豨莶精醇结构修饰及其抗凝血因子Xa活性研究

豨莶草是我国传统中药,具有广泛的药理作用,比如抗炎镇痛、抗血栓、免疫调节、抗过敏、抗菌、抗疟、抗动脉粥样硬化、抗缺血性脑损伤、抗肿瘤等。化学成分和药理活性研究表明豨莶草中丰富的萜类化合物是豨莶草发挥多种功效的物质基础。豨莶精醇系从豨莶草中分离得到的二萜类化合物,药理作用研究表明豨莶精醇具有良好的抗血小板聚集、抗凝血、改善血液流变学作用。为了发现活性更好、开发价值更高的先导化合物,通过缩酮、氧化、缩合、溴代等系列反应,对豨莶精醇进行了结构修饰研究,得到豨莶精醇衍生物11个(化合物1~11)。根据核磁和质谱数据确定了衍生物的结构,并通过以凝血因子Xa(FXa)为靶标的计算机辅助药物设计结合体外抗FXa试验评价了衍生物的活性,结果显示在豨莶精醇的A环上引入三氟甲基噁唑环(化合物9)或者噻唑环(化合物11)时活性明显提高,IC_(50)值分别为0.71±0.07和0.22±0.03μmol/L,为豨莶精醇结构的进一步优化提供参考,具有一定的研究价值。

豨莶精醇对大鼠的抗栓作用及机制

目的探讨豨莶精醇的抗栓作用及其作用机制。方法采用大鼠体内、外血栓形成实验、血小板聚集和黏附功能实验等方法。结果豨莶精醇可明显延长大鼠体内血栓形成时间、缩短血栓长度、减轻血栓干重并能显著抑制大鼠体内外血小板集聚和黏附。结论豨莶精醇具有明显的抗栓作用,其作用机制可能与抑制血小板聚集和黏附有关。

梯度洗脱联合波长切换HPLC法同时测定豨莶风湿丸中的豨莶苷、奇壬醇、豨莶精醇、防己诺林碱和粉防己碱

目的 建立梯度洗脱联合波长切换HPLC法同时测定豨莶风湿丸中豨莶苷、奇壬醇、豨莶精醇、防己诺林碱和粉防己碱。方法 采用Kromasil C18色谱柱（4.6mm×250mm,5μm）,以流动相A：乙腈-甲醇（2∶1）、流动相B：0.05%冰醋酸溶液进行梯度洗脱;流速为1.0mL/min;进样量为20μL;豨莶苷、奇壬醇和豨莶精醇检测波长为215nm,防己诺林碱和粉防己碱检测波长为280nm。结果 豨莶苷、奇壬醇、豨莶精醇、防己诺林碱和粉防己碱在给定浓度范围内的线性范围分别为6.45-129.00μg/mL（r=0.999 5）、5.61-112.20μg/mL（r=0.999 9）、4.25-85.00μg/mL（r=0.999 3）、9.19-183.80μg/mL（r=0.999 8）和11.05-221.00μg/mL（r=0.999 7）,线性关系良好;平均加样回收率和相对标准偏差（RSD）值分别为98.73%（1.43%）、97.63%（1.28%）、99.44%（1.29%）、98.33%（1.38%）、97.36%（1.37%）。结论 建立的梯度洗脱联合波长切换HPLC法能同时测定豨莶风湿丸中豨莶苷、奇壬醇、豨莶精醇、防己诺林碱和粉防己碱含量,方法简便、准确、重现性好,为豨莶风湿丸质量控制提供了可靠方法。

高效液相色谱梯度洗脱法同时测定关节痛丸中β-蜕皮甾酮、豨莶苷、奇壬醇和豨莶精醇的含量

目的建立HPLC梯度洗脱法同时测定关节痛丸中β-蜕皮甾酮、豨莶苷、奇壬醇和豨莶精醇的含量。方法采用Diamonsil C18(4.6 mm×200 mm,5μm),以乙腈-0.1%甲酸溶液为流动相,进行梯度洗脱,流速1.0 m L·min^(-1),柱温30℃,波长切换法检测(0~17 min,250 nm,β-蜕皮甾酮;17~60min,215 nm,豨莶苷、奇壬醇和豨莶精醇),进样量为10μL。结果β-蜕皮甾酮、豨莶苷、奇壬醇和豨莶精醇4个成分的线性范围分别为4.35~87.00μg·m L^(-1)(r=0.9993)、3.78~75.60μg·m L^(-1)(r=0.9999)、8.51~170.20μg·m L^(-1)(r=0.9994)、5.35~107.00μg·m L^(-1)(r=0.9997);平均加样回收率及相应的RSD分别为98.8%(1.4%)、99.3%(1.3%)、97.4%(1.0%)、99.0%(1.2%)。结论本文建立的方法,方法专属性强,测定结果准确,可有效保障关节痛丸临床用药安全。

豨莶精醇对免疫性血小板减少症的网络药理学与实验研究

目的通过网络药理学的方法,研究豨莶精醇对免疫性血小板减少症的作用及作用机制,并通过细胞实验对其作用进行初步探究。方法通过SwissTargetPrediction数据库绘制豨莶精醇结构,预测豨莶精醇作用的靶点,通过GeneCards数据库,以"Immune Thrombocytopenia"为关键词获取疾病相关靶点,通过Cytoscape 3.5.0软件绘制化合物-靶点-疾病网络图,获得豨莶精醇与免疫性血小板减少症共有靶点,使用David 6.8数据库进行GO生物学过程分析和KEGG通路分析,STRING数据库分析获得关键靶点;通过刀豆蛋白A诱导脾细胞增殖,使用豨莶精醇进行干预,检测细胞增殖变化。结果网络药理学分析显示,豨莶精醇与血小板减少性紫癜共有靶点56个,发挥治疗作用的生物学过程与调节多个蛋白通路的磷酸化、调节一氧化氮的合成、调控JAK-STAT级联、调控细胞的增殖凋亡和迁移等相关,涉及的通路有癌症的途径、催乳素信号通路、PI3K-Akt信号通路、ErbB信号通路、胶质瘤、白细胞跨内皮迁移、FoxO信号通路、GnRH信号通路等,关键靶点有STAT3、EGFR、ESR1、HSP90AA1、MAPK8;细胞实验显示豨莶精醇对刀豆蛋白A诱导的脾细胞增殖具有一定的抑制作用。结论豨莶精醇对免疫性血小板减少症具有一定治疗作用,主要的作用机制是通过影响多个基因表达,调节多通路,来影响免疫相关细胞的增殖及凋亡。

RP-HPLC同时测定豨莶草中奇壬醇与豨莶精醇的含量

目的建立RP-HPLC同时测定豨莶草中奇壬醇与豨莶精醇的含量。方法色谱柱为Kromasil C18柱(4.6 mm×200mm,5μm),流动相为乙腈-水溶液,梯度洗脱(0～6 min,29.5%乙腈,6～10 min,29.5%～43.5%乙腈),流速为1.0 mL.min-1,柱温30℃,检测波长215 nm。结果奇壬醇在0.015 1～0.302 4 mg.mL-1内线性关系良好,r=0.999 8,平均回收率为101.5%(RSD=1.7%,n=9);豨莶精醇在0.002 6～0.052 0 mg.mL-1内线性关系良好,r=0.999 7,平均回收率为101.7%(RSD=2.0%,n=9)。结论该方法简便快速,结果准确可靠,重复性良好,适于中药豨莶草中奇壬醇与豨莶精醇的同时测定,并应用本方法比较了不同产地豨莶草药材中奇壬醇与豨莶精醇的含量。

豨莶草的高效液相色谱指纹图谱研究

目的分析豨莶草的高效液相色谱指纹图谱，为科学评价与有效控制豨莶草药材质量提供依据。方法色谱柱为KromasilWQC8柱（250mm×4．6mm，5μm），以甲醇－乙腈－0．05mol／LKH2P04缓冲液作为流动相，色谱柱温度30℃，检测波长为215nm，流速为1mL／min。结果建立了豨莶草的HPLC指纹常见模型，同时对不同地区、不同批次的药材相比，从中寻找出相似性并以定量测定结果对各批药材进行评价。结论该方法操作简便、快速、准确，为豨莶草药材的鉴别和全面质量控制提供了新的依据。

炮制前后豨莶草指标性成分及指纹图谱研究

该文通过研究豨莶草生品及炮制一至九制品中奇壬醇、豨莶精醇和豨莶苷含量变化规律及指纹图谱对比,为豨莶草炮制研究提供实验基础。采用SunFire-C18色谱柱（4.6 mm×150 mm,5μm）,柱温30℃,流动相乙腈（含0.1%甲酸）-水（含0.1%甲酸）,流速1 mL·min-1,进样量30μL,检测波长215,320 nm,奇壬醇在2.180～26.16 mg·L-1呈良好的线性关系,平均加样回收率为96.4%,RSD 2.2%;豨莶精醇在2.900～34.80 mg·L-1呈良好的线性关系,平均加样回收率为97.2%,RSD 1.7%;豨莶苷在1.012～6.072 mg·L-1呈良好的线性关系,平均加样回收率为96.3%,RSD 2.4%。该方法准确可靠,重复性好,快速简便;实验结果为豨莶草炮制过程中化学成分变化规律和进一步阐明其疗效的改变奠定了基础。

豨莶草化学成分和药理作用及质量标志物(Q-Marker)的预测分析

豨莶草作为我国传统中草药,用药历史悠久,临床多用于风湿痹痛的治疗。豨莶草中化学成分类型丰富,主要成分为二萜类、倍半萜类、黄酮类,其二萜类成分历来被认为是主要的药效物质。对其化学成分、药理作用综述的基础上,根据中药质量标志物(quality maker,Q-Marker)理论,从化学成分特有性、成分有效性、可测成分、入血成分4个方面对豨莶草Q-Marker成分进行预测分析,豨莶苷、奇壬醇、豨莶精醇、槲皮素、黄芩苷作为豨莶草的Q-Marker,为豨莶草制定科学的质量标准提供依据。