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向日葵谷胱甘肽-S-转移酶基因的克隆及抗病功能研究 被引量:12
1
作者 马立功 孟庆林 +2 位作者 张匀华 刘志华 王志英 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期635-643,共9页
为探讨谷胱甘肽-S-转移酶(GST)基因在向日葵抗病机制中的作用,在核盘菌诱导向日葵转录组文库的基础上从向日葵耐病品种龙食葵2号中克隆了1个GST的c DNA序列,并进行了表达和功能分析。结果表明:该基因开放阅读框为675bp,编码224个氨基酸... 为探讨谷胱甘肽-S-转移酶(GST)基因在向日葵抗病机制中的作用,在核盘菌诱导向日葵转录组文库的基础上从向日葵耐病品种龙食葵2号中克隆了1个GST的c DNA序列,并进行了表达和功能分析。结果表明:该基因开放阅读框为675bp,编码224个氨基酸残基,分子量为55.45k D,等电点为5.16,命名为Ha GSTU1(Gen Bank登录号为KR071872);Ha GSTU1蛋白属于GST的Tau家族,推测是一种无信号肽的细胞质蛋白,其N端结构域包含结合GSH的G位点,C端结构域包含特异结合底物的H位点;Ha GSTU1与一个橡胶树GST蛋白的亲缘关系最近,氨基酸序列的相似性为72%。实时荧光定量PCR结果显示,该基因在叶中表达量最高,其次是花、根、种子和茎,在盘中的表达量最低;干旱、盐、草酸、核盘菌及其代谢物均能诱导向日葵Ha GSTU1基因的表达量出现显著变化。利用农杆菌介导法将该基因导入烟草,提高了转基因烟草叶片对核盘菌的抗性。对抗性株系烟草GST和谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)活性测定发现,转基因烟草叶片中GST和GPX酶活性较野生型提高约2倍,并随着接菌时间的延长,两种酶活性显著升高。初步推断Ha GSTU1具有抗核盘菌的功能。 展开更多
关键词 向日葵 谷胱甘肽-s-转移基因 基因克隆 功能分析
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一个橡胶树谷胱甘肽-S-转移酶基因的克隆和表达特性分析 被引量:12
2
作者 范玉洁 林飞鹏 +1 位作者 安泽伟 唐朝荣 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第20期4150-4158,共9页
【目的】从橡胶树中克隆Glutathione-S-transferase(GST)基因的cDNA和基因组DNA,进行序列、结构和系统进化分析,研究胁迫条件和激素处理下的表达谱。【方法】利用产排胶机理课题组构建的胶乳EST数据库,通过PCR技术克隆橡胶树GST基因的c... 【目的】从橡胶树中克隆Glutathione-S-transferase(GST)基因的cDNA和基因组DNA,进行序列、结构和系统进化分析,研究胁迫条件和激素处理下的表达谱。【方法】利用产排胶机理课题组构建的胶乳EST数据库,通过PCR技术克隆橡胶树GST基因的cDNA和基因组DNA;在线预测蛋白质保守功能域和亚细胞定位,构建系统进化树,利用实时荧光定量PCR分析割胶、伤害、低温、激素和死皮病等因素对该基因表达的影响。【结果】从橡胶树胶乳中克隆到1个GST基因的全长cDNA(793 bp),编码25.4 kD(219aa)蛋白,命名为HbGSTU1;克隆了HbGSTU1的基因组DNA(1 313 bp),包含1个内含子(520 bp)和2个外显子。HbGSTU1属于GST Tau家族,推测是一种无信号肽的细胞质蛋白,其N端结构域包含结合GSH的G位点,C端结构域包含特异结合底物的H位点;HbGSTU1与一个蓖麻GST蛋白的亲缘关系最近,氨基酸序列的一致性为85%;HbGSTU1的表达受割胶、伤害、低温、2,4-D、乙烯利和死皮病等因素调控,但对JA、SA和ABA处理的应答不明显。【结论】HbGSTU1是一个典型的GST Tau家族蛋白,可能在橡胶树抗逆过程中起作用,可作为橡胶树抗逆分子育种的靶标基因。 展开更多
关键词 橡胶树 谷胱甘肽-s-转移 基因表达 胁迫 激素
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野桑蚕谷胱甘肽-S-转移酶(GSTs)基因的诱导表达定量分析 被引量:6
3
作者 赵国栋 卫正国 +5 位作者 张轶岭 高瑞娜 王瑞娴 张婷 李兵 沈卫德 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期216-220,共5页
谷胱甘肽-S-转移酶(GSTs)在机体的解毒代谢和抗氧化中起重要作用。为了从分子水平上探究野桑蚕Bombyx mandarina对杀虫剂抗性的产生机理,本研究采用实时荧光定量RT-PCR方法,对GSTs基因在正常饲养野桑蚕5龄幼虫及用敌敌畏和溴氰菊酯处理... 谷胱甘肽-S-转移酶(GSTs)在机体的解毒代谢和抗氧化中起重要作用。为了从分子水平上探究野桑蚕Bombyx mandarina对杀虫剂抗性的产生机理,本研究采用实时荧光定量RT-PCR方法,对GSTs基因在正常饲养野桑蚕5龄幼虫及用敌敌畏和溴氰菊酯处理5龄幼虫不同组织中的转录水平进行检测,并采用Actin3内源参照基因对检测结果进行归一化处理。结果表明:用敌敌畏和溴氰菊酯处理5龄幼虫24h后,GSTs基因在各组织中的诱导转录水平存在差异,但GSTs基因在脂肪体中的诱导转录水平最高,其次为中肠,可能与这2种组织是野桑蚕主要的解毒器官有关。其中,GSTe2和GSTe5基因诱导转录水平相对较高,推测这2个基因可能主要参与野桑蚕对外源物质的解毒代谢。 展开更多
关键词 野桑蚕 谷胱甘肽-s-转移基因 组织 诱导表达 实时荧光定量PCR
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芸香苷对家蚕谷胱甘肽-S-转移酶部分基因的诱导表达 被引量:6
4
作者 张婷 卫正国 +4 位作者 高瑞娜 王瑞娴 赵国栋 李兵 沈卫德 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期20-26,共7页
谷胱甘肽-S-转移酶(glutathione-S-transferases,GSTs)是对一种机体的解毒代谢起重要作用并可以被诱导的酶系。为了从分子水平上探究家蚕Bombyx mori GSTs基因与植物次生物质芸香苷代谢的关系,本实验采用双跟踪标定定量PCR(dual-spike-i... 谷胱甘肽-S-转移酶(glutathione-S-transferases,GSTs)是对一种机体的解毒代谢起重要作用并可以被诱导的酶系。为了从分子水平上探究家蚕Bombyx mori GSTs基因与植物次生物质芸香苷代谢的关系,本实验采用双跟踪标定定量PCR(dual-spike-in qPCR)方法,用5×10^(-1),5×10^(-2),5×10^(-3) ng/μL 3个浓度芸香苷溶液处理家蚕5龄幼虫,并对各组织中GSTs Epsilon家族不同基因的转录水平进行检测。结果显示,浓度为5×10^(-2) ng/μL的芸香苷溶液能诱导GSTs基因的转录水平发生显著变化。在中肠中,BmGSTe1,BmGSTe2和BmGSTe6的诱导转录水平较高,在诱导后24 h达到最大值;在脂肪体中BmGSTe1,BmGSTe6和BmGSTe7的转录水平相对较高且分别在诱导后2 h,2 h和4 h达到最大值;而GSTs基因在马氏管中表达量均很低或者检测不到表达。与5×10^(-2) ng/μL浓度相比,5×10^(-1)ng/μL的芸香苷溶液诱导后各基因的转录水平上升的幅度较小并且达到峰值的时间不同,而5×10^(-3) ng/μL浓度的芸香苷溶液并不能使GSTs基因的诱导转录水平发生变化。结果提示,家蚕GSTs Epsilon家族基因对芸香苷的代谢具有重要作用。 展开更多
关键词 家蚕 谷胱甘肽-s-转移基因 芸香苷 双跟踪标定定量PCR 诱导表达
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家蚕谷胱甘肽-S-转移酶基因(BmGSTd1)的诱导表达定量分析 被引量:9
5
作者 赵国栋 卫正国 +1 位作者 李兵 沈卫德 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期46-51,共6页
谷胱甘肽-S-转移酶(GST)在机体的解毒代谢和抗氧化中起重要作用。为探究家蚕谷胱甘肽-S-转移酶基因(BmGSTd1)在家蚕体内的解毒和抗性功能,采用实时荧光定量PCR方法,对BmGSTd1基因在正常饲养及添食NaF家蚕5龄幼虫不同组织中的转录水平进... 谷胱甘肽-S-转移酶(GST)在机体的解毒代谢和抗氧化中起重要作用。为探究家蚕谷胱甘肽-S-转移酶基因(BmGSTd1)在家蚕体内的解毒和抗性功能,采用实时荧光定量PCR方法,对BmGSTd1基因在正常饲养及添食NaF家蚕5龄幼虫不同组织中的转录水平进行检测,并采用家蚕Actin3、GAPDH、28S rRNA 3种内参照基因对检测结果进行归一化处理。BmGSTd1基因在家蚕5龄幼虫各组织的转录水平存在差异,且采用不同内参照基因结果不一致:分别以家蚕Actin3、GAPDH、28S rRNA基因为内参照,该基因转录水平最高的组织分别为中肠、丝腺、脂肪体。5龄第2天幼虫添食NaF对体内各组织中BmGSTd1基因的转录水平具有诱导作用,且在不同组织中诱导表达的情况不同,采用以上3种内参照基因进行归一化处理的结果数据表明,中肠和脂肪体组织中的诱导转录水平最高,可能与这2种组织是家蚕主要的解毒器官有关。研究认为,检测基因在不同组织中的转录水平,采用合适的内参照基因对保证检测结果的可靠性非常重要。 展开更多
关键词 谷胱甘肽-s-转移基因 家蚕组织 诱导表达 实时荧光定量PCR 内参照基因
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青花菜谷胱甘肽-S-转移酶基因克隆及其表达分析 被引量:5
6
作者 高世超 林义章 +3 位作者 钟凤林 赵瑞丽 林琳琳 占丽英 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期651-657,共7页
为探讨青花菜在模拟酸雨胁迫下谷胱甘肽-S-转移酶的表达变化,克隆了青花菜谷胱甘肽-S-转移酶基因(glutathione-S-transferase,GST)的cDNA序列全长,并进行了生物信息学和表达分析。结果表明:青花菜GST基因cDNA全长为915bp,开放阅读框为64... 为探讨青花菜在模拟酸雨胁迫下谷胱甘肽-S-转移酶的表达变化,克隆了青花菜谷胱甘肽-S-转移酶基因(glutathione-S-transferase,GST)的cDNA序列全长,并进行了生物信息学和表达分析。结果表明:青花菜GST基因cDNA全长为915bp,开放阅读框为642bp,编码213个氨基酸,推测分子式为C1091H1719N289O306S5,分子量为23 940.7,没有跨膜螺旋区域和信号肽。系统进化树分析表明,该青花菜基因GST与芥菜的GST聚类关系最近。实时荧光定量PCR结果显示,在模拟酸雨胁迫下,GST基因的表达量在胁迫初期显著增大,随时间延长开始下降,表明其参与了青花菜抗酸雨的应答反应。 展开更多
关键词 青花菜 谷胱甘肽-s-转移基因 分子克隆 模拟酸雨 表达
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甘薯谷胱甘肽-S-转移酶基因在胁迫条件下的表达分析 被引量:12
7
作者 刘珣 何博文 张义正 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期859-864,共6页
成功地构建了甘薯谷胱甘肽-S-转移酶基因IBGSTU1的原核表达质粒pET-IbGST,并在大肠杆菌BL21(DE3)中进行IPTG诱导表达。重组蛋白部分以包涵体形式存在,部分以可溶性蛋白形式存在。酶活性测定表明可溶的重组蛋白具有GST的活性。纯化的重... 成功地构建了甘薯谷胱甘肽-S-转移酶基因IBGSTU1的原核表达质粒pET-IbGST,并在大肠杆菌BL21(DE3)中进行IPTG诱导表达。重组蛋白部分以包涵体形式存在,部分以可溶性蛋白形式存在。酶活性测定表明可溶的重组蛋白具有GST的活性。纯化的重组蛋白质用于多克隆抗体的制备。半定量RT-PCR和Western blotting分析结果显示,在正常的生长条件下,甘薯组织不启动IBGSTU1基因的转录和翻译,但是在冷胁迫或重金属离子等的作用下,可以检测到该基因的mRNA和编码的蛋白质,表明该基因在甘薯的胁迫耐受中行使重要功能,并发现该基因的表达具有组织特异性。 展开更多
关键词 甘薯 谷胱甘肽-s-转移 基因表达 冷胁迫 重金属诱导 RT-PCR 蛋白质印迹
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芸香苷诱导家蚕谷胱甘肽-S-转移酶omega家族基因的表达变化 被引量:4
8
作者 张婷 卫正国 +4 位作者 高瑞娜 王瑞娴 赵国栋 李兵 沈卫德 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期224-229,共6页
谷胱甘肽-S-转移酶(GST)是在机体的解毒代谢和抗氧化过程中起重要作用的超家族酶系。分析家蚕(Bombyx mori)GST omega家族基因在体内摄入植物次生物质芸香苷后的表达变化,为从代谢生理研究家蚕对农药的抗性,以及探讨植物次生代谢物质影... 谷胱甘肽-S-转移酶(GST)是在机体的解毒代谢和抗氧化过程中起重要作用的超家族酶系。分析家蚕(Bombyx mori)GST omega家族基因在体内摄入植物次生物质芸香苷后的表达变化,为从代谢生理研究家蚕对农药的抗性,以及探讨植物次生代谢物质影响鳞翅目害虫对农药的敏感性的机制提供参考。采用双跟踪标定定量PCR(dual-spike-in qPCR)方法,检测添食不同浓度芸香苷溶液的家蚕5龄幼虫的中肠和脂肪体中GST omega家族不同基因的转录水平,结果显示添食质量浓度为5×10-2 ng/μL的芸香苷溶液能诱导GST基因的转录水平发生显著变化:与对照相比,中肠中BmGSTo1、BmGSTo2和BmGS-To3基因在诱导后24 h的相对转录水平分别上升了7 143、1 391和3 398倍;在脂肪体中BmGSTo1的转录水平最高且在诱导后2 h达到最大值。与添食5×10-2 ng/μL芸香苷溶液处理组相比,添食5×10-1 ng/μL芸香苷溶液诱导后GST基因在蚕体组织转录水平上升的幅度较小,并且达到峰值的时间不同,而添食5×10-3 ng/μL芸香苷溶液诱导后并不能使GST基因的转录水平发生变化。研究结果提示:家蚕GST omega家族基因可能参与对摄入蚕体内的芸香苷的代谢。 展开更多
关键词 家蚕 谷胱甘肽-s-转移基因 芸香苷 双跟踪标定定量PCR 转录水平
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家蚕谷胱甘肽-S-转移酶E4基因的组织表达和序列特征及重组蛋白的酶活性分析 被引量:2
9
作者 谭祥 聂红毅 +5 位作者 刘春 胡晓明 陈全梅 刘茹凤 赵萍 夏庆友 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期624-633,共10页
昆虫体内的谷胱甘肽-S-转移酶(GSTs)主要行使对异生或内源有毒物质进行代谢解毒的功能。选择家蚕谷胱甘肽-S-转移酶E4的编码基因Bmgste4为靶标,研究其组织表达谱、序列结构特征及原核表达重组蛋白的酶活性。RT-PCR检测不同组织表达特征... 昆虫体内的谷胱甘肽-S-转移酶(GSTs)主要行使对异生或内源有毒物质进行代谢解毒的功能。选择家蚕谷胱甘肽-S-转移酶E4的编码基因Bmgste4为靶标,研究其组织表达谱、序列结构特征及原核表达重组蛋白的酶活性。RT-PCR检测不同组织表达特征的结果显示,Bmgste4基因在家蚕5龄第3天幼虫的头部、触角、下颚须、表皮、脂肪体、丝腺以及雄性个体的马氏管和雌性个体的卵巢中均有表达,而在血细胞、中肠以及雄性个体的精巢和雌性个体的马氏管中不表达。多序列比对结果显示BmGSTE4具有完整和保守的GST二级结构特征,N端氨基酸残基保守,特别是谷胱甘肽结合位点。构建插入Bmgste4基因开放阅读框片段的重组表达质粒p28-Bmgste4,并转化E.coli Rosetta(DE3)感受态细胞进行原核表达后,利用分光光度法测定重组蛋白对通用底物1-氯-2,4-二硝基苯的酶活参数:Km=0.58 mmol/L,Vmax=24.55μmol/(mg.min)。这些结果为进一步研究家蚕体内解毒和抗药性机制以及开发鳞翅目害虫新型生物防治药剂提供了基础信息。 展开更多
关键词 家蚕 谷胱甘肽-s-转移E4 基因表达谱 多序列比对 原核表达 活性
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汉族人群谷胱甘肽-S-转移酶M1、T1基因多态性分析 被引量:5
10
作者 武守山 邢朝斌 《中国优生与遗传杂志》 2005年第3期15-16,共2页
目的 分析汉族人群谷胱甘肽 -S -转移酶M 1、T1 (GSTM1、GSTT1 )的基因多态性分布。方法 样本为6 0名唐山地区汉族人群 ,采用多重等位基因聚合酶链反应 (PCR)方法分析GSTM 1和GSTT1基因多态性。结果 GSTM1缺失型和GSTT1缺失基因型频... 目的 分析汉族人群谷胱甘肽 -S -转移酶M 1、T1 (GSTM1、GSTT1 )的基因多态性分布。方法 样本为6 0名唐山地区汉族人群 ,采用多重等位基因聚合酶链反应 (PCR)方法分析GSTM 1和GSTT1基因多态性。结果 GSTM1缺失型和GSTT1缺失基因型频率分别为 33 3%和 1 1 7% ,同时具有GSTM1缺失型和GSTT1缺失型的个体频率为 1 7%。结论 唐山地区GSTM 1、GSTT1基因呈多态性分布 ,其等位基因和基因型频率不同于其他种族。 展开更多
关键词 GSTM1 GSTT1 谷胱甘肽-s-转移M1 基因多态性分布 汉族人群 缺失基因 PCR) 基因聚合 等位基因
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新生儿谷胱苷肽S转移酶μ1基因缺失状况的研究 被引量:1
11
作者 朱章菱 张利群 +2 位作者 刘敬忠 周艳 阎梅 《中国优生与遗传杂志》 1997年第5期11-14,共4页
谷胱苷肽S转移酶μ1(glutathioneStransferasesμ1,CSTμ1)对解毒香烟烟雾中的苯并(a)芘等致癌物有重要作用。现已证实正常人中约有50%缺失这种基因,这暗示将增加了肺癌发病的危险性。为了达到早期预防与预测,给新生儿以优育指... 谷胱苷肽S转移酶μ1(glutathioneStransferasesμ1,CSTμ1)对解毒香烟烟雾中的苯并(a)芘等致癌物有重要作用。现已证实正常人中约有50%缺失这种基因,这暗示将增加了肺癌发病的危险性。为了达到早期预防与预测,给新生儿以优育指导。本文采用双重PCR技术对106例新生儿脐血DNA进抒GSTμ1基因检测,并以健康人为对比,研究其缺失率为44.7%,同时新生儿与健康成人不同年龄组、新生儿男、女性别与成人男、女性别缺失率比较,经统计学卡方检验均无显著差异。提示GSTμ1基因缺失是新生儿自身遗传性不良因素,他(她)们如生活在香烟烟雾环境中,发生肿瘤危险性比无GSTμ1缺失的新生儿可能性大。并且通过本研究建立一种快速、准确的基因检测方法,有利于广泛群体筛查,应用临床及科学地指导优育有一定重要意义。 展开更多
关键词 谷胱苷肽 S转移酶μ1 基因缺失 新生儿
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谷胱苷肽硫转移酶Mu1-1(GSTM1)纯合缺失基因型的种族分布及其与肺癌易感性的关系 被引量:1
12
作者 张吉凯 王声湧 +1 位作者 胡毅玲 胡巢凤 《广东卫生防疫》 2001年第1期24-27,共4页
关键词 谷胱苷肽转移 GSTM1 纯合缺失基因 种族分布 肺癌易感性
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细粒棘球蚴中国大陆株谷胱苷肽S-转移酶基因的克隆和序列分析 被引量:3
13
作者 李宗吉 赵嘉庆 +5 位作者 王娅娜 王健 丁淑琴 黄瑾 张静 赵巍 《宁夏医学院学报》 2006年第1期4-6,共3页
目的对细粒棘球蚴谷胱苷肽S-转移酶基因进行克隆和序列分析。方法从包虫病患者体内获取细粒棘球蚴原头蚴提取总RNA,根据国外细粒棘球蚴谷胱苷肽S-转移酶基因的已知序列设计一对引物,采用RT-PCR技术扩增,将PCR产物纯化后,将其克隆到pGEM-... 目的对细粒棘球蚴谷胱苷肽S-转移酶基因进行克隆和序列分析。方法从包虫病患者体内获取细粒棘球蚴原头蚴提取总RNA,根据国外细粒棘球蚴谷胱苷肽S-转移酶基因的已知序列设计一对引物,采用RT-PCR技术扩增,将PCR产物纯化后,将其克隆到pGEM-T载体后进行序列测定以及生物信息学分析。结果用RT-PCR成功扩增出细粒棘球蚴中国大陆株谷胱苷肽S-转移酶基因,测序表明该基因开放阅读框为660bp,与已发表基因核苷酸序列相比,同源性为99%。结论成功克隆了细粒棘球蚴中国大陆株谷胱苷肽S-转移酶基因序列,为其进一步的研究奠定基础。 展开更多
关键词 细粒棘球蚴 谷胱苷肽S-转移基因 克隆 序列分析
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评价谷胱苷肽-S-转移酶无效基因型与Behcet病间的关系
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作者 Uzuno■luS. Acar H. +1 位作者 Okudan N. 刘艳 《世界核心医学期刊文摘(皮肤病学分册)》 2006年第3期33-34,共2页
Glutathione S-transferases (GST) play an important role in oxidative stress related syndromes. An imbalance of the oxidant and antioxidant systems is important in the pathogenesis of Behcet s disease (BD). The objec... Glutathione S-transferases (GST) play an important role in oxidative stress related syndromes. An imbalance of the oxidant and antioxidant systems is important in the pathogenesis of Behcet s disease (BD). The objective of this study was to evaluate the association of null genotypes of GST-M1 and GST-T1 with BD since some preliminary molecular genetic data were recently published. Ninety-four Turkish BD patients (42 male, 52 female, 37.1 ± 10.4 years) and 140 healthy volunteers (70 male, 70 female, 36.8 ± 11.7 years) matched for age and gender with the patients as the control group were included in the study. Distributions of GST-M1 and GST-T1 genotypes were determined by multiplexed PCR using three sets of primers for GST-M1, GST-T1, and β -globulin genes. There was no association between BD and the frequencies of GST-M1 and GST-T1 null genotypeswhen compared to controls by separate analysis. However, by cross and pooled combination analysis there was a significant association between the frequencies of pooled GSTs with one or both null genotypes in BD and controls. controls. This is the first evidence that the association between the frequencies of GST-M1 and GST-T1 null genotypes and BD might be dependent on the interaction of multiple null allele polymorphisms rather than a single null allele of GST-M1 and GST-T1. 展开更多
关键词 谷胱苷肽-s-转移 BEHCET病 基因型频率 无效 多重PCR检测 相关综合征 健康志愿者 β-球蛋白 抗氧化 发病机制
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谷胱甘肽-S-转移酶人趋化因子CCL3L1的表达
15
作者 徐斌 石英 +3 位作者 李俊红 张薇 吴昊 陈德喜 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期642-646,共5页
目的克隆人趋化因子CCL3L1基因,表达并初步纯化谷胱甘肽-S-转移酶(GST)-CCL3L1融合蛋白。方法从乳腺癌细胞MCF7中提取总RNA,采用RT-PCR扩增CCL3L1cDNA基因,克隆入GST融合表达载体pGEX-4T-1中,重组载体经酶切和测序鉴定后,在BL21大肠杆... 目的克隆人趋化因子CCL3L1基因,表达并初步纯化谷胱甘肽-S-转移酶(GST)-CCL3L1融合蛋白。方法从乳腺癌细胞MCF7中提取总RNA,采用RT-PCR扩增CCL3L1cDNA基因,克隆入GST融合表达载体pGEX-4T-1中,重组载体经酶切和测序鉴定后,在BL21大肠杆菌中用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,获得GST-CCL3L1融合蛋白,采用SDS-PAGE和Westernblotting分析表达产物。结果经测序、酶切鉴定证明CCL3L1基因已正确插入到pGEX-4T-1中,经IPTG诱导后,表达出相对分子质量为34000的新生GST-CCL3L1融合蛋白。结论GST-CCL3L1融合蛋白可被成功表达。 展开更多
关键词 趋化因子 CCl3l1 融合蛋白 谷胱甘肽-s-转移
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昆虫谷胱甘肽-S-转移酶的基因组学研究及其介导的抗药性 被引量:5
16
作者 房守敏 《蚕学通讯》 2010年第4期28-35,共8页
谷胱甘肽-S-转移酶(glutathione S-transferases,GSTs)是一类广泛分布于生物体的重要解毒酶系。它的功能广泛,主要包括催化还原型谷胱甘肽与有毒亲电子化合物扼合,以增加毒性物质的水溶性而排除体外;作为过氧化物酶,对脂质过氧化产物进... 谷胱甘肽-S-转移酶(glutathione S-transferases,GSTs)是一类广泛分布于生物体的重要解毒酶系。它的功能广泛,主要包括催化还原型谷胱甘肽与有毒亲电子化合物扼合,以增加毒性物质的水溶性而排除体外;作为过氧化物酶,对脂质过氧化产物进行解毒,从而降低氧化应激损伤;及以隔离机制被动结合杀虫剂等。昆虫GSTs主要分为6个已知的基因家族,其中Delta和Epsilon为昆虫特异的家族,已鉴定的抗药性相关基因则主要分属于这两个家族。本文主要对昆虫GSTs的比较基因组学及在杀虫剂抗性中的作用等相关研究进展进行综述。 展开更多
关键词 谷胱甘肽-s-转移 昆虫 杀虫剂 基因组学 抗药性
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与酵母Ure2p朊病毒结构域融合表达的谷胱苷肽-S-转移酶结构的改变
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作者 李运敏 饶子和 田波 《自然科学进展(国家重点实验室通讯)》 北大核心 2001年第9期929-934,T001,共7页
酵母朊蛋白Ure2蛋白(Ure2P)具有动物脱蛋白类似的构象转变特点,其N-端65个氨基酸是朊病毒结构域(PrD),对酵母朊病毒的发生起关键性作用,将PrD基因与谷胱苷肽-S-转移酶(GST)基因重组,在大肠杆菌中表达了可溶性的GST-PrD融合蛋白(sGST-PrD... 酵母朊蛋白Ure2蛋白(Ure2P)具有动物脱蛋白类似的构象转变特点,其N-端65个氨基酸是朊病毒结构域(PrD),对酵母朊病毒的发生起关键性作用,将PrD基因与谷胱苷肽-S-转移酶(GST)基因重组,在大肠杆菌中表达了可溶性的GST-PrD融合蛋白(sGST-PrD),sGST-PrD在体外自发地聚合成纤维,这种蛋白纤维的圆二色谱呈典型的β-折叠,对蛋白酶K的抵抗力增加,并具有淀粉样纤维的光学特性,聚合的GST-PrD(aGST-PrD)能促进sGST-PrD聚合成纤维,这些结果显示PrD能使与其融合的GST蛋白的构象发生变化,形成一种新的朊蛋白样嵌合蛋白,这是PrD改变其他蛋白构象的证据。 展开更多
关键词 酵母朊蛋白 Ure2p 朊病毒结构域 谷胱苷肽-s-转移 构象 融合表达 Β折叠
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褐飞虱谷胱苷肽转移酶基因cDNA片段的克隆、测序及表达分析
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作者 杨之帆 何光存 《武汉科技大学学报》 CAS 2007年第1期99-102,共4页
谷胱苷肽转移酶是昆虫体内重要的解毒酶系之一,研究水稻害虫褐飞虱的谷胱苷肽转移酶基因在褐飞虱与水稻互作中的表达变化,可为有效防治褐飞虱提供新的理论依据。利用反转录多聚酶链式反应(RT-PCR)技术克隆了褐飞虱谷胱苷肽转移酶基因编... 谷胱苷肽转移酶是昆虫体内重要的解毒酶系之一,研究水稻害虫褐飞虱的谷胱苷肽转移酶基因在褐飞虱与水稻互作中的表达变化,可为有效防治褐飞虱提供新的理论依据。利用反转录多聚酶链式反应(RT-PCR)技术克隆了褐飞虱谷胱苷肽转移酶基因编码区的cDNA片段,并使用Northern杂交技术检测了该基因对两种不同抗性水稻的分子反应。结果表明,所克隆到的cDNA片段长度为201bp,该片段所编码的氨基酸序列与来自大劣按蚊、细小按蚊、冈比亚按蚊、果蝇和木瓜果实蝇的谷胱苷肽转移酶的片段存在高度同源性。Northern杂交显示,在褐飞虱取食抗性水稻后,谷胱苷肽转移酶基因表达水平明显升高,但褐飞虱取食感虫水稻TN1后,该基因的表达水平没有明显变化。 展开更多
关键词 褐飞虱 RT—PCR 谷胱苷肽转移基因 Northern杂交分析
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多药耐药基因、谷胱甘肽-S-转移酶-π、胸苷酸合成酶在胃癌中的表达及意义
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作者 范瑞 吴光峰 +3 位作者 司成 付勇先 高峰 孙征 《中原医刊》 2007年第24期38-39,共2页
目的 检测多药耐药基因(P-gp)、谷胱甘肽-s-转移酶-π(GST-π)、胸苷酸合成酶(TS)在胃癌中的表达及其临床指标和预后关系。方法采用SP免疫组化法检测P-gP、GST-π、TS在62例胃癌患者中的表达。结果62例胃癌患者中P-gP、GST-π、T... 目的 检测多药耐药基因(P-gp)、谷胱甘肽-s-转移酶-π(GST-π)、胸苷酸合成酶(TS)在胃癌中的表达及其临床指标和预后关系。方法采用SP免疫组化法检测P-gP、GST-π、TS在62例胃癌患者中的表达。结果62例胃癌患者中P-gP、GST-π、TS表达率分别为77.4%、67.7%、12、9%。P-gP、GST-π表达率明显高于TS。结论P-gP、GST-π在原发性胃癌中有较高的表达率,P-gp的表达与分化程度和淋巴结转移有一定关系,可作为治疗和提示预后的指标。GST-π与肿瘤分化程度有一定相关性。P-gP、GST-π过表达导致胃癌化疗失败。鸭表达率低,提示5-FU可作为治疗原发性胃癌化疗的首选药物。 展开更多
关键词 多药耐药基因 谷胱甘肽-s-转移 胸苷酸合成 胃癌
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向日葵3个谷胱甘肽-S-转移酶GST基因的克隆及表达模式分析 被引量:4
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作者 凌云鹤 李静 +3 位作者 景兵 李春莲 肖恩时 王中华 《干旱地区农业研究》 CSCD 北大核心 2019年第5期92-98,共7页
从向日葵转录组测序结果中获得了3个对盐胁迫有响应的谷胱甘肽-S-转移酶(GST,EC 2.5.1.18)GST基因,构建了系统进化树并进行分析,得知这3个基因属于Tau型GST,并将它们命名为HaGSTU26(HanXRQChr04g0127901)、HaGSTU8(HanXRQChr06g0177581)... 从向日葵转录组测序结果中获得了3个对盐胁迫有响应的谷胱甘肽-S-转移酶(GST,EC 2.5.1.18)GST基因,构建了系统进化树并进行分析,得知这3个基因属于Tau型GST,并将它们命名为HaGSTU26(HanXRQChr04g0127901)、HaGSTU8(HanXRQChr06g0177581)、HaGSTU27(HanXRQChr10g0316331),然后以向日葵Sk02R为试验材料,克隆这3个基因,并进行了不同组织和不同胁迫条件下的表达分析。序列分析表明:HaGSTU26基因组为1674bp,CDS(编码蛋白序列)长666bp,编码221个氨基酸,由2个外显子和1个内含子组成;HaGSTU8基因组为2271bp,CDS长654bp,编码217个氨基酸,由2个外显子和1个内含子组成;HaGSTU27基因组为663bp,CDS长663bp,编码220个氨基酸,由1个外显子组成。实时荧光定量PCR分析表明:向日葵HaGSTU26、HaGSTU8、HaGSTU27基因在不同组织(根、幼叶、成熟叶、茎、幼茎、苞叶)中表达量不同,其中,HaGSTU26基因和HaGSTU27基因在根中表达量最高,而HaGSTU8基因在苞叶中表达量最高,但这3个基因均在成熟茎中的表达量最低。在不同胁迫条件下,测定这3个基因在向日葵幼苗中的表达量,结果表明在盐及ABA胁迫下,基因表达量均随着处理时间的增加而呈现先增加后下降的趋势。其中,在盐胁迫下,HaGSTU26基因在12 h后相对表达量最高,HaGSTU8及HaGSTU27基因表达量在3h后相对表达量最高。在ABA胁迫后,HaGSTU26及HaGSTU27基因表达量在12 h后相对表达量最高,HaGSTU8在24 h后相对表达量最高。在冷胁迫下,HaGSTU26和HaGSTU27基因上调表达,它们分别在3、24 h后相对表达量最高,HaGSTU8基因下调表达,其相对表达量随处理时间的延长呈现逐渐减少的趋势。在热胁迫条件下,这3个基因的相对表达量随着胁迫时间的延长而增加,均在24 h后表达量最高。以上结果说明这3个基因对不同非生物胁迫(盐、ABA、冷、热胁迫)均有响应。 展开更多
关键词 向日葵 谷胱甘肽-s-转移GST基因 基因克隆 基因相对表达量
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