谷胱甘肽硫转移酶Pi基因多态性与Alzheimer病的关系

目的研究谷胱甘肽硫转移酶Pi(GSTPi)基因多态性与Alzheimer病(AD)的关系。方法 AD患者48例,按1:2匹配选择与AD患者同性别、同年龄、同文化程度、无血缘关系、认知功能正常、身体健康的96例老人作为正常对照,外周血提取基因组DNA,聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术检测GSTPi基因第5外显子rs1695位点和第6外显子rs1138272位点基因型。结果 rs1695位点存在A/A、A/G和G/G三种基因型;rs1138272位点存在C/C和C/T两种基因型,未发现T/T型。AD组和对照组rs1695位点基因型分布差异无统计学意义(P>0.05),但AD组等位基因G的频率(32.3%)明显高于对照组(21.9%)(P=0.05)。AD组和对照组rs1138272位点基因型分布及等位基因频率差异无统计学意义(P>0.05)。GSTPi基因染色体单体型G/T(即rs1695位点为等位基因G,rs1138272位点为等位基因T)的频率,AD组(9.1%)明显高于对照组(2.4%),差异无统计学意义(P=0.01)。结论 GSTPi基因rs1695位点等位基因G和rs1138272位点等位基因T可增加AD发生的危险,尤其rs1695位点等位基因G可能与AD发病关系更大。

鱼类谷胱甘肽转移酶基因cDNA克隆及其序列分析

采用RT-PCR方法,从鲢、鲤、鲫3种鱼类肝脏总RNA中克隆出了谷胱甘肽转移酶Pi型(GST Pi)cDNA序列,推导了其编码的氨基酸序列。3种鱼类GST Pi的ORF全长627bp,编码208个氨基酸。翻译起始密码均为ATG,终止密码子均为TGA。鱼类与哺乳动物、两栖类爪蟾以及节肢动物丝虫之间GST Pi氨基酸序列相似度平均值分别为50%、33%、15%左右。5种鱼类之间的氨基酸序列相似度较大,其中鲤科鱼类之间平均为85%左右。我们以GST Pi为分子标记,用最大简约数法(MP)构建了13个物种的系统进化树,识别出两个大的单系类群:哺乳类组成类群一(bootstrap100);鱼类组成类群二(bootstrap93)。通过比较鱼类与哺乳类GST Pi N末端和C末端功能域的氨基酸组成差异,探讨了淡水鱼类GSTs承担较强的微囊藻毒素去毒能力的可能分子机制。

食管癌患者放疗前后血中pi类谷胱甘肽S－转移酶水平的测定

用放射免疫法（ＲＩＡ）检测了４０例正常人及６６例食管癌患者放疗前后血浆Ｐｉ类谷胱甘肽Ｓ－转移酶（ＧＳＴ－π）水平。结果显示：食管癌患者放疗前血浆ＧＳＴ－π水平显著高于正常对照（Ｐ＜０．００１），且水平和食管病变长度呈正相关。放疗后血浆ＧＳＴ－π水平显著降低（Ｐ＜０．０１），其水平在完全缓解（ＣＲ）病例与正常对照无明显差异（Ｐ＞０．０５），在部分缓解（ＰＲ）病例仍高于正常对照（Ｐ＜０．００１）。说明食管癌患者血浆ＧＳＴ－π水平与其肿瘤的消长密切相关，有可能成为疗效和判断预后的一个监测指标。

人谷胱甘肽硫转移酶Pi基因的克隆及表达

目的 克隆并表达人谷胱甘肽硫转移酶Pi(GSTPi)基因 ,为毒理学、遗传药理学及肿瘤的化学预防研究提供应用基础。方法 用RT -PCR技术从人胎盘 /肺脏组织获取GSTPi基因的cDNA序列 ,将其扩增产物GSTPi基因插入到原核表达载体pMAL -c2x中 ,鉴定重组表达质粒 ,并进行诱导表达。结果 构建了原核表达载体pMAL -c2x -GSTPi,通过诱导 ,在 85kDa的表达量约达到 35 %。结论 实现了解毒酶基因GSTPi的克隆和高效表达菌株的构建。

人谷胱甘肽硫转移酶Pi基因的克隆、原核表达和蛋白纯化

目的克隆人谷胱甘肽硫转移酶Pi(GSTPi)基因并在大肠杆菌中实现高效表达及蛋白纯化。方法用RT-PCR技术从人胎盘组织获取人GSTPi基因的cDNA序列,将其扩增产物GSTPi基因插入到原核克隆载体pMD18-T中,用PCR扩增、酶切分析及序列测定等方法对重组质粒pMD18-T-GSTPi进行鉴定,将测序正确的GSTPi基因连接到表达载体pMAL-c2x多克隆位点中,构建重组表达质粒pMAL-c2x-GSTPi,鉴定后,用异丙基-b-d-硫代半乳糖苷进行诱导表达,表达产物用麦芽糖亲和层析法纯化。结果人GSTPi克隆到原核表达载体pMAL-c2x中,测序结果同GenBank序列比较,同源性为100%。通过诱导,在85000的表达量约达到35%,麦芽糖亲和层析法纯化蛋白,纯度达到85%。结论实现了解毒酶基因GSTPi的克隆和高效表达菌株的构建,并获取了高纯度的GSTPi蛋白。

Pi类谷胱甘肽S-转移酶与消化道肿瘤

近年来研究发现谷脱甘肽S-转移酶（GST）与癌的发生、发展及抗药性的产生有着密切的关系，其中同工酶Pi类谷脱甘肽S-转移酶（GST－π）在消化道肿瘤中有一定表达，在其相应的癌、癌前病变组织及血中含量增多，可作为消化道肿瘤的一个标志酶，有助于消化道肿瘤的早期诊断和疗效观察。

人谷胱甘肽 S-转移酶pi(GSTp)中半胱氨酸对其在细胞氧化应激下功能的影响

利用PCR定点突变技术构建人GSTp三种半胱氨酸突变体C^(47/101)、C^(14/47/101)和C^(14/47/101/169)。将CSTp 野生型和突变体表达质粒转染293细胞,以CDNB 为底物测定胞内GST 的转移酶活性,结果显示各类突变体均明显抑制了细胞内源性CST 的催化活性,具有显著的负显性(dominant nega-tive)突变体的功能;将CSTp 野生型和突变体与c-Jun、NF-kB 和p53的报告基因载体共转染,通过萤光素酶活性测定发现突变体C^(14/47/101)和C^(14/47/101/169)能明显激活c-Jun 和p21的转录活性;Western印迹分析显示突变体均能上调细胞内p21蛋白的水平,细胞存活率的测定表明GSTp 突变体能增强293细胞对H_2O_2刺激的敏感性;实验结果表明半胱氨酸残基对于维持GSTp 在对抗细胞氧化应激过程中的保护作用至关重要。

谷胱甘肽S-转移酶-π与肿瘤多药耐药的研究进展

肿瘤多药耐药（MDR）是造成肿瘤化疗失败的主要因为,亦是近年肿瘤化疗的研究热点.随着对非P-糖蛋白（P-gp）介导的MDR机制研究的不断深入,证实谷胱甘肽S-转移酶-π（GST-π）在肿瘤MDR中发挥重要作用,有望成为新的肿瘤治疗靶点.本文就GST-π的生理特性、分布、耐药机制、检测手段和逆转由GST-π介导的MDR等方面作一综述.

谷胱甘肽S-转移酶P1基因多态性与散发性结直肠腺癌易感性的关系

背景:谷胱甘肽S-转移酶(GST)属Ⅱ相代谢酶,在人体内参与多种致癌物的解毒作用。目的:探讨GSTP1基因多态性与散发性结直肠腺癌(SCRAC)遗传易感性的关系。方法:118例SCRAC患者和140名健康对照者纳入研究。采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)检测GSTP1基因第5外显子105位密码子单核苷酸多态性,分析两组间GSTP1等位基因和基因型的差异。结果:SCRAC组GSTP1突变型等位基因(Val)频率显著高于健康对照组(57.6%对40.7%,P=0.000);纯合突变基因型(Val/Val)频率亦高于健康对照组,但差异无统计学意义(44.1%对30.7%,P=0.027)。根据临床病理特征对SCRAC患者进行分层分析,Dukes C期和低分化腺癌Val/Val基因型频率分别显著高于Dukes A、B期(P=0.007)和高、中分化腺癌(P=0.002)。结论:GSTP1基因多态性与SCRAC相关,纯合突变基因型携带者对SCRAC的易感性增加。

儿童急性白血病患者的谷胱甘肽S-转移酶Pi基因多态性分析

目的 研究谷胱甘肽S 转移酶Pi(GST Pi)的基因型多态性在中国儿童急性白血病 (AL)中的频率分布特征 ,探讨GST Pi基因变异与儿童白血病的易感性及化疗效应之间可能的相关性。方法 采用DNA直接测序法对 12 0例AL患儿和 85名健康儿童进行GST Pi基因型的测定 ,分析各基因型在AL儿童与健康对照者之间的分布差异。结果 AL患儿GST Pi外显子 5的突变率为 4 7 5 % ,明显高于健康儿童的 31 8% (OR =1 94 4 ,95 %CI为 1 0 88～ 3 4 73) ,其多态性分布特征与国外报道相似。其中 ,ALL患儿外显子 5的基因突变率增高更明显 ,而AML患儿与健康儿童的差异未达到显著水平 ;B系ALL患儿的总突变率 (6 0 3% )明显高于T ALL儿童 (4 7 1% ) ,但后者的纯合子突变率(17 6 % )显著高于前者 (3 4 % ) (P值均 <0 0 5 ) ;野生型ALL患儿的平均生存时间为 2 4个月 ,长于突变型患儿的 17 6个月 ,但差异未达到统计学意义 (P =0 0 80 4 ) ;外显子 5基因型对AML患儿的存活时间亦无显著影响。在所有受检儿童中 ,未发现GST Pi外显子 6存在文献报道的Ala114 Val变异基因型 ,但发现了两个新的突变基因型 :1例健康儿童的外显子 6第 99位点出现A/G杂合 ,该杂合基因型未引起氨基酸的改变 ;2例白血病儿童在外显子 6第 10 3测序位点发生G→T/G碱?

超敏C反应蛋白和人谷胱甘肽硫转移酶Pi及膜联蛋白A5在老年陈旧性心肌梗死患者的表达及临床意义

目的研究陈旧性心肌梗死老年患者循环超敏c-反应蛋白（high-sensitivity C-reactiveprotein，hs-CRP）、人谷胱甘肽硫转移酶Pi（glutathione S-transferase Pi，GSTPi）和膜联蛋白A5（annexinA5，AnxA5）水平的变化。方法前瞻性研究，连续人选2012年12月至2015年11月老年陈旧性心肌梗死患者185例。采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测GSTPi和AnxA5水平的变化，应用免疫散射比浊法测定hs-CRP的水平。结果随老年陈旧性心肌梗死患者冠状动脉狭窄程度的加重，GSTPi水平下降，AnxA5和hs-CRP水平升高。冠状动脉狭窄〉95％组GSTPi（190．0±37．0）μg／L、AnxA5（33．9±4．0）μg／L、hs-CRP（15．3±1．3）mg／L，与冠状动脉狭窄55％-65％组GSTPi（289．0±86．0）μg／L AnxA5（8．1±2．9）μg／L、hs-CRP（5．9±0．8）mg／L比较，差异有统计学意义（均P〈0．01）；左心室射血分数（LVEF）45％-54％组GSTPi（219．0±61．0）μg／L、AnxA5（12．9±3．9）μg／L、hs-CRP（10．1±1．0）mg／L，与I。VEF％30％组GSTPi（198．0±39．0）μg／L、AnxA（538．9±5．10）μg／L、hs-CRP（17．9±1．9）mg／L比较，差异有统计学意义（均P〈0．01）；NYHAⅠ级组GSTPi、AnxA5、hs-CRP与NYHAⅣ级组比较，差异有统计学意义（均声〈0．01）。结论GSTPi、AnxA5和hs-CRP水平的变化可能影响老年陈旧性心肌梗死患者冠状动脉狭窄和心力衰竭的严重程度。

谷胱甘肽S-转移酶pi(GSTP1)Ile105Val多态性与皮肤黑色素瘤发病风险相关性的Meta分析

目的系统评价谷胱甘肽S-转移酶pi(GSTP1)Ile105Val多态性与皮肤黑色素瘤的相关性。方法计算机检索Pub Med、EMbase、CNKI和Wan Fang Data数据库,搜集GSTP1 Ile105Val多态性与皮肤黑色素瘤相关性的病例-对照研究,检索时限截至2016年6月31日。由2位研究者独立筛选文献、提取资料和评价纳入研究的偏倚风险后,采用Rev Man 5.3软件进行Meta分析。结果最终纳入4个病例-对照研究,共981例病例和796例对照。Meta分析结果显示,在显性模型(GG+GA vs.AA)下,GSTP1 Ile105Val多态性与皮肤黑色素瘤发病风险存在相关性,且差异有统计学意义[OR=1.22,95%CI(1.01,1.48),P=0.04],但在隐性、杂合子、纯合子模型下,GSTP1基因Ile105Val(A/G)多态性与皮肤黑色素瘤发病风险无相关性[GG vs.CA+AA:OR=1.18,95%CI(0.86,1.60),P=0.30;GA vs.AA:OR=1.28,95%CI(0.92,1.77),P=0.14;GG vs.AA:OR=1.20,95%CI(0.98,1.47),P=0.08]。结论当前证据显示,在显性模型下,GSTP1 Ile105Val多态性与皮肤黑色素瘤存在相关性,可能增加皮肤黑色素瘤的发病风险。

谷胱甘肽硫转移酶Pi基因多态性与急性脑梗死的关系研究

目的探讨谷胱甘肽硫转移酶Pi基因多态性与急性脑梗死的关系。方法选取2011年6月—2014年8月河北省高碑店市医院收治的急性脑梗死患者120例作为急性脑梗死组,另选择同期进行体检的健康者120例作为对照组。采用比色法测定受试者血清谷胱甘肽硫转移酶水平。提取受试者血标本基因组DNA,采用聚合酶链反应(PCR)扩增目的基因并进行基因型分析。结果急性脑梗死组患者血清谷胱甘肽硫转移酶水平为(3.45±1.46)U/ml,低于对照组的(5.14±1.89)U/ml(P<0.05)。两组患者谷胱甘肽硫转移酶Pi基因型分布频率比较,差异有统计学意义(P<0.05);谷胱甘肽硫转移酶Pi(-)基因型者发生急性脑梗死的风险是谷胱甘肽硫转移酶Pi(+)基因型者的1.875倍〔OR=1.875,95%CI(1.271,2.766),P<0.05〕。结论急性脑梗死患者谷胱甘肽硫转移酶活性较低,且谷胱甘肽硫转移酶Pi(-)基因型人群急性脑梗死发生率较高。

糖痹康对糖尿病大鼠坐骨神经Ⅱ相代谢酶GCLc和GST pi蛋白与mRNA的影响

目的观察糖痹康对糖尿病大鼠坐骨神经II相代谢酶谷氨酸半胱氨酸连接酶亚基(glutamate-cysteine ligase catalytic subunit,GCLc)和谷胱甘肽-S-转移酶(glutathione s-transferase,GST)pi蛋白与mRNA的影响,探讨糖痹康对糖尿病周围神经病变大鼠坐骨神经保护作用机制。方法雄性SD大鼠,高脂饲料与小剂量链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)联合诱发糖尿病大鼠模型,模型成功后将糖尿病大鼠随机分为5组:模型组、α-硫辛酸(alpha lipoic acid,ALA)组(0.0268g/(kg·d),糖痹康高(2.5g/kg)、中(1.25g/kg)、低(0.625g/kg)剂量组,每组10只,另将雄性SD大鼠10只设为正常组。治疗12周后测大鼠右侧坐骨神经传导速度;Western blot检测大鼠坐骨神经中GCLc和GST pi蛋白的表达;实时荧光定量PCR检测大鼠坐骨神经中GCLc和GST pi mRNA的表达。结果与模型组相比,12周后ALA组、糖痹康高、中剂量组大鼠坐骨神经传导速度明显升高(P<0.05);ALA组、糖痹康高、中剂量组GCLc和GST pi蛋白及mRNA表达均明显高于模型组(P<0.05)。结论糖痹康可通过诱导Ⅱ相代谢酶GCLc和GST pi改善糖尿病大鼠坐骨神经损伤。

儿童急性白血病易感性与GSTPi基因多态性关系的研究

目的探讨谷胱甘肽硫转移酶Pi（GSTPi）基因A313G、C341 T多态性在深圳地区汉族健康儿童和急性白血病（AL）儿童中的突变情况，并分析GSTPi基因多态性与儿童AL易感性的关系。方法采用逆转录聚合酶链式反应-变性梯度凝胶电泳（RT-PCR-DGGE ）结合DNA测序技术，对108例AL患儿和121名正常对照儿童进行基因多态性筛查。结果 GSTPi313G等位基因总样本频率为16.4％；未检测到GSTPi C341 T位点突变。GSTPi 313 G等位基因在AL组、急性淋巴细胞白血病（ALL）组、急性髓细胞白血病（AML）组和急性B淋巴细胞白血病（B-ALL）组中分布频率分别为18.1％、17.9％、20.0％和19.9％，均高于对照组的14.9％（P ＞0.05）。男性患儿 GSTPi 313AG基因型及AG＋GG显性模型可显著增加B-ALL发病风险（OR＝2.26，95％CI：1.07～6.42， P＝0.04；OR＝2.49，95％CI：1.07～5.81，P＝0.04）；女性患儿GSTPi 313GG基因型似可增加AML发病风险（OR＝2.33，95％CI：0.18～30.10），但差异无显著性（P＞0.05）。结论男性患儿GSTPi 313 AG基因型和AG＋GG显性模型可增加B-ALL发病风险。另外，GSTPi 多态性在降低女性AL患儿发病风险中的作用仍需做进一步探讨。

三种耐药蛋白在胃癌中的表达及意义

目的 探讨多药耐药蛋白 ( MRP)、谷胱甘肽转移酶 Pi( GST-π)和肺耐药蛋白 ( L RP)在胃癌中的表达及意义。方法 应用免疫组化 S- P法 ,检测 MRP、GST-π和 L RP在 90例胃癌及 30例正常胃黏膜中的表达。结果 MRP、GST-π及 L RP在胃癌中的阳性表达率分别为 92 .2 %、99.0 %和 93.3% ,均显著高于其在正常胃黏膜中的表达 ( P<0 .0 5 ) ,且 MRP、GST-π和 L RP在高、中分化腺癌中的表达显著高于在低分化腺癌和黏液癌中的表达 ( P<0 .0 5 )。但它们的表达与胃癌浸润深度、淋巴结转移无关。结论 MRP、GST-π和 L RP在胃癌中高表达 ,在胃癌的原发性耐药中起重要作用。这可能是胃癌化疗效果差、死亡率高的重要原因之一。

胃癌多药耐药相关蛋白表达的临床分析

背景:胃癌对化疗药物原发或继发不敏感可致肿瘤多药耐药。目的:探讨胃癌组织中多药耐药相关蛋白P糖蛋白(P-gp)、谷胱甘肽S-转移酶(GST)-π、Bcl-xL的表达及其意义。方法:收集胃癌手术标本113例,每例标本选取肿瘤组织、距病灶5 cm以上的正常胃黏膜组织各1块。以免疫组化法检测多药耐药相关蛋白P-gp、GST-π、Bcl-xL的定位和表达,并与胃癌主要临床病理特征行相关性分析。结果:胃癌组织的P-gp、GST-π、Bcl-xL阳性表达率(48.7%对5.3%,P<0.05;62.8%对25.7%,P<0.05;83.2%对23.0%,P<0.05)和高表达率(18.6%对0%,P<0.05;23.9%对0%,P<0.05;71.7%对0%,P<0.05)均明显高于正常胃黏膜组织,胃癌组织P-gp、GST-π、Bcl-xL三者间表达呈正相关(P<0.05)。胃癌组织GST-π、Bcl-xL阳性表达与肿瘤组织分化程度呈正相关(P<0.05).胃癌组织P-gp、GST-π、Bcl-xL表达与患者的性别、年龄、浸润深度、淋巴结转移和临床分期均不相关(P>0.05)。结论:胃癌组织多药耐药相关蛋白P-gp、GST-π、Bcl-xL表达与胃癌的发生相关,且肿瘤组织GST-π、Bcl-xL表达与分化程度呈正相关,可作为判断胃癌患者预后的指标。

GSTP1基因多态性与胃黏膜肠上皮化生的关系

目的:了解胃黏膜肠上皮化生(肠化生)人群Pi类谷胱甘肽转移酶基因(GSTP1)不同等位基因的分布,探讨肠化生癌变的内在遗传特性。方法:利用PCR-RFLP法检测92例正常人群、55例肠化生组和103例胃癌组GSTP1不同等位基因的分布。结果:与正常对照组相比,具有A/G或G/G基因型者发生肠化生的风险增加到2.075倍(95%CI,0.990～4.348),罹患胃癌的风险性增加2.730倍(95%CI,1.380～5.400)。结论:具有A/G或G/G基因型者发生肠化生和胃癌的风险性增加;此种肠化生与胃癌有着相似的遗传特性,可作为癌前肠化生进行随访。

木犀草素对白血病K562/ADR细胞多药耐药的逆转作用及机制研究

目的 探究木犀草素(Lut)对慢性髓系白血病K562/ADR细胞多药耐药性的逆转作用及其机制。方法K562和K562/ADR细胞经不同浓度阿霉素(ADR)处理24 h后,采用CCK-8实验检测K562/ADR细胞耐药倍数。Lut单独或联合ADR作用K562/ADR细胞24 h后,采用CCK-8实验检测Lut的细胞毒性及对ADR的增敏作用。取对数生长期K562/ADR细胞分为0μmol/L Lut组、2μmol/L Lut组、4μmol/L Lut组,采用流式细胞术检测细胞内ADR蓄积量的变化;RT-PCR法和Western blot法分别检测核因子E2相关因子2(Nrf2)、多药耐药相关蛋白1(MRP1)、P-糖蛋白(P-gp)、谷胱甘肽-S-转移酶pi(GST-pi)mRNA和蛋白的表达;谷胱甘肽(GSH)试剂盒检测细胞内GSH的含量。结果 与K562细胞相比,K562/ADR细胞株对ADR具有明显的耐药性,耐药倍数为53.69倍。与0μmol/L Lut相比,不同浓度Lut作用于K562/ADR细胞后,细胞生长均受到不同程度的抑制(P<0.05),其中2、4μmol/L Lut对K562/ADR细胞的增殖抑制率<10%,为无毒性的Lut浓度。与0μmol/L Lut组相比,2、4μmol/L Lut组可明显增强ADR对K562/ADR的细胞增殖抑制率,增加细胞内ADR蓄积量,提高逆转耐药倍数,降低细胞内GSH含量,下调细胞中MRP1、P-gp、GST-pi、Nrf2 mRNA及蛋白的表达(P<0.05);且4μmol/L Lut作用效果较2μmol/L Lut更显著。结论Lut可抑制K562/ADR细胞增殖,逆转其对ADR的耐药性,其机制可能与Lut下调Nrf2、MRP1、P-gp、GST-pi表达,进而增加细胞内ADR蓄积量有关。