GSH对两种谷胱甘肽过氧化物酶模拟物活性影响的研究

设计并合成了谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)模拟物6A,6A′-二苯胺-6B,6B′-二硒桥联-β-环糊精(6-AnSeCD).采用双酶偶联法测定GPX的活力结果显示,6A,6A′-二环己胺-6B,6B′-二硒桥联-β-环糊精(6-CySeCD)催化谷胱甘肽还原H2O2和枯烯H2O2的活力均比6-AnSeCD的高.为了进一步考察6-CySeCD和6-AnSeCD与GSH之间的相互作用,进行了分子动力学(MD)模拟和分子对接研究.结果表明,与GSH的结合使GPX模拟物的构象发生变化,这种改变可能是影响桥连GPX模拟物催化活性的关键因素.

两种谷胱甘肽过氧化物酶模拟物抗紫外线损伤的研究

考察了紫外线照射小鼠胸腺细胞后,对细胞存活率、细胞周期、细胞凋亡、脂质过氧化程度以及外源性活性氧含量变化的影响,表明紫外线对胸腺细胞有严重损伤.研究了谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)的模拟物2-硒桥联β-环糊精和2-碲桥联β-环糊精抵抗紫外线损伤细胞的能力,结果表明,GPX模拟物能有效地保护细胞,防止紫外线引起的损伤.

谷胱甘肽过氧化物酶模拟物6-CySeCD对过氧化氢诱导小鼠成纤维细胞损伤的保护作用

考察不同剂量的H2O2作用于小鼠成纤维细胞(NIH3T3)后,细胞脂质过氧化、存活率、DNA片段化的变化情况,并研究谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)的模拟物6A,6B-环己胺-6A′,6B′-硒桥联-β-CD(6-CySeCD)抗H2O2诱导小鼠成纤维细胞损伤的能力.结果表明:H2O2对NIH3T3细胞有严重损伤;6-CySeCD能有效保护细胞,防止紫外线引起的损伤.

新型谷胱甘肽过氧化物酶模拟物——SeHA的合成及体外抗氧化活性研究

用化学修饰法合成了一个新的具有GPX活性的模拟物-硒化透明质酸(SeHA),其GPX活力可达276.88 U/μmol。用红外光谱和核磁共振光谱对模拟酶的结构进行研究,证明硒的修饰位点位于透明质酸的N-乙酰氨基葡萄糖的-CH2OH。为进一步研究SeHA的抗氧化活性,建立了Fe2+/Vc诱导的牛心线粒体损伤体系,对SeHA的体外生物活性进行研究。结果显示SeHA能够有效抑制损伤线粒体的膜膨胀、脂质过氧化终产物丙二醛(MDA)的生成及线粒体细胞色素氧化酶(CCO)活力的降低;同时在与另一种GPX模拟物-PZ51的比较中SeHA也表现出了更为明显的体外抗氧化活性。

谷胱甘肽过氧化物酶模拟物研究进展

回顾谷胱甘肽过氧化物酶模拟物的研究进展,为开发新型谷胱甘肽过氧化物酶模拟物提供科学参考。总结了目前研究比较热门的4种代表性谷胱甘肽过氧化物酶模拟物:小分子模拟物、环糊精为酶模型的模拟物、多肽含硒模拟物、多糖为酶模型的模拟物,分析了其发展趋势。

基于γ-环糊精的谷胱甘肽过氧化物酶模拟物的构建及催化作用

基于对天然谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)结构与功能的理解,我们利用超分子化学的方法和原理,选择γ-环糊精为骨架,通过引入催化基团硒或碲,设计并合成了7种基于γ-环糊精的新型谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)模拟物,并采用元素分析、红外光谱、核磁共振等手段对其结构进行了详细的表征和确认。运用GPX经典双酶体系法测定了它们的GPX活性,实验结果表明:6,6’双碲桥联γ-环糊精(6-diTe-γ-CD)表现出了最高的GPX活性,其催化GSH还原过氧化氢(H2O2)、叔丁基过氧化氢(t-BuOOH)和枯烯过氧化氢(CuOOH)的活力分别是传统小分子硒酶Ebselen的147.3、1897.9和663.9倍,该结果是目前报道的环糊精GPX模拟物中酶活力最高的。

谷胱甘肽过氧化物酶模拟物及在运动医学中的应用前景展望

目前,人工合成的谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)模拟物已有多种,多用于医学上抗氧化、抗炎症、抗肿瘤以及免疫调解等方面的研究,并在临床实验中取得良好效果.首次提出将毒性小、活性高的模拟物应用于运动抗疲劳方面,从而提高运动能力.

谷胱甘肽过氧化物酶模拟物的合成及其催化机理研究

谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px。ECl。11。1。9）是一种含硒蛋白质,由4个相同的亚基构成,它以还原型谷胱甘肽为底物,催化还原H2O2和ROOH。 GSH-Px催化还原氢过氧化物的机理为乒乓机理,催化过程包括两个循环,其中B循环慢于A循环。Reich和Jasperse提出的关于有机硒模拟物的催化机理与天然酶的催化反应不同,反应过程中有氮原子的参与,本文合成的有机硒化合物Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ为季铵盐型,氮原子无法参与催化反应过程中的成键及断键。因此,必须寻求新的反应机理。

谷胱甘肽过氧化物酶模拟物碲化透明质酸的合成及催化动力学研究

以透明质酸(HA)作为谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)的酶模型,将碲(Te)引入HA中,合成了一种新型的高活力的GPX模拟物碲化透明质酸(TeHA).用红外光谱和核磁共振技术对TeHA的结构进行了研究,证明Te的修饰位点位于HA的N-乙酰氨基葡萄糖的羟甲基(-CH2OH)上.采用Wilson辅酶偶联法测定得到TeHA催化还原型谷胱甘肽(GSH)还原H2O2的GPX活力为163.6 U/μmol,高于文献报道的其它模拟酶.TeHA还能够催化GSH还原异丙苯基过氧化物(CuOOH)和叔丁基过氧化物(t-BuOOH)的反应,并且CuOOH为该模拟酶的最适底物.通过研究TeHA催化GSH还原三种不同过氧化物的反应动力学发现,TeHA的催化遵循乒乓机制.

谷胱甘肽过氧化物酶4介导的铁死亡参与阿霉素对乳腺癌细胞抑制作用研究

目的:探讨谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)介导的铁死亡是否参与阿霉素对乳腺癌的抑制过程,并探讨其增加阿霉素敏感性的可能机制。方法:通过实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)实验和免疫蛋白印迹法(Western Blot),检测正常乳腺细胞MCF10A、HCC1937细胞和乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231细胞中GPX4的表达水平;通过慢病毒转染技术构建稳定敲低GPX4的乳腺癌细胞MCF-7,并通过qRT-PCR和Western Blot实验检测敲低效率;通过CCK8实验检测阿霉素对乳腺癌细胞的细胞毒性;通过谷胱甘肽(GSH)检测试剂盒、丙二醛(MDA)检测试剂盒、铁离子(Fe^(2+))浓度检测试剂盒检测敲低GPX4后乳腺癌细胞的铁死亡水平。结果:乳腺癌细胞中GPX4的蛋白水平及mRNA水平高于正常乳腺细胞(P<0.05);与对照组细胞相比,敲低GPX4表达的乳腺癌细胞中GSH水平降低(P<0.05),MDA和Fe^(2+)水平升高(P<0.05),阿霉素作用后细胞增殖能力下降(P<0.05),而铁死亡抑制剂ferrostatin-1可以逆转GPX4敲低后阿霉素对乳腺癌细胞增殖能力的抑制作用(P<0.05)。结论:沉默GPX4可以促进乳腺癌细胞铁死亡过程,最终促进乳腺癌对阿霉素的敏感性。

谷胱甘肽过氧化物酶基因重组乳酸菌的优化培养及其抗逆功能

为获取谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GPx)基因重组乳酸菌NZ9000/pNZ8148-GPx(简称NG1)的最优生长条件和在模拟胃肠道环境下的抗逆性情况,采用单因素试验和响应面分析法优化NG1的生长条件,同时对该重组菌的体外抗H_(2)O_(2)、抗胆汁酸盐和抗酸胁迫能力进行研究。结果表明,NG1的最优生长条件为培养温度36℃、初始pH7.6、Na_(2)SeO_(3)浓度59μg/mL;NG1对各胁迫因素的最高耐受值分别为过氧化氢(H_(2)O_(2))1.5 mmol/L、胆汁酸盐0.20%、酸度pH6.0;耐受能力排序为优化培养NG1>常规培养NG1>常规培养NG0(NZ9000/pNZ8148),说明GPx基因的导入对乳酸菌的抗H_(2)O_(2)和胆汁酸盐胁迫功能有增强作用,且在最优培养时得到强化,但对酸度耐受性无明显增强作用。

日本落叶松谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)酶学特性与抗逆性研究

【目的】植物谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)是酶促活性氧清除机制中的关键酶之一,对日本落叶松GPX开展酶学特性与抗逆性研究,可以补充和完善林木改良基因资源,也为探究谷胱甘肽过氧化物酶抗逆的分子机制提供理论依据。【方法】本研究以日本落叶松茎部组织为材料克隆谷胱甘肽过氧化物酶基因,进行生物信息学分析和亚细胞定位研究。诱导、纯化目的蛋白进行体外酶学活性测定,通过点斑试验、生长曲线试验验证GPX抗逆性。【结果】从日本落叶松茎中克隆得到了2个GPX基因,分别命名为LkGPX2、LkGPX3,二者都含有完整的特征保守基序。构建系统进化树发现,LkGPXs和具有抗逆功能的PmGPX与PeGPX聚为一支。亚细胞定位显示,LkGPX2和LkGPX3蛋白在细胞核和细胞质中均有表达。以硫氧还蛋白(Trx)为电子供体进行体外酶学活性测定,LkGPX2与LkGPX3对过氧化氢(H2O2)、过氧化氢叔丁醇(t-BHP)和有机氢过氧化物(Cum-OOH)都具有催化活性,LkGPX2对于3种底物的催化活性分别为(0.402±0.037)、(0.424±0.018)、(0.425±0.009)U/mg,LkGPX3对于3种底物的催化活性分别为(0.397±0.027)、(0.449±0.028)、(0.407±0.021)U/mg。大肠杆菌体外逆境处理试验表明,LkGPX2、LkGPX3能够提高大肠杆菌对模拟干旱胁迫和盐胁迫的耐受性。【结论】日本落叶松谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)既能起到活性氧清除作用,同时具备一定应对非生物胁迫的能力。

瑞马唑仑对腹腔镜胆囊切除术病人血清丙二醛、超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶水平的影响

目的分析瑞马唑仑对腹腔镜胆囊切除术病人血清丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平的影响。方法2021年12月~2022年11月本院收治的胆囊炎、胆石症行腹腔镜胆囊切除术病人110例,按照随机数表法分成两组,丙泊酚组55例,应用丙泊酚进行麻醉诱导与麻醉维持,瑞马唑仑组55例,应用瑞马唑仑进行麻醉诱导与麻醉维持,其余麻醉方法相同。比较两组的生命体征(平均动脉压、心率)、麻醉苏醒指标(睁眼时间、定向力恢复时间、拔管时间)、氧化应激指标(MDA、SOD、GSH-Px)、认知功能(MMSE评分)以及不良反应(呼吸抑制、躁动、头晕头痛、低血压、嗜睡)。结果瑞马唑仑组插管即刻、气腹即刻、拔管即刻的平均动脉压、心率均高于丙泊酚组,两组比较差异有统计学意义(P<0.05);瑞马唑仑组睁眼时间、定向力恢复时间、拔管时间分别为(10.37±2.15)分钟、(10.83±2.41)分钟和(11.06±2.19)分钟,丙泊酚组分别为(12.44±2.78)分钟、(13.16±2.84)分钟和(14.78±2.55)分钟,两组比较差异有统计学意义(P<0.05);瑞马唑仑组术后1天的MDA水平[(19.73±2.32)mmol/L]低于丙泊酚组[(27.82±2.95)mmol/L],SOD、GSH-Px水平[(310.85±27.61)U/ml、(939.63±105.14)U]高于丙泊酚组[(275.33±24.97)U/ml、(844.73±96.30)U];瑞马唑仑组术后1天的MMSE评分[(26.89±1.00)分]高于丙泊酚组[(25.33±0.92)分],两组比较差异有统计学意义(P<0.05);瑞马唑仑组不良反应发生率为7.27%,低于丙泊酚组的21.82%,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论瑞马唑仑在腹腔镜胆囊切除术麻醉中的应用效果好,可稳定病人生命体征,提高麻醉苏醒质量,减轻氧化应激反应与认知功能损伤,不良反应少。

谷胱甘肽过氧化物酶家族的功能及其成员作为胶质瘤免疫治疗标志物的可能性

目的:探讨谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)家族在胶质瘤发生发展中的生物学功能和预后价值。方法:利用TCGA、GTEx和CGGA等多个数据库数据分析胶质瘤中GPX各亚型基因的表达及其相关性、蛋白之间的相互作用、基因突变、GPX表达与胶质瘤患者预后的关系以及GPX7、8的基因集富集分析;GPX8与胶质瘤中免疫细胞浸润以及免疫检查点分子表达的相关性分析,胶质瘤中GPX8表达与化疗药物IC_(50)的相关性分析。采用qPCR法、WB法和免疫荧光技术检测国人胶质瘤组织和对照组织(标本收集自2022年10月20日至12月20日间在上海奉贤区中心医院神经外科手术切除的5例胶质瘤和3例严重脑外伤的病灶组织)中GPX mRNA、蛋白以及相关免疫检查点分子的表达进行验证。结果:数据库分析显示胶质瘤中GPX各亚型蛋白之间存在相互作用、基因表达水平存在相关性(P<0.05或P<0.01),胶质瘤组织中多个GPX亚型存在单核苷酸变异和拷贝数变异;不同类型胶质瘤组织的免疫细胞和肿瘤细胞中主要表达的GPX亚型有明显不同,在胶质瘤组织中GPX1、4、7、8均呈高表达(均P<0.05)且与胶质瘤患者预后不良相关(P<0.01)。qPCR法、WB法检测中国人胶质瘤组织中GPX7、8均呈高表达验证了数据库信息的正确性。在胶质瘤中GPX7、8表达具有独立预后预测价值;富集分析显示GPX7、8与胶质瘤细胞周期和免疫途径有关,在GBM和LGG中GPX8表达与免疫评分呈明显相关(P<0.01)、GPX8可能在胶质瘤中诱导抑制性免疫细胞浸润导致免疫抑制、GPX8表达与胶质瘤中多个免疫检查点分子表达正相关(均P<0.01)、GPX8表达与化疗药物IC_(50)呈明显正相关(均P<0.01)且其高表达可导致胶质瘤对化疗药物的耐药。结论:GPX8在胶质瘤中呈显著高表达,GPX8高表达能诱导胶质瘤中抑制性免疫细胞的浸润其与多个免疫抑制点、与多个化疗药物IC_(50)和患者预后密切相关,可作为胶质瘤免疫治疗的潜在靶点。

具有谷胱甘肽过氧化物酶活性的小分子模拟物2-TeCD保护线粒体抵抗氧化损伤

首次合成了一个新的含碲化合物 2 TeCD(二碲桥联环糊精 ) ,并证实其具有谷胱甘肽过氧化物酶 (GPX)活力 ,能清除氢过氧化物 .与其它GPX模拟物相比 ,2 TeCD具有分子量小 ,水溶性好及良好的化学和生物学稳定性 ,且其GPX活力比另一种被广泛认知的小分子模拟物Ebselen高约 4 6倍 .用Fe2 + Vc诱导的线粒体损伤体系研究了 2 TeCD的抗氧化性质 ,结果发现在相同剂量下 2

硒代β-环糊精模拟谷胱甘肽过氧化物酶的研究——6-位硒桥联β-环糊精的合成、性质及表征

谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＰＸ，Ｅｃ１．１１．１．９）属抗氧化应激酶系，它以还原型谷胱甘肽为底物，催化还原氢过氧化物［１］．它能消除体内自由基，防止脂质过氧化，对治疗和预防克山病、心血管病、炎症及癌症等有明显效果．随着对ＧＰＸ催化机制及活性部位结构的深入...

以透明质酸为骨架的新型谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)模拟酶的制备及性质研究

用修饰法合成以透明质酸为骨架的两种新型GPX模拟酶:硒化透明质酸SeHA及碲化透明质酸TeHA.用红外光谱和核磁共振波谱对模拟酶的结构进行研究,证明其修饰位点位于透明质酸的N-乙酰氨基葡萄糖的—CH2OH.用二硫代双硝基苯甲酸(DTNB)法测定模拟酶的硒含量为1.2%.通过模拟酶对3种不同底物过氧化氢(H2O2)、过氧化氢正丁烷(t-BuOOH)和过氧化氢异丙苯(CuOOH)的催化活性的研究结果表明CuOOH为该反应的最佳底物.研究模拟酶催化谷胱甘肽(GSH)还原3种过氧化物的动力学发现,反应速率与底物浓度的双倒数曲线均为平行的直线,说明模拟酶反应的动力学机制与天然GPX相同,为乒乓机制.用2,4二-叔丁基甲基苯酚(BHT)法证明了该催化反应为非自由基机理,且模拟酶不易被碘乙酸抑制.

化学诱变抗体模拟谷胱甘肽过氧化物酶

用诱变剂苯甲基磺酰氟（ＰＭＳＦ）活化兔抗人ＩｇＭ（Ｆｃμ）片段上特殊活性部位的丝氨酸（Ｓｅｒ）残基，经硒化氢（Ｈ_２Ｓｅ）处理，则将丝氨酸转变成硒代半胱氨酸（ＳｅＣｙｓ）。诱变后的抗体具有谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨ－Ｐｘ）活性，其活性为世界最好的ＧＳＨ－Ｐｘ模拟物ＰＺ５１的７０多倍。抗体效价为１：８，与没诱变的抗体相似。

模拟谷胱甘肽过氧化物酶活性三肽的制备及其性质研究

开发一种制备硒代谷胱甘肽（ＧｓｅＨ）的新方法。以合成的谷氨酰－γ－丝氨酰－甘氨酸（Ｇｌｕ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ）三肽为原料，经苯甲基磺酰氟（ＰＭＳＦ）活化，用Ｈ＿２Ｓｅ突变Ｓｅｒ成硒代半脱氨酸（ＳｅＣｙｓ）制成ＧＳｅＨ。用元素分析及氨基酸分析确定此三肽的组成并推导出此三肽的结构。研究了ＧＳｅＨ的性质．结果表明，此三肽具有谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＰＸ）的活性，其活力比其它一些小分子有机模拟物高，在性质上也有优于它们的一些特点，其动力学行为与天然ＧＰＸ类似。

模拟谷胱甘肽过氧化物酶活性三肽的合成及表征

用Ｂ，Ｂ－二氟硼杂唑烷酮保护谷氨酸的α－氨基和α－羧基，通过液相合成法制得谷氨酰－γ－丝氨酰－甘氨酸三肽。结合苯甲基磺酰氟（ＰＭＳＦ）与硒化氢（Ｈ２Ｓｅ）的突变，再经纯化制得具有谷胱甘肽过氧化物酶活性的三肽模拟物，即γ－谷氨酰－硒代半腕氨酰－甘氨酸。元素分析、氨基酸分析均证明了两种三肽的结构。电子能谱技术分析测得硒的价态及含量。