谷胱甘肽S-转移酶Zeta类基因在酿酒酵母中的表达

谷胱甘肽S-转移酶Zeta类（GSTZ）是一种重要的多功能酶，与细胞生化代谢、环境净化等密切相关。将拟南芥、甘蓝型油菜品系陕2B与垦C1的GSTZ基因克隆到大肠杆菌-酿酒酵母穿梭表达载体pYES2的多克隆位点，筛选到重组子后，提取重组质粒并将其转入酿酒酵母营养缺陷型菌株INVSc1细胞中，经SC-U培养基选择得到重组酵母Y2At、Y2BnB和Y2BnC。重组酵母在含棉子糖和半乳糖的诱导培养基中，表达出了具有二氯乙酸脱氯活力的谷胱甘肽S-转移酶Zeta类，且主要以可溶状态存在于酵母细胞中。不同碳源比较发现，使用半乳糖为唯一碳源时，与棉子糖和半乳糖共同使用相比，酵母生长虽受到轻微影响，但表达的GSTZ比活力几乎不受任何影响。0～96h诱导时间的优化实验表明，36h诱导下呈现最高比活力。同时也对不同GSTZ的Km值进行了比较。

拟南芥谷胱甘肽S-转移酶Zeta类进化酶的获得及其特性分析

拟南芥谷胱甘肽S-转移酶Zeta类(AtGSTZ)是一种与细胞代谢和环境净化密切相关的多功能酶.应用易错PCR和多轮DNA洗牌技术构建了AtGSTZ随机突变文库,再利用pH指示剂颜色改变法对突变文库进行筛选,获得了9个二氯乙酸脱氯活性提高的突变子.其中,NN23含25个氨基酸突变,比活力提高120%,NN20含24个氨基酸突变,比活力提高102%,EC1含2个氨基酸突变,比活力提高47%,其他6个为单点突变,比活力分别提高9%～60%.酶学分析显示,所有进化酶对底物二氯乙酸的催化效率和对谷胱甘肽的亲和力以及个别进化酶的复性能力都得到不同程度的提高,但热稳定性均没有明显改善.同时,对一系列与AtGSTZ空间折叠及催化活性相关位点进行了讨论.

对乙酰氨基酚致小鼠肝微粒体谷胱甘肽S-转移酶的激活机制

目的 探索大剂量对乙酰氨基酚 (Par)在体内对小鼠肝微粒体谷胱甘肽S 转移酶(mGST)活性的影响及其可能的机制。方法 小鼠饮用 1 0 %乙醇 7d以诱导肝药酶 ,Par90 ,1 5 0 ,2 1 0mg·kg-1ip ,在 6h内测定肝mGST活性及谷胱甘肽 (GSH)含量 ,结合二硫苏糖醇(DTT)逆转与N 乙基马来酰亚胺 (NEM)激活效应来探讨mGST活性变化机制 ,并用SDS PAGE和负染凝胶法评价Par对mGST蛋白分子量及含量的影响。结果 ipPar90～ 2 1 0mg·kg-1,在短时间内引起小鼠mGST活性增加 ,GSH含量减少。mGST活性的改变与Par处理之间存在时效及量效关系。Par引起的mGST的激活效应不被二硫键断裂剂DTT逆转 ,NEM在Par激活的mGST半胱氨酸 49巯基 (Cys 49 SH)上总激活效应降低 ;激活的mGST未见蛋白分子量变迁及蛋白表达增加。结论 大剂量Par引起小鼠体内mGST活性增加 ,其激活机制主要与Cys 49

微小RNA-25-3p靶向下调甘油磷酸二酯酶磷酸结构域5基因对乳腺癌细胞顺铂耐药性的影响

目的探讨微小RNA-25-3p(miR-25-3p)靶向甘油磷酸二酯酶磷酸结构域5(GDPD5)对乳腺癌细胞顺铂耐药性的影响及分子机制。方法本研究起止时间为2018年10月至2019年6月,人乳腺癌细胞MCF-7和乳腺癌顺铂耐药细胞MCF-7/DDP购于中国科学院上海细胞研究所,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测正常乳腺癌细胞MCF-7和乳腺癌顺铂耐药细胞MCF-7/DDP中miR-25-3p、GDPD5和谷胱甘肽巯基转移酶π(GST-π)的表达水平。四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法检测过表达miR-25-3p或过表达miR-25-3p联合顺铂对MCF-7/DDP细胞的增殖抑制作用,蛋白质印迹法检测GDPD5、GST-π和细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)蛋白的表达水平。双荧光素酶报告基因实验和蛋白质印迹法验证miR-25-3p和GDPD5的靶向关系。结果与MCF-7细胞相比,MCF-7/DDP细胞中miR-25-3p的表达显著下调,GDPD5和GST-π的表达显著上调。过表达miR-25-3p后,MCF-7/DDP细胞存活率显著降低[(50.36±5.04)%比(100.00±10.11)%],CyclinD1相对表达水平降低(0.40±0.05)比(1.12±0.11),GST-π表达水平降低(0.35±0.04)比(1.15±0.12);且过表达miR-25-3p可降低MCF-7/DDP细胞的顺铂耐药性。miR-25-3p可靶向负性调控GDPD5的表达。过表达GDPD5可部分逆转miR-25-3p对MCF-7/DDP细胞增殖和顺铂耐药性的影响。结论miR-25-3p通过靶向下调GDPD5抑制MCF-7/DDP细胞存活,进而降低MCF-7/DDP细胞对顺铂的耐药性。

注射用还原型谷胱甘肽治疗酒精性肝病患者前后ALT、AST、GGT的变化

目的观察注射用还原型谷胱甘肽（阿拓莫兰）注射液治疗酒精性肝病患者前后血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）、γ-谷氨酰转移酶（GGT）的变化。方法49例酒精性肝病患者随机分为对照组（24例）和治疗组（25例），两组患者均在戒酒的基础上给予甘草酸二铵、丹参等基础治疗。治疗组加用阿拓莫兰，疗程21d。分别采集患者治疗前后的血清标本，做ALT、AST、GGT检测。结果两组治疗后与治疗前比较，ALT、AST、GGT明显改善，差异有统计学意义（P〈0．05）；两组治疗后比较，治疗组ALT、AST、GGT改善明显[分别为（42±9）U／L比（99±53）U／L、（49±19）U／L比（135±42）U／L、（67±217）U／L比（189±47）U／L]，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论阿拓莫兰治疗酒精性肝病疗效确切，ALT、AST、GGT指标改善明显。

DPYD、GSTP1、MTHFR基因多态性对5-FU类基础化疗结直肠癌患者疗效的影响

目的探讨二氢嘧啶脱氢酶基因(DPYD)、谷胱甘肽S转移酶P1(GSTP1)和亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)与接受以5-FU类为基础的化疗方案治疗的结直肠癌(CRC)患者疗效的关系。方法选择晚期CRC患者90例,其中接受FOLFOX方案34例、接受CapeOX方案56例,化疗至少3周期后评价疗效,应用荧光染色原位杂交测序法检测患者外周血DPYD(rs3918290、rs55886062)、GSTP1(rs1695)、MTHFR(rs1801133、rs1801131)基因型,分析各基因型与CRC患者近期疗效的关系。结果90例CRC患者中,DPYD 2个位点(rs3918290、rs55886062)均为野生型,该样本不符合Hardy-Weinberg遗传平衡检验;携带GSTP1(rs1695)AA、AG+GG基因型的患者化疗后有效率分别为18.9%(17/90)和21.1%(19/90),AG+GG基因型患者化疗失败的可能性是AA型的3.193倍(OR=3.193,95%CI:1.307~7.804,P<0.05);携带MTHFR(rs1801133)CC、TC+TT基因型的患者化疗后有效率分别为6.7%(6/90)和26.7%(24/90),TC+TT基因型患者化疗失败的可能性是CC型的4.000倍(OR=4.000,95%CI:1.431~11.180,P<0.05);携带MTHFR(rs1801131)AA、AC+CC基因型的患者化疗后有效率分别为30.0%(27/90)和10.0%(9/90),二者比较差异无统计学意义(P<0.05)。结论GSTP1(rs1695)及MTHFR(rs1801133)基因多态性与5-FU类药物的疗效有关,而MTHFR(rs1801131)基因多态性与5-FU类药物的疗效无关,检测GSTP1(rs1695)、MTHFR(rs1801133)单核苷酸多态性可以成为预测晚期CRC患者接受以5-FU类为基础的化疗方案疗效的指标。

5-氨基乙酰丙酸对中华稻蝗(Oxya chinensis)的杀虫活性及对3种酶活性的影响

【目的】研究5-氨基乙酰丙酸(5-aminolevulinic acid,ALA)对中华稻蝗(Oxya chinensis)的杀虫活性及对3种酶活性的影响。【方法】以中华稻蝗4龄若虫为试验材料,用不同剂量的ALA(A1:250mmol·L-1;A2:450mmol·L-1;A3:750mmol·L-1;A4:1000mmol·L-1)处理中华稻蝗,观察其对中华稻蝗的毒性效应和对其体内乙酰胆碱酯酶(AChE)、谷胱甘肽S-转移酶(GSTs)和谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)活性的影响。【结果】不同剂量ALA处理组中华稻蝗死亡率依处理剂量呈现上升趋势,高浓度处理组A3、A4的死亡率分别达到66.19%和80.21%;LD50值为3.61(3.29～3.93)mg·g-1虫重(95%置信范围)。生化研究结果显示,最高浓度A4处理组雌、雄虫体内AChE活性分别较对照组下降了51.53%和42.65%,差异显著(P<0.05);GPx活性分别较对照组下降了42.82%和43.85%,差异显著(P<0.05)。同时,中华稻蝗GSTs活性随ALA处理剂量升高而增高,A4处理组雌、雄虫体内GSTs活性分别较对照组升高了171.05%及97.42%,差异显著(P<0.05)。【结论】ALA对雌、雄中华稻蝗均有明显的毒性效应;ALA可引起AChE和GPx光失活,从而导致中华稻蝗神经传导受阻同时抵御氧化损伤的能力下降;高剂量ALA激活GSTs,可引发昆虫对光毒性物质的自身反馈抵御反应。

谷胱甘肽硫转移酶M5通过p38MAPK/NF-κB途径下调肿瘤坏死因子α介导的人支气管上皮细胞炎症水平

目的探讨急性肺损伤炎症状态下谷胱甘肽硫转移酶M5(GSTM5)对人支气管上皮细胞16HBE炎症水平的影响及其可能的分子机制。方法肿瘤坏死因子α(TNF-α;10 ng/m L)诱导16HBE,建立急性肺损伤细胞炎症模型,分组处理如下:空白对照组、TNF-α组(TNF-α)、GSTM5组(GSTM5+TNF-α)、阴性对照组(阴性对照质粒+TNF-α)。GSTM5组及阴性对照组分别采用脂质体Lipofectamine2000转染导入GSTM5-GFP质粒及阴性对照质粒;酶联免疫吸附试验检测各组细胞上清液中IL-6、IL-8、IL-10的含量,反转录聚合酶链反应检测NF-κB mRNA表达水平,蛋白质印迹法检测NF-κB、P-NF-κB、p38、P-p38蛋白表达水平。结果荧光显微镜检查证实成功构建GSTM5-GFP真核表达质粒并转染成功。TNF-α诱导后,细胞培养上清液中IL-6、IL-8、IL-10浓度较空白对照组升高(P<0.05),GSTM5组细胞上清液中IL-6、IL-8、IL-10均较TNF-α组降低(P<0.05),差异有统计学意义;同时,TNF-α刺激后各组细胞总NF-κB mRNA转录水平、NF-κB、p38磷酸化水平均较空白对照组增高(P<0.05),而GSTM5组较TNF-α组与阴性对照组降低(P<0.05)。结论过表达GSTM5可下调TNF-α诱导的人支气管上皮细胞16HBE炎症水平,其机制与GSTM5抑制p38MAPK、NF-κB磷酸化密切相关。

人类髓样分化蛋白-2的原核表达

目的 :在大肠杆菌DH 5α中表达人类髓样分化蛋白 2 (humanmyeloiddifferentiatonprotein 2 ,hMD 2 )与谷胱甘肽巯基转移酶 (glutathione s transferase ,GST)的融合蛋白 (GST/hMD 2 ) ,并对融合蛋白进行免疫学鉴定及初步的变性复性处理 .方法 :建立GST/hMD 2表达菌 ,在不同温度下以不同浓度IPTG诱导不同时间后采样 ,用SDS PAGE分析各种组合条件下融合蛋白的表达量和溶解性 ;用Western Blot鉴定融合蛋白免疫性 ;用尿素变性和透析法对融合蛋白进行初步纯化 .结果 :在 37℃经 0 .4mmol/LIPTG诱导 4h后 ,GST/hMD 2可获最高表达量 (约占菌体总蛋白的 2 0 % ) ,未见可溶性表达 ;Western Blot证实GST/hMD 2能与抗MD 2单克隆抗体特异性结合 ;GST/hMD 2溶于 8mol/L尿素 ,梯度透析后纯度提高至4 0 % .结论 :hMD 2可在大肠杆菌DH

芍药醇调控miR-122-5p/GSTM1分子轴对缺血再灌注心肌细胞存活的影响

目的:探讨芍药醇对缺血再灌注心肌细胞存活的影响,并探讨其机制是否与调控miR-122-5p/谷胱甘肽转移酶M1(GSTM1)分子轴有关。方法:将H9C2细胞分为正常对照(NC)组、缺血/再灌注(I/R)组、I/R+低-中-高芍药醇组、I/R+anti-miRcon组、I/R+anti-miR-122-5p组、I/R+芍药醇+miR-con组、I/R+芍药醇+miR-122-5p组、I/R+芍药醇+miR-122-5p+pc DNA-con组、I/R+芍药醇+miR-122-5p+pc DNA-GSTM1组,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞活力;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和蛋白质印记(Western blot)检测miR-122-5p、GSTM1表达;双荧光素酶报告基因实验和Western blot确定miR-122-5p对GSTM1的靶向作用。结果:I/R处理后,H9C2细胞存活率、GSTM1表达降低,miR-122-5p表达升高(P<0.05)。芍药醇干预后,H9C2细胞存活率、GSTM1表达升高,miR-122-5p表达降低(P<0.05)。抑制miR-122-5p表达后H9C2细胞存活率升高,从而减轻I/R对H9C2细胞的抑制作用(P<0.05)。过表达miR-122-5p可逆转芍药醇对I/R处理下H9C2细胞存活的保护作用(P<0.05)。过表达GSTM1可逆转miR-122-5p对芍药醇干预的I/R处理下H9C2细胞存活的影响(P<0.05)。结论:GSTM1是miR-122-5p的靶基因,miR-122-5p对GSTM1具有负性调控作用。芍药醇可提高I/R条件下心肌细胞存活率,其机制与下调miR-122-5p/GSTM1分子轴有关。

HIF-1α、GLUT1、MRP1和GST-π在非小细胞肺癌组织中的表达及意义

目的:探讨低氧诱导因子-1(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)、葡萄糖转运蛋白-1(glucose transporter1,GLUT1)、多药耐药相关蛋白(multidrug resistance-associated proteins,MRP1)和谷胱甘肽-S-转移酶(glutathione-S-tranferase,GST-π)的mRNA在非小细胞肺癌(non-small cell lungcancer,NSCLC)组织中的表达水平以及与肺癌生物学特性的关系。方法:采用RT-PCR、凝胶电泳半定量方法检测36例肺癌组织和12例癌旁组织中HIF-1α、GLUT1、MRP1和GST-π的表达,并采用SAS8.0统计软件分析它们在TNM分期中的表达情况。结果:4个基因的mRNA在癌症组织中的表达明显高于癌旁组织(P<0.01),在有淋巴结转移组和有远端转移组中的表达均明显高于无淋巴结转移组和无远处转移组(P<0.01和P<0.05);HIF-1α和GLUT1在T3、T4期中的表达明显高于在T1、T2期中的表达(P<0.01或P<0.05),MRP1、GST-π在各TNM分期中的表达则差异无统计学意义。结论:NSCLC组织中存在HIF-1α、GLUT1、MRP1和GST-π的过度表达,并均与淋巴结转移和远端转移相关;其中HIF-1α、GLUT1的表达随TNM分期的增加而增高,MRP1、GST-π表达则与TNM分期无关。HIF-1α与GLUT1的表达呈线性正相关(P<0.01),HIF-1α与MRP1和GST-π的表达均呈线性正相关(P<0.05),GLUT1与MRP1和GST-π的表达无相关性(P>0.05),MRP1和GST-π的表达呈线性正相关(P<0.05)。以上4个基因表达的增高可能是NSCLC发生、发展以及恶化的基因标志。

肺癌中MDR基因产物LRP、P-gp、GST-π、TopoⅡ的表达及临床意义

目的:探讨多药耐药(MDR)基因产物LRP、P-gp、GST-π、TopoⅡ在肺癌中的表达及临床相关性。方法:应用单克隆抗体、免疫组化技术S-P法,对70例肺癌标本进行上述4种MDR指标检测。结果:在肺癌组织中LRP、P-gp、GST-π、TopoⅡ表达的阳性率分别为75.7%、70.0%、82.9%、84.3%,其与性别、年龄、部位、临床分期无关(P>0.05);在未分化、小细胞型肺癌中LRP、P-gp、GST-π表达的阳性率明显降低(P<0.05),而TopoⅡ表达的阳性率则升高(P<0.05,低分化型肺癌除外)。结论:LRP、P-gp、GST-π、TopoⅡ在未化疗过的肺癌组织中均有不同程度的高表达,且与肺癌的某些生物学行为有关,联合检测有助于化疗药物的选择及预后的判断。

淫羊藿苷对大鼠肝药物代谢Ⅱ相酶和药物转运体的影响

目的揭示淫羊藿苷(icariin,ICA)对大鼠药物代谢Ⅱ相酶和药物转运体的影响,并比较月龄差异。方法6月龄和18月龄SD雄性大鼠随机分为6月龄大鼠生理盐水组(6NS)和ICA组(6ICA),18月龄大鼠生理盐水组(18NS)和ICA组(18ICA),每组8只,灌胃ICA(60 mg.kg-1)4 w后取肝脏,钙沉淀法提取肝微粒体,BCA法测定微粒体蛋白浓度。比色法测定谷胱甘肽-S-转移酶(glutathione S-transferase,GSTs)活性;紫外分光光度法测定尿苷-5'-二磷酸葡醛酰转移酶(uridine 5'-diphosphate glucuronosyl transferase,UGTs)活性;ELISA法测定有机阴离子转运多肽2(organic anion transporting polypeptide 2,Oatp2)和有机阴离子转运体2(organic anion transporter2,OAT2)含量;Real-Time RT-PCR检测UGT1A6、UGT2B7、GST-π、OAT2和Oatp2 mRNA表达。结果 ICA(60mg.kg-1)明显增加Oatp2和OAT2含量,上调OAT2和Oatp2 mRNA的表达,但未见明显月龄差异;对GSTs和UGTs活性以及UGT1A6、UGT2B7、GST-πmRNA的表达未见明显影响。结论 ICA对大鼠肝组织OAT2和Oatp2具有诱导作用,该作用未见明显月龄差异,对GSTs和UGTs无明显影响。

GST-π在上皮性卵巢癌组织中表达及与患者耐药、病理特征的关系

目的探讨上皮性卵巢癌组织中谷胱甘肽S转移酶(GST)-π的表达与患者铂类化疗耐药及临床病理学特征的关系。方法上皮性卵巢癌患者114例为研究对象,采用免疫组化染色检测术后卵巢癌组织中GST-π蛋白的表达水平,所有患者术后接受6～8个疗程的铂类药物化疗,观察GST-π蛋白表达与患者临床病理学特征及铂类耐药的关系。结果化疗耐药组GST-π蛋白阳性表达率(89.58%)显著高于化疗敏感型组(59.09%,P<0.05);不同年龄、FIGO分期、病理学分级、病理学类型、发生大网膜转移、淋巴结转移、腹水量的患者GST-π蛋白阳性表达率比较,差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论 GST-π蛋白阳性表达与上皮性卵巢癌患者的临床病理学特征无显著性关系,与患者铂类药物化疗耐药性关系密切。

植物GSTZ基因在毕赤酵母中的高效分泌表达

谷胱甘肽 S-转移酶 Zeta 类(GSTZ)是一种重要的多功能酶,与细胞生化代谢、环境净化等密切相关.将拟南芥、甘蓝型油菜"陕2B"和"垦C1"的 GSTZ 基因重组到表达载体 pPIC9,电转化到毕赤酵母株 GS115中,得到了分泌表达 GSTZ 酶的毕赤酵母工程菌株.甲醇诱导表达显示,最佳诱导时间在48～60 h,DCA-DC 比活力为83.21～115.31 U/mg,GSTZ 分泌量为25.71～42.90 U/mL.研究结果表明,植物 GSTZ 基因在毕赤酵母中的表达是高效的,为大规模发酵生产 GSTZ 奠定了基础.

GSTP1、MTHFR基因多态性与PF方案治疗食管癌疗效相关性研究

目的：了解食管癌患者谷胱甘肽S转移酶P1（glutathione S-transferase Pi-1,GSTP1）,亚甲基四氢叶酸还原酶（methylenetetrahydrofolate reductase,MTHFR）基因多态性分布频率,探讨GSTP1、MTHFR基因多态性与食管癌患者PF方案（顺铂联合5-氟尿嘧啶）化疗疗效相关性。方法：从168例接受PF方案化疗的食管癌病例中采外周血提取DNA,采用PCR法扩增目的基因片段,直接测序法分析GSTP1、MTHFR基因多态性,每两周期化疗后评价疗效一次,按照实体瘤的疗效评价标准进行评价。结果：168例食管癌患者PF方案化疗疗效评价（实体瘤的疗效评价标准RECIST 3.0）,CR 19例（11.3%）,PR 60例（35.7%）,SD 48例（28.6%）,PD 41例（24.4）,食管癌患者GSTP1基因野生型（AA）有效率为22.0%,杂合型（AG）＋纯合型（GG）有效率为25.0%,MTHFR C667T基因野生型（CC）有效率为14.3%,杂合型（CT）＋纯合型（TT）有效率为32.7%,MTHFR A1298C基因野生型（AA）有效率为17.3%,杂合型（AC）＋纯合型（CC）有效率为29.8%,其中GSTP1基因野生型（AA）与杂合型（AG）＋纯合型（GG）的OR=2.520,95%CI：11.237-25.191,P=0.012,MTHFR C6 6 7 T基因野生型（CC）与杂合型（CT）＋纯合型（TT）的OR=1.933,95%CI：5.987-16.354,P=0.032,MTHFR A1298C基因野生型（AA）与杂合型（AC）＋纯合型（CC）的OR=3.514,95%CI：19.018-27.332,P=0.511。结果显示食管癌患者GSTP1基因及MTHFR C667T基因多态性与PF方案化疗后疗效相关,且杂合型及纯合型疗效优于野生型。结论：GSTP1及MTHFR-C677T基因多态性与5-氟尿嘧啶的疗效具有相关性,而MTHFR-A1298C基因多态性与5-氟尿嘧啶的疗效无明显相关性,故检测GSTP1及MTHFR-C677T基因多态性可预测PF方案化疗疗效。

基于分子杂交和单分子PCR的同源基因克隆技术

文章以拟南芥谷胱甘肽-S-转移酶Zeta类(GSTZ)基因为饵基因,建立了一种基于分子杂交和单分子PCR的同源基因克隆新方法。获得的6个甘蓝型油菜GSTZ全长cDNA克隆中,有5个与GenBank注册序列(AY208158)完全相同。

肿瘤坏死因子-α可诱导GSTM5核转位

目的构建稳定表达谷胱甘肽S转移酶mu5(GSTM5)的人支气管上皮16HBE细胞株,探讨诱导GSTM5核转位的关键因素。方法构建表达GSTM5基因的重组慢病毒载体(PLVX-puro-GSTM5-SBP-3*flag-N、PLVX-puro-3*flag-SBP-GSTM5-C)并制备出相应的慢病毒,感染人支气管上皮16HBE细胞后,经嘌呤霉素筛选获得细胞克隆;实时荧光定量PCR和蛋白印迹法(Western blot)分别检测细胞株中GSTM5的mRNA、蛋白表达水平;以肿瘤坏死因子-α(TNF-α;10ng/ml)刺激稳定转染细胞株(稳转株)0.5h,共聚焦荧光显微镜检测GSTM5核转位。结果成功构建稳定表达GSTM5人支气管上皮细胞株(16HBE-GSTM5-SBP-3*flag-N、16HBE-3*flagSBP-GSTM5-C);荧光共聚焦显微镜显示稳转株在TNF-α刺激诱导后,GSTM5由胞浆转入胞核,以16HBEGSTM5-SBP-3*flag-N稳转株更显著。结论 TNF-α刺激可诱导GSTM5人支气管上皮细胞株中GSTM5发生核转位,可能与其N端含有非经典核定位信号密切相关。

胃癌组织LRP和GST-π及GCS表达临床意义的研究

目的:研究多药耐药蛋白肺耐药蛋白(LRP)、葡萄糖神经酰胺合成酶(GCS)、谷胱甘肽转移酶(GST-π)在胃癌组织中的表达及临床意义。方法:采用免疫组化法对经收集的63例胃癌组织标本及30例非癌性胃组织标本中及LRP、GST-π、GCS的表达情况进行研究,并且观察三者的表达与胃癌的组织学类型、浸润深度、年龄、性别、有无淋巴结转移等的关系。结果:LRP、GST-π及GCS在胃癌组织中的表达均高于非癌性胃组织,其阳性表达率分别为66.7%与43.3%、63.5%与40.0%及49.2%与23.3%(P值均<0.05)。LRP、GST-π、GCS在胃癌组织中的阳性表达率与有无淋巴结转移、年龄、性别、分化程度、不同的侵犯深度等均无明显关系。胃癌组织中LRP与GST-π(r=0.233,P=0.066)、LRP与GCS(r=0.225,P=0.077)、GST-π与GCS(r=0.153,P=0.232)的表达则无明显相关性。结论:LRP、GCS、GST-π在胃癌组织中存在高表达,是引起胃癌原发性耐药的重要多药耐药相关蛋白;它们在介导胃癌多药耐药时相互独立,且其表达与临床及病理学特征无明显相关性。