谷胱甘肽过氧化物酶-3在腮腺多形性腺瘤中的表达及意义

目的 :研究谷胱甘肽过氧化物酶-3(glutathione peroxidase-3,GPX-3)基因及蛋白在腮腺良、恶性多形性腺瘤中的表达,以明确GPX-3与腮腺多形性腺瘤发生、发展的相关性,为临床预测腮腺多形性腺瘤的发生及恶变提供理论依据。方法:采用荧光定量PCR和蛋白免疫印迹法检测30例腮腺多形性腺瘤,30例腮腺多形性腺瘤的瘤旁2 cm腺体组织,以及10例恶性腮腺多形性腺瘤中的GPX-3 mRNA及蛋白的表达,对其相对表达量进行统计学分析。结果:GPX-3 mRNA和蛋白在腮腺良、恶性多形性腺瘤中的表达明显低于瘤旁腺体组织,且在腮腺恶性多形性腺瘤中的表达最低,差异有统计学意义(P<0.01)。GPX-3在腮腺多形性腺瘤中的表达与患者的年龄、性别及肿瘤大小无关,差异无统计学意义(P>0.05),且GPX-3在腮腺多形性腺瘤中的表达与肿瘤TNM分期及恶性成分比例有关,其差异有统计学意义(P<0.05)。结论:GPX-3在腮腺良性多形性腺瘤中低表达,且在腮腺恶性多形性腺瘤中的表达最低,提示GPX-3的低表达与腮腺多形性腺瘤的发生及恶变密切相关。

谷胱甘肽过氧化物酶4介导的铁死亡参与阿霉素对乳腺癌细胞抑制作用研究

目的:探讨谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)介导的铁死亡是否参与阿霉素对乳腺癌的抑制过程,并探讨其增加阿霉素敏感性的可能机制。方法:通过实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)实验和免疫蛋白印迹法(Western Blot),检测正常乳腺细胞MCF10A、HCC1937细胞和乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231细胞中GPX4的表达水平;通过慢病毒转染技术构建稳定敲低GPX4的乳腺癌细胞MCF-7,并通过qRT-PCR和Western Blot实验检测敲低效率;通过CCK8实验检测阿霉素对乳腺癌细胞的细胞毒性;通过谷胱甘肽(GSH)检测试剂盒、丙二醛(MDA)检测试剂盒、铁离子(Fe^(2+))浓度检测试剂盒检测敲低GPX4后乳腺癌细胞的铁死亡水平。结果:乳腺癌细胞中GPX4的蛋白水平及mRNA水平高于正常乳腺细胞(P<0.05);与对照组细胞相比,敲低GPX4表达的乳腺癌细胞中GSH水平降低(P<0.05),MDA和Fe^(2+)水平升高(P<0.05),阿霉素作用后细胞增殖能力下降(P<0.05),而铁死亡抑制剂ferrostatin-1可以逆转GPX4敲低后阿霉素对乳腺癌细胞增殖能力的抑制作用(P<0.05)。结论:沉默GPX4可以促进乳腺癌细胞铁死亡过程,最终促进乳腺癌对阿霉素的敏感性。

谷胱甘肽过氧化物酶基因重组乳酸菌的优化培养及其抗逆功能

为获取谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GPx)基因重组乳酸菌NZ9000/pNZ8148-GPx(简称NG1)的最优生长条件和在模拟胃肠道环境下的抗逆性情况,采用单因素试验和响应面分析法优化NG1的生长条件,同时对该重组菌的体外抗H_(2)O_(2)、抗胆汁酸盐和抗酸胁迫能力进行研究。结果表明,NG1的最优生长条件为培养温度36℃、初始pH7.6、Na_(2)SeO_(3)浓度59μg/mL;NG1对各胁迫因素的最高耐受值分别为过氧化氢(H_(2)O_(2))1.5 mmol/L、胆汁酸盐0.20%、酸度pH6.0;耐受能力排序为优化培养NG1>常规培养NG1>常规培养NG0(NZ9000/pNZ8148),说明GPx基因的导入对乳酸菌的抗H_(2)O_(2)和胆汁酸盐胁迫功能有增强作用,且在最优培养时得到强化,但对酸度耐受性无明显增强作用。

甲状腺癌患者血清半乳糖凝集素-1、谷胱甘肽过氧化物酶3表达变化及其与疾病严重程度相关性研究

目的研究甲状腺癌患者血清半乳糖凝集素-1(Gal-1)、谷胱甘肽过氧化物酶3(GPX3)表达变化及其与疾病严重程度关系。方法回顾性分析2017年4月~2019年1月首都医科大学附属北京天坛医院收治的92例甲状腺癌患者临床资料,同期选择本院收治的87例甲状腺良性病变患者,采用酶联免疫法检测比较两组血清Gal-1、GPX3水平,分析甲状腺癌血清Gal-1、GPX3水平和临床参数的关系,血清Gal-1、GPX3对甲状腺癌的诊断效能,及Gal-1和GPX3的相关性。结果甲状腺癌组血清Gal-1水平高于甲状腺良性病变组,GPX3水平低于甲状腺良性病变组,差异有统计学意义(P<0.05)。淋巴结转移、Ⅲ+Ⅳ期甲状腺癌患者血清Gal-1水平高于无淋巴结转移及Ⅰ+Ⅱ期,血清GPX3水平低于无淋巴结转移及Ⅰ+Ⅱ期,差异有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线分析显示,Gal-1、GPX3、Gal-1+GPX3对甲状腺癌诊断的曲线下面积分别为0.805、0.784、0.890,灵敏度分别为0.778、0.761、0.826,特异度分别为0.682、0.701、0.817。甲状腺癌血清Gal-1与GPX3呈负相关(r=-0.496,P<0.05)。结论血清Gal-1在甲状腺癌中的水平明显上升,GPX3则显著下降,且和淋巴结转移、肿瘤分期有直接关系,可作为甲状腺癌疾病严重程度的参考指标。

日本落叶松谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)酶学特性与抗逆性研究

【目的】植物谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)是酶促活性氧清除机制中的关键酶之一,对日本落叶松GPX开展酶学特性与抗逆性研究,可以补充和完善林木改良基因资源,也为探究谷胱甘肽过氧化物酶抗逆的分子机制提供理论依据。【方法】本研究以日本落叶松茎部组织为材料克隆谷胱甘肽过氧化物酶基因,进行生物信息学分析和亚细胞定位研究。诱导、纯化目的蛋白进行体外酶学活性测定,通过点斑试验、生长曲线试验验证GPX抗逆性。【结果】从日本落叶松茎中克隆得到了2个GPX基因,分别命名为LkGPX2、LkGPX3,二者都含有完整的特征保守基序。构建系统进化树发现,LkGPXs和具有抗逆功能的PmGPX与PeGPX聚为一支。亚细胞定位显示,LkGPX2和LkGPX3蛋白在细胞核和细胞质中均有表达。以硫氧还蛋白(Trx)为电子供体进行体外酶学活性测定,LkGPX2与LkGPX3对过氧化氢(H2O2)、过氧化氢叔丁醇(t-BHP)和有机氢过氧化物(Cum-OOH)都具有催化活性,LkGPX2对于3种底物的催化活性分别为(0.402±0.037)、(0.424±0.018)、(0.425±0.009)U/mg,LkGPX3对于3种底物的催化活性分别为(0.397±0.027)、(0.449±0.028)、(0.407±0.021)U/mg。大肠杆菌体外逆境处理试验表明,LkGPX2、LkGPX3能够提高大肠杆菌对模拟干旱胁迫和盐胁迫的耐受性。【结论】日本落叶松谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)既能起到活性氧清除作用,同时具备一定应对非生物胁迫的能力。

瑞马唑仑对腹腔镜胆囊切除术病人血清丙二醛、超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶水平的影响

目的分析瑞马唑仑对腹腔镜胆囊切除术病人血清丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平的影响。方法2021年12月~2022年11月本院收治的胆囊炎、胆石症行腹腔镜胆囊切除术病人110例,按照随机数表法分成两组,丙泊酚组55例,应用丙泊酚进行麻醉诱导与麻醉维持,瑞马唑仑组55例,应用瑞马唑仑进行麻醉诱导与麻醉维持,其余麻醉方法相同。比较两组的生命体征(平均动脉压、心率)、麻醉苏醒指标(睁眼时间、定向力恢复时间、拔管时间)、氧化应激指标(MDA、SOD、GSH-Px)、认知功能(MMSE评分)以及不良反应(呼吸抑制、躁动、头晕头痛、低血压、嗜睡)。结果瑞马唑仑组插管即刻、气腹即刻、拔管即刻的平均动脉压、心率均高于丙泊酚组,两组比较差异有统计学意义(P<0.05);瑞马唑仑组睁眼时间、定向力恢复时间、拔管时间分别为(10.37±2.15)分钟、(10.83±2.41)分钟和(11.06±2.19)分钟,丙泊酚组分别为(12.44±2.78)分钟、(13.16±2.84)分钟和(14.78±2.55)分钟,两组比较差异有统计学意义(P<0.05);瑞马唑仑组术后1天的MDA水平[(19.73±2.32)mmol/L]低于丙泊酚组[(27.82±2.95)mmol/L],SOD、GSH-Px水平[(310.85±27.61)U/ml、(939.63±105.14)U]高于丙泊酚组[(275.33±24.97)U/ml、(844.73±96.30)U];瑞马唑仑组术后1天的MMSE评分[(26.89±1.00)分]高于丙泊酚组[(25.33±0.92)分],两组比较差异有统计学意义(P<0.05);瑞马唑仑组不良反应发生率为7.27%,低于丙泊酚组的21.82%,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论瑞马唑仑在腹腔镜胆囊切除术麻醉中的应用效果好,可稳定病人生命体征,提高麻醉苏醒质量,减轻氧化应激反应与认知功能损伤,不良反应少。

硫氢化钠增加高糖高脂条件下小鼠心房肌细胞系HL-1谷胱甘肽合成

目的研究硫氢化钠(NaHS)是否通过调节谷胱甘肽(GSH)的合成,降低活性氧自由基(ROS)产生,改善小鼠2型糖尿病心肌病(DCM)。方法将小鼠心房肌细胞系HL-1分为对照组、高葡萄糖(HG:40 mmol/L)和棕榈酸(Pal:500μmol/L)处理组;以及硫氢化钠(NaHS,100μmol/L)、DL-炔丙基甘氨酸[PPG,胱硫醚γ裂解酶(CSE)抑制剂,1 mmol/L]和N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC,ROS抑制剂,5 mmol/L)处理72 h组。Western blot检测CSE和谷胱甘肽合成酶(GSS)的表达;二氢乙锭(DHE)和二氯氟甲烷(DCFH)检测ROS含量;免疫共沉淀检测核因子红细胞系2相关因子2(Nrf2)泛素化水平及Nrf2与肌肉特异性环指蛋白1(Murf1)的相互作用。结果与对照组比高糖高脂处理HL-1细胞后CSE、溶质载体家族7成员11(SLC7A11)、谷氨酸半胱氨酸连接酶催化亚基C(GCLC)、谷氨酸半胱氨酸连接酶修饰亚基M(GCLM)、谷胱甘肽合成酶(GSS)的表达水平下降,而NaHS能恢复其表达。高糖高脂组ROS含量高于NaHS组。与NaSH组比高糖高脂条件下Murf1与Nrf2的相互作用增加,Nrf2泛素化水平明显增加。结论硫氢化钠减轻Nrf2的泛素化,增加GSH合成关键酶的表达。

谷胱甘肽过氧化物酶家族的功能及其成员作为胶质瘤免疫治疗标志物的可能性

目的:探讨谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)家族在胶质瘤发生发展中的生物学功能和预后价值。方法:利用TCGA、GTEx和CGGA等多个数据库数据分析胶质瘤中GPX各亚型基因的表达及其相关性、蛋白之间的相互作用、基因突变、GPX表达与胶质瘤患者预后的关系以及GPX7、8的基因集富集分析;GPX8与胶质瘤中免疫细胞浸润以及免疫检查点分子表达的相关性分析,胶质瘤中GPX8表达与化疗药物IC_(50)的相关性分析。采用qPCR法、WB法和免疫荧光技术检测国人胶质瘤组织和对照组织(标本收集自2022年10月20日至12月20日间在上海奉贤区中心医院神经外科手术切除的5例胶质瘤和3例严重脑外伤的病灶组织)中GPX mRNA、蛋白以及相关免疫检查点分子的表达进行验证。结果:数据库分析显示胶质瘤中GPX各亚型蛋白之间存在相互作用、基因表达水平存在相关性(P<0.05或P<0.01),胶质瘤组织中多个GPX亚型存在单核苷酸变异和拷贝数变异;不同类型胶质瘤组织的免疫细胞和肿瘤细胞中主要表达的GPX亚型有明显不同,在胶质瘤组织中GPX1、4、7、8均呈高表达(均P<0.05)且与胶质瘤患者预后不良相关(P<0.01)。qPCR法、WB法检测中国人胶质瘤组织中GPX7、8均呈高表达验证了数据库信息的正确性。在胶质瘤中GPX7、8表达具有独立预后预测价值;富集分析显示GPX7、8与胶质瘤细胞周期和免疫途径有关,在GBM和LGG中GPX8表达与免疫评分呈明显相关(P<0.01)、GPX8可能在胶质瘤中诱导抑制性免疫细胞浸润导致免疫抑制、GPX8表达与胶质瘤中多个免疫检查点分子表达正相关(均P<0.01)、GPX8表达与化疗药物IC_(50)呈明显正相关(均P<0.01)且其高表达可导致胶质瘤对化疗药物的耐药。结论:GPX8在胶质瘤中呈显著高表达,GPX8高表达能诱导胶质瘤中抑制性免疫细胞的浸润其与多个免疫抑制点、与多个化疗药物IC_(50)和患者预后密切相关,可作为胶质瘤免疫治疗的潜在靶点。

β-胡萝卜素对阿霉素致大鼠心肌组织的超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶mRNA表达改变的影响

目的研究β-胡萝卜素(BC)对阿霉素(ADM)所致大鼠心肌组织的锰超氧化物歧化酶(Mn SOD)mRNA、铜-锌超氧化物歧化酶(Cu-Zn SOD)mRNA、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)mRNA表达改变的影响,探讨BC拮抗ADM导致心肌组织的Mn SOD、Cu-Zn SOD、GPx活性降低的机制。方法大鼠腹腔注射(ip)ADM(10·0mg·kg-1,1次);ADM处理的大鼠灌胃(ig)不同剂量的BC(每天1次,3次;ipADM前igBC,每天1次,11次行预处理)进行干预。分别用硫代巴比妥酸法、硝酸还原酶法、黄嘌呤氧化酶法、二硫代二硝基苯甲酸法、血红蛋白氧化法测定心肌组织的丙二醛(MDA)含量、一氧化氮(NO)含量、Mn SOD及Cu-Zn SOD活性、GPx活性、一氧化氮合酶活性;RT-PCR方法检测心肌组织的Mn SODmRNA、Cu-Zn SOD mRNA、GPx mRNA、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA表达。结果BC(20·0,40·0,80·0mg·kg-1)拮抗ADM所致心肌组织的MDA含量及NO含量增加、iNOS mRNA表达水平增加及其酶活性增加(P<0·01);拮抗ADM所致心肌组织的Mn SOD mRNA、Cu-Zn SOD mR-NA、GPx mRNA表达水平降低及其酶活性降低(P<0·01)。结论BC拮抗ADM导致心肌组织的Mn SOD mRNA、Cu-ZnSOD mRNA、GPx mRNA表达降低而拮抗ADM导致Mn SOD、Cu-Zn SOD、GPx活性降低。其机制可能与BC抑制ADM诱导心肌组织的iNOS mRNA表达而降低iNOS活性使心肌组织产生NO减少,从而减少NO抑制Mn SOD mRNA、Cu-ZnSOD mRNA、GPx mRNA表达有关。

卵磷脂对花尾胡椒鲷幼鱼谷胱甘肽-硫-转移酶,谷胱甘肽过氧化物酶和DNA完整性的影响

采用不同卵磷脂添加量的配合饲料投喂花尾胡椒鲷(Plectorhyncchuscinctus)幼鱼,同步测定幼鱼的谷胱甘肽-硫-转移酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性以及DNA完整程度。结果表明,谷胱甘肽-硫-转移酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性随着饲料中卵磷脂含量的增加而提高,而DNA单链断裂程度随着饲料中卵磷脂含量的增加而减少。这提示卵磷脂能够提高鱼体的抗氧化防御系统的机能。

具有谷胱甘肽过氧化物酶活性的小分子模拟物2-TeCD保护线粒体抵抗氧化损伤

首次合成了一个新的含碲化合物 2 TeCD(二碲桥联环糊精 ) ,并证实其具有谷胱甘肽过氧化物酶 (GPX)活力 ,能清除氢过氧化物 .与其它GPX模拟物相比 ,2 TeCD具有分子量小 ,水溶性好及良好的化学和生物学稳定性 ,且其GPX活力比另一种被广泛认知的小分子模拟物Ebselen高约 4 6倍 .用Fe2 + Vc诱导的线粒体损伤体系研究了 2 TeCD的抗氧化性质 ,结果发现在相同剂量下 2

谷胱甘肽过氧化物酶3甲基化及蛋白表达在胃癌中的临床意义

目的探讨血浆谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)3基因启动子甲基化及GPX3蛋白表达在胃癌发病中的临床意义。方法采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)方法检测胃癌组和胃炎组血标本中的GPX3甲基化程度;采用免疫组化方法检测胃癌组和癌旁正常组织标本中的GPX3蛋白表达情况,分析其与临床病理特征间的关系。结果 1胃癌组GPX3甲基化程度显著高于胃炎组(P<0.01);胃癌伴有淋巴结转移组GPX3甲基化程度显著高于无淋巴结转移组(P<0.05);胃癌组GPX3甲基化程度与患者年龄、性别和肿瘤分化程度、浸润情况、TNM分期无关(P>0.05);2胃癌组GPX3蛋白表达较癌旁正常组显著降低(P<0.01);胃癌伴有淋巴结转移组GPX3蛋白表达显著低于无淋巴结转移组(P<0.05);胃癌组GPX3蛋白表达与患者年龄、性别和肿瘤分化程度、浸润情况、TNM分期无关(P>0.05);3胃炎组GPX3蛋白表达与癌旁正常组无显著差异(P>0.05)。结论GPX3基因启动子区高甲基化通过下调GPX3蛋白表达,参与胃癌发生和促进淋巴结转移,有潜力成为诊断胃癌、判断预后的预警分子指标和临床治疗中的基因调控靶点。

硒代β-环糊精模拟谷胱甘肽过氧化物酶的研究——6-位硒桥联β-环糊精的合成、性质及表征

谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＰＸ，Ｅｃ１．１１．１．９）属抗氧化应激酶系，它以还原型谷胱甘肽为底物，催化还原氢过氧化物［１］．它能消除体内自由基，防止脂质过氧化，对治疗和预防克山病、心血管病、炎症及癌症等有明显效果．随着对ＧＰＸ催化机制及活性部位结构的深入...

高温胁迫对扶桑绵粉蚧成虫过氧化物酶和谷胱甘肽-S-转移酶活性的影响

为了研究高温胁迫对扶桑绵粉蚧的影响,将该虫分别置于35℃、38℃、41℃、44℃和47℃水浴处理2 h、3 h和4 h,然后置于26℃下恢复2 h,测定成虫的过氧化物酶(POD)和谷胱甘肽-S-转移酶(GSTs)活力的变化。结果表明在处理2 h、3 h和4 h下,对照(26℃)的POD活力值分别为(0.0527±0.0015)mmol/min、(0.0508±0.0015)mmol/min和(0.0483±0.0072)mmol/min,均高于高温各处理的POD活力值;5个温度处理下的POD活力值变化为低(35℃)-高(38℃)-低(41、44、47℃)的变化趋势;当处理2 h时,不同温度下的POD活力值分别是(0.0183±0.0009)(35℃)、(0.0480±0.0012)(38℃)、(0.0227±0.0012)(41℃)、(0.0197±0.0003)(44℃)、(0.0173±0.0007)(47℃)mmol/min。且在不同温度和时间处理下,成虫的GSTs活性变化趋势与POD活性变化趋势一致。即不同时间处理下,对照的GSTs活性均高于高温各处理的GSTs,其对照的GSTs活力值分别为(0.5537±0.0044)(2 h)、(0.5358±0.0078)(3 h)和(0.5291±0.0264)(4 h)mmol/min;5个温度处理下的GSTs活力值变化为低(35℃)-高(38℃)-低(41℃、44℃、47℃)的变化趋势;当处理3 h时,不同温度下的GSTs活力值分别是(0.5114±0.0116)(35℃)、(0.5426±0.0009)(38℃)、(0.4861±0.0073)(41℃)、(0.3657±0.0029)(44℃)、(0.3404±0.0156)mmol/min(47℃)。因此高温对扶桑绵粉蚧体内的POD和GSTs活力存在影响。

谷胱甘肽过氧化物酶模拟物2-位碲桥联环糊精的合成及催化作用

以 β 环糊精 (CD)为酶模型 ,将Te引入 β 环糊精中 ,成功地合成出一种新的水溶性好、活力高的谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)小分子模拟物 2 TeCD ,并对其结构进行了表征 .采用Wilson辅酶偶联法 ,间接测定了 2 TeCD催化还原型谷胱甘肽(GSH)还原H2 O2 的GPX活力为 46 7U/ μmol,与文献报道的数据相比 ,2 TeCD的GPX活力最高 .通过考察 2 TeCD催化GSH还原H2 O2 反应的动力学 ,发现反应初速度对底物浓度的双倒数曲线为一组平行线 ,表明 2 TeCD所遵循的催化机制可能为三转移乒乓机制 .通过考察自由基捕获剂 2 ,4 二叔丁基甲基苯酚对酶促和自发反应速率的影响 ,发现 2 TeCD催化的酶促反应为非自由基机理 .通过考察酶不可逆抑制剂碘乙酸对酶促反应速率的影响 ,发现 2 TeCD催化反应过程中不生成碲醇中间体 .由此推测出 2 TeCD的催化循环经历碲硫化合物、次碲酸硫酯和次碲酸中间体 .该催化循环与含硒GPX小分子模拟物所经历的催化循环不同 ,以及环糊精对底物具有识别与结合的能力 ,可能是 2

谷胱甘肽过氧化物酶模拟物6-CySeCD对过氧化氢诱导小鼠成纤维细胞损伤的保护作用

考察不同剂量的H2O2作用于小鼠成纤维细胞(NIH3T3)后,细胞脂质过氧化、存活率、DNA片段化的变化情况,并研究谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)的模拟物6A,6B-环己胺-6A′,6B′-硒桥联-β-CD(6-CySeCD)抗H2O2诱导小鼠成纤维细胞损伤的能力.结果表明:H2O2对NIH3T3细胞有严重损伤;6-CySeCD能有效保护细胞,防止紫外线引起的损伤.

硒-谷胱甘肽过氧化物酶在脑抗氧化损伤中的研究进展

硒是人体必需的微量元素之一,硒半胱氨酸是谷胱甘肽过氧化物酶的活性中心,脑内的谷胱甘肽过氧化物酶通过多种途径,不同机制清除脑内的氧代谢产物,谷胱甘肽过氧化物酶减少和活性降低可能与脑智力发育障碍、大脑缺血缺氧损伤、神经变性疾病及重金属中毒的发生有关,因此提高脑内谷胱甘肽过氧化物酶的浓度可能能够防止脑细胞受到氧化损伤,保护大脑功能。

谷胱甘肽过氧化物酶-1在糖尿病及其血管并发症中的研究进展

近年来，随着人们生活水平的提高，膳食结构的变化，糖尿病患病人数及糖耐量异常人数呈逐年上升趋势。最新数据显示，中国人糖尿病患病率在过去20年上升近3倍，已达7％，估计患病人数约4000万，占全球糖尿病患者总数的1／5。糖尿病及其血管并发症对人类健康产生了巨大威胁。最近研究表明，氧化应激增加在糖尿病及糖尿病各种并枯痒的发毕、发展中托重兽作用,

马铃薯腐烂茎线虫谷胱甘肽过氧化物酶基因(Dd-Gpx)的克隆与原核表达

旨在研究植物寄生线虫谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GPX)的结构和功能,通过RACE技术克隆了马铃薯腐烂茎线虫(Ditylenchus destructor)Gpx基因,并成功克隆到p ET-41b载体上进行融合表达。结果表明,该基因c NDA全长950 bp,含有1个681 bp的开放阅读框,共编码226个氨基酸。生物信息学分析显示,该蛋白N端有明显信号肽,属于分泌蛋白。将其克隆到p ET-41b载体在BL21(DE3)中进行原核表达,结果显示,在60 k D处有一条明显的带。经质谱鉴定,此条带有7个肽段与马铃薯腐烂茎线虫GPX匹配。表明重组Dd-GPX蛋白表达成功。

肉雏鸡肝细胞谷胱甘肽过氧化物酶mRNA表达产物的RT-PCR检测

细胞谷胱甘肽过氧化物酶 (cGPX)是动物体内一种重要的抗氧化酶。建立了利用RT PCR并以 β 肌动蛋白 (β Actin)为内参照定量分析cGPXmRNA表达的方法。提取肉鸡肝总RNA ,经反转录和PCR扩增 ,PCR产物的电泳条带于VDS摄像系统扫描灰度。寻求PCR线性扩增范围 ,确定RT PCR的最佳循环次数和模板量。通过计算cGPXPCR产物与 β 肌动蛋白PCR产物的灰度之比 ,即可得出cGPXmRNA的相对含量。