侵染豌豆的两种病毒病的初步鉴定

从江苏、四川省豌豆田中表现花叶症状的病株上分离得到病毒分离物 P-89、P-23.经寄主范围、体外抗性、蚜传及种传试验,病毒粒体形态及内含体观察,血清学试验,P-89分离物鉴定为豌豆花叶病毒.P-23分离物为马铃薯 Y 病毒组成员.

侵染花叶青木的病毒种类鉴定及其基因序列分析

【目的】探明采自云南和海南表现为黄化、皱缩等表型的花叶青木病毒种类。【方法】首先,利用转录组测序技术对来自云南省昆明市的花叶青木样品进行检测;然后,根据转录组测序结果,采用RT-PCR对采自云南省昆明市和海南省海口市的73份花叶青木样品开展转录组测序结果中发现的病毒种类检测验证,并扩增获得相关病毒基因片段,对这些病毒的基因序列进行比对分析。【结果】转录组测序结果发现,送测的花叶青木样品中含有蚕豆萎蔫病毒2号(broad bean wilt virus 2,BBWV2)、菜豆黄花叶病毒(bean yellow mosaic virus,BYMV)、黄瓜花叶病毒(cucumber mosaic virus,CMV)、豌豆耳突花叶病毒1号(pea enation mosaic virus 1,PEMV-1)和豌豆耳突花叶病毒2号(pea enation mosaic virus 2,PEMV-2)5种病毒的侵染。但随后对来自云南和海南的73份花叶青木样品的RT-PCR验证中,只检测到BBWV2、BYMV、CMV和PEMV-24种病毒。其中,云南和海南的样品中均能检测到BBWV2,总检出率为11.0%;而BYMV、CMV和PEMV-2仅在云南的样品中被检测到,检出率分别为5.5%、1.4%和1.4%。从两地采集的花叶青木样品中既未发现PEMV-1的侵染,也未发现BBWV2、BYMV、CMV和PEMV-2的复合侵染。为了进一步分析BBWV2、BYMV、CMV和PEMV-2花叶青木分离物与来自其他寄主植物相关病毒分离物的分子变异,选取检测到上述4种病毒的样品,分别对BBWV2、BYMV和CMV 3种病毒的cp及PEMV-2的RdRp序列进行扩增,并对扩增获得的BBWV2490 nt的small cp(GenBank登录号:OQ137565、OQ137566)、BYMV 499 nt的cp核心区域(GenBank登录号:OQ137568)、CMV 880 nt的cp(GenBank登录号:OQ137567)和PEMV-2800nt的RdRp核心区域序列(GenBank登录号:OQ137569)进行分析。序列比对分析结果表明,BBWV2云南与海南花叶青木分离物间存在85.9%的核苷酸序列一致性,二者与GenBank中其他BBWV2分离物分别存在79.8%—94.5%和80.2%—92.0%的核苷酸序列一致性;BYMV、CMV和PEMV-2云南花叶青木分离物与GenBank中相应病毒的核苷酸序列一致性分别为79.8%—99.0%、71.5%—99.4%和84.9%—98.0%。利用以上病毒相应基因核苷酸序列构建系统发育树,发现BBWV2云南和海南花叶青木分离物分别属于I组中的a亚组和b亚组;BYMV云南花叶青木分离物与伊朗(GenBank登录号:MN241051,MN241060)和伊拉克(GenBank登录号:JQ026005)蚕豆分离物具有较近的亲缘关系;CMV云南花叶青木分离物属于I组中的IB亚组,但与IB亚组的其他成员具有较远的亲缘关系;PEMV-2云南花叶青木分离物与云南豌豆分离物亲缘关系最近并聚为一组,但与其他分离物存在较远的亲缘关系。【结论】首次报道了花叶青木被病毒感染,同时也是BBWV2、BYMV、CMV和PEMV-2在花叶青木乃至桃叶珊瑚属植物上的首次报道,BBWV2、BYMV、CMV和PEMV-2花叶青木分离物与来自其他植物的相关病毒分离物存在较大的分子变异。

云南省豆科蔬菜常见病毒种类鉴定及发生分布

对云南省豆科蔬菜主要产区开展病毒病调查,并采集病样进行烟草花叶病毒(Tobacco Mosaic Virus,TMV)、豌豆种传花叶病毒(Pea Seed-borne Mosaic Virus,PSbMV)、菜豆黄花叶病毒(Bean Yellow Mosaic Virus,BYMV)、蚕豆萎蔫病毒2号(Broad Bean Wilt Virus 2,BBWV2)和番茄斑萎病毒(Tomato Spotted Wilt Orthotospovirus,TSWV)等豆科作物常见病毒的RT-PCR检测与鉴定.豆科蔬菜病毒病的症状蚕豆主要为坏死、花叶、畸形、卷叶等;豌豆主要为花叶,有时伴随有黄化、坏死、卷叶、畸形等;菜豆主要为花叶和皱缩;豇豆主要有斑驳、皱缩和叶脉黄化.检测结果发现,侵染豌豆的病毒有PSbMV,BBWV2和TSWV,检出率分别为44.74%,1.32%和1.32%;侵染蚕豆的病毒有BYMV,BBWV2和PSbMV,检出率分别为39.42%,9.62%和8.65%,存在PSbMV与BYMV复合侵染现象,二者的复合侵染率为4.81%;侵染菜豆的病毒有CMV,PSbMV和BYMV,检出率分别为8.57%,1.43%和1.43%;在豇豆上只检测到TSWV,检出率为9.38%.豆科蔬菜病毒病主要分布于昆明市、楚雄州、玉溪市和红河州等滇中、滇南地区,昆明市的样品主要检测到BBWV2,PSbMV,BYMV,CMV等;玉溪市样品检测到BBWV2,PSbMV,TSWV等;红河州样品检测到BBWV2,PSbMV等;楚雄州样品主要检测到BYMV,PSbMV等.当前为害云南蚕豆、豌豆、菜豆、豇豆的主要病毒有PSbMV,BYMV,CMV,BBWV2和TSWV 5种病毒,其中优势病毒为BYMV和PSbMV,PSbMV在云南省分布最广且检出率相对较高.

豌豆种传花叶病毒检测鉴定

豌豆种传花叶病毒(pea seed-borne mosaic virus,PSbMV)世界广泛分布,在国外已造成豌豆大量减产,国内有仅小范围低密度分布的报道。加拿大豌豆种子中挑拣皱缩、黑斑等症状的豌豆,先采用双抗体夹心酶联免疫吸附(DAS-ELISA)方法检出PSbMV阳性,再利用反转录PCR(RT-PCR)、序列比对分析和构建系统进化树对阳性样本进行验证鉴定,结果显示与PSbMV序列相似度为99.25%,综上确定从进境豌豆种子中检出豌豆种传花叶病毒。

Desiccation Alters the Stability and Distribution of Pea Seed_borne Mosaic Virus in Pea (Pisum sativum) Cotyledon Cells

As a seed transmitted pathogen, pea seed_borne mosaic virus (PSbMV) not only replicates in embryonic cells but can also withstand seed desiccation. To understand the mechanism of PSbMV tolerance to seed desiccation, the authors compared the stability of viral coat protein (CP) and the distribution of viral particles in the cotyledon cells of pea (Pisum sativum L.) embryos collected before and after the dehydration process. Before dehydration, when the embryo was fresh and immature, degradation of CP was observed and a predominantly perinuclear distribution of viral particles in the cotyledon cells was evident. After dehydration, when the embryo was dry and mature, degradation of CP did not occur and the perinuclear viral distribution disappeared. Instead, aggregates containing PSbMV CP were found in the cytoplasm. Electron microscopy showed that these aggregates were composed of PSbMV particles. The formation of PSbMV particle aggregates is apparently triggered by seed dehydration and may be favorable to the virus survival in the desiccated embryonic cells.