谷胱甘肽S-转移酶Zeta类基因在酿酒酵母中的表达

谷胱甘肽S-转移酶Zeta类（GSTZ）是一种重要的多功能酶，与细胞生化代谢、环境净化等密切相关。将拟南芥、甘蓝型油菜品系陕2B与垦C1的GSTZ基因克隆到大肠杆菌-酿酒酵母穿梭表达载体pYES2的多克隆位点，筛选到重组子后，提取重组质粒并将其转入酿酒酵母营养缺陷型菌株INVSc1细胞中，经SC-U培养基选择得到重组酵母Y2At、Y2BnB和Y2BnC。重组酵母在含棉子糖和半乳糖的诱导培养基中，表达出了具有二氯乙酸脱氯活力的谷胱甘肽S-转移酶Zeta类，且主要以可溶状态存在于酵母细胞中。不同碳源比较发现，使用半乳糖为唯一碳源时，与棉子糖和半乳糖共同使用相比，酵母生长虽受到轻微影响，但表达的GSTZ比活力几乎不受任何影响。0～96h诱导时间的优化实验表明，36h诱导下呈现最高比活力。同时也对不同GSTZ的Km值进行了比较。

拟南芥谷胱甘肽S-转移酶Zeta类进化酶的获得及其特性分析

拟南芥谷胱甘肽S-转移酶Zeta类(AtGSTZ)是一种与细胞代谢和环境净化密切相关的多功能酶.应用易错PCR和多轮DNA洗牌技术构建了AtGSTZ随机突变文库,再利用pH指示剂颜色改变法对突变文库进行筛选,获得了9个二氯乙酸脱氯活性提高的突变子.其中,NN23含25个氨基酸突变,比活力提高120%,NN20含24个氨基酸突变,比活力提高102%,EC1含2个氨基酸突变,比活力提高47%,其他6个为单点突变,比活力分别提高9%～60%.酶学分析显示,所有进化酶对底物二氯乙酸的催化效率和对谷胱甘肽的亲和力以及个别进化酶的复性能力都得到不同程度的提高,但热稳定性均没有明显改善.同时,对一系列与AtGSTZ空间折叠及催化活性相关位点进行了讨论.

四逆汤对缺血心肌谷胱甘肽S转移酶基因表达的影响

目的 :探讨四逆汤对缺血心肌谷胱甘肽S转移酶 (GST)基因表达的影响。方法 :昆明种小鼠 ,随机分为对照组、缺血组、缺血加四逆汤组。提取各组心肌组织总RNA通过RT -PCR ,以 β -actin为内参照对GST基因的表达水平进行检测。结果 :缺血加四逆汤组GST基因表达显著强于对照组及缺血组。结论 :四逆汤能诱导GST基因的表达 ,GST能催化谷胱甘肽与亲电子物质发生结合反应。

三七总皂苷对实验性糖尿病性心肌病大鼠心脏谷胱甘肽转移酶基因表达的影响

目的探讨三七总皂苷对实验性糖尿病性心肌病大鼠心脏谷胱甘肽转移酶(GST)基因表达的影响。方法将50只造模成功的雄性SD大鼠随机分为治疗组30只和空白对照组10只,达美康对照组10只。治疗4周后提取各组心肌组织总RNA通过RT-PCR,以β-actin为内参照对GST基因的表达水平进行检测。结果不同剂量三七总皂苷组GST基因表达上调,与对照组相比有显著性差异(P<0.05)。结论三七总皂苷能够诱导GST基因表达,催化谷胱甘肽与亲电子物质发生结合反应,改善心肌细胞能量代谢,减轻心肌损害。

食管癌患者放疗前后血中pi类谷胱甘肽S－转移酶水平的测定

用放射免疫法（ＲＩＡ）检测了４０例正常人及６６例食管癌患者放疗前后血浆Ｐｉ类谷胱甘肽Ｓ－转移酶（ＧＳＴ－π）水平。结果显示：食管癌患者放疗前血浆ＧＳＴ－π水平显著高于正常对照（Ｐ＜０．００１），且水平和食管病变长度呈正相关。放疗后血浆ＧＳＴ－π水平显著降低（Ｐ＜０．０１），其水平在完全缓解（ＣＲ）病例与正常对照无明显差异（Ｐ＞０．０５），在部分缓解（ＰＲ）病例仍高于正常对照（Ｐ＜０．００１）。说明食管癌患者血浆ＧＳＴ－π水平与其肿瘤的消长密切相关，有可能成为疗效和判断预后的一个监测指标。

卵巢癌中谷胱甘肽S-转移酶-π的表达与化疗反应的关系

目的 :了解卵巢癌中谷胱甘肽S 转移酶 π(GST π)的表达与化疗的关系。方法 :运用免疫组织化学技术对 74例术前未治疗的上皮性卵巢癌进行GST π检测。结果 :74例卵巢癌中GST π阳性 5 5例 ,阳性率为 74.3%。卵巢癌中GST π的表达与病理类型无相关性 (P >0 .0 5 )。对首次术后有残余癌的 2 7例患者行化疗反应评价 ,GST π阳性者与阴性者的化疗反应率为 13.3%及 83.3 % ,两者间差异有显著性 (P <0 .0 1)。GST π阳性对耐药的预测值为 86 .7% ,GST π阴性对化疗反应的预测值为 83.3%。结论 :未治疗卵巢癌中存在着由GST π介导的内在性耐药机制 ,GST π的表达能较好地预测化疗反应。

卵巢癌组织谷胱甘肽S转移酶-π表达与耐药关系的研究

目的 :研究卵巢癌GST -π表达与化疗耐药及预后的关系。方法 :采用免疫组织化学方法检测 6 8例卵巢上皮癌GST -π的表达 ,分析GST -π表达与化疗耐药及预后之间的关系。结果 :卵巢上皮癌GST -π的总阳性率为 6 9.1% ,GST -π表达与一般临床病理参数无相关性。GST -π阳性和阴性病例对化疗的反应率分别为 2 9.8%和 90 .5 %(P <0 .0 0 5 )。GST -π阳性患者的预后明显比阴性者差 (P =0 .0 0 4 )。结论 :卵巢癌GST -π表达在耐药形成中起重要作用 ,GST

乳腺癌患者血清及组织中谷胱甘肽-S-转移酶活性检测的临床价值

目的 探讨谷胱甘肽 - S-转移酶 (GST)活性变化与乳腺癌发生、发展的关系及其临床应用价值。 方法 检测 6 0例乳腺癌 (其中伴有淋巴结转移 30例 )、30例乳腺不典型增生及 30例乳腺单纯性增生患者的血清及癌组织、癌旁组织、不典型增生组织、单纯性增生组织中 GST活性。 结果 (1)乳腺癌组的血清及组织中 GST活性显著高于不典型增生组 (P<0 .0 1)及单纯性增生组 (P<0 .0 1)。 (2 )乳腺癌组织 GST活性显著高于癌旁组织 (P<0 .0 5 )、癌旁组织中 GST活性显著高于正常对照组织 (P<0 .0 5 )。 (3)乳腺癌组织 GST活性与肿瘤大小、按预后好坏的组织学分型等病理指标无关 ,与组织学分级、是否伴有淋巴结转移相关 (P <0 .0 5 )。 (4)乳腺癌术后血清中GST活性明显低于术前 (P<0 .0 1)。 结论 GST活性变化与乳腺癌发生发展密切相关 。

胃癌患者血清及组织中组织蛋白酶-D、谷胱甘肽-S-转移酶活性测定的临床意义

目的 探讨组织蛋白酶 - D(Cath- D)、谷胱甘肽 - S-转移酶 (GST)活性变化与胃癌发生、发展及预后的关系。 方法 检测胃癌、单纯性胃炎、胃炎伴癌前病变患者血清、癌组织、癌旁组织、胃窦粘膜中 Cath- D、GST的活性和手术前后血清 GST活性。 结果 (1)胃癌组的 Cath- D、GST的活性显著高于单纯性胃炎组及胃炎伴癌前病变组 (P<0 .0 1) ,胃炎伴癌前病变组 GST的活性显著高于单纯性胃炎组 (P<0 .0 5 ) ,Cath- D活性与单纯性胃炎组比较差异无显著性 (P>0 .0 5 )。 (2 )胃癌组织 Cath- D、GST的活性显著高于癌旁组织 (P<0 .0 5 )、癌旁组织中Cath- D、GST的活性显著高于对照组织 (P<0 .0 5 )。 (3)伴有淋巴结转移的胃癌组织中 Cath- D活性显著高于不伴有淋巴结转移的 (P<0 .0 5 ) ,GST的活性在伴有与不伴有淋巴结转移者中差异无显著性 (P>0 .0 5 )。 (4) Cath- D的活性与按预后好坏的组织学分型 (P<0 .0 1)、按 TNM的分期 (P<0 .0 1)等病理指标有密切相关 ,而 GST的活性与病理指标无显著相关 (P>0 .0 5 )。 (5 )胃癌手术后 10天血清中 GST的活性明显低于手术前 (P<0 .0 1)。 结论 Cath- D、GST活性联合检测可用于胃癌高危人群筛选。

急性胆管炎病人血清α-谷胱甘肽-S-转移酶的检测及意义

[目的 ]探讨血清α 谷胱甘肽 S 转移酶 (α GST)在急性胆管炎病人肝功能异常检测中的临床应用价值 .[方法 ]实验组为 32例急性胆管炎病人 ,对照组为 2 0例健康志愿者 .α GST检测采用酶联免疫法 ,谷丙转氨酶、谷草转氨酶检测采用常规生物化学方法 .[结果 ]急性胆管炎病人血清α GST升高 ,发病早期α GST升高快于谷丙转氨酶、谷草转氨酶 ,经治疗后α GST下降快于谷丙转氨酶、谷草转氨酶 .[结论 ]α

谷胱甘肽S-转移酶P1基因多态性与胃癌发展的相关性研究

目的分析谷胱甘肽S-转移酶(glutathione-S-transferase GSTs)P1基因多态性与胃癌发展的相关性,探讨高风险GSTP1-Val等位基因在氧自由基致胃癌中的作用。方法以血液样本、胃癌细胞和相应正常胃黏膜细胞样本为实验材料,采用放射免疫分析法(RIA)测定血浆谷胱甘肽S-转移酶P(GSTP)的含量和活性改变;多聚酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术检测外周血DNA GSTP1的多态性。结果胃癌、肠上皮化生和不典型增生两种癌前病变组织中GSTP染色的阳性率分别为78.00%(39/50)、48.00%(24/50)和74.00%(37/50),与正常胃黏膜比较差异有统计学意义(P<0.05);GSTP在胃癌时升高[(27.5±24.5)μg/L],明显高于正常人组[(7.1±2.3)μg/L],两组比较差异有高度统计学意义(P<0.01);GSTP在癌前病变组[(16.8±12.3)μg/L]高于正常人组(P<0.01);GSTP含量与肿瘤的分化程度呈正相关(r=0.914,P<0.01);高分化及中分化管状腺癌的阳性率分别为72.73%(8/11)和100.00%(21/21),高于低分化管状腺癌(58.33%),分化程度与GSTP表达呈正相关(r=0.732,P<0.01)。Val 105的酶代替具有Lle 105的酶对多环芳烃二醇环氧化作用的效力高7倍,说明携带Val等位基因的个体患胃癌危险性明显高于非携带Val等位基因个体。结论 GSTP是机体损伤解毒的酶,它与肿瘤的发生、发展有关,是肿瘤早期诊断有价值的标志酶;GSTP1基因多态性与胃癌发展相关。携带GSTP1 Val等位基因的个体胃癌发病风险增高。

胎盘型谷胱甘肽硫转移酶在肺癌中的表达及意义

目的 :研究胎盘型谷胱甘肽硫转移酶 (GST Pi)在非小细胞性肺癌的表达及临床意义。方法 :用免疫组化SABC法、图像分析和免疫电镜胶体金技术 ,检测 2 3例非小细胞性肺癌手术切除标本GST Pi的表达状况。结果 :2 3例标本中免疫组化染色阳性 19例 ,阳性率为 82 .6% ( 19/2 3) ,其中肺鳞癌为 10 0 %( 12 /12 ) ,肺腺癌阳性率为 63.6% ( 7/11)。肺鳞癌阳性表达的平均光密度明显高于肺腺癌 (P <0 .0 5)。肿瘤细胞内的胶体金阳性颗粒主要位于核内异染色质和溶酶体。结论 :GST -Pi的高表达与非小细胞性肺癌密切相关 ,对非小细胞性肺癌特别是鳞癌的诊断有一定意义。

卵巢肿瘤组织谷胱甘肽S转移酶的表达与临床及病理因素的关系

目的 检测卵巢肿瘤组织中谷胱甘肽S转移酶 (GST л)的表达 ,探讨其与临床及病理的关系。方法 采用免疫组化SP法检测 77例卵巢恶性肿瘤 ,30例卵巢良性肿瘤中GST π的表达。结果 (1)卵巢恶性肿瘤术前接受化疗组GST π阳性表达率 5 2 .38% ,未接受化疗组 32 .14% ,卵巢良性肿瘤组 6 .6 7% ,三组比较有显著性差异 (P <0 .0 1)。 (2 )低分化肿瘤较高、中分化者GST л阳性表达率显著增高 (P <0 .0 1)。结论 卵巢恶性肿瘤组织中GST л表达与其化疗有关 ,对临床判断化疗敏感性和预后有一定参考价值。

Pi类谷胱甘肽S-转移酶与消化道肿瘤

近年来研究发现谷脱甘肽S-转移酶（GST）与癌的发生、发展及抗药性的产生有着密切的关系，其中同工酶Pi类谷脱甘肽S-转移酶（GST－π）在消化道肿瘤中有一定表达，在其相应的癌、癌前病变组织及血中含量增多，可作为消化道肿瘤的一个标志酶，有助于消化道肿瘤的早期诊断和疗效观察。

亚硝基谷胱甘肽对大鼠肝微粒体谷胱甘肽转移酶的激活及机制

目的 探索一氧化氮供体亚硝基谷胱甘肽(GSNO)能否在体外通过S 亚硝酰化机制激活大鼠肝微粒体谷胱甘肽转移酶 (mGST)。方法 微粒体粗提物与GSNO体外共孵育 ,测定mGST催化动力学改变 ,结合N 乙基马来酰亚胺 (NEM )再激活实验和二巯基苏醇 (DTT)逆转实验 ,以及酶蛋白游离巯基和酶S 亚硝酰化蛋白的改变 ,研究酶的激活机制。结果 GSNO在 0 .12 5～ 2mmol·L- 1浓度范围内呈浓度和时间 (3～ 15min)依赖性地激活mGST ,NEM对酶的再激活效应消失 ,DTT可以逆转上述激活作用 ,同时酶蛋白游离巯基浓度依赖性减少 ,而S 亚硝酰化蛋白浓度依赖性增多。结论 GSNO体外可激活大鼠肝mGST ,激活机制可能与mGST第 4 9位半胱氨酸 (Cys4 9)的巯基被亚硝酰化形成S 亚硝基硫醇结构有关。

人胎盘谷胱甘肽S-转移酶的纯化及其部分性质的研究

从人胎盘中分离得到谷胱甘肽S-转移酶纯化倍数470倍.比活力为37.897μmol/min·mg.经PAGE和SDS-PAGE证实为一条区带,亚基分子量为23000 Dalton;等电聚焦电泳结果,此酶等电点为4.6.底物GSH和CDNB的Km值分别为0.259mmol/L(r=0.97)和0.350mmol/L(r=0.99).不同浓度的巯基乙醇对GST-π活性有保护作用,1mmol/L浓度的保护作用较强.DEN,Triton X—100、苯巴比妥钠和AAF对GST-π活性起抑制作用,抑制作用随浓度增高而加强.

谷胱甘肽S-转移酶与膀胱癌关系的研究

目的 :探讨谷胱甘肽 S-转移酶 (GST)与膀胱癌的关系。方法 :检测 5 8例膀胱癌患者 (膀胱癌组 )、80例泌尿系非肿瘤患者 (泌尿系非肿瘤组 )和 40例正常对照者 (正常对照组 )血清中 GST活性及 2 4例膀胱癌患者癌组织、配对癌周正常组织和 13例正常膀胱组织中 GST活性。结果 :膀胱癌组血清中 GST活性明显高于泌尿系非肿瘤组和正常对照组 (P <0 .0 1) ,泌尿系非肿瘤组与正常对照组之间 GST活性差异无显著性意义 (P >0 .0 5 ) ,膀胱癌组癌组织中 GST活性明显高于癌周正常组织及正常膀胱组织 (P <0 .0 1) ,癌周正常组织与正常膀胱组织之间 GST活性差异无显著性意义 (P >0 .0 5 )。各级和各期膀胱癌之间血清中 GST活性及各级膀胱癌组织之间 GST活性差异均无显著性意义 (P >0 .0 5 ) ,而 ～ 期膀胱癌周组织中 GST活性较 期增高 (P <0 .0 5 )。结论 :膀胱癌患者 GST活性明显增高 ,GST活性在癌组织中随着癌分期的增高而增加 ,提示

重组日本血吸虫谷胱甘肽S-转移酶的纯化

[目的 ]原核表达并纯化重组日本血吸虫谷胱甘肽S 转移酶 .[方法 ]将表达载体pGEX 5X 1转化至大肠杆菌BL 2 1中 ,用异丙基硫代 β D 半乳糖苷诱导 ,以十二烷基硫酸钠 聚丙烯酰胺凝胶电泳进行分析 ,产物用谷胱甘肽琼脂糖树脂纯化 .[结果 ]获得了纯化的谷胱甘肽S 转移酶 .

溴苯所致小鼠肝损伤时血清谷胱甘肽S-转移酶的变化

研究谷胱甘肽S 转移酶 (GST)在化学性肝毒物质溴苯所致小鼠肝损伤中的变化规律。结果表明 ,溴苯 15 0mg kgBW腹腔注射后 2h肝组织出现多个小灶性坏死 ,同时血清GST活性明显增高 ,注射 8h后血清丙氨酰转氨酶 (ALT)也开始增高 ,上述指标皆在给药后 16h达高峰 ,2 4h血清GST首先恢复正常。血清GST与肝组织病理学改变、血清ALT活性变化间皆存在高度的正相关。血清GST灵敏度、特异度和准确度分别为 89%、75 %和 82 % ,而血清ALT为 39%、92 %和 6 4%。诊断肝损伤的受试者工作特征曲线 (ROC)也进一步表明 ,血清GST比ALT更灵敏、更特异。提示血清GST能较好用于化学性肝损伤的预防和治疗监测。

谷胱甘肽S—转移酶Pi同工酶对胃癌的诊断价值

用本实验室建立的检测谷胱甘肽S—转移酶(GST_(pi))的ELISA法检测了23例健康志愿者,42例胃良性疾病患者和68例胃癌患者的血清GSTP_(pi)含量。胃癌组的血清GST_(pi)均值为(15.24±14.00)μg/L,健康对照组的GST_(pi)均值为(2.16±1.46)μg/L,胃良性疾病组的GST(pi)均值为(2.32±1.51)μg/L,前者明显高于后二者(P<0.001)。GST_(pi)检测对胃癌的诊断敏感性为67.6％,(Ⅰ期和Ⅱ期胃癌的诊断敏感性分别为45.5％和50.0％),特异性为96.9％。提示检测GST_(pi)对早期诊断胃癌有良好的前景。