谷胱甘肽-S-转移酶-人表皮生长因子融合蛋白基因的表达及其产物的生物活性

目的 通过融合蛋白的表达使人表皮生长因子(hEGF)易于纯化。方法 构建基于tac启动子的pGEX 4T-1-hEGF原核表达载体,转化大肠杆菌BL2 1(DE3 ) ,以异丙基 1 硫代-β-D半乳糖苷诱导,表达谷胱甘肽 S 转移酶(GST) hEGF融合蛋白。结果 表达产物占细菌总蛋白的3 4%。部分为可溶性的,部分形成包涵体。菌体裂解上清液经GlutathioneSepharose 4B纯化后,SDS PAGE电泳出现一条3 2ku蛋白条带,与GST hEGF融合蛋白的计算分子量相符。菌体裂解液中的可溶性GST hEGF的产率为63mg·L- 1 。将其添加到培养的HEK-2 93细胞中,能明显促进该细胞的分裂和生长。结论 成功地构建并表达了GST-hEGF融合蛋白基因,其表达产物GST

人细胞色素P450 1A1与谷胱甘肽S-转移酶的融合蛋白及其抗体的制备

采用融合蛋白技术原核表达 CYP1 A1 (第 2 4 1- 381个氨基酸 )与谷胱甘肽 S-转移酶 (GST)的融合蛋白作为抗原 ,用于制备 CYP1 A1多克隆抗体 .根据正反重组质粒 p GEX/ 1 A1表达的融合蛋白大小不同的原理 ,直接表达筛选得到正向重组质粒p GEX/ 1 A1 .通过优化表达条件 ,提高了目的蛋白的表达水平 .包涵体蛋白经制备型聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE)分离 ,获含纯化融合蛋白 GST- 1 A1的 PAGE凝胶 .直接用含 GST- 1 A1的凝胶悬液免疫 BALB/ c小鼠 ,自腹水中获取 CYP1 A1多克隆抗体 (1 A1 p Ab) . 1 A1 p Ab用切胶纯化的融合蛋白GST- 2 B6交叉吸收 ,蛋白 A- Sepharose亲和层析柱来纯化 .用切胶纯化的融合蛋白 GST- 1 A1及 GST-2 B6的免疫印迹反应初步鉴定 1 A1 p Ab的特异性 .纯化的 1 A1 p Ab对融合蛋白 GST- 1 A1反应特异性较强 ,但仍对 GST- 2 B6有弱交叉反应 .

谷胱甘肽-S-转移酶-ASPP2融合蛋白的原核表达及纯化

为表达并初步纯化包含ASPP2活性区域和不包含其活性区域的谷胱甘肽-S-转移酶(GST)-ASPP2融合蛋白。采用PCR扩增两段ASPP2基因短片段,在引物5'端和3'端分别引入BamHⅠ和EcoRⅠ酶切位点,将其克隆进入原核表达载体pGEX-4T-1;异丙基硫代-半乳糖苷(IPTG)诱导重组质粒pGEX-4T-1-ASPP2在大肠杆菌BL21(DE3)中表达同时带有谷胱甘肽-S-转移酶(GST)标签的融合蛋白;超声法裂解大肠杆菌,应用谷胱苷肽琼脂糖树脂纯化可溶的GST-ASPP2融合蛋白;通过SDS-PAGE和Western blot验证GST-ASPP2融合蛋白的表达。结果表明,已成功的构建了GST-ASPP2小片段融合蛋白表达载体,在Western blot分析中,4个蛋白条带均能被鼠抗GST单克隆抗体特异性识别,条带所在位置和GST-ASPP2的分子质量相符。构建了GST-ASPP2重组质粒,在大肠杆菌BL21中高效表达GST-ASPP2融合蛋白,为进一步研究ASPP2全长,N-末端和C-末端生理意义奠定了基础。

万寿菊根提取物对山楂叶螨谷胱甘肽S-转移酶和蛋白酶及蛋白质含量的影响

采用常规生化实验方法,探讨了山楂叶螨在光、暗条件下经万寿菊根的氯仿提取物(TPC)作用后谷胱甘肽S-转移酶、蛋白酶活性及蛋白质含量.生物样品采用活体处理和离体处理相结合的方法.结果表明:万寿菊根氯仿提取物的光活化生物活性最高,其次为水提取物,最后为甲醇提取物;山楂叶螨经TPC处理后,谷胱甘肽S-转移酶和蛋白酶活性显著升高,蛋白质含量明显下降,蛋白酶及蛋白质含量变化程度在光照条件下显著高于黑暗处理.万寿菊根氯仿提取物中存在的活性物质,能够促进山楂叶螨离体酶液中蛋白酶的活化;TPC通过激活试螨体内的蛋白酶而促进蛋白质的降解.万寿菊次生物质的生物活性主要属于光活化活性.

植物谷胱甘肽S-转移酶(GSTs)及除草剂解毒剂的诱导作用

谷胱甘肽S-转移酶(Glutathione S-transferase,GSTs)是一个同工酶家族,由同源或异源二聚体组成,广泛分布于原核生物和真核生物(昆虫、哺乳动物和高等植物)中。其主要功能是催化某些内源性或外来有害物质的亲电子基团与还原型谷胱甘肽的巯基偶联,增加其疏水性使其易于穿越细胞膜,分解后排出体外,从而达到解毒的目的。GSTs可受多种因素的诱导,对一些有毒物质,包括农药、除草剂、致癌物和诱变剂等起到解毒的作用。文章介绍了植物谷胱甘肽转移酶的分类、命名、结构及典型底物,描述了除草剂和解毒剂对GSTs酶的诱导表达特性。

急性白血病患者谷胱甘肽S-转移酶和肺耐药相关蛋白的检测及临床意义

目的:探讨急性白血病(AL)患者细胞内谷胱甘肽S转移酶活力(GST)及肺耐药相关蛋白(LRP)表达与临床疗效的关系。方法:采用化学比色法检测57例AL患者骨髓单个核细胞内GST活力并同时采用免疫细胞化学(SABC)方法检测LRP表达。结果:AL患者细胞内GST活力明显高于对照组(P<0.01);AL患者细胞内GST活力与骨髓中原始及幼稚细胞百分数有一定相关性(r=0.30,P<0.05)。初治组AL患者细胞内GST活力明显高于化疗后缓解(CR)组(P<0.01),化疗后难治复发组患者细胞内GST活力又明显上升,显著高于缓解组(P<0.01)。化疗后17例AL患者LRP表达阳性,其中13例未缓解(NR),20例LRP表达阴性,其中CR12例,LRP阳性组疗效显著差于阴性组(P<0.05),且LRP阳性组NR患者及LRP阴性组NR患者GST活力均明显增高。结论:AL患者细胞内GST活力增高与临床疗效及骨髓原始及幼稚细胞增殖有关;同时检测AL患者GST活力与LRP表达对提高耐药白血病的疗效和预后有一定价值。

地方性砷中毒与易感标志物金属硫蛋白和谷胱甘肽S-转移酶关系的研究进展

地方性砷中毒（endemic arsenism）简称地砷病，是一种生物地球化学性疾病。是居住在特定地理环境条件下的居民．长期通过饮水、空气或食物摄入过量的无机砷而引起的．以皮肤色素脱失或／和过度沉着、掌跖角化及癌变为主要特征的全身性慢性中毒。无机砷是国际癌症研究中心（IARC）确认的人类致癌物，可致皮肤癌，肺癌。并伴有其他内脏癌高发。在重病区，恶性肿瘤死亡人数占总死亡人数的1／3～1／2，居首位．

谷胱甘肽S-转移酶-肌钙蛋白I(28～110aa)表达纯化及稳定性的初步研究

目的:评估重组融合蛋白谷胱甘肽S-转移酶(GST)-肌钙蛋白I(TnI)(28～110aa)的实用价值。方法:诱导表达菌株BL21-PGEX-4T-3/TnI(84～330bp)表达GST-TnI(28～110aa),谷胱甘肽Sepharose-4B亲合层析柱纯化融合蛋白,经自动免疫分析仪检测其免疫反应性。采用双抗体夹心ELISA法检测稳定性,并与天然提纯心肌肌钙蛋白I(cTnI)抗原进行比较。结果:GST-TnI(28～110aa)融合蛋白表达水平高,具较高免疫反应性。在37℃条件下,GST-TnI(28～110aa)融合蛋白第3天免疫反应性仍保留60%,而人心肌提纯的cTnI在第3天免疫反应性几近丧失。结论:GST-TnI(28～110aa)融合蛋白具较高的免疫反应性,与天然cTnI相比较,重组GST-TnI融合蛋白稳定性好,有望作为cTnI测定的候选参考标准品。

溴氰菊酯对麦穗鱼谷胱甘肽S-转移酶(GSTs)的影响

研究了溴氰菊酯不同浓度、不同处理时间对麦穗鱼体内谷胱甘肽S-转移酶(GSTs)活性的影响,同时测定了麦穗鱼不同组织中谷胱甘肽S-转移酶对低浓度溴氰菊酯处理的反应特点。结果表明,处理48 h后,高浓度(0.009 mg/L)组对肝中GSTs活性的抑制率达到43.7%,对鳃中GSTs活性的抑制率达54.3%;而低浓度组(0.001 mg/L)对鳃中GSTs活性有一定的诱导作用。亚致死剂量的溴氰菊酯(3.0×10-4mg/L)处理96 h后,对卵巢的诱导活性最高,其GSTs活性是对照的2.43倍,但对肝、鳃、肾、肠的诱导作用均较低。溴氰菊酯对麦穗鱼不同组织GSTs活性诱导的时间效应和强度不同。

谷胱甘肽S-转移酶的功能、应用及克隆表达

谷胱甘肽S-转移酶(glutathione S-transferases,GSTs,E.C.2.5.1.18)是由多个基因编码、具有多种功能的超家族酶,广泛存在于动物、植物、微生物等多种生物组织中。在生物体遇到高盐、干旱、除草剂、有机污染物等逆境时,GSTs常发挥其Ⅱ相代谢酶和抗氧化酶的双重功能,以保护生物体免受逆境的损害。文章综述了GSTs的分类、结构、功能、应用及克隆表达等方面的研究进展。

重金属胁迫下厚壳贻贝谷胱甘肽S-转移酶基因表达分析

谷胱甘肽S转移酶(Glutathione S-transferase,GST)因对环境污染反应灵敏,且具有降解毒物、抗氧化等作用常被作为水体污染的指示分子;厚壳贻贝对环境污染物具有很强的耐受性,是重要的海洋环境污染监测生物,因此研究厚壳贻贝GST分子及其表达特征,对正确使用其进行海洋环境污染预警具有重要价值。本文通过同源克隆法获得厚壳贻贝GST部分序列(Gene Bank序列号为KC176684),经序列比对和系统进化分析初步推断所得到的GST基因为pi型。鉴于铜和镉是目前海水中主要的重金属污染源,进一步利用实时荧光定量PCR技术检测铜和镉胁迫后GST在厚壳贻贝血液中的表达水平,结果显示铜(Cu2+浓度为20μg/L)和镉(Cd2+浓度为200μg/L)胁迫均造成GST高水平表达,但最高表达量出现的时间略有差别,Cu2+出现在刺激后第10 d,表达量为对照组的6.95倍,Cd2+则出现在第15 d,约为对照组的6.11倍,说明GST参与了厚壳贻贝重金属的解毒过程,且对于不同重金属胁迫的解毒能力稍有不同。鉴于厚壳贻贝GST对重金属刺激的敏感作用,可将其作为海水养殖环境污染监测的生物指示基因。

2-十三烷酮和槲皮素诱导棉铃虫谷胱甘肽S-转移酶组织特异性表达

利用分光光度酶动力学和定量PCR的方法,从蛋白质水平和基因水平上研究了棉铃虫幼虫谷胱甘肽S-转移酶(GST)的组织特异性表达和植物次生物质的诱导表达作用.结果表明,以1-氯-2, 4-二硝基苯(CDNB)为底物检测到的棉铃虫幼虫不同组织GST的活性与其GST mRNA相对表达量的趋势是一致的.酶动力学活性测定结果表明的棉铃虫各组织GST活性大小的顺序与定量PCR结果表明的各组织GST mRNA相对量大小的顺序都依次为:脂肪体、中肠、头和体壁.通过培养基混药法研究植物次生物质对棉铃虫幼虫GST的诱导表明,2-十三烷酮和槲皮素对棉铃虫幼虫GST活性的诱导与其对mRNA表达量的影响是一致的.2-十三烷酮对GST活性及其GST mRNA表达量的诱导作用比槲皮素强.说明mRNA的转录量增加是植物次生物质诱导GST活性增加的主要机制.该结果对于进一步研究植物次生物质诱导作用对棉铃虫对杀虫药剂敏感度的影响具有重要的意义.

猪囊尾蚴谷胱甘肽S-转移酶的表达研究

目的应用免疫组化、双向电泳（2-DE）结合蛋白质印迹（Western-blotting）技术分析猪囊尾蚴谷胱甘肽S-转移酶（GST）的表达。方法用猪带绦虫卵1 mL（8万个/mL）灌胃20d龄健康乳猪6头,于感染后40d、80d和120 d分别宰杀2头猪并取含囊尾蚴的肌肉及肝脏（120 d除外）制作4μm厚石蜡切片,采用Envision二步法,观察不同时期寄生在肌肉及肝脏的猪囊尾蚴GST的表达;同时制备感染后40d取自肌肉的猪囊尾蚴蛋白进行2-DE分析,将凝胶蛋白斑点转移至聚偏氟乙烯膜（PVDF膜）,用本课题组自制的大鼠抗猪带绦虫GST血清作为一抗、健康大鼠血清作为阴性对照进行western-blotting分析。结果不同时期寄生在肌肉及肝脏的猪囊尾蚴均表达GST,随感染时间增加,寄生在肌肉的猪囊尾蚴GST的表达变化不大（P〉0.05）,寄生在肝脏的猪囊尾蚴GST的表达升高（P〈0.05）;双向电泳凝胶共检测到207±9个蛋白质斑点,相对分子质量（Mr）为14 400-94 000,等电点（pI）为3.0-10.0。Western-blotting分析显示,实验组特异性抗原抗体阳性杂交斑点为1个,阴性对照未见阳性杂交斑点。将Western-blotting检测的抗原抗体阳性杂交斑点与原双向电泳凝胶斑点进行比对,找到对应蛋白斑点,经ImageMaster 2D Platinum 5.0软件分析后初步确定该蛋白斑点的pI/Mr为6.6/25 548,与猪带绦虫GST的理论推导值接近。结论感染时间及感染部位组织学特征不同,猪囊尾蚴GST的表达略有差异。

谷胱甘肽S-转移酶和乳酸脱氢酶在亚洲带绦虫囊尾蚴中的表达

为开发相关疫苗和治疗靶分子,应用免疫组化、双向电泳（2-DE）结合蛋白质印迹（Western-blotting）技术对亚洲带绦虫囊尾蚴谷胱甘肽S-转移酶（GST）和乳酸脱氢酶（LDH）的表达进行了研究。结果表明：亚洲带绦虫囊尾蚴表达GST,囊尾蚴的双向电泳凝胶共检测到204±11个蛋白质斑点,相对分子质量为Mr14 400~94 000,等电点（pI）为3.0~10.0;Western-blotting分析显示,GST和LDH特异性抗原抗体阳性杂交斑点均为1个,阴性对照均未见阳性杂交斑点;将Western-blotting检测的抗原抗体阳性杂交斑点与原双向电泳凝胶斑点进行比对,均找到对应蛋白斑点,经ImageMaster 2D Platinum 6.0软件分析后初步确定,该蛋白斑点的pI/Mr分别为6.5/25 588和8.2/35 318,与亚洲带绦虫GST和LDH的pI/Mr理论推导值接近。亚洲带绦虫囊尾蚴表达GST和LDH。

人胎盘谷胱甘肽S-转移酶的纯化和性质

将人胎盘组织粗匀浆经105000×g超速离心后,用S-已基谷胱甘肽-琼脂糖-6B亲和层析一步纯化法获得电泳纯的人胎盘GST(简称GST-π)。其比活性较粗匀浆高194.7倍,回收率为50％。再经DE_(52)交换柱进一步纯化,用KCl浓度梯度洗脱后为单一锐峰,等电聚集电泳呈一条带,等电点(pI)为4.60。GST-π经TSKgel-G3000SW柱高效液相层析,也为单一对称锐峰,测得其分子量为45.2kD;在SDS-PAGE电泳也为单一区带,测得其亚基单位的分子量为22.5kD。GST-π氨基酸组成分析可检出十六种氨基酸,其中以谷氨酸、亮氨酸、丙氨酸、天冬氨酸及甘氨酸含量较高。 GST-π酶动力学研究证明GST-π以GST和CDNB为底物时km值分别为0.16mmol/L和0.55mmol/L,经测定表明,GST-π的最适作用pH值为7.5,在pH6.5—9的范围内较为稳定,体外GST-π在温度超过25℃对容易失活。以GST-π为抗原,得到兔抗人GST-π抗血清,其效价为1:32,与人肝GSTs不发生免疫交叉反应。

谷胱甘肽S-转移酶-π与肿瘤多药耐药的研究进展

肿瘤多药耐药（MDR）是造成肿瘤化疗失败的主要因为,亦是近年肿瘤化疗的研究热点.随着对非P-糖蛋白（P-gp）介导的MDR机制研究的不断深入,证实谷胱甘肽S-转移酶-π（GST-π）在肿瘤MDR中发挥重要作用,有望成为新的肿瘤治疗靶点.本文就GST-π的生理特性、分布、耐药机制、检测手段和逆转由GST-π介导的MDR等方面作一综述.

谷胱甘肽-S-转移酶人趋化因子CCL3L1的表达

目的克隆人趋化因子CCL3L1基因,表达并初步纯化谷胱甘肽-S-转移酶(GST)-CCL3L1融合蛋白。方法从乳腺癌细胞MCF7中提取总RNA,采用RT-PCR扩增CCL3L1cDNA基因,克隆入GST融合表达载体pGEX-4T-1中,重组载体经酶切和测序鉴定后,在BL21大肠杆菌中用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,获得GST-CCL3L1融合蛋白,采用SDS-PAGE和Westernblotting分析表达产物。结果经测序、酶切鉴定证明CCL3L1基因已正确插入到pGEX-4T-1中,经IPTG诱导后,表达出相对分子质量为34000的新生GST-CCL3L1融合蛋白。结论GST-CCL3L1融合蛋白可被成功表达。

牛带绦虫成虫谷胱甘肽S-转移酶基因的生物信息学分析

目的:分析牛带绦虫成虫谷胱甘肽S-转移酶(GST)基因结构并预测其编码蛋白的结构和功能。方法:利用生物信息学网站如NCBI和ExPASY系统中的生物信息学分析工具,并结合其它分析软件,分析该基因的结构并预测其编码蛋白质的结构和功能。结果:该基因全长908 bp,编码区为135～771 bp,编码212个氨基酸,无各种亚细胞定位序列;与猪带绦虫GST的一致性为93%,相似性为96%;预测3个主要的抗原表位33～53 aa,62～68 aa,179～184 aa位于空间结构上相距较远的分子表面。结论:从牛带绦虫成虫cDNA文库中筛选出GST基因,预测为胞浆型蛋白,可能具有较好的免疫学诊断抗原应用前景。

肺癌患者血清谷胱甘肽S-转移酶活性测定及其意义

测定血清谷胱甘肽S-转移酶(GST)活性的结果表明,肺癌患者的血清GST活性(21.1±8.2IU/L)与正常人的(15.6±7.6IU/L)及肺部良性病患者的(16.3±9.1IU/L)均有极显著性差异(P<0.01),肺癌患者手术前后的无显著性意义(P>0.05)。由于个体差异明显,该结果对肺癌的诊断价值不大。发展免疫学方法测定患者血清GST各类同功酶则非常必要,此项工作正在进行中。

亚致死剂量溴氰菊酯对麦穗鱼谷胱甘肽S-转移酶活性的影响

本文研究了麦穗鱼Pseudorasboraparva谷胱甘肽S-转移酶的组织分布以及亚致死剂量的溴氰菊酯对其比活力和组织分布的影响。结果表明肝胰脏、肠、鳃、卵巢、肾、脾脏、鳔、肌肉谷胱甘肽S-转移酶(GSTs)活性分别占41.73%、14.31%、12.11%、10.10%、8.62%、5.23%、4.33%和3.58%。用溴氰菊酯亚致死剂量活体处理麦穗鱼120h后,卵巢和肾GSTs的活性与对照组具有显著差异,活性提高1.85倍;肠和鳃的GSTs活性分别是对照组的1.40倍和1.44倍;对肝脏GSTs活性的诱导不显著。这表明溴氰菊酯对麦穗鱼不同组织部位诱导的时间效应和强度是不同的。