水甘油醚（BDGE）为活化剂,通过活化、偶联谷胱甘肽（GSH）,得到GSH亲和层析介质.实验结果表明：活化及偶联的优化条件为10,m L基质加入0.42,g Na OH、15,m L二甲基亚砜（DMSO）、15,m L BDGE,反应温度为40,℃,反应时间为6,h;偶联溶液p H 6.5,反应温度为37,℃,反应时间为24,h.在此条件下,环氧基修饰密度可达60~65,μmol/m L;所制备的介质载量为（14.19±0.98）mg/m L.以此介质对谷胱甘肽S–转移酶（GST）、融合蛋白GST-Bcl-2、GST-Ald、GST-PTPN12进行纯化,结果表明,该介质纯化效果较好、载量高、稳定性能较好,可重复使用.

G蛋白Rab3a cDNA的克隆与表达

利用PCR法 ,从人胎盘总cDNA中扩增得到Rab3acDNA的全编码区 .序列分析表明 ,扩增得到的Rab3acDNA有 5个核苷酸发生了变异 ,但翻译的氨基酸与发表的完全一致 .将扩增得到的Rab3acDNA克隆于原核融合表达载体pGEX 4T 1中 ,在E .coliBL2 1中经IPTG诱导表达 .为了进一步鉴定表达产物 ,对纯化后的Rab3a蛋白进行了SDS PAGE、N端氨基酸测序、质谱分子量测定及氨基酸组成分析鉴定 .结果显示 ,表达蛋白的分子量约 2 5kD ,N端氨基酸序列为MASATDSR ,氨基酸组成分析表明 。